a . : L 1 : z . . 2 . 1 1 . 1 . . » 5 . 5 . 5 . 3 ; . . . ” V . ‘ 4 W . . 1 . ‘ . 1 g 5 w : w . . . . Z . ‘ V . . , V . V ‘ ‘ ‘ . n a . u 2 o . h 1 : ‘ fl 2 3 . . . . f ? . r . £ ‘ a 9 . n 5 . . . . fi . . . t h i t . . E . . : u ? 2 2 . 9 f H . ‘ . . a ‘ e 3 “ n . r g f $ m | i u a : 0 z n , . - I i 3 " T ‘ 1 ‘ : . ? h . 2 w fl 1 ‘ m ; . g . v ) k . . . : . . 2 . . n i x - : 1 . . « 1 l z fl \ \‘ \\\\\W \\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\ W \\\\\\\\\I V H E S O S A . M c m G A N S 3 w L I B R A R I E S 3 1 2 9 3 \ T h i s i s t o c e r t i f y t h a t t h e d i s s e r t a t i o n e n t i t l e d S T U D I E S O N T H E E F F I C A C Y O F A H O M O F E R M E N T A T I V E L A C T I C A C I D - P R O D U C I N G B A C T E R I A L I N O C U L A N T A N D C O M M E R C I A L P L A N T C E L L - N A L L - D E G R A D I N G E N Z Y M E M I X T U R E S T O E N H A N C E T H E . T F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S A N D A E R O B I C S T A B I L I T Y O F F O R A G E S I N S I L E D I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L ‘ E N V I R O N M E N T S p r e s e n t e d b y A b n e r A n t o n i o R o d r i g u e z - C a r i a s h a s b e e n a c c e p t e d t o w a r d s f u l f i l l m e n t o f t h e r e q u i r e m e n t s f o r P h . D d e g r e e i n A n i m a l j c l e n ' c e 4 3 m m 1 6 4 1 1 M a j o r p r o f e s s o r D a t e Q " 9 8 ‘ - 9 & 2 M S U i s a n A f fi r m a t i v e A c t i o n / E q u a l O p p o r t u n i t y I n s t i t u t i o n O ~ 1 2 7 7 1 P T L O C A A D E O I I I D R F E I T E ‘ V A U E T N D R S U N M E B u O m X o t n o o D o e r r A o M o o m T v r E t h d D o u t s i u c o h d o u c o k . U E f D r o A m y o u r r o o o r d . T E D U E 3 1 : 1 — 3 : : L I B R A R Y M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y [ I f — — J | M S U t o A n A f fl n n o t i v o A c t i o n / E q u a l O p p o r t u n i t y I n s t i t u t i o n W F L m 1 S T U D I E S O N T H E E F F I C A C Y O F A H O M O F E R M E N T A T I V E L A C T I C A C I D - P R O D U C I N G B A C T E R I A L I N O C U L A N T A N D C O M M E R C I A L , P L A N T C E L L - W A L L - D E G R A D I N G E N Z Y M E M I X T U R E S T O E N H A N C E T H E F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S A N D A E R O B I C S T A B I L I T Y O F F O R A G E S E N S I L E D I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S B y A b n e r A n t o n i o R o d r i g u e z - C a r i e s V O L U M E I A D I S S E R T A T I O N S u b m i t t e d t o M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y i n p a r t i a l f u l fi l l m e n t o f t h e r e q u i r e m e n t s f o r t h e d e g r e e o f D O C T O R O F P H I L O S O P H Y D e p a r t m e n t o f A n i m a l S c i e n c e 1 9 9 6 A B S T R A C T S T U D I E S O N T H E E F F I C A C Y O F A H O M O F E R M E N T A T I V E L A C T I C A C I D - P R O D U C I N G B A C T E R I A L I N O C U L A N T A N D C O M M E R C I A L , P L A N T C E L L - W A L L - D E G R A D I N G E N Z Y M E M I X T U R E S T O E N H A N C E T H E F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S A N D A E R O B I C S T A B I L I T Y O F F O R A G E S E N S I L E D I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S B Y A b n e r A n t o n i o R o d r i g u e z - C a r i a s A s e r i e s o f s t u d i e s w e r e c o n d u c t e d t o a d d r e s s t h e h y p o t h e s i s t h a t a d d i t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s ( m i c r o b i a l i n o c u l a n t o r e n z y m e s ) i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I n e x p e r i m e n t o n e , a t w o y e a r s t u d y w a s c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e e f f e c t o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a f t e r 9 0 d o f g r o w t h i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I n b o t h l o c a t i o n s , t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e e n h a n c e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m a s e v i d e n c e d b y a d e c r e a s e i n p H ; a n i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d p r o d u c i n g - b a c t e r i a l p o p u l a t i o n a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t . H o w e v e r , i t h a d e i t h e r a n e g a t i v e o r n o e f f e c t o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e . R e s u l t s f r o m e x p e r i m e n t t w o i n d i c a t e d t h a t i n o c u l a t i o n a l s o i m p r o v e d t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s , b u t d i d n o t r e d u c e t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 a n d 1 1 0 d o f g r o w t h i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . I n e x p e r i m e n t t h r e e , a d d i t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s h a d a p o s i t i v e e f f e c t o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a f t e r t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . F i n d i n g s f r o m e x p e r i m e n t f o u r i n d i c a t e d t h a t u n d e r i n v i t r o c o n d i t i o n s , c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e i n f o r a g e s o r g h u m a n d J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d i n a t r o p i c a l c l i m a t e i s i n c r e a s e d w h e n t r e a t e d w i t h e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d , b u t a c t i v i t y o f t h e e n z y m e c o m p l e x d i f f e r e d b e t w e e n f o r a g e s p e c i e s . I n e x p e r i m e n t f i v e , t h e N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , t r e a t e d w i t h 5 c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s a n d a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s w e r e e v a l u a t e d . E n z y m e p r e p a r a t i o n s d i f f e r e d i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e t h e N D F f r a c t i o n o f f o r a g e s o r g h u m , b u t a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d d i d n o t i m p r o v e N D F d i s a p p e a r a n c e . R e s u l t s f r o m e x p e r i m e n t s i x i n d i c a t e d t h a t a d d i t i o n o f e n z y m e m i x t u r e s d i d n o t c o n s i s t e n t l y a f f e c t t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d c a r b o h y d r a t e c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . I n m e m o r y o f G . M . J . H o r t o n A C K N O W L E D G M E N T S I w i s h t o e x p r e s s m y g r a t i t u d e t o t h e O f f i c e o f D i v e r s i t y a n d P l u r a l i s m , C A N R a n d t o t h e D e p a r t m e n t o f A n i m a l S c i e n c e a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y f o r t h e i r f i n a n c i a l s u p p o r t d u r i n g m y P h . D . p r o g r a m . M y g r a t i t u d e i s e x t e n d e d t o t h e U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o , M a y a g u e z C a m p u s , f o r g i v i n g m e t h e o p p o r t u n i t y t o c o n t i n u e m y g r a d u a t e s t u d i e s , a n d f o r t h e i r c o n s i d e r a t i o n a n d p a t i e n c e i n w a i t i n g f o r m y r e t u r n . I w o u l d l i k e t o e x p r e s s m y s p e c i a l t h a n k s t o m y c o m m i t t e e m e m b e r s D r . M i k e A l l e n , D r . M a r g a r e t B e n s o n , D r . W a l d m a r M o l i n e , a n d D r . O r a n H e s t e r m a n f o r t h e i r h e l p f u l i n p u t . S p e c i a l t h a n k s a r e a l s o e x t e n d e d t o D r . E r n e s t o R i q u e l m e f o r s e r v i n g a s e x t e r n a l e x a m i n e r , a n d f o r h i s a s s i s t a n c e d u r i n g t h e e x p e r i m e n t s c o n d u c t e d i n P u e r t o R i c o . I a m i n d e b t e d a n d t h a n k f u l f o r t h e a s s i s t a n c e o f R o b e r t B u r n e t t i n t h e u s e o f H P L C e q u i p m e n t . B o b , I h o p e t h e L i o n s a n d t h e L a k e r s c a n m a k e i t n e x t y e a r . T o T a d d D a w s o n a n d M i c h a e l S c h l e g e l ; y o u r f r i e n d s h i p a n d p r o f e s s i o n a l a s s i s t a n c e w e r e v e r y h e l p f u l . T h e l o n g d i s t a n c e s u p p o r t o f m y p a r e n t s a n d s i s t e r s d u r i n g t h e r e s e a r c h a n d p r e p a r a t i o n o f t h i s d i s s e r t a t i o n h a s b e e n a v e r y c o m f o r t i n g s u p p o r t m e c h a n i s m . F i n a l l y b u t n o t l e a s t , I w o u l d l i k e t o e x p r e s s m y t h a n k s t o D r . M e l v i n Y o k o y a m a a n d e s p e c i a l l y D r . S t e v e n R u s t f o r s e r v i n g a s f a c u l t y c o - a d v i s o r s d u r i n g m y d o c t o r a l p r o g r a m . F o r t h e i r e f f o r t t o m a k e m e a b e t t e r p e r s o n , a b e t t e r p r o f e s s i o n a l , a n d p a r t i c u l a r l y f o r i n s t i l l i n g m e , w h a t I t h i n k w a s m y b e s t l e a r n i n g e x p e r i e n c e a t M i c h i g a n S t a t e : h o w t o b e p a t i e n t . v i T A B L E O F C O N T E N T S L I S T O F T A B L E S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . x L I S T O F F I G U R E S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . x x i i I N T R O D U C T I O N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 C H A P T E R 1 L I T E R A T U R E R E V I E W E f f e c t o f C l i m a t e o n F o r a g e Q u a l i t y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 O S i l a g e Q u a l i t y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 M i c r o b i o l o g y o f S i l a g e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 L a c t i c A c i d B a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 E n t e r o b a c t e r i a c e a e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 Y e a s t s a n d M o l d s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 E n d o s p o r e - F o r m i n g B a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 O t h e r M i c r o o r g a n i s m s A s s o c i a t e d w i t h t h e E n s i l i n g P r o c e s s . . . . . 2 5 S o u r c e o f M i c r o o r g a n i s m s i n t h e E n s i l i n g P r o c e s s . . . . . . . . . . . . 2 5 B i o c h e m i s t r y o f t h e S i l a g e F e r m e n t a t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 7 P h a s e s o f t h e E n s i l i n g P r o c e s s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 9 A e r o b i c S t a b i l i t y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 4 C h a r a c t e r i s t i c s o f T r o p i c a l S i l a g e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 5 S i l a g e A d d i t i v e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 7 L a c t i c A c i d - P r o d u c i n g B a c t e r i a l l n o c u l a n t s . . . . . . . . . . . . 3 7 P l a n t C e l l W a l l - D e g r a d i n g E n z y m e P r e p a r a t i o n s . . . . . . . . . 4 6 M i c r o b i a l l n o c u l a n t a n d E n z y m e M i x t u r e s . . . . . . . . . . . . . 4 9 O t h e r S i l a g e A d d i t i v e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 0 2 A T W O Y E A R S T U D Y O N T H E E F F I C A C Y O F S I L A G E A D D I T I V E S T O E N H A N C E T H E E N S I L I N G O F F O R A G E S O R G H U M U N D E R T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S . 1 . F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 2 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 4 v i i E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 6 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 1 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 5 3 A T W O Y E A R S T U D Y O N T H E E F F I C A C Y O F S I L A G E A D D I T I V E S T O E N H A N C E T H E E N S I L I N G O F F O R A G E S O R G H U M I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S . 2 . A E R O B I C S T A B I L I T Y A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 7 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 8 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 9 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 2 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 4 4 M I C R O B I A L I N O C U L A N T A N D E N Z Y M E S I N F O R A G E S O R G H U M E N S I L E D A T T W O S T A G E S O F M A T U R I T Y I N A T R O P I C A L E N V I R O N M E N T A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 2 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 3 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 5 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 0 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 5 5 F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S O F J O H N S O N G R A S S E N S I L E D A T T W O R E G R O W T H P E R I O D S W I T H S I L A G E A D D I T I V E S A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 8 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 9 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 0 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 3 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 4 6 C E L L — W A L L D I S A P P E A R A N C E F R O M F O R A G E S O R G H U M A N D J O H N S O N G R A S S A F T E R T R E A T M E N T W I T H A C O M M E R C I A L M U L T I - E N Z Y M E P R E P A R A T I O N A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 5 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 6 v i i i E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 7 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 0 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 8 7 N E U T R A L D E T E R G E N T F I B E R D I S A P P E A R A N C E F R O M F O R A G E S O R G H U M T R E A T E D W I T H C O M M E R C I A L E N Z Y M E M I X T U R E S A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 9 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 1 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 2 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 6 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 6 8 F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S O F F O R A G E S O R G H U M E N S I L E D W I T H C O M M E R C I A L E N Z Y M E M I X T U R E S A b s t r a c t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 7 I n t r o d u c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 8 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 9 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 1 I m p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 6 9 S U M M A R Y A N D C O N C L U S I O N S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 7 A P P E N D I X A . D A T A T A B L E S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 2 8 . L i t e r a t u r e C i t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 7 T a b l e 1 - 1 . T a b l e 1 - 2 . T a b l e 2 - 1 . T a b l e 2 - 2 . T a b l e 2 - 3 . T a b l e 2 - 4 . T a b l e 2 - 5 . T a b l e 2 - 6 . T a b l e 2 - 7 . T a b l e 2 - 8 . T a b l e 2 - 9 . T a b l e 2 - 1 0 . L I S T O F T A B L E S S p e c i e s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a f o u n d i n s i l a g e . . . . . . . . . . 1 7 C l a s s i f i c a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 8 S e l e c t i v e m e d i a a n d i n c u b a t i o n p e r i o d o f m i c r o o r g a n i s m s e n u m e r a t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 9 C h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m p r i o r t o e n s i l i n g h a r v e s t e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . . . . . . . . . . . . . . 6 5 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n o r g a n i c a c i d c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . 6 8 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 0 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 2 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 5 E f f e c t o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 8 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . 8 0 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o n e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o n e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e T a b l e 2 - 1 1 . T a b l e 2 - 1 2 . T a b l e 2 - 1 3 . T a b l e 2 - 1 4 . T a b l e 2 - 1 5 . T a b l e 2 - 1 6 . T a b l e 2 - 1 7 . T a b l e 2 - 1 8 . T a b l e 2 - 1 9 . T a b l e 2 - 2 0 . T a b l e 2 - 2 1 . e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 3 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o n e n s i l i n g o n W S C c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . 8 4 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o n e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 6 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n o r g a n i c a c i d c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . 8 7 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 9 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 2 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 5 E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 7 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . 9 9 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 0 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 2 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n W S C c o n t e n t x i T a b l e 2 - 2 2 . T a b l e 3 - 1 . T a b l e 3 - 2 . T a b l e 3 - 3 . T a b l e 3 - 4 . T a b l e 3 - 5 . T a b l e 3 - 6 . T a b l e 3 - 7 . T a b l e 3 - 8 . T a b l e 3 - 9 . o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . 1 0 3 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 4 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . 1 1 3 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 5 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . 1 1 7 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t a n d e x p o s e d t o a i r f o r 7 d a y s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 9 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . 1 2 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 3 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . 1 2 4 E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t a n d e x p o s e d t o a i r f o r s e v e n d a y s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 6 E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s x i i T a b l e 3 - 1 0 . T a b l e 3 - 1 1 . T a b l e 3 - 1 2 . T a b l e 3 - 1 3 . T a b l e 3 - 1 4 . T a b l e 3 - 1 5 . T a b l e 3 - 1 6 . T a b l e 3 - 1 7 . T a b l e 3 - 1 8 . o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 7 E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . 1 2 9 E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 0 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f e n s i l i n g o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 3 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . 1 3 4 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . 1 3 6 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 8 E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 3 9 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . 1 4 1 x i i i T a b l e 3 - 1 9 . T a b l e 3 - 2 0 . T a b l e 3 - 2 1 . T a b l e 3 - 2 2 . T a b l e 3 - 2 3 . T a b l e 3 - 2 4 . T a b l e 3 - 2 5 . T a b l e 3 - 2 6 . T a b l e 4 - 1 . T a b l e 4 - 2 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 2 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . 1 4 3 E f f e c t o f l e n g t h o f e n s i l i n g a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 5 E f f e c t s o f l e n g t h o f e n s i l i n g a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 4 6 E f f e c t s o f l e n g t h o f e n s i l i n g a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . 1 4 7 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . 1 4 8 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 9 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 5 0 C h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 1 E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n o r g a n i c a c i d s c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 3 x i v T a b l e 4 — 3 . T a b l e 4 - 4 . T a b l e 4 - 5 . T a b l e 4 - 6 . T a b l e 4 - 7 . T a b l e 4 - 8 . T a b l e 4 — 9 . T a b l e 4 - 1 0 . T a b l e 4 - 1 1 . T a b l e 4 . 1 2 , E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 5 E f f e c t s s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 7 E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 9 E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 0 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 4 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 5 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 6 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 7 E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H a n d t e m p e r a t u r e o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 9 E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 8 0 X V T a b l e 4 - 1 3 . T a b l e 4 - 1 4 . T a b l e 4 — 1 5 . T a b l e 4 - 1 6 . T a b l e 5 - 1 . T a b l e 5 - 2 . T a b l e 5 - 3 . T a b l e 5 - 4 . T a b l e 5 - 5 . T a b l e 5 - 6 . T a b l e 5 - 7 . T a b l e 6 - 1 . E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 8 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n p H a n d t e m p e r a t u r e o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 3 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 8 4 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d s t a g e o f m a t u r i t y o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . 1 8 6 E f f e c t s o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n p H a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . 1 9 4 E f f e c t s o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . . . . 1 9 6 E f f e c t s o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . . 1 9 8 E f f e c t s o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . 1 9 9 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d r e g r o w t h p e r i o d o n p H a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . 2 0 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d r e g r o w t h p e r i o d o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . . . . 2 0 2 E f f e c t s o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 3 D e s c r i p t i o n o f t h e c o m m e r c i a l m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n e v a l u a t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 9 x v i T a b l e 6 - 2 . T a b l e 7 - 1 . T a b l e 7 - 2 . T a b l e 7 - 3 . T a b l e 7 - 4 . T a b l e 7 - 5 . T a b l e 7 - 6 . T a b l e 7 - 7 . T a b l e 8 - 1 . T a b l e 8 - 2 . T a b l e 8 - 3 . T a b l e 8 - 4 . T a b l e A - 1 . C o m p o s i t i o n o f i n i t i a l p l a n t c e l l - w a l l f r a c t i o n s o f J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 1 D e s c r i p t i o n o f c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s e v a l u a t e d . 2 2 3 E f f e c t o f e n z y m e ( E 1 ) a p p l i c a t i o n r a t e o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m d r i e d a n d f r o z e n - t h a w e d f o r a g e s o r g h u m ( E x p . 1 ) . . . 2 2 7 I n t e r a c t i o n b e t w e e n p H a n d e n z y m e a p p l i c a t i o n ( E 1 ) r a t e o n n e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m ( E x p . 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 9 I n t e r a c t i o n b e t w e e n E 2 t o E 3 r a t i o n a n d a p p l i c a t i o n r a t e o n n e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m ( E x p . 3 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 0 N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h e n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s ( E x p . 4 a n d E x p . 5 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 2 N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s e x p r e s s e d a s a d i f f e r e n c e a b o v e c o n t r o l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 3 S u g g e s t e d a p p l i c a t i o n r a t e a n d p r o t e i n c o n t e n t o f t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n s e v a l u a t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 5 D e s c r i p t i o n o f . t r e a t m e n t s a n d c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s e v a l u a t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 0 E f f e c t o f e n z y m e t r e a t m e n t a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . 2 4 2 E f f e c t o f e n z y m e t r e a t m e n t a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . . 2 4 4 E f f e c t o f e n z y m e t r e a t m e n t a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . . . . . . . 2 4 5 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t s i n f o r a g e x v i i T a b l e A - 2 . T a b l e A - 3 . T a b l e A - 4 . T a b l e A - 5 . T a b l e A - 6 . T a b l e A - 7 . T a b l e A - 8 . T a b l e A - 9 . T a b l e A - 1 0 . T a b l e A - 1 1 . s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( C h a p t e r 3 ) . . . . . . . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . x v i i i . 2 5 2 2 5 5 2 6 1 2 6 4 2 6 7 . 2 6 9 2 7 2 2 7 5 2 7 8 2 8 0 2 9 2 T a b l e A - 1 2 . T a b l e A - 1 3 . T a b l e A - 1 4 . T a b l e A - 1 5 . T a b l e A - 1 6 . T a b l e A - 1 7 . T a b l e A - 1 8 . T a b l e A - 1 9 . T a b l e A - 2 0 . T a b l e A - 2 1 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) . . . ’ . . . . . . . . . . . . 2 9 5 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 9 8 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 0 1 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 0 4 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 0 7 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 1 0 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 1 3 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 1 5 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d t e m p e r a t u r e i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . . . . . . . 3 1 6 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . 3 1 8 x i x T a b l e A - 2 2 . T a b l e A - 2 3 . T a b l e A - 2 4 . T a b l e A - 2 5 . T a b l e A - 2 6 . T a b l e A - 2 7 . T a b l e A - 2 8 . T a b l e A - 2 9 . T a b l e A - 3 0 . T a b l e 3 - 3 1 . T a b l e 3 - 3 2 . T a b l e 3 - 3 3 . T a b l e A - 3 4 . T a b l e A - 3 5 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) . . . . . 3 1 9 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d a n d l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a p o p u l a t i o n s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i d o s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 5 ) . . . 3 2 0 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d — p r o d u c t s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 5 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2 2 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 5 ) . . . . . . . . . . . . . . . 3 2 4 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 5 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2 6 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 6 . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2 7 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 1 ) . . . . . . . . . . 3 2 8 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 2 ) . . . . . . . . . . 3 2 9 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 3 ) . . . . . . . . . . 3 3 0 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 4 ) . . . . . . . . . . 3 3 1 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 5 ) . . . . . . . . . . 3 3 1 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f e n z y m e c o m p a r i s o n i n C h a p t e r 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 2 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s a n d p H i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s ( C h a p t e r 8 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 4 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e X X T a b l e A - 3 6 . c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s ( C h a p t e r 8 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 5 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s ( C h a p t e r 8 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 3 6 x x i F i g u r e l - 1 F i g u r e l - 2 . F i g u r e 1 - 1 . F i g u r e 1 - 2 . F i g u r e 1 - 3 . F i g u r e 1 - 4 . F i g u r e 1 - 5 . F i g u r e 1 - 6 . F i g u r e 1 - 7 . F i g u r e 2 - 1 . F i g u r e 2 - 2 . F i g u r e 6 - 1 . F i g u r e 6 - 2 . F i g u r e 6 - 3 . L I S T O F F I G U R E S C l i m a t i c r e g i o n s o f P u e r t o R i c o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 T y p i c a l m o n t h l y p r e c i p i t a t i o n a n d t e m p e r a t u r e p a t t e r n s o f P u e r t o R i c o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 R e l a t i o n o f e n v i r o n m e n t a l f a c t o r s t o p l a n t m e t a b o l i c c o m p o n e n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 R e s i s t a n t s t r u c t u r e s a n d r e s e r v e c o m p o n e n t s i n v e g e t a t i v e m a t e r i a l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 F e r m e n t a t i o n o f g l u c o s e a n d f r u c t o s e b y h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 F e r m e n t a t i o n o f g l u c o s e a n d f r u c t o s e b y h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0 F e r m e n t a t i o n o f p e n t o s e s b y h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 F e r m e n t a t i o n o f o r g a n i c a c i d s b y h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 P h a s e s o f s i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d s t o r a g e . . . . . . . . . . . . 3 0 T e m p e r a t u r e a n d p r e c i p i t a t i o n d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t o f M i c h i g a n . . . . . . . . . . . . 6 2 T e m p e r a t u r e a n d p r e c i p i t a t i o n d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t o f P u e r t o R i c o . . . . . . . . . . . . . 6 3 N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h a c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e . . . . 2 1 2 E n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 2 I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e x x i i F i g u r e 6 - 4 . F i g u r e 6 - 5 . s p e c i e s o n A D F d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 4 I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e s p e c i e s o n h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 4 I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e s p e c i e o n c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 1 6 x x i i i I N T R O D U C T I O N C o n s e r v a t i o n o f f e e d s t u f f s b y e n s i l i n g i s a m a j o r p r a c t i c e u s e d i n m a n y l i v e s t o c k o p e r a t i o n s . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , r u m i n a n t f e e d i n g s y s t e m s a r e b a s e d o n t h e p r o d u c t i o n o f f o r a g e , g r a i n , o r c e r e a l s i l a g e s d u r i n g t h e w a r m e r s e a s o n s t o b e u t i l i z e d a s i n g r e d i e n t s i n g r o w i n g - f i n i s h i n g r a t i o n s f o r b e e f c a t t l e o r i n t o t a l m i x e d r a t i o n s ( T M R ) f o r d a i r y c a t t l e d u r i n g w i n t e r m o n t h s . T h i s m a n a g e m e n t s y s t e m p r o v i d e s a c o n s i s t e n t f o r a g e s u p p l y o f u n i f o r m q u a l i t y t h e r e b y , p r o v i d i n g f o r a m o r e c o n s t a n t f e e d i n g p r o g r a m t h r o u g h o u t t h e y e a r . I n t r o p i c a l r e g i o n s , d u e t o t h e s o c i o - e c o n o m i c c o n d i t i o n s w h i c h p r e v a i l , r u m i n a n t p r o d u c t i o n d e p e n d s l a r g e l y o n t h e e f f i c i e n t m a n a g e m e n t a n d u t i l i z a t i o n o f p a s t u r e f o r a g e s p e c i e s . H o w e v e r , b e c a u s e o f t h e t y p i c a l e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s , b e e f a n d d a i r y p r o d u c t i o n e x p e r i e n c e m a r k e d s e a s o n a l f l u c t u a t i o n s i n f o r a g e s u p p l y a n d q u a l i t y . P u e r t o R i c o i s a n i s l a n d l y i n g b e t w e e n t h e A t l a n t i c O c e a n a n d t h e C a r i b b e a n S e a , l o c a t e d o n t h e l a t i t u d e 1 8 ° N a n d l o n g i t u d e 6 6 ° W a n d m e a s u r e s a b o u t 1 6 0 k i l o m e t e r s f r o m e a s t t o w e s t , a n d 5 6 k i l o m e t e r s f r o m n o r t h t o s o u t h . T h e w e a t h e r o f P u e r t o R i c o i s c l a s s i f i e d a s t r o p i c a l . T e m p e r a t u r e c h a n g e s 2 a r e s m a l l , a n d t h e s e a s o n s a r e n o t c l e a r l y d e f i n e d ( C a p i e l a n d C a l v e s b e r t , 1 9 7 6 ) . T h e m i n i m u m a n d m a x i m u m a n n u a l t e m p e r a t u r e s a r e 1 9 3 ° C a n d 3 0 ° C , r e s p e c t i v e l y , w i t h a n a v e r a g e t e m p e r a t u r e o f 2 4 . 7 ° C . T h e i s l a n d i s d i v i d e d i n t o s i x c l i m a t i c r e g i o n s ( F i g u r e I - 1 ) b a s e d o n t h e a m o u n t o f p r e c i p i t a t i o n . H o w e v e r , i n a l l c l i m a t i c r e g i o n s , t w o s e a s o n s a r e o b s e r v e d , a d r y s e a s o n w h i c h b e g i n s i n D e c e m b e r a n d e n d s i n J u l y , a n d a r a i n y s e a s o n w h i c h b e g i n s i n A u g u s t a n d e n d s i n N o v e m b e r ( F i g u r e l - 2 ) . A n i m a l p r o d u c t i o n r e p r e s e n t s 5 9 . 0 % o f t h e g r o s s a n n u a l a g r i c u l t u r a l i n c o m e w i t h t h e d a i r y a n d b e e f i n d u s t r i e s r a n k i n g f i r s t a n d t h i r d , r e s p e c t i v e l y . C u r r e n t l y , i s l a n d p r o d u c t i o n c o n t r i b u t e s 2 4 % o f t h e t o t a l b e e f c o n s u m p t i o n w i t h t h e r e m a i n i n g b e e f ( 7 6 % ) b e i n g i m p o r t e d f r o m C e n t r a l A m e r i c a a n d t h e c o n t i n e n t a l U n i t e d S t a t e s . B e e f p r o d u c t i o n i s b a s e d o n g r a z i n g s y s t e m s , w h i c h a r e l i m i t e d b y f l u c t u a t i o n s i n f o r a g e q u a l i t y a n d q u a n t i t y t h r o u g h o u t t h e y e a r , r e s u l t i n g i n a a n n u a l p a t t e r n o f w e i g h t g a i n i n t h e w e t s e a s o n , a n d w e i g h t l o s s i n t h e d r y s e a s o n . W i t h t h i s p r o d u c t i o n s y s t e m , i t r e q u i r e s 3 6 m o n t h s t o r e a c h m a r k e t w e i g h t . T h e d a i r y i n d u s t r y u t i l i z e s T M R b a s e d o n i m p o r t e d c o n c e n t r a t e s a n d f o r a g e s p r o d u c e d l o c a l l y . A l l f r e s h m i l k u s e d f o r h u m a n c o n s u m p t i o n i s p r o d u c e d o n t h e i s l a n d . T h e f e e d i n g s y s t e m d u r i n g t h e d r y s e a s o n w h i c h c o i n c i d e s w i t h s h o r t d a y s , i s c h a r a c t e r i z e d b y t h e e x c e s s i v e u s e o f c o n c e n t r a t e s , p o o r g r a z i n g c o n d i t i o n s , a n d l o w q u a l i t y h a y . T h i s r e s u l t s i n a n i n c r e a s e d c o s t o f p r o d u c t i o n , g r e a t e r i n c i d e n c e o f m e t a b o l i c d i s o r d e r s ( e g a c i d o s i s ) , a n d 6 7 ° 0 0 ' 6 6 A B C D E F - - - - N N W E o o a e r s r s - - S S o o u u t t 0 ' + 2 ° t t 3 0 ' 6 6 ° t t h e e r e h e h h C r r n r C n n n o o a s I n S C s n t l o t I a t e t a o e r a a l p r i s l e i o t r o r s a 0 l L e g e n d : F i g u r e l - 1 . C l i m a t i c r e g i o n s o f P u e r t o R i c o 2 0 0 4 0 1 5 0 fi g » . . - 1 0 0 I . i v ) _ fl . . » ‘ J u . l . 2 ‘ » . Q J I I J , ' m m ~ l g . 1 . : . I I I I n . r . . - N . * 5 V " ” a r e » , . 1 t h . ‘ I “ I ” : [ I I I ” f l i t “ M I I i ’ I . . l . 1 " . ‘ I t . 1 : _ . “ I ” . ‘ ’ 5 1 “ i " 5 0 . I r . - ‘ " . ” A " : ‘ 3 ‘ ? “ ‘ - ‘ ~ _ ‘ , ‘ . 2 1 » , 1 ; . . . " W 9 ‘ L . . . D r S e s o “ W o n . . . - - . - . a . a r m s . P r e c i p i t a t i o n l T e m p e r a t u r e - M a x i m u m I I T e m p e r a t u r e - M i n i m u m F i g u r e I - Z . T y p i c a l m o n t h l y p r e c i p i t a t i o n a n d t e m p e r a t u r e p a t t e r n s o f P u e r t o R i c o d e c r e a s e d f a t c o n t e n t o f t h e m i l k . I n a d d i t i o n t o t h e p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h l a c k o f f o r a g e q u a l i t y a n d q u a n t i t y d u r i n g t h e d r y s e a s o n , a n o t h e r m a j o r p r o b l e m i s t h e d e m a n d f o r l a n d b y i n d u s t r i a l i z a t i o n o n a l i m i t e d l a n d b a s e . T h e r e f o r e , t h e r e i s a n u r g e n t n e e d t o d e v e l o p i n t e n s i v e o r s e m i - i n t e n s i v e f e e d i n g s y s t e m s t h a t o p t i m i z e t h e u s e o f s h r i n k i n g l a n d r e s o u r c e s t o p r o d u c e t h e n e e d e d f o r a g e s . T h e i n t r o d u c t i o n o f s i l a g e a s a m a j o r f e e d c o m p o n e n t i n t o f e e d l o t d i e t s f o r f i n i s h i n g b e e f c a t t l e , a n d i n t o t o t a l m i x e d r a t i o n s f o r d a i r y c o w s u t i l i z i n g h i g h y i e l d i n g s p e c i e s ( e . g . f o r a g e s o r g h u m ) o r a g g r e s s i v e n a t i v e s p e c i e s ( e . g J o h n s o n g r a s s ) r e p r e s e n t a v i a b l e a l t e r n a t i v e t o i n t e n s i f y f o r a g e p r o d u c t i o n . L a n d w i t h l i m i t e d a g r i c u l t u r a l p o t e n t i a l s h o u l d b e d e d i c a t e d t o p a s t u r e s f o r g r o w i n g c a t t l e a n d b r o o d c o w s . H o w e v e r , i n c o n t r a s t t o t e m p e r a t e c l i m a t e s , i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , p r o d u c t i o n o f s i l a g e a s a m e t h o d o f c o n s e r v a t i o n h a s n o t b e e n e x t e n s i v e l y p r a c t i c e d b e c a u s e o f p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f t r o p i c a l g r a s s e s ( C a t c h p o o l e a n d W i l l i a m s , 1 9 6 9 ; C a t c h p o o l e a n d H e n z e l l , 1 9 7 1 ) . P r o b l e m s w h i c h l i m i t s i l a g e - m a k i n g p r a c t i c e i n t h e t r o p i c s a r e t h e l o w c o n c e n t r a t i o n o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e f o u n d i n t h e f o r a g e s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) , a n d a l a c k o f e p i p h y t i c h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . I n a d d i t i o n t o t h e p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h e n s i l i n g o f t r o p i c a l g r a s s e s , t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f t r o p i c a l s i l a g e i s n o t w e l l d o c u m e n t e d . C u r r e n t l y , t h e e f f e c t i v e n e s s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a l l n o c u l a n t s a n d p l a n t c e l l - 6 w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s t o i m p r o v e e n s i l i n g o f f o r a g e s h a r v e s t e d i n t e m p e r a t e a n d s u b t r o p i c a l e n v i r o n m e n t h a s b e e n v a r i a b l e . I n a r e v i e w o f f i v e y e a r s o f p u b l i s h e d s t u d i e s e v a l u a t i n g b a c t e r i a l i n o c u l a n t s , M u c k a n d B o l s e n ( 1 9 9 2 ) i n d i c a t e d t h a t s i l a g e f e r m e n t a t i o n w a s i m p r o v e d a s e v i d e n c e d b y l o w e r p H , s h i f t i n g f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s t o a p r e d o m i n a n c e o f l a c t i c a c i d , o r r e d u c i n g t h e l e v e l s o f a m m o n i a - n i t r o g e n i n 6 6 % o f t h e s t u d i e s . H e n d e r s o n e t a l . ( 1 9 8 2 ) r e p o r t e d t h a t a d d i n g . 4 % c e l l u l a s e t o g r a s s a n d l e g u m e f o r a g e ( f r e s h m a t e r i a l ) r e s u l t e d i n m a r k e d c e l l u l o s e h y d r o l y s i s . H o w e v e r , t h e u s e o f e n z y m e a d d i t i v e s o n a l f a l f a e n s i l e d a t t h r e e m o i s t u r e c o n t e n t s d i d n o t i m p r o v e t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n ( J a s t e r a n d M o o r e , 1 9 9 0 ) . T h e e f f e c t s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a i n o c u l a t i o n o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e i n t e m p e r a t e r e g i o n s h a s s h o w n m i x e d r e s u l t s . I n a s t u d y o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t a d d i t i o n t o c o r n s i l a g e , s t a b i l i t y w a s i m p r o v e d ( W o l t h , 1 9 8 9 ) w h e r e a s i n o t h e r s t u d i e s n o r e s p o n s e ( S c h a e f e r e t a l . , 1 9 8 9 ) o r a n e g a t i v e r e s p o n s e ( R u s t e t a l . , 1 9 8 9 ) h a v e b e e n o b s e r v e d . E f f e c t s o f e n z y m e m i x t u r e s o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e s a r e n o t w e l l d o c u m e n t e d . I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , t h e r e i s l i m i t e d i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e u s e o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s a n d e n z y m e s o n t h e r e s u l t i n g f e r m e n t a t i o n , a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e . B e c a u s e o f t h e w a r m a n d h u m i d e n v i r o n m e n t p r e v a i l i n g i n t r o p i c a l a r e a s , t h e c o m p o s i t i o n o f t h e p l a n t m a t e r i a l a n d e p i p h y t i c m i c r o f l o r a a r e d i f f e r e n t t h a n i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . C o n s e q u e n t l y , i t i s d i f f i c u l t t o e x t r a p o l a t e t h e e f f e c t i v e n e s s o f s i l a g e a d d i t i v e s f r o m o n e 7 e n v i r o n m e n t t o a n o t h e r . T h e r e f o r e , s t u d i e s t o e v a l u a t e t h e u s e o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s a n d e n z y m e s o n f e r m e n t a t i o n o f f o r a g e s e n s i l e d i n t r o p i c a l a r e a s a r e r e q u i r e d . I n t h i s d i s s e r t a t i o n , t w o q u e s t i o n s w e r e a d d r e s s e d : 1 . ) D o s i l a g e a d d i t i v e s i m p r o v e t h e f e r m e n t a t i o n o f f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , a n d ; 2 . ) w h a t f a c t o r s l i m i t o r e n h a n c e t h e i r e f f e c t i v e n e s s ? . T h e s p e c i f i c o b j e c t i v e s o f t h i s d i s s e r t a t i o n w e r e : 1 . T o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f a h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a n d a p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e o n t h e o r g a n i c a c i d c o n t e n t s , p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d c a r b o h y d r a t e c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . T o d e t e r m i n e t h e e f f e c t o f t h e s i l a g e a d d i t i v e s ( e n z y m e s a n d m i c r o b i a l i n o c u l a n t ) o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e . T o s t u d y t h e d i f f e r e n c e s i n e f f e c t i v e n e s s o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e s w h e n f o r a g e s o r g h u m i s e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . T o e v a l u a t e e n s i l i n g o f J o h n s o n g r a s s t r e a t e d w i t h s i l a g e a d d i t i v e s a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s a s a p o t e n t i a l f o r a g e s o u r c e . T o d e t e r m i n e t h e e f f e c t o f a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s o n c e l l w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m 8 J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . 6 . T o c o m p a r e t h e e f f e c t s o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . 7 . T o d e t e r m i n e t h e d i f f e r e n c e s i n a c t i v i t y o f d i f f e r e n t c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . I n o r d e r t o a c c o m p l i s h t h e s e o b j e c t i v e s , C h a p t e r 1 o f t h i s d i s s e r t a t i o n r e v i e w s p e r t i n e n t i n f o r m a t i o n r e l a t e d t o t h e f e r m e n t a t i o n p h a s e s , m i c r o b i o l o g y , b i o c h e m i s t r y , a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f t h e e n s i l i n g p r o c e s s . I n a d d i t i o n , C h a p t e r 1 i n c l u d e s a r e v i e w o f t h e l i t e r a t u r e a s s o c i a t e d w i t h t h e e f f e c t s o f c l i m a t e o n f o r a g e q u a l i t y , c h a r a c t e r i s t i c s o f t r o p i c a l s i l a g e s , a n d u t i l i z a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s t o e n h a n c e s i l a g e f e r m e n t a t i o n , w i t h e m p h a s i s i n l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l i n o c u l a n t s a n d p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e p r e p a r a t i o n s . O b j e c t i v e s 1 a n d 2 w e r e a c c o m p l i s h e d w i t h a t w o y e a r s t u d y t h a t e v a l u a t e d t h e e f f e c t s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e p r e p a r a t i o n o n e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s ( C h a p t e r 2 ) a n d a e r o b i c s t a b i l i t y ( C h a p t e r 3 ) o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . T h e p o s s i b l e d i f f e r e n c e s i n e f f e c t i v e n e s s o f s i l a g e a d d i t i v e s w h e n f o r a g e s o r g h u m i s e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l 9 e n v i r o n m e n t ( O b j e c t i v e 3 ) i s r e p o r t e d i n C h a p t e r 4 . C h a p t e r 5 d e s c r i b e s t h e b e n e f i t s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e s t o p r e s e r v e J o h n s o n g r a s s a s a s i l a g e ( O b j e c t i v e 4 ) . T h e i n v i t r o e v a l u a t i o n s o f c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s o n c e l l w a l l d i s a p p e a r a n c e o f f o r a g e s h a r v e s t e d i n e i t h e r e n v i r o n m e n t ( O b j e c t i v e s 5 a n d 6 ) a r e p r e s e n t e d i n C h a p t e r s 6 a n d 7 . I n C h a p t e r 8 , a s t u d y c o m p a r e s t h e d i f f e r e n t e n z y m e p r e p a r a t i o n s o n f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( O b j e c t i v e 7 ) . A s u m m a r y o f t h e f i n d i n g s a n d c o n c l u s i o n s f r o m a l l t h e s t u d i e s i s p r e s e n t e d i n C h a p t e r 9 . R a w d a t a t a b l e s f o r e a c h c h a p t e r , a n d l i t e r a t u r e c i t e d a r e p r e s e n t e d i n t h e t w o a p p e n d i c e s . T h e g e n e r a l h y p o t h e s i s o f t h i s w o r k i s t h a t u t i l i z i n g a h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a n d p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e s w i l l i m p r o v e t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . C H A P T E R 1 E f f e c t o f c l i m a t e o n f o r a g e q u a l i t y I n a n y l i v e s t o c k o p e r a t i o n , i t i s w e l l r e c o g n i z e d t h a t a n i m a l p e r f o r m a n c e i s h i g h l y d e p e n d e n t o n f o r a g e q u a l i t y . F o r a g e i s a n y v e g e t a t i v e p l a n t m a t e r i a l i n a f r e s h , d r i e d , o r e n s i l e d s t a t e t h a t i s f e d t o l i v e s t o c k ( J e r g e n s , 1 9 9 3 ) . T h e n u t r i t i v e v a l u e o f f o r a g e s i s p r i m a r i l y d e t e r m i n e d b y i t s c h e m i c a l c o m p o s i t i o n , w h i c h r e s u l t f r o m t h e d i s t r i b u t i o n o f p h o t o s y n t h e t i c r e s o u r c e s i n t o t h e v a r i o u s p l a n t t i s s u e s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ; F i g u r e 1 - 1 ) . T h e i n t e r a c t i o n b e t w e e n t h e p l a n t a n d e n v i r o n m e n t d e t e r m i n e s t h e e x t e n t o f s t r u c t u r a l c o m p o n e n t s i n t h e v e g e t a t i v e m a t e r i a l , a n d s u b s e q u e n t l y i t s n u t r i t i v e v a l u e . T h e s t r u c t u r a l c o m p o n e n t s ( e . g . c e l l u l o s e , h e m i c e l l u l o s e , a n d l i g n i n ) a r e d i s t r i b u t e d i n t h e p r i m a r y a n d s e c o n d a r y p l a n t c e l l w a l l a n d a r e i n v e r s e l y r e l a t e d t o f o r a g e q u a l i t y . O t h e r p l a n t c o m p o n e n t s s u c h a s s o l u b l e c e l l c o n t e n t , i n c l u d i n g p r o t e i n s , s u g a r s , f a t s , s t a r c h a n d p e c t i n , a r e p o s i t i v e l y r e l a t e d t o n u t r i t i v e v a l u e ( F i g u r e 1 - 2 ) . T h e e f f e c t o f e n v i r o n m e n t o n t h e c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f f o r a g e s a n d s u b s e q u e n t n u t r i t i v e v a l u e w a s i n i t i a l l y d e f i n e d b y M i n s o n a n d M c L e o d ( 1 9 7 0 ) . D i f f e r e n c e s i n p l a n t c o m p o s i t i o n h a v e b e e n a t t r i b u t e d t o l i g h t 1 0 1 1 L i g h t 0 0 2 H 2 0 S o i l N u t r i e n t s a S o l u b l e S t r u c t u r a l M e t a b o l i c ( 2 : ) C o n s t i t u e n t s C o n s t i t u e n t s p o o l ( : 2 ) S t r e s s D i s e a s e W e a t h e r P r e d a t i o n F i g u r e 1 - 1 . R e l a t i o n o f e n v i r o n m e n t a l f a c t o r s t o p l a n t m e t a b o l i c c o m p o n e n t s ( a d a p t e d f r o m V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) 1 2 S O L U B L E C O N T E N T S C e l l C o n t e n t P r o t e i n S u g a r s F a t s S t a r c h P e c t i n S T R U C T U R A L C O M P O N E N T S H e m i c e l l u l o s e L i g n i n C e l l u l o s e D F C e l l N D F w a l l F i g u r e 1 - 2 . R e s i s t a n t s t r u c t u r e s a n d r e s e r v e c o m p o n e n t s i n v e g e t a t i v e m a t e r i a l 1 3 i n t e n s i t y , t e m p e r a t u r e , l a t i t u d e , w a t e r s t r e s s , f e r t i l i z a t i o n a n d s o i l . H o w e v e r , t e m p e r a t u r e , l i g h t , a n d l a t i t u d e h a v e b e e n d e s c r i b e d a s t h e t h r e e m a j o r f a c t o r s w h i c h m a y a l t e r f o r a g e c o m p o s i t i o n b e t w e e n e n v i r o n m e n t s . G e n e r a l l y , t e m p e r a t u r e h a s a g r e a t e r i n f l u e n c e o n f o r a g e q u a l i t y t h a n o t h e r e n v i r o n m e n t a l f a c t o r s , a n d i t s g r e a t e s t e f f e c t i s o n t h e a c c u m u l a t i o n o f s t r u c t u r e s r e s i s t a n t t o m i c r o b i a l d e g r a d a t i o n ( B u x t o n a n d F a l e s , 1 9 9 4 ) . A t l o w e r t e m p e r a t u r e , c e l l w a l l m a t e r i a l i s l e s s l i g n i f i e d t h a n a t h i g h e r t e m p e r a t u r e s ( V a n S o e s t e t a l . , 1 9 6 8 : N e l s o n a n d M o s e r , 1 9 9 4 ) . T h i s r e s u l t s f r o m a h i g h e r e n z y m a t i c a c t i v i t y a s s o c i a t e d w i t h l i g n i n b i o s y n t h e s i s w h e n t e m p e r a t u r e i s i n c r e a s e d ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . E l e v a t e d t e m p e r a t u r e s a r e a l s o a s s o c i a t e d w i t h g r e a t e r N D F , c e l l u l o s e , a n d s i l i c a ( H e n d e r s o n a n d R o b i n s o n , 1 9 8 2 ) , a n d a d e c r e a s e i n n o n - s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ( V o u g h a n d M a r t e n , 1 9 7 1 ) . T h e i n c r e a s e s i n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s a n d d e c r e a s e i n c e l l s o l u b l e s , a r e d u e t o a r a p i d m e t a b o l i c a c t i v i t y i n t h e p l a n t a t h i g h e r t e m p e r a t u r e s , w h i c h d e c r e a s e t h e p o o l o f m e t a b o l i t e s w i t h i n t h e c e l l . T h e e l e v a t e d p h o t o s y n t h e t i c p r o c e s s a n d r e s u l t i n g e n d - p r o d u c t s r e s u l t i n a m o r e r a p i d a c c u m u l a t i o n o f s t r u c t u r a l c o m p o n e n t s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . I n a d d i t i o n , a m i n o a c i d s a n d p r o t e i n s y n t h e s i s f r o m s u g a r s a r e g r e a t e r a s t e m p e r a t u r e i n c r e a s e s . A s a r e s u l t , n i t r o g e n s u p p l y i s i n c r e a s e d a n d s u g a r c o n t e n t d e c r e a s e d . T h e e f f e c t o f l i g h t i s e x e r t e d d i r e c t l y o n m e t a b o l i s m t h r o u g h p h o t o s y n t h e s i s a n d i s i n f l u e n c e d b y t o t a l a m o u n t o f l i g h t r e c e i v e d , l i g h t i n t e n s i t y a n d d a y 1 4 l e n g t h ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , p l a n t g r o w t h o c c u r s m a i n l y d u r i n g t h e s u m m e r . L o n g p h o t o p e r i o d s r e s u l t i n h i g h f o r a g e q u a l i t y b e c a u s e o f g r e a t e r p h o t o s y n t h e t i c a c t i v i t y o f t h e p l a n t a n d i n c r e a s e d s o l u b l e s u g a r c o n t e n t s ( W i l s o n , 1 9 8 2 ; D e i n u m , 1 9 8 4 ) . C o n v e r s e l y , i n t r o p i c a l c l i m a t e s , p l a n t s g r o w t h u n d e r a r e l a t i v e l y c o n s t a n t d a y l e n g t h a n d h i g h t e m p e r a t u r e s , r e s u l t i n g i n f o r a g e s t h a t t e n d t o b e o f l o w e r q u a l i t y . P l a n t n u t r i e n t s a r e m e t a b o l i z e d a t a f a s t e r r a t e t h a n t h e y a r e p r o d u c e d . T h e m e t a b o l i c a d a p t a t i o n s a s s o c i a t e d w i t h t h e w a r m , l o n g d a r k p e r i o d s p r o m o t e r e s p i r a t i o n . E l e v a t e d t e m p e r a t u r e s i n c r e a s e l i g n i f i c a t i o n a n d d e c r e a s e t h e n u t r i t i v e v a l u e o f t r o p i c a l f o r a g e s ( C r o w d e r a n d C h h e d a , 1 9 8 2 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . T h e e f f e c t o f l a t i t u d e o n p l a n t d e v e l o p m e n t i s c l o s e l y r e l a t e d t o p h o t o p e r i o d . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , t h e h i g h e r l a t i t u d e s h a v e l o n g e r d a y l e n g t h s a n d l e s s v a r i a t i o n i n d e n s i t y o f s o l a r r a d i a t i o n , w h e r e a s , i n t r o p i c a l c l i m a t e s l o c a t e d i n t h e l o w e r l a t i t u d e s d a y l e n g t h s a r e s h o r t e r , b u t f l u x d e n s i t y i s g r e a t e r . I n c r e m e n t s i n s o l a r r a d i a t i o n h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h h i g h e r r e s e r v e c o n t e n t s i n t h e p l a n t ( B a t h u r s t a n d M i t c h e l l , 1 9 5 8 ; M e l v i n a n d S u t h e r l a n d , 1 9 6 1 ; S m i t h , 1 9 7 3 ) . H o w e v e r , t h e h i g h e r t e m p e r a t u r e s a n d c h a r a c t e r i s t i c s h o r t e r d a y l e n g t h o v e r r i d e t h e p o s i t i v e e f f e c t o f s o l a r r a d i a t i o n o n p l a n t c o m p o s i t i o n i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . T h e e f f e c t o f w a t e r , f e r t i l i z a t i o n , a n d s o i l o n p l a n t d e v e l o p m e n t h a v e b e e n e x t e n s i v e l y d o c u m e n t e d ( M i n s o n , 1 9 9 0 ; B u x t o n a n d F a l e s , 1 9 9 4 , V a n 1 5 S o e s t , 1 9 9 4 ) , a n d t h e i r e f f e c t s a r e v a r i a b l e b e t w e e n e n v i r o n m e n t s a n d w i t h i n g e o g r a p h i c a l r e g i o n s . S i l a g e Q u a l i t y I n a n y c o n s e r v a t i o n m e t h o d f o r f o r a g e , q u a l i t y i s d e f i n e d b y r e c o v e r y o f n u t r i e n t s , a n d p r o d u c t i o n o f a n u t r i t i v e f e e d s t u f f f o r l i v e s t o c k ( B a r n e t t , 1 9 5 4 ; M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 i . S i l a g e q u a l i t y , h a s t r a d i t i o n a l l y b e e n a s s o c i a t e d w i t h t h e t y p e o f f e r m e n t a t i o n t h a t o c c u r s . C h a r a c t e r i s t i c s o f a s u c c e s s f u l f e r m e n t a t i o n i n c l u d e h i g h l a c t i c a c i d c o n t e n t , l o w p H , a n d s t i m u l a t i o n o f g r e a t e r a n i m a l i n t a k e a n d p e r f o r m a n c e . C o n v e r s e l y , s i l a g e s w i t h h i g h c o n c e n t r a t i o n o f b u t y r i c , a n d a c e t i c a c i d s , h a v e s h o w n a n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w i t h a n i m a l p e r f o r m a n c e ( W i l k i n s o n e t a l . , 1 9 7 6 ; M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ; S h a v e r e t a l . , 1 9 8 5 ) a n d a r e c o n s i d e r e d t o b e o f p o o r q u a l i t y . G o o d q u a l i t y s i l a g e c a n b e d e s c r i b e d a s t h e p l a n t m a t e r i a l t h a t h a s a p H o f l e s s t h a n 4 . 2 , l a c t i c a c i d g r e a t e r t h a n 1 . 5 g / 1 0 0 g D M , a c e t i c a c i d b e t w e e n . 5 a n d . 8 9 / 1 0 0 9 D M , b u t y r i c a c i d l e s s t h a n . 1 g / 1 0 0 g D M ( B r e i r m a n a n d U l v e l s i , c i t e d b y M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ) , a n d a m m o n i a - n i t r o g e n l e s s t h a n 8 % o f t h e t o t a l n i t r o g e n ( M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ) . C r i t e r i a a s s o c i a t e d w i t h h i g h q u a l i t y s i l a g e a n d t h e l o s s e s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s ( e . g . p l a n t e n z y m e s r e s p i r a t i o n , m i c r o b i a l m e t a b o l i s m , a n d e f f l u e n t l o s s e s ) h a v e b e e n e x t e n s i v e l y r e v i e w e d ( M u c k , 1 9 8 8 ; M c D o n a l d e t a l , 1 9 9 1 ; W o o l f o r d , 1 9 9 2 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . 1 6 M i c r o b i o l o g y o f S i l a g e S i l a g e f e r m e n t a t i o n i s c h a r a c t e r i z e d b y a v e r y h e t e r o g e n o u s m i c r o b i a l p o p u l a t i o n . T h e m a j o r m i c r o b i a l g r o u p s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s i n c l u d e ; l a c t i c a c i d b a c t e r i a , E n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s , a n d e n d o s p o r e - f o r m i n g b a c t e r i a . H o w e v e r , o t h e r m i c r o b i a l g r o u p s s u c h a s a c e t i c a c i d b a c t e r i a , p r o p i o n i c a c i d b a c t e r i a , a n d l i s t e r i a , h a v e a l s o b e e n i d e n t i f i e d a s p a r t o f t h e s i l a g e m i c r o f l o r a . L a c t i c A c i d B a c t e r i a T h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a a r e d e s c r i b e d a s g r a m - p o s i t i v e , m i c r o a e r o p h i l i c , a s p o r o g e n o u s , s o m e t i m e s m o t i l e , a n d c a p a b l e o f f e r m e n t i n g s u g a r s ( B u c h a n a n a n d G i b b o n s , 1 9 7 4 ; L o n d o n , 1 9 7 6 ) . T h e y a r e a l s o c l a s s i f i e d b a s e d o n c e l l m o r p h o l o g y ( e . g . c o c c i , r o d s ) a n d t h e f e r m e n t a t i o n p a t h w a y u t i l i z e d f o r s u g a r m e t a b o l i s m ( h e t e r o f e r m e n t a t i v e a n d h o m o f e r m e n t a t i v e ) . T h e l a s t c l a s s i f i c a t i o n i s t h e m o s t i m p o r t a n t f r o m a s i l a g e f e r m e n t a t i o n s t a n d p o i n t . D u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s , b o t h h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a r e p r e s e n t ( T a b l e 1 . 1 ) . T h e h o m o f e r m e n t a t i v e b a c t e r i a a r e t h e d e s i r e d t y p e b e c a u s e t h e y d e g r a d e o n e m o l e o f h e x o s e ( e . g . g l u c o s e , f r u c t o s e ) t o t w o m o l e s o f l a c t i c a c i d ( F i g u r e 1 - 3 ) , r e s u l t i n g i n m o r e e f f i c i e n t p r o d u c t i o n o f l a c t i c a c i d a n d s u b s e q u e n t d e c r e a s e i n p H . T h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a a r e H L o a m c t S t r o e o f p e a b r c t o c e s i s u m m h f i o l r u r u s u s m L i L L L L L S e l . . . . . . o . i a t o i n v t a p i v a r a i l s r a r n t u s a c c c s p a o u c l a c u l c t v n d e y i s b o v i s H L e a t c e t r o o f e r m b a l l L e u c o n u e f v b b s n e r u c i e e c r r t s a v m h i i d t n i e s e e v r e i n s t c u e m n e n t e r o s i d e s t o m c o i L L L L s L . . . . . 1 7 T a b l e 1 - 1 . S p e c i e s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a f o u n d i n s i l a g e P e d i o c o c c u s P . a c i d i l a c t i c i P . c e r i v i s i a e P . p e n t o s a c e u s L a c t o c o c c u s L . l a c t i s E n t e r o c o c c u s E . f a e c a l i s E . f a e c i u m ( A d a p t e d f r o m M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) 1 8 F r u c t o s e G l u c o s e A T I ’ A T ? A D P A D P G I u c o s e - 6 - p h o s p h a t e F r u c t o s e - 6 - P h o s p h a t e A T P A D P 2 G I y c e r a l d e h y d e - 3 - p h o s p h a t e : P I Z N A D J A D P Z N A D H + 2 H ' 4 A T P 2 - P y r u v a t e Z N A D H + 2 H ° Z N A D ' 2 - L a c t a t e S u m : H e x o s e + 2 A D P + 2 P i = 2 L a c t a t e + 2 A T P + 2 H 2 0 F i g u r e 1 - 3 . F e r m e n t a t i o n o f g l u c o s e a n d f r u c t o s e b y h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( A d a p t e d f r o m M c D o n a l d , e t a l 1 9 9 1 ) 1 9 l e s s d e s i r a b l e b e c a u s e m a n y o f t h e i r f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s ( e . g . a c e t i c a c i d , e t h a n o l , m a n n i t o l ; F i g u r e 1 - 4 ) t h a t r e s u l t f r o m t h e m e t a b o l i s m o f s u g a r s , h a v e d i s s o c i a t i o n c o n s t a n t ( p K a ' s ) g r e a t e r t h a n l a c t i c a c i d , a n d t h e i r a c c u m u l a t i o n t e n d s t o r e s u l t i n s i l a g e w i t h h i g h e r p H . C a r b o n d i o x i d e i s a l s o p r o d u c e d b y m o s t h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a , r e s u l t i n g i n c a r b o n l o s s e s . H o m o l a c t i c b a c t e r i a n o r m a l l y m e t a b o l i z e s u g a r s b y t h e E m d e n - M e y e r h o f f — P a r n a s p a t h w a y ; w h e r e a s h e t e r o f e r m e n t a t i v e b a c t e r i a u s e t h e h e x o s e m o n o p h o s p h a t e p a t h w a y ( B u c h a n a n a n d G i b b o n s , 1 9 7 4 ) . B o t h h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a c a n d e g r a d e p e n t o s e s ( e . g . x y l o s e , a r a b i n o s e ) y i e l d i n g l a c t a t e a n d a c e t a t e a s f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s ( F i g u r e 1 - 5 ) . S o m e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l s t r a i n s a r e c a p a b l e o f d e g r a d i n g o t h e r o r g a n i c a c i d s , s u c h a s c i t r i c , m a l i c , l a c t i c a n d a c e t i c a c i d s ( B r y a n - J o n e s , 1 9 6 9 ; C i t e d b y M c D o n a l d e t a l , 1 9 9 1 ; F i g u r e 1 - 6 ) , a n d b o t h t y p e s h a v e b e e n s h o w n t o d e a m i n a t e a n d d e c a r b o x y l a t e a m i n o a c i d s a n d p o s s e s s s o m e p r o t e o l y t i c a c t i v i t y ( B r a d y , 1 9 7 6 ; B e c k , 1 9 7 8 ) . E n t e r o b a c t e r i a c e a e T h e e n t e r o b a c t e r i a c e a e a r e g r a m n e g a t i v e , r o d - s h a p e d b a c t e r i a , t h a t a r e f a c u l t a t i v e l y a n a e r o b i c , a s p o r o g e n o u s , c a p a b l e o f f e r m e n t i n g s u g a r s , a n d u s u a l l y f o u n d a t e a r l y s t a g e s o f e n s i l i n g ( B e c k , 1 9 7 8 ) . E n t e r o b a c t e r i a c e a e h a v e b e e n f o u n d t o o c c u r a t l e v e l s o f 1 0 5 - 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l i n a l f a l f a , ( B o l s e n e t a l , 1 9 9 2 ) a n d g r a s s e s ( R a u r a m a a , 1 9 8 7 b ) , b u t t h e i r S u m : 2 0 N A I H ' I I I I I N A I H ' G l u c o s e F r u c t o s e g » M a n n i t o l A I I ' . \ I I ' A I H ' A l ) I ' G l u c o s e - G - p h o s p h a t e < — F r u c t o s e - B - p h o s p h a t e N A I ) N - \ I ) I I 6 I I 6 - P h o s p h o g l u c o n a t e N A O ' C 0 : N A U H o I r R i b u l o s e - S - p h o s p h a t e l X y l u l o s e — S - p h o s p h a t e I ' r / A I ‘ T ‘ ( \ I I ' G l y c e r a l d e h y d e - 3 - p h o s p h a t e A c e t y l p h o s p h a t e _ _ L _ . _ _ , A c e t a t e p . I N A D ' 2 A D P , ( b A N A D H O [ 1 ' Q 2 A T P P i P y r u v a t e A c e t y l - C o A N A D H + H ' ‘ N A D I I . l t ' N A D ' l “ 6 0 ‘ L a c t a t e A c e t a l d e h y d e N A D I I 0 I I N A D ' E t h a n o l G l u c o s e + A D P + P i = L a c t a t e + E t h a n o l + C 0 , + 2 A T P + 2 H 2 0 3 F r u c t o s e + 2 A D P + 2 P i = L a c t a t e + A c e t a t e + 2 M a n n i t o l + C O 2 + 2 A T P + H 2 0 G l u c o s e + 2 F r u c t o s e + 2 A D P + 2 P i = L a c t a t e + A c e t a t e + 2 M a n n i t o l + C 0 2 + 2 A T P + H 2 0 F i g u r e 1 — 4 . F e r m e n t a t i o n o f g l u c o S e a n d f r u c t o s e b y h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( a d a p t e d f r o m M c D o n a l d , e t a l 1 9 9 1 ) 2 1 X y l o s e A r a b i n o s e X y l u l o s e R i b u l o s e A T P A T P A D P A D P R i b u l o s e - S - p h o s p h a t e . / X y l u l o s e - S - p h o s p h a t e I ’ I G l y c e r a I d e h y d e — 3 - p h o s p h a t e A c e t y l p h o s p h a t e V p a N A D ‘ 2 A D P A D P N A D H + H ‘ 2 A T P C P y r u v a t e A T P N A D H + H ‘ N A D ‘ q ) L a c t a t e A c e t a t e S u m : X y l o s e ( o r A r a b i n o s e ) + 2 A D P + 2 P i = L a c t a t e + A c e t a t e + 2 A T P + 2 H 2 0 F i g u r e 1 - 5 . F e r m e n t a t i o n o f p e n t o s e s b y h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( A d a p t e d f r o m M c D o n a l d , e t a l 1 9 9 1 ) C i t r a e t M e l a “ M a l a N t A e D N A D ' H + I I ' 2 2 O x a l o a c e t a t e C O , N A D H + 1 1 ’ N A D ' P y r u v a t e \ j — e L a c t a t e / C O A / / / / / ‘ / F o r m a t e 2 P y r u v a t e A c e t y l - C D A P 2 C D , ' C 0 ; 2 N A I ) H + 2 H ' A c e t o i n C ‘ o A A D P N A D H + I I ‘ . Z N A D A T P N A D ' . / 2 , 3 — B u t a n e d i o l E t h a n o l A c e t a t e S u m : C i t r a t e + A D P + P i = 2 A c e t a t e + F o r m a t e + C 0 2 + A T P 2 C i t r a t e + 2 H = 2 A c e t a t e + 2 , 3 - B u t a n e d i o l + 4 C 0 2 2 C i t r a t e + A D P + P i = 3 A c e t a t e + L a c t a t e + 3 C 0 2 + A T P C i t r a t e + 4 H = A c e t a t e + E t h a n o l + F o r m a t e + C O , M a l a t e = L a c t a t e + C 0 2 2 M a l a t e = 2 , 3 - B u t a n e d i o l + 4 C 0 2 + 2 H M a l a t e + A D P + P i = A c e t a t e + F o r m a t e + C O 2 + 2 H + A T P M a l a t e + 2 H = E t h a n o l + F o r m a t e + C O 2 F i g u r e 1 - 6 . F e r m e n t a t i o n o f C i t r a t e a n d m a l a t e . b y h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a 2 3 p r e s e n c e h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h p o o r q u a l i t y s i l a g e ( O s t l i n g a n d L i n d g r e n , 1 9 9 1 ) . T h e m a i n f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s o f E n t e r o b a c t e r i a c e a e f r o m h e x o s e m e t a b o l i s m a r e a c e t i c a c i d a n d e t h a n o l . O t h e r f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s p r o d u c e d i n l e s s e r a m o u n t i n c l u d e l a c t a t e , s u c c i n a t e , a n d 2 , 3 - b u t a n e d i o l ( B u c h a n a n a n d G i b b o n s , 1 9 7 4 ; B e c k 1 9 7 8 ) . Y e a s t s a n d M o l d s Y e a s t s a n d m o l d s a r e c l a s s i f i e d w i t h i n t h e f u n g i k i n g d o m . Y e a s t s g r o w a s s i n g l e c e l l s , a n d h a v e b e e n c l a s s i f i e d b y t h e i r a b i l i t y t o f e r m e n t s u g a r s a n d d e g r a d e l a c t i c a c i d ( s e d i m e n t a r y o r p e l l i c l e ) . H e x o s e s a r e t h e m a i n s u g a r s u t i l i z e d b y y e a s t , h o w e v e r , s o m e y e a s t u t i l i z e p e n t o s e s ( e . g . x y l o s e , r i b o s e ) , s t a r c h , a l c o h o l s , a n d o r g a n i c a c i d s ( P e l c z a r a n d R e i d , 1 9 7 2 ) . Y e a s t s a r e n o t I n h i b i t e d b y l o w p H l e v e l s r e a c h e d d u r i n g e n s i l i n g , a n d u n d e r a n a e r o b i c c o n d i t i o n s m a y u t i l i z e a g r e a t v a r i e t y o f s u b s t r a t e s i n c l u d i n g o r g a n i c a c i d s a n d e t h a n o l ( W o o l f o r d , 1 9 7 6 ) . S t u d i e s h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t y e a s t s a r e c a p a b l e o f p r o d u c i n g l a c t i c a c i d f r o m s u g a r ( W o o l f o r d , 1 9 7 6 ) . H o w e v e r , t h e i r p r e s e n c e I n s i l a g e i s n o t d e s i r a b l e b e c a u s e t h e y t e n d t o u t i l i z e c a r b o n s o u r c e s i n e f f i c i e n t l y ( i . g . i n c r e a s e e t h a n o l p r o d u c t i o n w h i c h r e s u l t s i n s i l a g e s t h a t a r e s u s c e p t i b l e t o a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n ) . M o l d s g r o w a s m u l t i c e l l u l a r f i l a m e n t o u s c o l o n i e s , a r e n o t c o m m o n i n t h e e a r l y s t a g e s o f e n s i l i n g , a n d t h e i r p r e s e n c e i s g e n e r a l l y a s s o c i a t e d w i t h d e t e r i o r a t i o n a f t e r e x p o s u r e t o a i r ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . T h e m a j o r e n d - 2 4 p r o d u c t s o f r e s p i r a t i o n b y y e a s t s a r e l a c t a t e , a c e t a t e a n d e t h a n o l , a n d h a v e b e e n s h o w n t o c o m p e t e w i t h l a c t i c a c i d b a c t e r i a f o r s u b s t r a t e s ( R a u r a m a a e t a l . , 1 9 8 7 b ) . T h e a c t i v i t y o f m o l d s a r e u s u a l l y s e c o n d a r y t o t h e a c t i v i t y o f y e a s t s ( O h y a m a a n d M c D o n a l d , 1 9 7 5 ; O h y a m a e t a l . , 1 9 7 5 b ) , a n d a r e i m p l i c a t e d i n t h e p r o d u c t i o n o f t o x i n s ( e . g . a f l a t o x i n , z e a r a l e n o n e ) a n d o t h e r p r o d u c t s t h a t m a y b e d e t r i m e n t a l t o a n i m a l s ( B e c k , 1 9 7 8 ) . E n d o s p o r e - f o r m i n g b a c t e r i a C l o s t r i d i a a n d b a c i l l u s a r e e n d o s p o r e - f o r m i n g b a c t e r i a t h a t h a v e b e e n i s o l a t e d f r o m s i l a g e . C l o s t r i d i a h a v e b e e n c l a s s i f i e d i n t o t w o m a j o r g r o u p s a c c o r d i n g t o s u b s t r a t e s u t i l i z e d o r e n d - p r o d u c t s p r o d u c e d . S a c c h a r o l y t i c C l o s t r i d i a a r e a s s o c i a t e d w i t h s i l a g e t h a t d o e s n o t r e a c h a p H b e l o w 4 . 2 , a n d w i l l d e g r a d e c a r b o h y d r a t e s t o b u t y r i c a c i d a n d c a r b o n d i o x i d e ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ) . A c c u m u l a t i o n o f b u t y r i c a c i d c a u s e s a i n c r e a s e i n p H w h i c h w i l l f a v o r t h e g r o w t h o f p r o t e o l y t i c C l o s t r i d i a . T h e p r e s e n c e o f C l o s t r i d i a d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s i s u n d e s i r a b l e b e c a u s e t h e y a c t a g a i n s t p r e s e r v a t i o n b y d e s t r o y i n g l a c t i c a c i d , i n c r e a s i n g p H , a n d i n c r e a s e p r o t e i n d e g r a d a t i o n . S o m e s t r a i n s o f C l o s t r i d i a a r e a b l e t o p r o d u c e p r o p i o n i c a c i d b y r e d u c t i o n o f l a c t i c a c i d . B a c i l l i a r e m i c r o o r g a n i s m s t h a t h a v e n o t r e c e i v e d a s m u c h a t t e n t i o n a s t h e c l o s t r i d i a , b u t a r e a s s o c i a t e d w i t h p o o r q u a l i t y s i l a g e . T h e s e b a c t e r i a a r e a e r o b i c o r f a c u l t a t i v e l y a n a e r o b i c , a n d a m m o n i a h a s b e e n s h o w n t o b e a n e n d - p r o d u c t o f t h e i r m e t a b o l i s m 2 5 ( B u c h a n a n a n d G i b b o n s , 1 9 7 4 ) . O t h e r m i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s A c e t i c a c i d - a n d p r o p i o n i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a , a n d L i s t e r i a a r e o t h e r m i c r o o r g a n i s m s t h a t h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s . A c e t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a r e m o r e a c t i v e w h e n p H i s o v e r 5 . 0 w h i c h u s u a l l y o c c u r s i n t h e i n i t i a l s t a g e s o f a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f p o o r l y f e r m e n t e d s i l a g e . T h e s e b a c t e r i a p r o d u c e a c e t i c a c i d f r o m e t h a n o l , a n d c a r b o n d i o x i d e a n d w a t e r f r o m a c e t i c a n d l a c t i c a c i d s . P r o p i o n i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a h a v e b e e n s h o w n t o b e p a r t o f t h e s i l a g e m i c r o f l o r a . T h i s b a c t e r i a m a y u t i l i z e l a c t a t e o r s u g a r a s s u b s t r a t e a n d t h e i r f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s m a i n l y i n c l u d e p r o p i o n i c a c i d , a c e t i c a c i d , a n d c a r b o n d i o x i d e . P r o p i o n i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a h a v e b e e n t e s t e d t o e n h a n c e t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e ( D a w s o n , 1 9 9 4 ) . L i s t e r i a a r e m i c r o o r g a n i s m s f o u n d f r e q u e n t l y i n s i l a g e , b u t a t r e l a t i v e l y l o w n u m b e r s ( G r a y a n d K i l l i n g e r , 1 9 6 6 ) . T h e i r i m p o r t a n c e i s r e l a t e d t o m e t a b o l i c d i s e a s e s r a t h e r t h a n s i l a g e f e r m e n t a t i o n . I n f o r a g e e n s i l e d u n d e r s t r i c t l y a n a e r o b i c c o n d i t i o n s a n d w e l l f e r m e n t e d , l i s t e r i a p o p u l a t i o n i s a b s e n t d u e t o t h e i r s u s c e p t i b i l i t y t o l o w p H . S o u r c e o f m i c r o o r g a n i s m s i n t h e e n s i l i n g p r o c e s s E p i p h y t i c m i c r o f l o r a a r e f o u n d o n t h e s t a n d i n g c r o p p r i o r t o o r i m m e d i a t e l y 2 6 a f t e r h a r v e s t , a n d r e p r e s e n t t h e m a i n s o u r c e o f m i c r o o r g a n i s m s f o r t h e e n s i l i n g p r o c e s s . A e r o b i c b a c t e r i a , E n t e r o b a c t e r i a c e a e , a n d y e a s t s a n d m o l d s s e e m t o b e t h e m o s t p r e d o m i n a n t o r g a n i s m s o n t h e s t a n d i n g f o d d e r p l a n t s ( L i n d g r e n e t a l . , 1 9 8 5 ) . H o w e v e r , i n v i e w o f t h e i r i m p o r t a n c e d u r i n g s i l a g e f e r m e n t a t i o n , m o s t o f t h e r e s e a r c h h a s b e e n f o c u s e d o n t h e p r e s e n c e o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s . T h e o c c u r r e n c e o f e p i p h y t i c m i c r o f l o r a c a n r a n g e f r o m n o d e t e c t a b l e l e v e l s t o 1 0 4 - 1 0 6 c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ( F e n t o n , 1 9 8 7 ) , a n d m a y b e i n f l u e n c e d b y e n v i r o n m e n t a l a n d p l a n t f a c t o r s . J . A . R o o k e ( 1 9 9 0 ) r e p o r t e d t h a t l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a w e r e h i g h e r i n t h e s e c o n d c u t t i n g o f p e r e n n i a l r y e g r a s s ( L o l i u m p e r e n n e ) . F e n t o n ( 1 9 8 7 ) a n d M u c k ( 1 9 8 9 ) s h o w e d t h a t t h e e p i p h y t i c , l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s p o s i t i v e l y a s s o c i a t e d w i t h a i r t e m p e r a t u r e a n d l e n g t h o f w i l t i n g , b u t n e g a t i v e l y c o r r e l a t e d w i t h d r y i n g r a t e . E p i p h y t i c m i c r o f l o r a p r e s e n t o n a l f a l f a p l a n t s w e r e s h o w n t o b e h i g h e r a t e l e v a t e d t e m p e r a t u r e s d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n , b u t l i t t l e e f f e c t d u e t o c u t t i n g n u m b e r , p l a n t m a t u r i t y , o r w i l t i n g w a s o b s e r v e d ( L i n e t a l . , 1 9 9 2 a ) . I n a d d i t i o n t o e p i p h y t i c m i c r o f l o r a , s o i l a n d m a c h i n e r y h a v e b e e n i d e n t i f i e d a s a s o u r c e o f m i c r o o r g a n i s m s f o r t h e e n s i l i n g p r o c e s s . E n d o s p o r e - f o r m i n g b a c t e r i a ( i . e . c l o s t r i d i a , b a c i l l u s ) a r e g e n e r a l l y n o t d e f i n e d a s p a r t o f t h e e p i p h y t i c m i c r o f l o r a , b u t a r e c o n s i d e r e d t o b e s o i l c o n t a m i n a n t s ( R a u r a m a a e t a l . , 1 9 8 7 b ) . S t i r l i n g a n d W h i t t e n b u r y ( 1 9 6 3 ) o b s e r v e d a n i n c r e a s e i n b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s o n p l a n t m a t e r i a l d u r i n g t h e h a r v e s t i n g p r o c e s s , w h i l e 2 7 F e n t o n ( 1 9 8 7 ) r e p o r t e d t h a t p a s s a g e t h r o u g h t h e f a r m m a c h i n e r y s e r v e d t o i n o c u l a t e t h e f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g . B i o c h e m i s t r y o f t h e S i l a g e F e r m e n t a t i o n T h e g r o w t h o f m i c r o o r g a n i s m s d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s r e q u i r e s t h e p r e s e n c e o f a n a q u e o u s e n v i r o n m e n t . M o s t s u b s t r a t e s u s e d b y m i c r o o r g a n i s m s a r e w a t e r s o l u b l e , l o w m o l e c u l a r w e i g h t , a n d r e a d i l y a b s o r b e d b y t h e m i c r o o r g a n i s m s . T h e r e a r e t h r e e m a j o r c h e m i c a l g r o u p s t h a t s e r v e a s s u b s t r a t e s d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s ; c a r b o h y d r a t e s , o r g a n i c a c i d s , a n d n i t r o g e n o u s c o m p o u n d s . C a r b o h y d r a t e s i n t h e p l a n t p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n i n t e r m e d i a t e m e t a b o l i s m , e n e r g y t r a n s f e r a n d s t o r a g e , a n d p l a n t s t r u c t u r e . C a r b o h y d r a t e s m a y b e C l a s s i f i e d i n t w o m a i n c a t e g o r i e s ; s t r u c t u r a l a n d n o n - s t r u c t u r a l . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s c o n s t i t u t e t h e p l a n t c e l l - w a l l a n d a r e i m p o r t a n t i n t h e s t r u c t u r a l i n t e g r i t y o f i n d i v i d u a l c e l l s , t i s s u e s a n d o r g a n s ( H a t f i e l d , 1 9 8 9 ) . T h e m a i n c o m p o n e n t s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s i n c l u d e c e l l u l o s e , a l i n e a r p o l y m e r o f D - g l u c o s e u n i t s j o i n e d b y 8 - ( 1 - 4 ) b o n d s , h e m i c e l l u l o s e c o m p r i s e d b y m i x t u r e s o f d i f f e r e n t m o n o s a c c h a r i d e s ( e . g . x y l a n , a r a b i n o s e , g l u c o s e ) , a n d p e c t i n s w h i c h c o n s i s t o f c h a i n s o f m e t h y l g l u c u r o n i c a c i d , i n t e r s p e r s e d w i t h g l u c o s e , g a l a c t o s e , a n d a r a b i n o s e . C e l l u l o s e i s n o t d e g r a d e d d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s a n d o n l y s m a l l a m o u n t s o f h e m i c e l l u l o s e a r e d e g r a d e d b y e n z y m e s p r e s e n t i n t h e p l a n t . 2 8 F r u c t a n s a n d s t a r c h a r e t h e m a j o r n o n - s t r u c t u r a l , s t o r a g e c a r b o h y d r a t e s f o u n d i n p l a n t s . F r u c t a n s a r e c o m p o s e d e n t i r e l y o f f r u c t o s e m o l e c u l e s , a n d a r e n o t n o r m a l l y m e t a b o l i z e d d u r i n g s i l a g e f e r m e n t a t i o n . H o w e v e r , t h e y a r e t h e m a j o r s t o r a g e c a r b o h y d r a t e s o f t e m p e r a t e g r a s s e s . S t a r c h i s f o r m e d b y p o l y m e r s c o m p r i s e d o f o - D - g l u c o s e u n i t s , a n d o c c u r i n t w o f o r m s i n t h e p l a n t ; a m y l o s e a n d a m y l o p e c t i n , w h i c h d i f f e r i n m o l e c u l a r w e i g h t , t y p e o f b o n d i n g , a n d w a t e r s o l u b i l i t y . S t a r c h I s n o t f e r m e n t e d b y m i c r o o r g a n i s m s n o r m a l l y f o u n d i n s i l a g e s ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ) , h o w e v e r , i t i s t h e m a i n s t o r a g e c a r b o h y d r a t e i n t r o p i c a l g r a s s e s . G l u c o s e , f r u c t o s e , a n d s u c r o s e a r e a l s o n o n - s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s f o u n d i n p l a n t s . G l u c o s e a n d f r u c t o s e a r e s i m p l e s u g a r s C l a s s i f i e d a c c o r d i n g t o t h e i r f u n c t i o n a l g r o u p ( a l d e h y d e o r k e t o n e ) w h e n i n t h e o p e n - c h a i n f o r m , a n d s u c r o s e i s a d i s a c c h a r i d e c o m p o s e d o f g l u c o s e a n d f r u c t o s e . T h e s e c a r b o h y d r a t e s a r e h i g h l y s o l u b l e i n c o l d w a t e r a n d e a s i l y h y d r o l y z e d i n w e a k a c i d . C o l l e c t i v e l y , t h e y c o m p r i s e t h e f r a c t i o n m e a s u r e a s w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( W S C ) a n d r e p r e s e n t t h e m a i n e n e r g y s o u r c e f o r m i c r o o r g a n i s m s d u r i n g s i l a g e f e r m e n t a t i o n . S m a l l e r c o n c e n t r a t i o n s o f a r a b i n o s e , x y l o s e , r i b o s e , g a l a c t o s e , a n d m a n n o s e a r e a l s o p r e s e n t i n t h e W S C f r a c t i o n o f f o r a g e s ( M c l l r o y , 1 9 6 7 ; V o l e n e c a n d N e l s o n , 1 9 8 4 ) . I n t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n , a d i s t i n c t p r e f e r e n c e f o r f r u c t o s e , g l u c o s e , a r a b i n o s e , a n d x y l o s e o v e r o t h e r w a t e r s o l u b l e , s t o r a g e a n d n o n - f e r m e n t a b l e c a r b o h y d r a t e s h a s b e e n s h o w n ( S a l i s b u r y , e t a l , 1 9 4 9 ) . m i c r o b i o l o g i c a l , b i o c h e m i c a l , a n d e n v i r o n m e n t a l c h a n g e s o c c u r r i n g d u n h g 2 9 O r g a n i c a c i d s a n d t h e i r s a l t s p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n t h e e n s i l i n g p r o c e s s . T h e c o n t e n t o f o r g a n i c a c i d s i n p l a n t s r a n g e f r o m 2 . 0 t o 6 . 0 % o f t h e D M ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) , a n d a r e a s s o c i a t e d w i t h t h e b u f f e r i n g c a p a c i t y o f s i l a g e s ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) . C i t r i c , m a l i c , a n d s u c c i n i c a r e t h e p r e v a l e n t o r g a n i c a c i d s i n g r a s s e s . I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , g r a s s e s a l s o c o n t a i n o x a l o a c e t i c a c i d ( a n i n t e r m e d i a t e i n t h e t r i c a r b o x y l i c c y c l e a n d o t h e r b i o c h e m i c a l p a t h w a y s i n C - 4 p l a n t s ) , w h i c h h a v e b e e n s h o w n t o h a v e a s t r o n g b u f f e r i n g c a p a c i t y , a n d m a y b e a s s o c i a t e d w i t h t h e i n a b i l i t y t o a c h i e v e a l o w p H i n t r o p i c a l s i l a g e s . O r g a n i c a c i d s a r e r e a d i l y d e g r a d e d b y l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a t o e n d - p r o d u c t s w i t h l o w e r d i s a s s o c i a t i o n c o n s t a n t s s u c h a s 2 , 3 - b u t a n e d i o l , f o r m a t e , a c e t a t e , e t h a n o l , a n d c a r b o n d i o x i d e ( B e c k , 1 9 7 8 ; M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ) . N i t r o g e n o u s c o m p o u n d s p r e s e n t i n t h e f r e s h f o r a g e i n c l u d e p r o t e i n , a m i n o a c i d s , a m i d e s , a m i n e s , c h l o r o p h y l l , u r e i d e s , n u c l e o t i d e s , a n d l o w m o l e c u l a r w e i g h t p e p t i d e s ( E d w a r d s a n d M c D o n a l d , 1 9 8 7 ) . N i t r o g e n o u s c o m p o u n d s h a v e b e e n i m p l i c a t e d a s a s o u r c e o f b u f f e r i n g c a p a c i t y i n f o r a g e s ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) , a n d a r e p o s i t i v e l y c o r r e l a t e d w i t h a m m o n i a c a l n i t r o g e n c o n t e n t o f s i l a g e ( R a u r a m a a e t a l . , 1 9 7 8 a ) . P h a s e s o f t h e e n s i l i n g p r o c e s s a n d s t o r a g e S i l a g e p r o d u c t i o n h a s b e e n d i v i d e d i n t o 6 p h a s e s a c c o r d i n g t o t h e 3 0 t h e e n s i l i n g p r o c e s s ( B a r n e t t , 1 9 5 4 ; M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ; F i g u r e 1 - 7 ) . P h a s e 1 . P h a s e 2 . T h e a e r o b i c o r r e s p i r a t i o n p h a s e . B e g i n s w h e n t h e f o r a g e i s p l a c e d i n t o t h e s i l o a n d e n d s w h e n a l l o x y g e n i n t h e e n s i l e d m a t e r i a l i s d e p l e t e d . A t t h e o n s e t o f t h e e n s i l i n g p r o c e s s , p l a n t e n z y m e s h y d r o l y z e c a r b o h y d r a t e s ( m o n o m e r s a n d p o l y m e r s ) , p r o t e i n s , a n d s m a l l a m o u n t s o f o r g a n i c a c i d s t o c a r b o n d i o x i d e , w a t e r , a n d h e a t ( W y l a n , 1 9 5 4 ) . H o w e v e r , t h e i r a c t i o n d o e s n o t s e e m t o p l a y a m a j o r r o l e i n d e g r a d a t i o n o f t h e s e s u b s t r a t e s w h e n c o m p a r e d w i t h t h e f u r t h e r a c t i o n o f m i c r o o r g a n i s m s ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ) . D u r i n g t h i s r e s p i r a t i o n p h a s e t e m p e r a t u r e i s i n c r e a s e d a n d p H i s d e c r e a s e d . E x p o n e n t i a l g r o w t h o f f a c u l t a t i v e a n d o b l i g a t e o b l i g a t e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a i s i n i t i a t e d , a n d t h e n u m b e r o f e n t e r o b a c t e r i a c e a e m a y i n c r e a s e r e a c h i n g p o p u l a t i o n s a s h i g h a s 1 0 8 t o 1 0 9 c f u \ g o f f r e s h m a t e r i a l ( G i b s o n e t a l , 1 9 5 8 ) . O x y g e n u t i l i z a t i o n s h o u l d b e r a p i d t o m i n i m i z e t h e g r o w t h o f a e r o b i c b a c t e r i a , y e a s t s a n d m o l d s , a n d c e r t a i n C l o s t r i d i a . A n a e r o b i c p h a s e . B e g i n s w h e n t h e o x y g e n i s d e p l e t e d . G e n e r a l l y t e m p e r a t u r e o f t h e s i l a g e m a s s w h i c h p e a k s i n I A c c i i d d L F a o c r t i m a I c I t A i i o n I I c c o c ° t a d t . i i 2 n u l t A C A L a E P c a n t r e c d h o 3 2 n o t r o n i e a C t o i r c a d - A c P e r t o i d c u B a c t e A i i c n a c r i g a T a c O c t t d i e U c r e 1 n t u _ i R 0 a P e 0 n r s 2 2 d o r e E i M s m s l r I W u . a l H c a 5 t ° e t t y i r p o h f i l P h a s . o r s n j e n e j a a a o e r e p v m M r P g h h M o r a u T E e C C . c M i F i a t e t n r r s g g ” g e a n e 1 C p e i . d 0 p c d I c t i m a t L F a o c r V M S a t t o e r r i a a g l e A i C V . d c o i n w m V e x p ° E A 7 I r o b i c s u r e o C a n d e o a l s d s t s 3 Y M ° , c o h d o d c - i n i Q i n , c H A I i a t u C a f 2 8 . n t i 1 a 9 o n 8 n 8 H d 7 L P B l 3 m i 2 m s a a e g s t e p o f t e e d s p f i e r e t l r o a g a m u M f r c e e C r u e s l t n a o u g - 7 . ‘ a l P S ( h i A 1 e 2 e s t a o m r b g a i o f ) n t t e m p e r a t u r e 3 1 E n s i l i n g P r o c e s s I d I P h a s e 3 . P h a s e 4 . 3 2 p h a s e I , i s d e c l i n i n g . A t t h i s p o i n t , a n a e r o b i c b a c t e r i a b e g i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s a n d c o n v e r t w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s t o a c e t i c a c i d , l a c t i c a c i d , e t h a n o l , a n d c a r b o n d i o x i d e . E x p o n e n t i a l g r o w t h o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a c o n t i n u e s . T h i s p h a s e i s u s u a l l y s h o r t i n d u r a t i o n a n d m e r g e s i n t o p h a s e I I I . L a c t i c a c i d a c c u m u l a t i o n p h a s e . I t i s t h e c o n t i n u a t i o n o f t h e a n a e r o b i c s t a g e a n d e a r l y p h a s e o f l a c t i c a c i d a c c u m u l a t i o n . E n t e r o b a c t e r i a c e a e b a c t e r i a d e c l i n e i n a c t i v i t y a f t e r t h e f i r s t t h r e e t o s e v e n d a y s o f e n s i l i n g . T h e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n m a y p e a k d u r i n g t h i s p h a s e . L a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a p r o d u c e d a c i d r a p i d l y a n d r e d u c e t h e p H t o l e v e l s i n h i b i t o r y t o m o s t o f t h e o t h e r m i c r o o r g a n i s m s ( L i n d g r e n e t a l . , 1 9 8 8 ; P e t t e r s s o n , 1 9 8 8 ) . T h e e n d r e s u l t i s a d o m i n a t i o n o f t h e f e r m e n t a t i o n b y L A B . T h i s e x p o n e n t i a l g r o w t h o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a i s o n e o f t h e m o s t i m p o r t a n t f a c t o r s f o r a s u c c e s s f u l e n s i l i n g p r o c e s s . S t a b l e p h a s e . L a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a c o n t i n u e t o f e r m e n t c a r b o h y d r a t e s i n t o a c i d s b u t a t a m u c h s l o w e r P h a s e 5 . P h a s e 6 . 3 3 r a t e . T h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n b e g i n s t o d e c l i n e ( G i b s o n s e t a l . , 1 9 5 8 ) . M a t e r i a l S t o r a g e P h a s e . T h e f i r s t f o u r p h a s e s i n t h e e n s i l i n g p r o c e s s u s u a l l y a r e c o m p l e t e d w i t h i n t h e f i r s t 1 7 t o 2 1 d . I f t h e p r o d u c t i o n o f l a c t i c a c i d i s i n s u f f i c i e n t a n d t h e p H i n t h e e n s i l e d m a t e r i a l i s g r e a t e r t h a n 4 . 2 , a p r o l i f e r a t i o n o f s a c c h a r o l y t i c C l o s t r i d i a m a y o c c u r . T h e o r g a n i s m s c o n v e r t W S C i n t o b u t y r i c a c i d w h i c h i s n o t a n e f f i c i e n t m e c h a n i s m t o c o n s e r v e c a r b o n . S i l a g e w i t h h i g h l e v e l s o f b u t y r i c a c i d t e n d s t o h a v e h i g h e r p H a n d e n d - p r o d u c t s f r o m p r o t e o l y s i s . I f s u f f i c i e n t l a c t i c a c i d i s p r o d u c e d , s p o r e s o f C l o s t r i d i a w i l l n o t g e r m i n a t e b e c a u s e c o n d i t i o n s a r e n o t f a v o r a b l e f o r v e g e t a t i v e g r o w t h . C h a n g e s i n t h e h o m o f e r m e n t a t i v e - h e t e r o f e r m e n t a t i v e r a t i o o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a m a y o c c u r i n t h i s p h a s e w i t h d o m i n a n c e o f h e t e r o f e r m e n t a t i v e s t r a i n s d u e t o t h e i r g r e a t e r t o l e r a n c e t o l a c t i c a c i d ( B e c k , 1 9 7 8 ) . S o m e y e a s t m a y s u r v i v e u n d e r h i g h a c i d i c c o n d i t i o n s . F e e d o u t p h a s e . S i l a g e i s b e i n g f e d o u t f r o m t h e s t o r a g e s t r u c t u r e , a n d e x p o s e d t o a e r o b i c c o n d i t i o n s . 3 4 I t i s g e n e r a l l y a s s u m e d t h a t s i l a g e s w h i c h h a v e h i g h e r l e v e l s o f l a c t i c a c i d a r e b e s t b e c a u s e o f b e t t e r c a r b o n p r e s e r v a t i o n a n d b u n k s t a b i l i t y . H o w e v e r , e x c e p t i o n s d o e x i s t . W o o l f o r d ( 1 9 8 4 ) c o n c l u d e d t h a t p o o r q u a l i t y s i l a g e c o u l d b e a s s o c i a t e d w i t h l a r g e L A B p o p u l a t i o n s , a n d g o o d q u a l i t y s i l a g e c o u l d b e p r e p a r e d f r o m s i l a g e w i t h h i g h n u m b e r s o f C l o s t r i d i a . S e v e r a l f a c t o r s s u c h a s c r o p m o i s t u r e , p a c k i n g d e n s i t y o f t h e e n s i l e d c r o p , a m b i e n t t e m p e r a t u r e a t h a r v e s t a n d d u r i n g e n s i l i n g , a n d c r o p m a t u r i t y i n f l u e n c e t h e s u c c e s s o f s i l a g e f e r m e n t a t i o n . A e r o b i c s t a b i l i t y E x p o s u r e o f e n s i l e d m a t e r i a l t o a i r m a y l e a d t o s i l a g e d e t e r i o r a t i o n . T h e m i c r o b i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a n g e s t h a t o c c u r w h e n s i l a g e i s e x p o s e d t o a e r o b i c c o n d i t i o n s h a v e b e e n t h e f o c u s o f m a n y s t u d i e s ( O h y a m a e t a l . , 1 9 7 5 a , 1 9 7 5 b ; W o o l f o r d , 1 9 9 0 ) . A e r o b i c s p o i l a g e u s u a l l y o c c u r s o n t h e e x p o s e d s u r f a c e s o f t h e s i l a g e m a s s , a n d i s c o m m o n l y i d e n t i f i e d b y a p p e a r a n c e o f w h i t e o r m u l t i c o l o r e d c o l o n i e s o f o r g a n i s m s ( e . g . m o l d s ) , t h a t g r o w w h e n t e m p e r a t u r e s a r e a b o v e 3 7 ° C , a n d p H i s a b o v e 5 . 0 ( M u c k a n d P i t t , 1 9 9 3 ) . T h e i n c r e a s e s i n t e m p e r a t u r e a n d p H r e s u l t f r o m t h e m e t a b o l i s m o f o r g a n i c a c i d s a n d r e s i d u a l , w a t e r - s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s b y y e a s t a n d m o l d s , a n d a e r o b i c b a c t e r i a t o c a r b o n d i o x i d e a n d w a t e r ( H o n i n g a n d W o o l f o r d , 1 9 7 9 ) . E x t e n s i v e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n r e s u l t s i n d e c r e a s e d d r y m a t t e r r e c o v e r y a n d l o s s o f v a l u a b l e n u t r i e n t s . F e r m e n t a t i o n p r o d u c t s 3 5 p r o d u c e d d u r i n g e n s i l i n g a r e m e t a b o l i z e d a n d l o s s o f t h e s e a c i d s m a y a c c o u n t f o r 3 5 % o f d r y m a t t e r l o s s e s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s ( H e n d e r s o n e t a l . , 1 9 7 9 ; W o o l f o r d , 1 9 9 0 ) . T h e p r o b a b i l i t y o f a e r o b i c s p o i l a g e i n s i l a g e i s i n f l u e n c e d b y m o i s t u r e c o n t e n t , t e m p e r a t u r e d u r i n g s t o r a g e , l e n g t h o f s t o r a g e , o x y g e n i n f i l t r a t i o n d u r i n g s t o r a g e , p a c k i n g c o n d i t i o n s , n u m b e r o f m i c r o o r g a n i s m s a n d s u b s t r a t e s a v a i l a b l e d u r i n g t h e p e r i o d o f a e r o b i c e x p o s u r e , p r e s e n c e o f o x y g e n a n d c a r b o n d i o x i d e , f o r a g e s p e c i e s , a n d c o n c e n t r a t i o n s o f f e r m e n t a t i o n a c i d s ( O h y a m a e t a l . , 1 9 7 5 ; P i t t , 1 9 8 6 ; M u c k , 1 9 8 8 ) . C h a r a c t e r i s t i c s o f t r o p i c a l s i l a g e I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , e n s i l i n g o f g r a s s e s r e s u l t s i n l o w e r q u a l i t y s i l a g e a s c o m p a r e d t o t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . E n s i l i n g o f t r o p i c a l f o r a g e s h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h f e r m e n t a t i o n s c h a r a c t e r i z e d b y l o w l a c t i c a c i d a c c u m u l a t i o n , a n d h i g h a m m o n i a , a c e t i c a c i d a n d p H ( C a t c h p o o l e a n d H e n z e l l , 1 9 7 1 ; A g u i l e r a , 1 9 7 5 ; P a n t i t h a r a t n e e t a l . , 1 9 8 6 ) . T j a n d r a a t m a d j a e t a l . ( 1 9 9 0 ) d e m o n s t r a t e d t h a t L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m , a p r e d o m i n a n t l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l s t r a i n f o u n d i n f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , w a s a l s o t h e p r i m a r y l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a p r e s e n t i n s i l a g e m a d e f r o m f o r a g e s o r g h u m ( S o r g h u m b i c o l o r c v . S u g a r d r i p ) , h a m i l g r a s s ( P a n i c u m m a x i m u m ) , p a n g o l a g r a s s ( D i g i t a r i a d e c u m b e n s ) , a n d s e t a r i a ( S e t a r i a s p h a l a c e t a ) i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . 3 6 H o w e v e r , M c D o n a l d e t a l . ( 1 9 9 1 ) r e p o r t e d t h a t s i l a g e w i t h h i g h p e r c e n t a g e s o f a c e t i c a c i d s e e m t o b e d e f i c i e n t i n l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a , a n d t h a t o t h e r m i c r o o r g a n i s m s ( e . g . E n t e r o b a c t e r i a c e a e ) m a y p r e d o m i n a t e i n t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n . S i l a g e w i t h h i g h c o n c e n t r a t i o n s o f a c e t i c a c i d a l s o h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h l o w f e e d i n g v a l u e ( W i l k i n s o n e t a l . , 1 9 7 6 ) a n d p o o r d r y m a t t e r r e c o v e r y ( H a m i l t o n e t a l . , 1 9 7 8 ) . I n a d d i t i o n , r u m i n a n t a n i m a l s u s e a c e t a t e l e s s e f f i c i e n t l y t h a n p r o p i o n a t e u n d e r m o s t c i r c u m s t a n c e s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . I n t h e t r o p i c s , t h e l o w c o n c e n t r a t i o n o f r e a d i l y - a v a i l a b l e , f e r m e n t a b l e c a r b o h y d r a t e s f o u n d i n f o r a g e s i s a n o t h e r p r o b l e m a s s o c i a t e d w i t h p o o r e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s . W i l k i n s o n ( 1 9 8 3 ) r e p o r t e d f r o m a s t u d y o f 2 3 1 s i l a g e s m a d e f r o m t e m p e r a t e c r o p s , t h a t a c o n c e n t r a t i o n o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s o f 3 % w a s n e c e s s a r y t o p r o v i d e a s t a b l e , l o w p H , l a c t i c a c i d d o m i n a t e d , w e l l - p r e s e r v e d s i l a g e . H o w e v e r , t r o p i c a l f o r a g e s g e n e r a l l y c o n t a i n l o w e r l e v e l s o f f e r m e n t a b l e c a r b o h y d r a t e s , a n d d u r i n g e n s i l i n g , a r e m o r e s u s c e p t i b l e t o m o r e e x t e n d e d f e r m e n t a t i o n p e r i o d s a s c o m p a r e d t o t e m p e r a t e s p e c i e s ( C a t c h p o o l e a n d H e n z e l l , 1 9 7 1 ; W i l s o n a n d F o r d , 1 9 7 3 ; N o b l e a n d L o w e , 1 9 7 4 ) . O j e d a a n d c o - w o r k e r s ( 1 9 8 7 ) r e p o r t e d t h a t t y p i c a l , t r o p i c a l g r a s s e s ( e . i . D i g i t a r i a d e c u m b e n s , C y n o d o n d a c t y l o n , a n d C h l o r i s g a y a n a ) , h a v e 2 t o 3 p e r c e n t a g e u n i t s l e s s w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s t h a n t y p i c a l t e m p e r a t e g r a s s e s ( P e r e n n i a l r y e g r a s s , O r c h a r d g r a s s , T i m o t h y ) . I n m o r e r e c e n t s t u d i e s , T j a n d r a a t m a d j a e t a l . ( 1 9 9 4 a ) , r e p o r t e d 3 7 t h a t t h e w a t e r - s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f t h r e e t r o p i c a l g r a s s e s ( h a m i l g r a s s , P a n i c u m m a x i m u m ; p a n g o l a g r a s s , D i g i t a r i a d e c u m b e n s ; s e t a r i a , S e t a r i a s p h a l a c e t a ) w a s i n s u f f i c i e n t t o p r o m o t e a s t r o n g l a c t i c a c i d f e r m e n t a t i o n . S i l a g e a d d i t i v e s T h e u t i l i z a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s t o i m p r o v e t h e e n s i l i n g p r o c e s s h a s b e e n t h e s u b j e c t o f n u m e r o u s s t u d i e s . S i l a g e a d d i t i v e s c a n b e s u b d i v i d e d i n t o v a r i o u s c a t e g o r i e s b a s e d o n t h e m e c h a n i s m s o f a c t i o n w h i c h i n c l u d e : s t i m u l a n t s , f e r m e n t a t i o n i n h i b i t o r s , a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n i n h i b i t o r s , n u t r i e n t s , a n d a b s o r b e n t s ( T a b l e 1 - 2 ) . I t i s i m p o r t a n t t o e m p h a s i z e t h a t s i l a g e a d d i t i v e s d o n o t e n s u r e a b e t t e r s i l a g e i f g o o d m a n a g e m e n t p r a c t i c e s a t e n s i l i n g ( i . e . f i l l i n g r a p i d l y , g o o d m a t e r i a l c o m p a c t i o n ) a r e n o t f o l l o w e d . C u r r e n t l y , u t i l i z a t i o n o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l i n o c u l a n t s , a n d p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e s a r e t h e t w o m o s t p o p u l a r m e t h o d s t o i m p r o v e s i l a g e f e r m e n t a t i o n . A d d i t i o n o f n i t r o g e n ( N P N , a m m o n i a ) , a n d a d d i t i o n a l c a r b o h y d r a t e s o u r c e s ( m o l a s s e s ) a r e a l s o u t i l i z e d t o s o m e e x t e n t . L a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l i n o c u l a n t s T h e u s e o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t s a s s t a r t e r c u l t u r e s t o e n h a n c e s i l a g e f e r m e n t a t i o n w a s f i r s t s t u d i e d b y F r e n c h w o r k e r s i n s u g a r b e e t p u l p a t t h e b e g i n n i n g o f t h i s c e n t u r y ( W a t s o n a n d N a c h , 1 9 6 0 ) . C u r r e n t l y , n i n e : l a c t s e e i e n t e i t h i h p m a r e e p t l e l u m d e d u t u e a y y t i p fi m t z h e i i i e d t d n d r e b b p u n o d p y a i l e d o r i a e y h x u r d e e s i s d e h e x l a l t x t l l m o s p t e s r a h y i e h o y l g d u c i i p n c h e i m d m u s n i d b h l l e e e s x p e i d d i r t t a o b r u i l t l m m m m o n n b d o o n e p r r p e t a t u o a o a o o f m s u u u i u b a t r m a t p b b a n i i i i u b r c m i n t e g r r u l d d d r r x o d t t a e e i o h m o a l u o o o a a e r o n e n r m o a y t g l n u o e B C D P F P G S S S S A A C C H B S C t S P B s t n e i r t u n r e d n u d e t s i l o s l a e b n a c s e c r ‘ . s s t l n e i t t u a r e n i N M | . . s E e u v i t i d d a e g a l i s f o n o i t a c i f i s s a l C . 2 - 1 e l b a T o s e t a r d y h o b r a c r e d n u d e t s i l s e c n a t s b u s t s o M B a c t e r i a L C u l t u L e s ; L a c t i c a c i d b a c t e r i a A c i d s M i n e r a l a c i d s F o r m i c a c i d A c e t i c a c i d L a c t i c a c i d B e n z o i c a c i d A c r y l i c a c i d G l y c o l l i c a c i d S u l p h a m i c a c i d C i t r i c a c i d S o r b i c a c i d L a c t i c a c i d b a c t e r i a P r o p i o n i c a c i d C a p r o i c a c i d S o r b i c a c i d P i r a m i c i n A m m o n i a U r e a G l u c o s e A d a p t e d f r o m M c D o n a l d , e t a l . ( 1 9 9 1 ) 3 8 3 9 c r i t e r i a h a v e b e e n d e s c r i b e d t o d e f i n e t h e c h a r a c t e r i s t i c s o f a d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s t o b e u s e d a s s t a r t e r c u l t u r e s ( S e a l e , 1 9 8 6 ; M u c k , 1 9 8 8 ) . D e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s m u s t h a v e t h e f o l l o w i n g c h a r a c t e r i s t i c s : 1 . T h e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a m u s t g r o w t h v i g o r o u s l y a n d b e a b l e t o c o m p e t e w i t h a n d p r e f e r a b l y d o m i n a t e o t h e r o r g a n i s m s . 2 . I t m u s t p o s s e s s a h o m o f e r m e n t a t i v e p a t h w a y i n o r d e r t o p r o d u c e t h e m a x i m u m a m o u n t o f l a c t i c a c i d f r o m h e x o s e s u g a r s i m m e d i a t e l y a v a i l a b l e . 3 . I t m u s t b e a c i d t o l e r a n t a n d c a p a b l e t o p r o d u c i n g a f i n a l p H o f a t l e a s t 4 . 0 . P r e f e r a b l y i t s h o u l d b e a b l e t o p r o d u c e t h i s l o w p H a s r a p i d l y a s p o s s i b l e i n o r d e r t o q u i c k l y i n h i b i t t h e a c t i v i t i e s o f o t h e r m i c r o o r g a n i s m s . 4 . I t m u s t b e a b l e t o f e r m e n t g l u c o s e , f r u c t o s e , s u c r o s e , f r u c t a n s , a n d p r e f e r a b l y , p e n t o s e s u g a r s . 5 . i t m u s t n o t p r o d u c e d e x t r a n f r o m s u c r o s e o r m a n n i t o l f r o m f r u c t o s e . 6 . I t s h o u l d h a v e n o a c t i o n o n o r g a n i c a c i d s . 7 . I t s h o u l d p o s s e s s a g r o w t h t e m p e r a t u r e r a n g e e x t e n d i n g t o 5 0 ° C . 8 . I t s h o u l d b e a b l e t o g r o w i n m a t e r i a l o f l o w m o i s t u r e c o n t e n t a s m i g h t a r i s e w h e n w i l t e d m a t e r i a l i s e n s i l e d . 9 . I t s h o u l d h a v e n o p r o t e o l y t i c a c t i v i t y . 4 0 I f t h e m i c r o o r g a n i s m t o b e u t i l i z e d h a s a l l t h e o u t l i n e d C h a r a c t e r i s t i c s , t h e n c h a n g e s e x p e c t e d d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s i n c l u d e ; a s h i f t i n t h e L A B f r o m h e t e r o f e r m e n t a t i v e t o h o m o f e r m e n t a t i v e , a n i n c r e a s e i n t h e r a t i o o f l a c t i c a c i d t o o t h e r f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s ( e . g . o r g a n i c a c i d s , e t h a n o l ) , i n c r e a s e i n r a t e o f p H d e c l i n e , r e d u c t i o n o f p r o t e o l y s i s . a n d i n c r e a s e i n d r y m a t t e r r e c o v e r y . T h e m o s t f r e q u e n t l y u s e d G e n u s a n d s p e c i e s o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a i n m i c r o b i a l i n o c u l a n t s a r e L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m , P e d i o c o c c u s c e r e v i s i a e , a n d E n t e r o c o c c u s f a e c i u m ( M a h a n n a , 1 9 9 3 ) . H o w e v e r , o t h e r s p e c i e s o f b a c t e r i a ( e . i . P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i , L a c t o b a c i l l u s c u r v a t u s , L a c t o b a c i l l u s x y l o s u s , a n d S t r e p t o c o c c u s f a e c i u m ) h a v e a l s o b e e n e v a l u a t e d . E v e n t h o u g h t h e s e s t r a i n s s e e m t o a c c o m p l i s h t h e n i n e c r i t e r i a t h a t c h a r a c t e r i z e a d e s i r a b l e m i c r o b i a l i n o c u l a n t , t h e i r e f f e c t s o n s i l a g e q u a l i t y h a v e b e e n v a r i a b l e . T h i s v a r i a b l e r e s p o n s e m a y r e s u l t f r o m p l a n t , m a n a g e m e n t , a n d o t h e r m i c r o b i o l o g i c a l f a c t o r s t h a t i n f l u e n c e t h e m i c r o b i a l c u l t u r e a c t i v i t y . T h e n u m b e r a n d t y p e o f e p i p h y t i c m i c r o f l o r a h a v e b e e n m e n t i o n e d a s t h e m o s t c r i t i c a l f a c t o r t h a t d e t e r m i n e s t h e s u c c e s s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( M u c k , 1 9 9 1 ) . I t i s d e s i r a b l e t o h a v e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a d d e d a t l e a s t 1 0 t i m e s t h e e p i p h y t i c b a c t e r i a c o u n t s t o c o m p e t e a n d d o m i n a t e t h e n a t u r a l m i c r o f l o r a , a n d h a v e a p o s i t i v e e f f e c t o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d a n i m a l p e r f o r m a n c e ( S a t t e r , 1 9 9 1 ; M u c k a n d B o l s e n , 1 9 9 2 ) . W a t e r - s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t o f t h e c r o p a l s o h a s a g r e a t i m p a c t o n m i c r o b i a l a c t i v i t y . B a c t e r i a u t i l i z e s u g a r f o r g r o w t h , a n d i f 4 1 i n s u f f i c i e n t s u g a r i s a v a i l a b l e t h e n a d e c r e a s e i n m i c r o b i a l i n o c u l a n t a c t i v i t y w o u l d b e e x p e c t e d . T h e g r o w t h r a t e a n d e n v i r o n m e n t a l a d a p t a b i l i t y o f t h e b a c t e r i a l s t r a i n u t i l i z e d , r a t e o f a p p l i c a t i o n , s y n e r g i s t i c o r a n t a g o n i s t i c e f f e c t s b e t w e e n b a c t e r i a l s t r a i n s w h e n u s e d i n c o m b i n a t i o n , a n d t h e s p e c i f i c i t y o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a t o f o r a g e s p e c i e s t o b e e n s i l e d m a y a l s o i n f l u e n c e t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a c t i v i t y . I t h a s b e e n s h o w n t h a t i n d i v i d u a l s t r a i n s o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o f e r m e n t s u b s t r a t e s , a n d g r o w a t v a r i o u s m o i s t u r e l e v e l s a n d t e m p e r a t u r e s ( D e n n i s , 1 9 8 9 ; H i l l 1 9 8 9 ) . I n a d d i t i o n , m a n y d i f f e r e n t s p e c i e s e x i s t w i t h i n e a c h G e n u s a n d i t i s e s t i m a t e d t h a t a s m a n y a s 5 0 0 0 s t r a i n s e x i s t w i t h i n e a c h s p e c i e ( S o d e r l u n d , 1 9 8 8 ) . M o s t s t u d i e s u t i l i z i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t s h a v e b e e n p e r f o r m e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . l n o c u l a n t s h a v e b e e n a p p l i e d a s m o n o c u l t u r e , b i c u l t u r e o r m i x t u r e s o f t h r e e o r m o r e m i c r o o r g a n i s m s . W h o l e c o r n p l a n t a n d a l f a l f a h a v e b e e n t h e c r o p s m o s t e x t e n s i v e l y s t u d i e d , b u t t h e e f f e c t i v e n e s s o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s o n g r a s s e s , c e r e a l s , a n d g r a s s - l e g u m e s i l a g e s h a v e b e e n a l s o i n v e s t i g a t e d . L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m s e e m s t o b e t h e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l s p e c i e s m o s t u t i l i z e d . K u n g e t a l . , ( 1 9 9 3 ) r e p o r t e d t h a t a m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s p / a n t a r u m i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s i n c o r n s i l a g e , b u t t h e s a m e b a c t e r i a l s p e c i e h a d l i t t l e b e n e f i t o n c o r n s i l a g e f e r m e n t a t i o n p a t t e r n s i n a n o t h e r s t u d y ( W i t t e n b e r g e t a l . , 1 9 8 3 ) . S t u d i e s u s i n g b i c u l t u r e s o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a i n w h o l e p l a n t c o r n s h o w e d g r e a t e r d r y m a t t e r r e c o v e r y a n d l e s s 4 2 r e s i d u a l s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n c e n t r a t i o n s w h e n t h e c r o p w a s t r e a t e d w i t h a m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i a n d L a c t o b a c i l l u s x y l o s u s ( C l e a l e , I V . e t a l . , 1 9 9 0 ) . I n a n o t h e r s t u d y , a b i c u l t u r e c o m p o s e d o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d E n t e r o c o c c u s f a e c i u m d i d n o t i m p r o v e t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f w h o l e c o r n p l a n t s i l a g e ( B o l s e n e t a l . , 1 9 9 2 ) . S e a l e e t a l . ( 1 9 8 6 ) d e m o n s t r a t e d d e s i r a b l e c h a n g e s d u r i n g t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n o f h i g h m o i s t u r e c o r n a s c o m p a r e d w i t h l i t t l e b e n e f i t i n w h o l e c o r n p l a n t s i l a g e w h e n b o t h c r o p s w e r e t r e a t e d w i t h P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i a n d L a c t o b a c i l l u s x y l o s u s . I n g r a s s e s , a m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f r y e g r a s s s i l a g e , a s e v i d e n c e d b y f a s t e r a c i d i f i c a t i o n , i n c r e a s e d l a c t i c a c i d c o n t e n t , a n d r e d u c t i o n s i n a c e t i c a c i d a n d p r o t e o l y s i s ( H e r o n e t a l . , 1 9 8 8 ) . i n a l f a l f a , a n e a r l y d e c r e a s e i n p H a n d g r e a t e r l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s o b s e r v e d w h e n s i l a g e w a s t r e a t e d w i t h a n i n o c u l a n t c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d E n t e r o c o c c u s f a e c i u m ( P h i l l i p e t a l . , 1 9 9 0 ) . K u n g e t a l . , ( 1 9 8 4 ) o b s e r v e d a n i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d c o n t e n t i n a l f a l f a e n s i l e d a t t h r e e d i f f e r e n t d r y m a t t e r c o n c e n t r a t i o n s w h e n t r e a t e d w i t h a b a c t e r i a l i n o c u l a n t t h a t c o n t a i n e d L a c t o b a c i l / u s p l a n t a r u m , L a c t o b a c i / I u s b r e v i s a n d P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i . S h o c k e y a n d B o r g e n ( 1 9 9 1 ) c o m p a r e d t h e e f f e c t i v e n e s s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d S t r e p t o c o c c u s f a e c i u m , a n d a f e r m e n t a t i o n i n h i b i t o r ( N a C l ) o n f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f a l f a l f a s i l a g e , a n d f o u n d t h a t i n o c u l a t e d a l f a l f a h a d a f a s t e r d e c r e a s e i n p H , m o r e 4 3 e f f e c t i v e i n h i b i t i o n o f C l o s t r i d i a ) o r g a n i s m s , a n d g r e a t e r l a c t i c a c i d c o n t e n t t h a n a l f a l f a s i l a g e t r e a t e d w i t h o n l y N a C l . I n g r a s s - l e g u m e s i l a g e t r e a t e d w i t h L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d S t r e p t o c o c c u s f a e c i u m , H a r r r i s o n a n d c o - w o r k e r s ( 1 9 8 9 ) o b s e r v e d a n a c c e l e r a t e d p H d e c l i n e , a n d r e d u c t i o n i n c o n t e n t o f a m m o n i a - N , w h i c h s u p p o r t s t h e c o n c e p t t h a t t h e p o p u l a t i o n o f I a c t o b a c i l l i s h i f t d u r i n g f e r m e n t a t i o n f r o m a h e t e r o f e r m e n t a t i v e t o s e l e c t e d s t r a i n s o f h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a . I n o t h e r s t u d i e s , i n o c u l a n t s c o n t a i n i n g s t a r c h - d e g r a d i n g b a c t e r i a h a v e b e e n s t u d i e d t o i n c r e a s e d s u b s t r a t e a v a i l a b i l i t y f o r a c i d p r o d u c t i o n . J o n e s e t a l . ( 1 9 9 1 ) r e p o r t e d t h a t a p p l i c a t i o n o f S t r e p t o c o c c u s b o v i s a s a m i c r o b i a l i n o c u l a n t d e c r e a s e d p H a n d a m m o n i a n i t r o g e n i n l o w d r y m a t t e r a l f a l f a s i l a g e , b u t n o d e g r a d a t i o n o f s t a r c h w a s o b s e r v e d . O t h e r s t r a i n s o f s t a r c h - d e g r a d i n g b a c t e r i a ( e . i . L a c t o b a c i l l u s a m y l o p h i l u s a n d L a c t o b a c i l l u s a m y l o v o r u s l h a v e a l s o b e e n s t u d i e d b u t t h e r e s u l t s h a v e b e e n v a r i a b l e ( F i t z s i m o n s a n d O ' C o n n e l , 1 9 9 4 ) . H o w e v e r , t h e r e a r e n o s t u d i e s t h a t e v a l u a t e d a m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g s t a r c h - d e g r a d i n g b a c t e r i a i n a c r o p w i t h h i g h s t a r c h c o n t e n t ( e . g . s o m e t r o p i c a l f o r a g e s ) . A l i m i t e d n u m b e r o f s t u d i e s i n s u b t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s h a v e e v a l u a t e d t h e e f f e c t o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s o n t h e e n s i l i n g p r o c e s s . W i i t e d c o a s t a l b e r m u d a g r a s s i n o c u l a t e d w i t h L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d S t r e p t o c o c c u s f a e c i u m h a d l o w e r p H , a c e t i c a c i d , a n d a m m o n i a c o n c e n t r a t i o n s , a n d g r e a t e r l a c t i c a c i d c o n t e n t a n d i n v i t r o o r g a n i c m a t t e r d e g r a d a b i l i t y t h a n s i l a g e w i t h o u t i n o c u l a n t ( U m a ‘ r ‘ i a e t a l , 1 9 9 1 ) . A d e c r e a s e d i n p H i n 4 4 b e r m u d a g r a s s e n s i l e d a s l a r g e r o u n d b a l e s a n d t r e a t e d w i t h a b a c t e r i a l i n o c u l a n t w a s r e p o r t e d b y D a w s o n ( 1 9 8 9 ) . I n S o u t h A f r i c a , F i g u e i r e d o a n d M a r a i s ( 1 9 9 4 ) s h o w e d t h a t a d d i t i o n o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m o r a b i c u l t u r e c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s b u l g a r i c u s a n d L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s d i d n o t i n c r e a s e d l a c t i c a c i d c o n t e n t , b u t d e c r e a s e d a m m o n i a c o n t e n t i n k i k u y u g r a s s ( P e n n i s e t u m c l a n d e s t i n u m ) . T h e c h a n g e s i n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s d u e t o a d d i t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t m a y b e n e f i t a n i m a l p e r f o r m a n c e . R e d u c t i o n s i n a c e t i c a c i d a n d e t h a n o l s h o u l d i m p r o v e s i l a g e p a l a t a b i l i t y a n d i m p r o v e i n t a k e ( M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ) . H i g h e r l e v e l s o f l a c t i c a c i d i s b e n e f i c i a l a s l a c t i c a c i d i s f e r m e n t e d t o p r o p i o n a t e i n t h e r u m e n . P r o p i o n a t e i s u s e d m o r e e f f i c i e n t l y b y t h e a n i m a l t h a n e t h a n o l a n d a c e t i c a c i d ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . H o w e v e r , i n a r e c e n t r e v i e w ( M u c k , 1 9 9 3 ) o n l y 2 5 % o f t h e s c i e n t i f i c s t u d i e s s h o w e d a b e n e f i t o n a n i m a l i n t a k e a n d a v e r a g e d a i l y g a i n d u e t o t h e u s e o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t . I n m e a t p r o d u c i n g a n i m a l s , i n o c u l a t i o n o f w h o l e p l a n t c o r n s i l a g e i n c r e a s e d d r y m a t t e r i n t a k e i n h e i f e r s , b u t a v e r a g e d a i l y g a i n w a s s i m i l a r ( C l e a r l e e t a l . 1 9 8 9 ) . F e e d c o n v e r s i o n e f f i c i e n c y o f b e e f s t e e r s f e d i n o c u l a t e d w h o l e c o r n p l a n t s i l a g e o r h i g h m o i s t u r e c o r n w e r e s i m i l a r t o c o n t r o l s ( S c h a e f e r e t a l , 1 9 8 9 ) . I n d a i r y c a t t l e , i n c r e s e d m i l k p r o d u c t i o n w a s o b s e r v e d w h e n a m i x t u r e o f t i m o t h y ( P h l e u m p r a t e n s e ) a n d m e a d o w f e s c u e ( F e s t u c a p r a t e n s i s ) w a s t r e a t e d w i t h a m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( M a r t i n s s o n , 1 9 9 2 ) . M a y n e ( 1 9 9 3 ) r e p o r t e d t h a t p e r e n n i a l r y e g r a s s ( L o l i u m p e r e n n e ) s i l a g e i n o c u l a t e d w i t h a b a c t e r i a l s t a r t e r c u l t u r e d i d n o t i n c r e a s e 4 5 m i l k y i e l d , b u t t h e r e w a s a t e n d e n c y f o r i n c r e a s e s i n m i l k f a t a n d p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n s . I n s m a l l r u m i n a n t s , a n i n c r e a s e i n a p p a r e n t d i g e s t i b i l i t y o f f i b e r a n d a t e n d e n c y f o r i m p r o v e d n i t r o g e n r e t e n t i o n i n l a m b s f e d l u c e r n e t r e a t e d w i t h a b a c t e r i a l i n o c u l a n t w e r e o b s e r v e d b y P h i l l i p s e t a l . ( 1 9 9 0 ) . C o n v e r s e l y , n o d i f f e r e n c e s i n d i g e s t i b i l i t y i n l a m b s f e d c o r n e n s i l e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t w e r e r e p o r t e d b y W h i t t e n b e r g e t a l . ( 1 9 8 3 ) . I n a s u b t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , v o l u n t a r y d r y m a t t e r c o n s u m p t i o n b y h e i f e r s f e d e i t h e r c o n t r o l o r t r e a t e d r o u n d b a l e b e r m u d a g r a s s s i l a g e t r e a t e d w a s s i m i l a r ( D a w s o n , 1 9 8 9 ) . T h e r e i s a l i m i t e d i n f o r m a t i o n o n t h e u s e o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s i n t r o p i c a l f o r a g e s a n d t h e r e s u l t i n g e f f e c t s o n d r y m a t t e r i n t a k e a n d a n i m a l p e r f o r m a n c e . H i g h e r a c c u m u l a t i o n o f l a c t i c a c i d d u r i n g f e r m e n t a t i o n d u e t o i n o c u l a t i o n m a y r e s u l t i n l o w e r p H a n d i n h i b i t g r o w t h o f u n d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s , i m p r o v i n g t h e s t a b i l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e . H o w e v e r , u t i l i z a t i o n o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s t o i m p r o v e a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e h a s s h o w n m i x e d r e s u l t s . W o l t h , ( 1 9 8 9 ) r e p o r t e d t h a t i n o c u l a t i o n o f c o r n s i l a g e i m p r o v e d a e r o b i c s t a b i l i t y a s c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e a s e v i d e n c e d b y l o w e r t e m p e r a t u r e a f t e r 9 6 h o f a e r a t i o n , b u t R u s t , e t a l . ( 1 9 8 9 ) s h o w e d t h a t i n o c u l a t i n g c o r n s i l a g e a p p e a r e d t o l o w e r t h e s t a b i l i t y o f c o r n s i l a g e u p o n e x p o s u r e t o a i r . A p o s s i b l e e x p l a n a t i o n f o r t h e i n s t a b i l i t y o f i n o c u l a t e d s i l a g e s , m a y b e a h i g h e r r a t i o o f l a c t i c a c i d / s h o r t c h a i n f a t t y a c i d s ( e . g . a c e t i c a c i d , p r o p i o n i c a c i d ) . S h o r t c h a i n f a t t y a c i d s h a v e b e e n s h o w n t o h a v e a n t i m y c o t i c a c t i v i t y , a n d m a y i n h i b i t t h e g r o w t h o f y e a s t s a n d m o l d s , 4 6 a n d o t h e r m i c r o o r g a n i s m s r e s p o n s i b l e f o r a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f s i l a g e s ( M o o n , 1 9 8 3 ) . A d d i t i o n a l l y , t h e r e m a y b e m o r e r e s i d u a l W S C i n t h e s i l a g e m a s s a t t i m e o f e x p o s u r e t h a t a l l o w s s p o i l a g e o r g a n i s m s t o g r o w . P l a n t c e l l w a l l d e g r a d i n g - e n z y m e s p r e p a r a t i o n s T h e t w o m a i n g o a l s f o r u s e o f p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e s a s s i l a g e a d d i t i v e s a r e t o i n c r e a s e t h e c o n t e n t o f s o l u b l e s u g a r s d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s , a n d t o i m p r o v e t h e d i g e s t i b i l i t y o f o r g a n i c m a t t e r o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e . M o s t c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s c o n t a i n c e l l u l a s e s a n d h e m i c e l l u l a s e s , a n d t h e i r a c t i o n o n p l a n t c a r b o h y d r a t e s r e s u l t i n h y d r o l y s i s o f c e l l u l o s e a n d h e m i c e l l u l o s e t o p e n t o s e s a n d h e x o s e s . E n z y m e p r e p a r a t i o n s c o n t a i n i n g a m y l a s e s a r e a l s o a v a i l a b l e . A p o s i t i v e r e s p o n s e t o t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n m a y r e d u c e t h e N D F a n d A D F c o n t e n t o f t h e e n s i l e d m a t e r i a l , a n d m a y c a u s e s i g n i f i c a n t c h a n g e s i n f e r m e n t a t i o n , D M r e c o v e r y , a n d a n i m a l p e r f o r m a n c e . H o w e v e r , t h e e f f e c t s o f p l a n t c e l l w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n h a v e b e e n v a r i a b l e . T h e e f f e c t i v e n e s s o f e n z y m e s m a y b e i n f l u e n c e d b y p l a n t , e n v i r o n m e n t a l , m a n a g e m e n t a n d m i c r o b i o l o g i c a l f a c t o r s . v a n V u u r e n e t a l . ( 1 9 8 9 ) r e p o r t e d t h a t e n z y m e p r e p a r a t i o n s a r e m o r e e f f e c t i v e i n d e g r a d a t i o n o f t h e c e l l w a l l i n i m m a t u r e f o r a g e s . E n z y m e p r e p a r a t i o n s g e n e r a l l y h a v e p H a n d t e m p e r a t u r e o p t i m u m s t h a t a r e n o t t y p i c a l l y f o u n d i n s i l a g e s ( S h e p e r d a n d K u n g , J r . , 1 9 9 4 ) , a n d r e q u i r e a p p l i c a t i o n r a t e s t h a t w o u l d n o t b e e c o n o m i c a l l y f e a s i b l e ( H o p k i n g a n d B a s s , 1 9 8 7 ; K u n g J r . e t a l . , 1 9 9 1 ) . E n z y m e a c t i v i t y o f t h e v a r i o u s 4 7 c o m m e r c i a l p r e p a r a t i o n s a r e e x p r e s s e d i n d i f f e r e n t u n i t s w h i c h m a k e s i t d i f f i c u l t t o c o m p a r e d i f f e r e n t s o u r c e s . A d d i t i o n a l l y , t h e r e i s a l a r g e v a r i a t i o n i n e f f i c a c y o f t h e v a r i o u s p r e p a r a t i o n s ( S h e p e r d e t a l . , 1 9 9 5 ) . T h e m i c r o b i a l s o u r c e o f t h e e n z y m e s m a y a l s o i n f l u e n c e i t s e f f e c t i v e n e s s . D i f f e r e n t f e r m e n t a t i o n p a t t e r n s w e r e o b s e r v e d i n t i m o t h y ( P h l e u m p r e t e n s e ) , m e a d o w f e s c u e ( F e s t u c a p r a t e n s i s ) , a n d r e d c l o v e r ( T r i f o l i u m p l a t e n s e ) s i l a g e t r e a t e d w i t h c e l l u l a s e d e r i v e d f r o m d i f f e r e n t f u n g a l p r e p a r a t i o n s ( S e l m e r - O l s o n , 1 9 9 4 ) . B e r t i n e t a l . ( 1 9 8 5 ) f o u n d t h a t e n z y m e s d e r i v e d f r o m A s p e r g i l l u s n i g e r h a d m o r e h e m i c e l l u l o l y t i c a c t i v i t y t h a n e n z y m e s f r o m T r i c h o d e r m a v i r i d e , w h e r e a s H e n d e r s o n a n d M c D o n a l d ( 1 9 7 7 ) r e p o r t e d m o r e a c t i v e e n z y m e s d e r i v e d f r o m T r i c h o d e r m a v i r i d e t h a n A s p e r g i l / u s n i g e r . T h e m a j o r i t y o f s t u d i e s e v a l u a t i n g p l a n t c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s h a v e b e e n p e r f o r m e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s u s i n g f o r a g e s w i t h a l o w s u g a r c o n t e n t ( i . e . g r a s s e s , a l f a l f a ) . I n a c u r r e n t r e v i e w ( 1 9 8 5 t o 1 9 9 2 ) , e n z y m e a d d i t i v e s r e d u c e d t h e f i b e r c o n t e n t o f g r a s s s i l a g e i n 8 0 % o f t h e s t u d i e s r e p o r t e d ( M u c k , 1 9 9 3 ) . I n a l f a l f a , h o w e v e r , t h e s u c c e s s r a t e w a s o n l y 5 0 % . L e a t h e r w o o d , e t a l . ( 1 9 5 9 ) r e p o r t e d t h a t a d d i t i o n o f e n z y m e s i n c r e a s e d c e l l u l o s e h y d r o l y s i s a n d d e c r e a s e d p H i n a l f a f a s i l a g e . C o n v e r s e l y , l i t t l e e f f e c t o f e n z y m e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f a l f a l f a e n s i l e d a t t h r e e m o i s t u r e c o n t e n t s w e r e r e p o r t e d b y J a s t e r e t a l . ( 1 9 9 0 ) . I n a n o t h e r s t u d y , c e l l u l a s e i n c r e a s e d c e l l u l o s e h y d r o l y s i s i n a g r a s s - a l f a l f a - c l o v e r s i l a g e , b u t d i d n o t c h a n g e t h e f e r m e n t a t i o n p a t t e r n ( H e n d e r s o n e t a l . , 1 9 8 2 ) . 4 8 A n i n c r e a s e i n f i b e r d e g r a d a b i l i t y o r a r e d u c t i o n i n f i b e r c o n t e n t w o u l d b e e x p e c t e d t o e n h a n c e a n i m a l p e r f o r m a n c e . C o n s e q u e n t l y , i f e n z y m e s r e d u c e f i b e r c o n t e n t a n d i m p r o v e i t s d e g r a d a b i l i t y o n e w o u l d e x p e c t t h e r e s u l t i n g s i l a g e t o h a v e a g r e a t e r e n e r g y v a l u e . H o w e v e r , i n a s u m m a r y o f 5 9 t r i a l s u s i n g b e e f c a t t l e , o n l y 1 5 % o f t h e c a s e s s h o w e d i m p r o v e d d e g r a d a b i l i t y b y e n z y m e p r o d u c t s ( M u c k , 1 9 9 3 ) . I n l a c t a t i n g a n i m a l s , a n e n z y m e - t r e a t e d c o r n s i l a g e d i d n o t i m p r o v e d r y m a t t e r i n t a k e , a n d s l i g h t l y r e d u c e d d a i l y m i l k p r o d u c t i o n d u r i n g e a r l y l a c t a t i o n ( C h e n e t a l . , 1 9 9 4 ) . C o n v e r s e l y , g r a s s - l e g u m e s i l a g e t r e a t e d w i t h a c o m m e r c i a l e n z y m e r e s u l t e d i n a n i n c r e a s e i n d r y m a t t e r i n t a k e , m i l k p r o d u c t i o n , a n d p r o t e i n a n d f a t c o n t e n t o f t h e m i l k . l n s h e e p , a d e c r e a s e d i n D M i n t a k e a n d d i g e s t i b i l i t y w e r e o b s e r v e d w h e n t i m o t h y s i l a g e w a s t r e a t e d w i t h a n e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e ( N a r a s i m h a l u , e t a l . , 1 9 9 2 ) . I n c o n t r a s t t o t h i s o b s e r v a t i o n , s h e e p f e d s e c o n d - c u t a l f a l f a s i l a g e t r e a t e d w i t h e n z y m e s h a d a g r e a t e r D M i n t a k e t h a n s h e e p f e d w i t h u n t r e a t e d a l f a l f a ( F r e d e e n a n d M c Q u e e n , 1 9 9 3 ) . U t i l i z a t i o n o f p l a n t c e l l w a l l - d e g r a d i n g e n z y m e s h a v e s h o w n p o s i t i v e ( J a a k k o l a e t a l . , 1 9 9 1 ) o r l i t t l e e f f e c t ( S t o k e s , 1 9 9 2 ) o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e s . T h e e f f e c t s o f e n z y m e p r o d u c t s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s , a n i m a l p e r f o r m a n c e a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s e n s i l e d i n t r o p i c a l a n d s u b t r o p i c a l c l i m a t e s i s l i m i t e d . 4 9 M i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e m i x t u r e s W h e n f o r a g e s l a c k a d e q u a t e a m o u n t s o f w a t e r - s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s t o s e r v e a s s u b s t r a t e s f o r m i c r o b i a l g r o w t h a n d p o s s e s s l o w n u m b e r o f e p i p h y t i c l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a , u t i l i z a t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s w o u l d s e e m t o b e b e n e f i c i a l f o r t h e e n s i l i n g p r o c e s s . M o s t s t u d i e s u s i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e s h a v e s h o w n a p o s i t i v e r e s p o n s e d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s , b u t c o n f l i c t i n g r e s u l t s h a v e b e e n o b s e r v e d o n a n i m a l p e r f o r m a n c e . I n s i l a g e f e r m e n t a t i o n s t u d i e s , n o d i f f e r e n c e s i n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s i n c o r n a n d g r a s s - l e g u m e s i l a g e w e r e o b s e r v e d w h e n t r e a t e d w i t h a e n z y m e m i x t u r e c o n t a i n i n g c e l l u l a s e , o r - a m y l a s e a n d p r o t e a s e , b u t a d e c r e a s e d p H a n d a n i n c r e a s e d l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s w e r e o b t a i n e d w h e n t h e e n z y m e c o m p l e x w a s c o m b i n e d w i t h a m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( G r a n t e t a l , 1 9 9 4 ) . S h e p e r d e t a l . ( 1 9 9 5 ) r e p o r t e d t h a t a d d i t i v e s c o n t a i n i n g c o m b i n a t i o n s o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a n d e n z y m e s i m p r o v e d t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d r e d u c e d f i b e r c o n t e n t i n a l f a l f a s i l a g e . I n a n o t h e r s t u d y , a c o m b i n a t i o n o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a n d e n z y m e s n e g a t i v e l y a f f e c t e d D M i n t a k e , b u t i n c r e a s e d m i l k p r o d u c t i o n i n d a i r y c a t t l e ( S t o k e s , 1 9 9 2 ) . F e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s , r u m i n a l d e g r a d a t i o n o f s i l a g e D M a n d N D F , o r t o t a l t r a c t d i g e s t i b i l i t y i n e a r l y l a c t a t i o n c o w s w e r e n o t i m p r o v e d w h e n g r a s s - l e g u m e a n d c o r n s i l a g e s w e r e t r e a t e d w i t h a e n z y m e - i n o c u l a n t m i x t u r e s ( C h e n e t a l . 1 9 9 4 ) . C o n v e r s e l y , p e r e n n i a l r y e g r a s s ( L o l i u m p e r e n n e l t r e a t e d w i t h e n z y m e - i n o c u l a n t m i x t u r e s w a s m o r e 5 0 d i g e s t i b l e t h a n c o n t r o l s i l a g e w h e n f e d t o l a c t a t i n g d a i r y c o w s ( S m i t h e t a l . , 1 9 9 3 ) . T h e e f f e c t o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e m i x t u r e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s , a n i m a l p e r f o r m a n c e , a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f t r o p i c a l f o r a g e s i s l i m i t e d . O t h e r s i l a g e a d d i t i v e s N u t r i e n t s , f e r m e n t a t i o n i n h i b i t o r s , a n d a b s o r b e n t s a r e e x a m p l e s o f o t h e r p r o d u c t s t h a t h a v e b e e n e v a l u a t e d a s s i l a g e a d d i t i v e s . V a r i o u s n u t r i e n t s o u r c e s h a v e b e e n a d d e d t o s i l a g e t o i n c r e a s e t h e s u p p l y o f a v a i l a b l e e n e r g y f o r t h e g r o w t h o f l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a , o r i n c r e a s e t h e n i t r o g e n c o n t e n t o f t h e s i l a g e ( u r e a , a m m o n i a ) . I n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , a d d i n g g l u c o s e d i d n o t s h o w a b e n e f i c i a l e f f e c t o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f r y e g r a s s s i l a g e ( H e r o n e t a l . , 1 9 8 8 ) , b u t a l f a l f a e n s i l e d w i t h g l u c o s e o r f r u c t o s e h a d a l o w e r p H , m o r e p r o t e i n - N , l e s s a m m o n i a - N , a n d a g r e a t e r i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l n u m b e r s t h a n i n a l f a l f a e n s i l e d w i t h o u t t h e c a r b o h y d r a t e s o u r c e ( S e a l e e t a l . , 1 9 8 6 ) . A d d i t i o n o f a m m o n i a p r i o r t o e n s i l i n g i n c r e a s e d l a c t i c a c i d c o n t e n t a n d d e c r e a s e p H i n a l f a l f a s i l a g e a f t e r 5 0 d o f f e r m e n t a t i o n ( K u n g e t a l . , 1 9 8 4 ) . E n s i l i n g o f g r a s s e s w i t h m o l a s s e s i n t h e s u b t r o p i c a l e n v i r o n m e n t o f F l o r i d a , h a s s h o w n t o d e c r e a s e p H , i n c r e a s e l a c t i c a c i d c o n t e n t , a n d i n c r e a s e i n v i t r o o r g a n i c m a t t e r d e g r a d a b i l i t y ( B e c k e r e t a l . , 1 9 7 0 ; U m a fi a e t a l , 1 9 9 1 ) . I n t r o p i c a l c l i m a t e s , a d d e d m o l a s s e s t o p a n g o l a g r a s s s i l a g e ( D i g i t a r i a d e c u m b e n s l . h a m i l g r a s s ( P a n i c u m m a x i m u m c v . H a m i l ) , a n d s e t a r i a ( S e t a r i a s p h a c e / a t a 5 1 c v . K u z u n g u l a ) i n c r e a s e d l a c t i c a c i d c o n t e n t , b u t n o d i f f e r e n c e s i n f i n a l p H , o r a m m o n i a - N w e r e o b s e r v e d ( T j a n d r a a t m a d j a e t a l . , 1 9 9 4 a ) . H o w e v e r , i n o t h e r s t u d i e s a d d i t i o n o f m o l a s s e s h a s i m p r o v e d t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( C a s t e l a n d W a t s o n , 1 9 8 5 ; T j a n d r a a t m a d j a , 1 9 9 4 b ) . A s a s i l a g e a d d i t i v e , m o l a s s e s l o s t i t s p o p u l a r i t y p r o b a b l y b e c a u s e o f t h e d i f f i c u l t y i n a p p l y i n g i t , a n d a n y b e n e f i c i a l e f f e c t s m o l a s s e s h a d o n f e r m e n t a t i o n w e r e l i m i t e d t o e n v i r o n m e n t s w h e r e t e m p e r a t u r e s i n s i l a g e e x c e e d e d 3 0 ° C ( L a n i g a n , 1 9 6 1 ) . U t i l i z a t i o n o f f e r m e n t a t i o n i n h i b i t o r s ( e . g . f o r m i c a c i d , f o r m a l d e h y d e ) i s a p o p u l a r m e t h o d t o i n h i b i t t h e g r o w t h o f u n d e s i r a b l e m i c r o f l o r a , a n d r e d u c e p r o t e o l y s i s , a n d h a s b e e n s h o w n t o b e a n e f f e c t i v e m e t h o d t o d e c r e a s e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n ( J o n e s e t a l , 1 9 7 4 ; R a e k e r e t a l , 1 9 9 2 ) . H o w e v e r , u s e o f t h e s e a d d i t i v e s i s b e c o m i n g l e s s a t t r a c t i v e b e c a u s e o f t h e c a u s t i c n a t u r e o f a c i d o n w o r k e r s a n d e q u i p m e n t , a n d p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h f e e d r e f u s a l b y a n i m a l s . C H A P T E R 2 A T W O Y E A R S T U D Y O N T H E E F F I C A C Y O F S I L A G E A D D I T I V E S T O E N H A N C E T H E E N S I L I N G O F F O R A G E S O R G H U M I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S . 1 . F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S . A b s t r a c t A t w o y e a r ( 1 9 9 3 - 1 9 9 4 ) s t u d y w a s c o n d u c t e d t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s ( e n z y m e s a n d m i c r o b i a l i n o c u l a n t ) o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I n b o t h y e a r s , f o r a g e s o r g h u m w a s h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g , a n d a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o . I n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n , f o r a g e w a s c h o p p e d i n t o 2 . 5 c m p i e c e s , a s s i g n e d t o o n e o f f o u r t r e a t m e n t s ; n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) , e n z y m e s ( . 1 % o f f r e s h w e i g h t ) , i n o c u l a n t ( 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) , a n d e n z y m e s p l u s i n o c u l a n t , a n d p l a c e d i n t o P V C s i l o s . T h r e e s i l o s p e r t r e a t m e n t w e r e o p e n e d a f t e r e i g h t e n s i l i n g p e r i o d s ( 0 , 1 , 3 , 7 , 1 4 , 2 1 , 4 0 , a n d 1 0 0 d ) , a n d a n a l y z e d f o r 5 2 5 3 p l a n t o r g a n i c a c i d c o n t e n t s ( c i t r i c , m a l i c , s u c c i n i c a n d o x a l o a c e t i c ) , p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n ( l a c t i c a c i d b a c t e r i a , e n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t ) , s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( l a c t i c , a c e t i c , p r o p i o n i c a n d b u t y r i c a c i d s , a n d e t h a n o l ) , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( g l u c o s e , f r u c t o s e , g a l a c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e l . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ( N D F , A D F , c e l l u l o s e a n d h e m i c e l l u l o s e ) w e r e d e t e r m i n e d a f t e r 0 , 4 0 a n d 1 0 0 d . M i c r o b i a l e c o l o g y a n d e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s v a r i e d b e t w e e n y e a r s . I n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n , m a l i c a n d s u c c i n i c a c i d s w e r e t h e m a j o r o r g a n i c a c i d s m e t a b o l i z e d d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s , l a c t i c a c i d w a s t h e p r i n c i p a l f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t , a n d g l u c o s e a n d f r u c t o s e w e r e t h e p r e d o m i n a n t w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s u t i l i z e d . S i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t a f f e c t t h e d e g r a d a t i o n o f o r g a n i c a c i d s , i n e i t h e r e n v i r o n m e n t . F o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t d e c r e a s e d p H a t 3 , 7 , a n d 1 4 d o f f e r m e n t a t i o n , a n d i n c r e a s e d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n a f t e r 7 d a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t a f t e r 1 4 d a s c o m p a r e d t o s i l a g e w i t h o u t t h e i n o c u l a n t . I n t h e t r o p i c a l a r e a , s i l a g e s c o n t a i n i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d l o w e r p H o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , a n d h i g h e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a f t e r 3 d a n d h i g h e r l a c t i c a c i d c o n t e n t a f t e r 1 4 d i n c o m p a r i s o n t o c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s . N e i t h e r s i l a g e a d d i t i v e i n f l u e n c e d o t h e r m i c r o b i a l g r o u p s o r o t h e r 5 4 f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . F o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t a n d c o n t a i n i n g a m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d l o w e r g l u c o s e c o n t e n t o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , b u t g r e a t e r f r u c t o s e f r o m d 1 t o d 1 0 0 d o f e n s i l i n g . I n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , i n o c u l a t e d f o r a g e s o r g h u m h a d l o w e r g l u c o s e a f t e r 3 , 7 a n d 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , b u t h i g h e r f r u c t o s e c o n t e n t o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d a s c o m p a r e d t o s i l a g e s w i t h o u t m i c r o b i a l i n o c u l a n t . S i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t h a v e a m a j o r i n f l u e n c e i n o t h e r W S C o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s , r e g a r d l e s s o f e n v i r o n m e n t . I n t r o d u c t i o n T h e i m p o r t a n c e o f t h e w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e ( W S C ) c o n t e n t i n f o r a g e s p r i o r t o e n s i l i n g , a n d t h e p r e s e n c e o f a s u f f i c i e n t l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n ( L A B ) a r e n e c e s s a r y t o e n s u r e a g o o d q u a l i t y s i l a g e i s w e l l d o c u m e n t e d ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ; M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . L a c t i c a c i d b a c t e r i a u s e W S C a s t h e e n e r g y s o u r c e t o p r o d u c e l a c t i c a c i d , c a u s i n g a n e a r l y d e c r e a s e i n p H a n d r e d u c i n g t h e g r o w t h o f u n d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s s u c h a s e n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d f u n g i ( M u c k a n d B o l s e n , 1 9 9 2 ) . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , t h e c o m b i n e d u s e o f a L A B i n o c u l a n t a n d a n e n z y m e m i x t u r e s t o i n c r e a s e t h e n u m b e r o f d e s i r a b l e o r g a n i s m s a n d t o i n c r e a s e t h e a v a i l a b i l i t y o f W S C h a s b e e n t h e s u b j e c t o f s e v e r a l s t u d i e s ( K u n g e t a l . , 1 9 9 0 ; B o l s e n e t a l . , 1 9 9 2 , S h e p e r d e t a l . , 1 9 9 5 ) . H o w e v e r , t h e r e s u l t s h a v e b e e n i n c o n s i s t e n t . C o r n ( O ' L e a r y e t a l . , 1 9 8 5 ; C l e a r e e t a l . , 1 9 9 0 ) , 5 5 s o r g h u m ( E l y e t a l . , 1 9 8 2 ; S a n d e r s o n , M . A . , 1 9 9 3 ) , a n d a l f a l f a ( B o l s e n e t a l . , 1 9 9 2 ) s i l a g e s t r e a t e d w i t h a m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a v e b e e n s h o w n t o i n c r e a s e L A B p o p u l a t i o n s e a r l y i n t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d , r e s u l t i n g i n s i l a g e w i t h h i g h e r l a c t i c a c i d c o n t e n t a n d l o w e r p H . H o w e v e r , a f t e r a n e x t e n d e d f e r m e n t a t i o n p e r i o d , t h e e n d - p r o d u c t s i n c o r n s i l a g e ( W i t t e n b e r g e t a l . , 1 9 8 3 ) a n d a l f a l f a s i l a g e ( S h o c k e y e t a l . , 1 9 8 5 ) t r e a t e d w i t h a b a c t e r i a l i n o c u l a n t c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m w e r e s i m i l a r t o t h e c o n t r o l s i l a g e . A n i n c r e a s e i n c e l l u l o s e c o n t e n t w a s o b s e r v e d i n g r a s s - a l f a l f a - c l o v e r s i l a g e t r e a t e d w i t h a c e l l u l a s e p r e p a r a t i o n , b u t f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s w e r e s i m i l a r ( H e n d e r s o n e t a l . , 1 9 8 2 ) . A d d i t i o n a l l y , a n e n z y m e p r e p a r a t i o n d i d n o t i m p r o v e t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f b a r l e y a n d v e t c h s i l a g e ( K u n g e t a l . , 1 9 9 0 ) . I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , e n s i l i n g o f f o r a g e s r e s u l t s i n l e s s a c c u m u l a t i o n o f l a c t i c a c i d , h i g h e r p H , a n d l o w e r L A B p o p u l a t i o n t h a n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . I t h a s b e e n s u g g e s t e d t h i s r e s u l t s f r o m w a r m e r c l i m a t e , l e s s W S C , h i g h e r b u f f e r i n g c a p a c i t y , a n d f e w e r e p i p h y t i c L A B . H o w e v e r , t h e r e i s l i m i t e d i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e u t i l i z a t i o n o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t s o r e n z y m e s t o e n h a n c e t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f t r o p i c a l f o r a g e s . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o e v a l u a t e t h e e f f i c a c y o f a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n a n d a h o m o f e r m e n t a t i v e L A B i n o c u l a n t t o e n h a n c e t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t w o d i f f e r e n t c l i m a t i c e n v i r o n m e n t s . 5 6 E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d o v e r a t w o y e a r p e r i o d ( 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 ) a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g ( 8 4 ° 2 9 ' 3 9 w e s t l o n g i t u d e , 4 2 ° 4 1 ' 5 0 n o r t h l a t i t u d e , e l e v a t i o n 2 6 5 m ) a n d a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o ( 6 7 ° 0 0 ' 0 0 w e s t l o n g i t u d e , 1 8 ° 0 0 ' 0 0 n o r t h l a t i t u d e , e l e v a t i o n 1 0 0 m ) . I n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n , f o r a g e s o r g h u m ( H i E n e r g y H y b r i d I I , H e r e f o r d , T X ) w a s h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h a n d c h o p p e d m e c h a n i c a l l y i n t o 2 . 5 c m p i e c e s . T e m p e r a t u r e ( m i n i m u m a n d m a x i m u m ) , a n d p r e c i p i t a t i o n w e r e m o n i t o r e d d a i l y d u r i n g t h e f o r a g e g r o w i n g s e a s o n . I n P u e r t o R i c o , f o r a g e w a s m a n u a l l y h a r v e s t e d a n d p l a c e d t h r o u g h a c o m m e r c i a l f o r a g e h a r v e s t e r i n 1 9 9 3 , w h e r e a s t h e s o r g h u m w a s c u t a n d c h o p p e d w i t h a c o m m e r c i a l f o r a g e h a r v e s t e r i n 1 9 9 4 . A c o m m e r c i a l f o r a g e h a r v e s t e r w a s u s e d i n b o t h y e a r s a t t h e E a s t L a n s i n g s i t e . C h o p p e d f o r a g e w a s a n a l y z e d f o r D M ( 5 5 ° C f o r 7 2 h ) , a s h ( 5 5 0 ° C f o r 1 2 h ) , t o t a l - N ( A O A C , 1 9 9 0 ) , b u f f e r i n g c a p a c i t y ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) , o r g a n i c a c i d c o n t e n t , w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s , a n d e p i p h y t i c m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s . P r i o r t o e n s i l i n g , v e g e t a t i v e m a t e r i a l w a s t r e a t e d w i t h o n e o f f o u r t r e a t m e n t s ; n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) , e n z y m e s ( V i s c o z y m e T M L , N o v o N o r d i s k B i o i n d u s t r i a l s , l n c . F a r n h a m , S u r v e y , U K ) , b a c t e r i a l i n o c u l a n t ( E c o s y l m , Z e n e c a B i o p r o d u c t s , F a r n h a m , S u r v e y , U K ) , a n d e n z y m e s p l u s b a c t e r i a l i n o c u l a n t . T h e e n z y m e a d d i t i v e c o n s i s t e d o f a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B - g l u c a n a s e . 5 7 h e m i c e l l u l a s e , a n d x y l a n a s e a n d w a s a p p l i e d a t . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l . T h e b a c t e r i a l i n o c u l a n t , c o n s i s t e d o f a h o m o f e r m e n t a t i v e s t r a i n o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a p p l i e d a t 1 0 ‘ 3 c f u / g o f f r e s h p l a n t m a t e r i a l . T r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d t o w e i g h e d p o r t i o n s ( 1 . 6 k g ) o f f o r a g e s o r g h u m , m a n u a l l y m i x e d , a n d p a c k e d i n t o P V C l a b o r a t o r y s i l o s . L a b o r a t o r y s i l o s w e r e f i t t e d w i t h r e l e a s e v a l v e s t o a l l o w g a s e s c a p e a n d m a i n t a i n e d a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 0 - 2 3 ° C i n M i c h i g a n , a n d 2 7 - 3 0 ° C i n P u e r t o R i c o ) u n t i l o p e n e d . T h e c o n t r o l t r e a t m e n t r e c e i v e d a s i m i l a r a m o u n t o f w a t e r a s t h e s o r g h u m t r e a t e d w i t h a d d i t i v e s . I n b o t h y e a r s a n d a t e a c h l o c a t i o n , t r i p l i c a t e s i l o s f r o m e a c h t r e a t m e n t w e r e o p e n e d a t 0 , 1 , 3 , 7 , 1 4 , 2 1 , 4 0 , a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g a n d a n a l y z e d f o r p l a n t o r g a n i c a c i d c o n t e n t , p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n , s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s . F i f t y g o f f o r a g e f r o m e a c h s i l o a t e a c h s a m p l i n g d a y w e r e p l a c e d i n t o 4 5 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r ( w / v ) a n d h o m o g e n i z e d f o r 5 m i n w i t h a S t o m a c h e r a p p a r a t u s ( T e k m a r 3 5 0 0 , T e k m a r , C i n c i n n a t i , O H ) . H o m o g e n a t e s w e r e s t r a i n e d t h r o u g h e i g h t l a y e r s o f c h e e s e c l o t h a n d a n a l y z e d f o r p H w i t h a p H m e t e r f i t t e d w i t h a c o m b i n a t i o n e l e c t r o d e ( F i s h e r S c i e n t i f i c , P i t t s b u r g h , P A ) t h a t w a s s t a n d a r d i z e d f r o m p H 4 t o 7 u s i n g c o m m e r c i a l b u f f e r s ( C u r t i s M a t t h e a s o n , W o d a l e , I L ) . F o r m i c r o b i a l s u c c e s s i o n d e t e r m i n a t i o n s , t e n f o l d d i l u t i o n s o f t h e c l a r i f i e d , e x t r a c t h o m o g e n a t e w e r e p r e p a r e d f o r e a c h s a m p l e i n s t e r i l e p e p t o n e s o l u t i o n ( . 1 % l a n d e n u m e r a t e d f o r l a c t i c a c i d b a c t e r i a , e n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t . P l a t e s 5 8 f o r a l l m i c r o b i a l g r o u p s w e r e p o u r e d w i t h s e l e c t i v e m e d i a a n d m a n u a l l y e n u m e r a t e d a f t e r r e s p e c t i v e i n c u b a t i o n ( T a b l e 2 - 1 ) p e r i o d s u s i n g a d i g i t a l c o l o n y c o u n t e r . O r g a n i c a c i d s ( c i t r i c , m a l i c , o x a l o a c e t i c , a n d s u c c i n i c a c i d s ) f o u n d i n p l a n t m a t e r i a l a n d s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( l a c t i c , a c e t i c , p r o p i o n i c , a n d b u t y r i c a c i d s , a n d e t h a n o l ) w e r e d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e - e x c l u s i o n H P L C a n a l y s i s ( B i o r a d a m i n e x H P X - 8 7 H ) f o l l o w i n g t h e g e n e r a l p r o c e d u r e s o f C a n a l e e t a l . , ( 1 9 8 4 ) . M o b i l e p h a s e c o n s i s t e d o f . 0 0 5 N H 2 8 0 4 a t a f l o w r a t e o f . 9 m l / m i n . C o l u m n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 6 5 ° C b y a n e x t e r n a l c o l u m n h e a t e r ( W a t e r s M i l l i p o r e ) . T h r e e m l o f t h e c l a r i f i e d h o m o g e n a t e f r o m e a c h s i l o w e r e f i l t e r e d t h r o u g h 2 p m i o n c h r o m a t o g r a p h y s y r i n g e f i l t e r s ( G e l m a n A c r o d i s k , 2 5 m m , A n n A r b o r , M I ) i n t o 4 m l H P L C s a m p l e v i a l s ( N a t i o n a l S c i e n t i f i c , A t l a n t a , G A ) . F i l t e r e d s a m p l e s w e r e s t o r e d a t - 2 0 ° C u n t i l a n a l y s i s . F i f t e e n p l o f t h e f i l t e r e d s a m p l e s w a s i n j e c t e d b y a n a u t o i n j e c t o r ( W a t e r W I S P 7 1 2 ) a n d q u a n t i f i e d w i t h a r e f r a c t i v e i n d e x d e t e c t o r ( W a t e r s 4 1 0 r e f r a c t i v e i n d e x d e t e c t o r ) . P e a k h e i g h t s w e r e q u a n t i f i e d b y a c o m m e r c i a l H P L C s o f t w a r e p r o g r a m ( T u r b o c h e m 3 , P E N e l s o n ) a n d c o m p a r e d t o k n o w n i n d i v i d u a l s t a n d a r d s f o r r e s p e c t i v e o r g a n i c a c i d s a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . W a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e a l s o d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e - e x c l u s i o n H P L C ( B i o r a d a m i n e x H P X - 8 7 P ) e x c e p t t h a t 2 0 u l o f t h e f i l t e r e d s a m p l e w a s i n j e c t e d , t h e m o b i l e p h a s e w a s m i l l i p o r e w a t e r a t a r a t e o f . 6 m l / m i n a n d t h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 8 5 ° C . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ; ) d ( d o i r e P n o i t a b u c n I 2 7 d e t ) l o c i n e h p m a a r r e m u n ' e a i r a g a o l h c l h a t g i s r n d w m e a e s B g M d i a n e a g v L i S t e e t s n o e r R o o r c a e l s o m e l e p c S i g o m R p u s ( f o d o i r e p n o i t a b u c n i d n a a i d e m e v i t c e l e S . 1 L - 2 e l b a T ' t s a e I y M g n i t , t i o r a t l e i D m i , s s s e A i - r e o t t a a t r c a o b a L o c f i D M i c r o b i a l G r o u p L a c t i c A c i d B a c t e r i a E n t e r o b a c t e r i a c e a e Y e a s t s a n d M o l d s V i o l e t r e d a g a r I ( s u p p l e m e n t e d w i t h 5 % g l u c o s e ) Y e a s t n i t r o g e n b a s e a g a r 3 ( s u p p l e m e n t e d w i t h . 0 1 % l a c t i c a c i d ) 5 9 [ 1 + A + B i + ( A * B ) i j + C k + ( A * C ) i k + ( B * C ) i k 6 0 N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n N D F a n d A D F ) , a n d c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n A D F a n d l i g n i n ) , w e r e d e t e r m i n e d a t 0 , 4 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g b y t h e p r o c e d u r e s o f G o e r i n g a n d V a n S o e s t ( 1 9 7 0 ) a n d V a n S o e s t e t a l . ( 1 9 9 1 M e t h o d A ) . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d w i t h i n e n v i r o n m e n t a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h a 2 ( y e a r s ) b y 4 ( s i l a g e a d d i t i v e s ) b y 8 ( e n s i l i n g p e r i o d ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s ( S t e e l a n d T o r r i e , 1 9 7 8 ) u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l s u b r o u t i n e o f S A S ( 1 9 9 0 ) . T h e A n o v a m o d e l s f o r o r g a n i c a c i d c o n t e n t s , p H , m i c r o b i a l g r o u p , f e r m e n t a t i o n e n d — p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e a s f o l l o w s : Y i j k l W h e r e : Y i j k l - l - ( A * B * C ) i i k + E m a I n d i v i d u a l r e s p o n s e v a r i a b l e m e a s u r e d ( e . g . p H , m i c r o b i a l g r o u p ) O v e r a l l m e a n E f f e c t o f y e a r E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y s i l a g e a d d i t i v e E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g I n t e r a c t i o n o f y e a r b y d a y o f e n s i l i n g 6 1 B * C j . , = I n t e r a c t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g A " ’ B * C i j k = I n t e r a c t i o n o f y e a r b y s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g E m , I = r a n d o m r e s i d u a l e r r o r B o n f e r r o n i - t t e s t w a s u s e d f o r m e a n s e p a r a t i o n ( S A S , 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l f o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e h y d r o l y s i s w a s s i m i l a r e x c e p t t h a t o n l y t h r e e e n s i l i n g p e r i o d s ( d 0 , 4 0 a n d 1 0 0 ) w e r e u t i l i z e d . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n E n v i r o n m e n t a l D a t a a n d F o r a g e C h a r a c t e r i s t i c s I n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n , t y p i c a l e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s p r e v a i l e d d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n . I n t h e E a s t L a n s i n g s i t e , a v e r a g e t e m p e r a t u r e w a s 1 6 . 4 2 ° C ( 1 3 . 4 5 - 2 4 . 8 1 ° C ) i n 1 9 9 3 a n d 1 6 . 7 6 ° C ( 1 3 . 2 7 - 2 6 . 1 3 ° C ) i n 1 9 9 4 , w i t h a t o t a l p r e c i p i t a t i o n o f 2 5 8 m m i n 1 9 9 3 a n d 5 3 3 m m i n 1 9 9 4 ( F i g u r e 2 - 1 ) . I n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , a v e r a g e t e m p e r a t u r e w a s 2 6 . 0 4 ° C ( 1 8 . 6 5 - 3 2 . 0 7 ° C ) i n 1 9 9 3 a n d 2 4 . 1 9 ° C ( 1 6 . 5 4 - 3 1 . 8 4 ° C ) i n 1 9 9 4 . T o t a l p r e c i p i t a t i o n d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n w a s 3 7 2 m m i n 1 9 9 3 , a n d 1 3 6 m m i n 1 9 9 4 ( F i g u r e 2 - 2 ) . A s e x p e c t e d , i n b o t h y e a r s a g r e a t e r t e m p e r a t u r e a n d l o w e r t o t a l p r e c i p i t a t i o n w a s o b s e r v e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . I n P u e r t o R i c o , t h e g r o w i n g s e a s o n i n c l u d e d m o n t h s c o r r e s p o n d i n g t o t h e d r y p e r i o d , w h i c h m a y e x p l a i n t h e l o w r a i n f a l l o b s e r v e d d u r i n g t h e e x p e r i m e n t . H o w e v e r , t h e f o r a g e w a s p e r i o d i c a l l y n o i t a t i p i c e r P I e r u t a r e p m e T m u n o s a m e S g n i w o r G i n i M # e r u t a r e p m e T m u m i x a M e I o . ) u m m e d w e t ( 9 ° ) B J I ' I I I E J e d e L J u l y A u g u s t S e p t e m b e r M a y J u n e J u l y G r o w i n g S e a s o n F i g u r e . 2 - 1 . T e m p e r a t u r e a n d p r e c i p i t a t i o n d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t o f M i c h i g a n ( S o u r c e : D e p a r t m e n t o f H o r t i c u l t u r e , M S U ) R a i n f a l l ( m m ) R a i n f a l l ( m m ) 6 2 0 3 5 0 5 O 5 0 3 3 2 2 1 1 + 4 9 9 1 0 0 4 2 1 4 2 0 0 0 ) n o i t a l t a S c i l p a o t r t n e e m h i t r e n i p x n E o l s a a r e u s t l g u c n i i r w g o A r s g a j e a h L t g n i r u d : e c r u o S n ( o i . t o a c t i i R p i o c t e r r e p u P d n f a o e t r n u e t m a n r o e r i p v m n e e T . 2 - 2 . e r u g i F ( 9 ° ) B J W B J e d e L ( 9 , ) e i r u e J e d u I e J . 3 O 1 O A p r i l M a y J u n e J u l y G r o w i n g S e a s o n 3 0 M a r c h A p r i l M a y J u n e G r o w i n g S e a s o n + M a x i m u m T e m p e r a t u r e ° C + M i n i m u m T e m p e r a t u r e ° C I P r e c i p i t a t i o n R a i n f a l l ( m m ) R a i n f a l l ( m m ) 6 3 6 4 i r r i g a t e d t o m a i n t a i n a n o r m a l g r o w t h . I n i t i a l c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m ( T a b l e 2 - 2 ) u t i l i z e d i n t h i s e x p e r i m e n t a r e i n a g r e e m e n t w i t h v a l u e s p r e v i o u s l y r e p o r t e d f o r g r a s s e s h a r v e s t e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( V i c e n t e - C h a n d l e r e t a l , 1 9 8 3 ; V a n S o e s t , 1 9 9 1 ) . F o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n t h e t e m p e r a t e c l i m a t e h a d l o w e r D M , s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s , l i g n i n , p H , a n d b u f f e r i n g c a p a c i t y t h a n f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . O r g a n i c m a t t e r a n d t o t a l - N w e r e s i m i l a r r e g a r d l e s s o f c l i m a t e . I n b o t h l o c a t i o n s , g l u c o s e a n d f r u c t o s e w e r e t h e m a j o r W S C f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m , a n d o n l y s m a l l c o n c e n t r a t i o n s ( < 1 % D M ) o f g a l a c t o s e a n d p e n t o s e s ( e . i . x y l o s e , a r a b i n o s e ) w e r e d e t e c t e d . F o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t h a d g r e a t e r g l u c o s e a n d f r u c t o s e c o n c e n t r a t i o n s t h a n f o r a g e s o r g h u m i n t h e t r o p i c a l a r e a , b u t l o w e r x y l o s e c o n t e n t . G a l a c t o s e a n d a r a b i n o s e c o n t e n t s w e r e s i m i l a r r e g a r d l e s s o f e n v i r o n m e n t . T h e c o n c e n t r a t i o n s o f m a l i c a n d s u c c i n i c a c i d s o f f o r a g e s o r g h u m w e r e g r e a t e r t h a n c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s , i n b o t h e n v i r o n m e n t s . I n c o n t r a s t t o c o o l s e a s o n - C 3 p l a n t s , c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s ( i n t e r m e d i a t e s i n t h e t r i c a r b o x y l i c c y c l e a n d o t h e r b i o c h e m i c a l p a t h w a y s i n d i g e n o u s t o C - 4 p l a n t s ) h a v e b e e n p r e v i o u s l y e x t r a c t e d f r o m w a r m s e a s o n g r a s s e s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . T h e b u f f e r i n g c a p a c i t y o f t h e s e a c i d s a r e s t r o n g e s t w i t h i n p H r a n g e o f 4 . 0 t o 6 . 0 ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) a n d h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h t h e g r e a t e r b u f f e r i n g D S 0 0 7 5 6 2 6 2 4 1 5 9 4 0 . . . . 9 6 4 4 0 0 0 . . . . 5 8 0 9 0 0 4 3 5 0 7 9 7 4 1 4 0 7 5 0 4 7 0 5 9 3 5 5 9 2 2 6 0 6 2 0 2 9 9 . . . . . . . . 7 6 1 . 4 7 3 1 . . . . . . 9 3 3 6 9 6 2 5 0 0 0 2 3 1 5 5 . . . . . . . . 1 2 6 9 3 2 3 2 0 4 1 5 3 3 2 D S 7 5 5 7 7 0 7 1 3 6 0 7 2 9 . . . . 4 4 3 1 0 0 0 . . . . s t n e m n o r i 3 6 4 8 5 5 0 0 2 8 2 6 0 3 0 5 0 1 1 v . 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 7 9 2 4 1 1 1 8 3 7 7 6 6 8 4 8 6 9 4 5 2 6 7 8 0 6 3 2 0 0 0 1 5 0 4 0 1 2 9 6 3 2 3 2 n e l a c i p o r t d t n e m n n o a r i v n D E S 5 6 9 0 7 7 5 1 5 0 7 3 4 4 . . . . 7 3 3 2 0 0 0 . . . . e t a r e p m e t n i 3 6 9 5 7 0 . . . . 0 8 8 6 0 4 1 5 2 2 8 . . . . 4 3 5 2 g 4 n 0 4 i . 9 9 1 0 2 l i s n e o t r o i r p m u h g r o s e g a r o f f o ' 2 1 1 6 4 7 D . . . . 1 7 3 5 6 S 0 0 0 0 . . . . 3 7 4 7 7 5 4 3 9 9 . . . . . . . . . 4 0 9 9 0 6 2 5 3 4 6 4 4 8 9 0 s 1 9 2 6 94 0 0 0 4 1 3 5 5 4 4 8 0 0 2 2 2 2 1 c i t s i r e t c a . . r a h C m m e M O g b e s o 1 c y t i c a p a c t s a e l y a , i a n g r e n i o a i r s i e t e t a e d t c m a t l l a M fl a c i i a v o i D h m m s " ' r b i M e g e e d . ” J 0 ” c t s l r 2 - 2 I M u b 0 e ” e i t D d d s 0 f I c d e ” I s s t b a 1 l e g i n I / l s N i ' a ' o ” n c s i b c c t l e g l n - r o ” e o s t e n . o a t d s 0 c i b e a 1 o s e o ” o ” n e c a c a r f g 0 e " “ u i i c a b o a f c c c o i r t 0 g a / i n l F F . ” l n i s / i l c e t 1 t a q b a T M M D D H l c a c t c a e r u l a y r e i o d t m u u l a l l g t f r D O C T p N A H G F X A L G B i a x u n e a a t / e f u S g m c Q E ' " c ‘ C M Y O S E L L l l T e m p e r a t e T r o p i c a l 9 2 . 4 1 5 4 . 5 1 3 5 . 6 6 2 4 . 2 0 2 8 . 1 4 4 . 4 5 6 . 4 1 6 . 3 0 0 . 1 7 0 . 0 6 0 . 1 6 1 . 1 2 5 . 1 6 1 9 . 1 6 v - C O O Q ’ Q I - N N O v - P N O L D P m q m ¢ m ¢ h w q q o o o ~ h m n m m m m q q m o o o P o F F O F N P N O O O O O O O O P c u m u o n h h o m o u m m m O P N N O N O d o o o o o d N Q V P M N N N O O c — M M O N O q m o q o o q q n o w o w m m c o p r o n o o o o o o o o ~ O B N ¢ Q O O O N M F V N Q ¢ Q fi fi m q m e Q Q O Q fi Q Q w o m u o u o o o o o o o o o P O P E ) O P v - l n I N V O N 6 5 6 6 c a p a c i t y f o r f o r a g e s h a r v e s t e d i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . F o r a g e s o r g h u m i s a w a r m s e a s o n - C , g r a s s n a t i v e t o t r o p i c a l c l i m a t e s . H o w e v e r , i n t h i s e x p e r i m e n t w h e n f o r a g e s o r g h u m w a s h a r v e s t e d a t t h e s a m e c h r o n o l o g i c a l a g e a s i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , t o t a l o r g a n i c a c i d c o n c e n t r a t i o n s w e r e l o w e r t h a n i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . E p i p h y t i c e n t e r o b a c t e r i a c e a e , l a c t i c a c i d b a c t e r i a , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i o n y e a s t p o p u l a t i o n s w e r e s i m i l a r i n c h o p p e d f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , r e g a r d l e s s o f y e a r , b u t y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w e r e h i g h e r i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . I n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , e n t e r o b a c t e r i a c e a e , l a c t i c a c i d b a c t e r i a , a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w e r e h i g h e r i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 , b u t l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t c o u n t s w e r e s i m i l a r . A l l f o u r e p i p h y t i c m i c r o b i a l g r o u p s e n u m e r a t e d i n c h o p p e d f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g w e r e h i g h e r i n s o r g h u m h a r v e s t e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . I n t h i s e x p e r i m e n t , i d e n t i c a l f o r a g e s p e c i e s a n d l e n g t h o f g r o w i n g s e a s o n w e r e u t i l i z e d i n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n . H o w e v e r , v a r i a t i o n i n t h e i n i t i a l c h e m i c a l c o m p o s i t i o n , o r g a n i c a c i d c o n t e n t , a n d e p i p h y t i c m i c r o f l o r a w e r e o b s e r v e d w i t h i n a n d a c r o s s l o c a t i o n s . T h i s i s a c o m m o n p r o b l e m e n c o u n t e r e d i n r e s e a r c h w i t h b i o l o g i c a l m a t e r i a l s . T h e v a r i a t i o n i n c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f f o r a g e s o r g h u m b e t w e e n e n v i r o n m e n t s m a y b e a t t r i b u t e d t o t h e d i f f e r e n c e s i n t e m p e r a t u r e , l a t i t u d e , s o l a r r a d i a t i o n , a n d p h o t o p e r i o d . T h e e f f e c t s o f e n v i r o n m e n t a l f a c t o r s o n c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f f o r a g e s 6 7 h a v e b e e n e x t e n s i v e l y r e v i e w e d ( M i n s o n a n d M c L e o d , 1 9 7 0 ; B u x t o n a n d F a l e s , 1 9 9 4 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . E x p e r i m e n t s a l s o h a v e s h o w n t h a t t h e o c c u r r e n c e o f e p i p h y t i c m i c r o f l o r a m a y b e i n f l u e n c e d b y e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s w i t h i n a n d b e t w e e n g e o g r a p h i c a l a r e a s ( H e n d e r s o n , 1 9 7 2 ; M u c k , 1 9 8 9 ; L i n e t a l . , 1 9 9 2 b ) ; w h i c h m a y e x p l a i n t h e v a r i a b i l i t y i n e p i p h y t i c m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s f o u n d i n t h i s e x p e r i m e n t . T e m p e r a t e S i l a g e T h e r e w a s a s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n f o r d a y o f e n s i l i n g b e t w e e n y e a r s f o r a l l o r g a n i c a c i d s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e a r e a ( T a b l e 2 - 3 ) . I n b o t h y e a r s , c o n c e n t r a t i o n o f m a l i c a c i d d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h e i n i t i a l 4 0 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t t h e l a s t 6 0 d o f f e r m e n t a t i o n . S u c c i n i c a c i d d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s t h e l e n g t h o f e n s i l i n g p e r i o d i n c r e a s e d . A g e n e r a l t r e n d f o r t h e f e r m e n t a t i o n o f c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d w a s n o t o b s e r v e d . T h e s e t w o a c i d s r e m a i n e d m a i n l y c o n s t a n t t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s , b u t l o w e r c o n c e n t r a t i o n s w e r e s e e n a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g a s c o m p a r e d t o t h e i n i t i a l c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s c o n t e n t f o u n d i n v e g e t a t i v e m a t e r i a l p r i o r t o e n s i l i n g . I n t h i s e x p e r i m e n t , a l l f o u r o r g a n i c a c i d s d i s a p p e a r e d i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e , b u t a g r e a t e r a n d m o r e c o n s i s t e n t d e g r a d a t i o n o f m a l i c a n d s u c c i n i c a c i d s w a s o b s e r v e d a s c o m p a r e d t o c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s . I n b o t h y e a r s , p H o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h r o u g h t h e d D 1 1 0 0 " 0 0 t . Y . n y t e i m n l i b o 1 a 1 r o 0 b " i r P 0 0 0 0 . . v n e e 7 t 0 b Y 0 1 0 0 . . a r e p = m e t a n i d 1 0 0 . 1 0 0 . 1 0 0 . e ' 4 5 l M 3 1 3 i E 0 1 s . S . 7 0 . n e m u h g r o s e g 4 ’ “ ° 3 8 e 9 9 5 2 7 I ' 6 4 ’ " 8 9 5 3 a . . . . . . 1 0 0 4 0 0 1 r o f f o t n e = t n r a o e c Y ) 1 0 . 0 < P ( r e f f d i i c a c d g n i d i a 3 “ h : " ‘ h 4 9 3 6 7 1 n 9 a 9 3 2 4 5 3 8 . . . . . . g 1 0 0 2 0 0 2 r o n o g n i l i s n e y 0 0 0 a D 0 0 o 0 0 0 1 1 1 f o y a d d n a r a e y e h d i c a c i n a g r o d n a r a e y e m a s e h t g n n i i l i s s t n p e i f r o c n s a y r e e a p g d m n u i s y e l h i b e t s k n r i f e a l o e n f u y r o f M o s t D g c 0 e f f E 0 1 / g , i d i c a c i o r c f h i r i y t c a o r c e r . l c t 3 i i a C M u S - n 2 a e r O g l b a T a i e n y w d o d f i r o f o t s a c n t a d a t c r n c e e e a f t e f M t f n S E I E 9 f " ' b ‘ “ “ c i n 1 0 0 0 . 6 9 " 0 . 5 7 ' O x a l o a c e t i c . 0 0 . 6 9 “ 1 . 0 9 ‘ . 0 5 6 . 2 2 1 . 0 0 1 . 0 0 1 6 8 6 9 i n i t i a l 1 4 d o f f e r m e n t a t i o n , a n d r e a c h e d a p H v a l u e o f 4 . 2 a f t e r 3 d p o s t - e n s i l i n g ( T a b l e 2 - 4 ) ; w h i c h i s t h e p H n e e d e d f o r a s t a b l e s i l a g e ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ) . A f t e r 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , a s l i g h t i n c r e a s e i n p H t h e l a s t 6 0 d o f f e r m e n t a t i o n w a s o b s e r v e d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 , b u t p H r e m a i n e d c o n s t a n t t h r o u g h o u t t h e e n s i l i n g p e r i o d i n 1 9 9 4 . T h e f i n a l p H o f e n s i l e d m a t e r i a l i s h i g h l y i n f l u e n c e d b y t h e b u f f e r i n g c a p a c i t y o f t h e f o r a g e ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ; M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . I n t h i s e x p e r i m e n t , h i g h e r b u f f e r i n g c a p a c i t y a n d t o t a l o r g a n i c a c i d c o n t e n t ( 5 . 9 2 v s . 7 . 9 6 D M % i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , r e s p e c t i v e l y ) w e r e f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 , b u t p H v a l u e s w e r e l o w e r t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . T h i s r e s u l t m a y i n d i c a t e a m o r e a c t i v e m i c r o f l o r a a s s o c i a t e d w i t h d e g r a d a t i o n o f o r g a n i c a c i d s i n m a t e r i a l e n s i l e d i n 1 9 9 4 o r d i f f e r e n c e s i n t h e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . I n i t i a l p H v a l u e s w e r e a l s o d i f f e r e n t b e t w e e n y e a r s ( 5 . 4 0 i n 1 9 9 3 , a n d 5 . 1 8 i n 1 9 9 4 ) . I n t h i s e x p e r i m e n t , p H w a s m e a s u r e d 2 a n d 4 h a f t e r t h e m a t e r i a l w a s h a r v e s t e d i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , r e s p e c t i v e l y . T h e s e d i f f e r e n c e s i n i n i t i a l p H m a y a l s o i n f l u e n c e t h e f i n a l p H v a l u e s o f t h e s i l a g e s d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n b o t h y e a r s , t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n f o l l o w e d t h e s a m e g e n e r a l t r e n d , r e a c h i n g m a x i m u m l e v e l a f t e r 7 d o f f e r m e n t a t i o n a n d s l i g h t l y d e c r e a s i n g t h e r e a f t e r . A s i m i l a r p a t t e r n i n l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s w a s o b s e r v e d i n c o r n a n d a l f a l f a s i l a g e s b y S e a l e e t a l . ( 1 9 8 6 ) ; w h o a s s o c i a t e d t h i s d e c r e a s e i n T a b l e 2 - 4 w E s f o f r e c g t h s u m o f e n y s e i a l r e d a i n n d a d t a e y m o e f r p I E 0 I ' I C M 1 4 . . . 0 1 1 8 8 4 7 2 0 ' O b I a l v 0 . s b u c c e s P r r o n a b i l i s o 0 b ° o t f y w 0 1 . 0 0 1 . . 0 0 0 0 1 1 . . 0 0 0 0 1 1 . 0 0 1 . 0 0 1 f 0 e o r a g e " 0 1 0 0 1 . 0 0 1 0 0 4 . . . . 2 1 8 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 " ° “ ° “ “ ” . e I d H t i m a I p . c . r i a b a c t e I L a n e I t a . c t i e r o s t I a a b c s a n d E Y L c t e r i a c e t a e s i n g y e a s t m m o l d i l a a c t a t e a s s i a n d I T n t L 4 8 2 7 S . ' ° " e ' 3 ' ‘ ‘ ‘ ’ l ‘ ' I ‘ ‘ 6 1 6 6 0 1 2 9 7 2 t " ° h " " ‘ “ “ “ " “ ° “ ° ° " ° I l n s e i l e Y i n n v g r o n p r o n m e e a r 1 9 3 3 8 8 7 7 6 2 2 2 2 3 5 4 3 3 3 3 7 8 4 4 5 5 5 5 4 4 4 4 4 4 2 3 2 3 3 3 3 3 H 5 3 1 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ' ' ' ' ' ' ' ' 9 a 4 0 8 0 7 6 2 8 0 9 4 5 0 5 9 3 2 6 0 7 4 2 6 2 4 6 5 9 2 1 8 " " ‘ 0 8 0 5 6 5 7 8 0 3 9 6 6 3 2 8 6 2 3 3 4 6 9 7 5 2 3 1 1 8 5 4 7 2 4 8 1 2 0 9 1 4 4 5 5 1 3 7 2 3 5 5 4 9 3 0 2 3 6 8 6 6 3 1 7 9 5 5 9 5 8 4 8 9 1 0 5 9 2 0 7 0 5 0 4 0 8 0 4 5 8 1 9 0 6 5 1 3 0 4 0 9 0 1 4 9 5 8 1 0 6 6 ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ ° ' ' ‘ ' ' ' ‘ ’ ‘ ' ‘ ‘ ° “ ' " 9 “ " “ “ ° ° ° ° ° 1 1 1 D 0 1 3 7 0 0 3 7 0 0 3 7 0 0 3 7 1 3 0 0 7 0 1 4 0 4 4 0 0 4 4 0 0 1 1 1 1 1 2 4 2 4 2 4 2 4 1 2 4 1 1 1 1 1 1 1 1 a y 0 0 0 0 0 5 4 4 3 3 3 7 7 4 5 1 3 3 3 8 7 7 7 7 2 3 2 2 2 2 3 3 4 4 4 4 2 2 2 2 2 4 4 1 3 1 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 0 ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n ° E f f e c t o f y e a r ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g " I n t e r a c t i o n o f y e a r b y d a y o f e n s i l i n g ‘ c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d i t e m h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 7 1 l a c t i c a c i d b a c t e r i a w i t h t h e i n c r e a s e i n a c i d i t y a t l a t e r s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n b o t h y e a r s , e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e f i r s t 1 4 d o f f e r m e n t a t i o n , t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t . P r e v i o u s s t u d i e s h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n s d e c r e a s e e a r l y i n t h e s i l a g e f e r m e n t a t i o n p e r i o d , a n d h a v e l i t t l e s i g n i f i c a n c e d u r i n g t h e l a s t s t a g e s o f t h e e n s i l i n g p r o c e s s ( B e c k , 1 9 7 8 ; M u c k a n d B o l s e n , 1 9 9 2 ) . A d i f f e r e n t p a t t e r n i n y e a s t a n d m o l d a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s w a s o b s e r v e d b e t w e e n y e a r s . I n 1 9 9 3 , y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 1 4 d o f f e r m e n t a t i o n . T h i s r i s e i n y e a s t a n d m o l d c o u n t s a f t e r 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , m a y b e a t t r i b u t e d t o a n i n c r e a s e i n l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t d u r i n g t h e l a s t t w o t h i r d s o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . I n 1 9 9 4 , y e a s t a n d m o l d c o u n t s d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e f i r s t 3 d o f f e r m e n t a t i o n , t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g , a n d a t r e n d f o r i n c r e a s e d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n w a s n o t o b s e r v e d . I n t h i s e x p e r i m e n t , y e a s t , m o l d , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s w e r e n o t i n h i b i t e d b y t h e h i g h a c i d i c c o n d i t i o n s f o u n d i n t h e e n s i l e d m a t e r i a l . T h e s e r e s u l t s a r e i n a g r e e m e n t w i t h H e n d e r s o n e t a l . ( 1 9 7 2 ) ; w h o f o u n d h i g h y e a s t a n d m o l d a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s i n l o w p H s i l a g e t r e a t e d w i t h f o r m i c a c i d . I n b o t h y e a r s , a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) o v e r t h e e n s i l i n g p e r i o d ( T a b l e 2 - 5 ) . A g r e a t e r a c e t i c a c i d c o n t e n t d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n 7 2 T a b l e 2 - 5 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t l o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s r l e d m a t e m p e r a t e e n v r r o n m e n t Y e a r P r o b a b i l i t y F e r m e n t a t i o n E n d - p r o d u c t , g / I 0 0 g D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y " D c Y ‘ D " A c e t i c a c i d 0 0 . 2 2 ‘ 0 . 2 8 l . 0 6 6 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 3 0 1 1 . 0 6 ' 0 . 7 9 ' 3 1 . 2 0 “ 0 . 9 4 “ 7 1 . 4 0 ° 1 1 4 ° 1 4 1 . 7 1 ' 1 3 8 ' 2 1 1 . 7 9 ' 1 3 8 ' 4 0 1 . 7 3 ' 1 5 2 ' 1 0 0 1 . 8 9 ' 1 5 4 ' L a c t i c a c i d 0 0 . 5 9 0 . 5 8 . 3 0 3 . 0 8 5 . 0 0 1 . 1 4 2 1 4 . 3 1 4 . 8 9 3 6 . 4 7 6 . 2 7 7 8 . 0 5 7 . 8 2 1 4 9 . 4 4 9 . 3 3 2 1 9 . 1 2 1 0 . 4 2 4 0 8 . 3 2 8 . 3 8 1 0 0 6 . 4 3 7 . 1 3 P r o p i o n i c a c i d 0 0 . 0 0 “ 0 . 0 0 " . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 0 0 “ 0 . 0 0 F 3 0 . 0 1 " 0 . 0 0 ’ 7 0 . 0 1 ‘ 0 . 0 0 ' 1 4 0 . 0 1 ‘ 0 . 0 1 E 2 1 0 . 0 2 E 0 . 0 0 ‘ 4 0 0 . 0 1 F 0 . 0 1 " 1 0 0 0 . 0 2 E 0 . 0 1 E B u t y r i c a c i d 0 0 . 0 0 “ 0 . 0 0 F . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 4 1 0 . 0 1 ‘ 0 . 0 0 F 3 0 . 0 1 F 0 . 0 0 ’ 7 0 . 0 1 ‘ 0 . 0 0 ’ 1 4 0 . 0 2 E 0 . 0 1 ‘ 2 1 0 . 0 1 ' 0 . 0 1 ‘ 4 0 0 . 0 1 F 0 . 0 1 E 1 0 0 0 . 0 1 ‘ 0 . 0 1 E E t h a n o l 0 0 . 1 9 “ 0 . 1 8 “ 0 . 0 7 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 5 2 ' 0 . 5 0 ‘ 3 1 . 2 0 “ 0 . 5 4 “ “ 7 1 . 6 2 E 0 . 6 1 E 1 4 1 . 4 2 " 0 . 5 5 F 2 1 1 . 4 5 " 0 . 6 9 E 4 0 1 . 2 2 “ 0 . 4 9 F 1 0 0 1 . 1 2 " 0 . 5 6 E ‘ S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f y e a r ‘ E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g ‘ E ' F l m fl r a c t i o n o f e a r b y a y o f e n s i l i n g M e a n s w i t u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) " " " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 5 ) 7 3 p r o c e s s w a s o b s e r v e d i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 ; w h i c h m a y b e r e s p o n s i b l e t o t h e h i g h e r p H f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 . A c e t i c a c i d h a s a d i s a s s o c i a t i o n c o n s t a n t ( p K a = 4 . 7 6 ) g r e a t e r t h a n o t h e r m a j o r e n d - p r o d u c t s p r o d u c e d i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s ( e . g . l a c t i c a c i d , p K a = 3 . 8 6 ) , a n d i t s p r e s e n c e h a s b e e n a s s o c i a t e d w i t h h i g h p H s i l a g e s ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ; M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . L a c t i c a c i d w a s t h e m a j o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f f o r a g e s o r g h u m . N o s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g f o r l a c t i c a c i d c o n t e n t w a s o b s e r v e d . H o w e v e r , f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 t e n d e d ( P < . 0 8 ) t o h a v e g r e a t e r l a c t i c a c i d c o n t e n t t h a n s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 . I n b o t h y e a r s , l a c t i c a c i d p r o d u c t i o n i n c r e a s e d t h r o u g h 2 1 ( I p o s t - e n s i l i n g , t h e n d e c r e a s e d s l i g h t l y . N u m b e r s o f l a c t i c a c i d p r o d u c i n g b a c t e r i a f o u n d i n t h i s e x p e r i m e n t i n c r e a s e d a t a n e x p o n e n t i a l r a t e d u r i n g t h e f i r s t 7 d o f e n s i l i n g . T h i s i n c r e a s e i n n u m b e r o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a c o r r e s p o n d t o t h e d e c r e a s e i n p H a n d i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d c o n t e n t . I n b o t h y e a r s , s m a l l a m o u n t s o f p r o p i o n i c a n d b u t y r i c a c i d s w e r e f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e , b e i n g g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 . H o w e v e r , c o n c e n t r a t i o n o f t h e s e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s w e r e b e l o w . 1 % D M ; w h i c h i s t h e m i n i m u m c o n c e n t r a t i o n r e q u i r e d t o p l a y a s i g n i f i c a n t r o l e i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . E t h a n o l p r o d u c t i o n i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e f i r s t 7 d p o s t - e n s i l i n g i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 , t h e n d e c r e a s e d s l i g h t l y ( P < 0 . 0 1 ) t h e l a s t 7 4 t w o - t h i r d s o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . I n 1 9 9 4 , e t h a n o l c o n t e n t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h r o u g h 3 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t t h e r e a f t e r . A l l m i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h e t h a n o l p r o d u c t i o n w e r e h i g h e r i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 , b u t e t h a n o l c o n t e n t w a s l o w e r . T h e r e a p p e a r s t h a t m o r e m e t a b o l i c a l l y a c t i v e m i c r o b i a l p o p u l a t i o n a s s o c i a t e d w i t h e t h a n o l p r o d u c t i o n ( e . g . e n t e r o b a c t e r i a c e a e , h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a , a n d y e a s t s a n d m o l d s ) w e r e p r e s e n t i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 . T h e r e w a s a s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n f o r y e a r a n d l e n g t h o f e n s i l i n g o n g l u c o s e a n d f r u c t o s e c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . I n b o t h y e a r s , g l u c o s e a n d f r u c t o s e w e r e r a p i d l y d e g r a d e d t h e f i r s t 7 d p o s t - e n s i l i n g ( T a b l e 2 - 6 ) . T h i s d e c r e a s e i n g l u c o s e a n d f r u c t o s e c o n t e n t c o r r e s p o n d s t o t h e m a x i m u m L A B c o u n t s a n d m a x i m u m p H d e c r e a s e f o u n d i n t h i s e x p e r i m e n t . A f t e r 7 d p o s t - e n s i l i n g , d e g r a d a t i o n o f b o t h s u g a r s c o n t i n u e d , b u t a t a s l o w e r r a t e . E n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n , w h i c h i s w e l l k n o w n f o r p r o d u c t i o n o f a c e t i c a c i d a t t h e e a r l y s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d , d e c r e a s e d a f t e r 7 ( I p o s t - e n s i l i n g . T h e i n c r e a s e i n a c e t i c a c i d a n d d e c r e a s e i n l a c t i c a c i d a t t h e l a t e r s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n m a y i n d i c a t e a s h i f t i n t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n f r o m h o m o f e r m e n t a t i v e t o h e t e r o f e r m e n t a t i v e . A d d i t i o n a l l y , t h e g r e a t e r g l u c o s e c o n t e n t o v e r f r u c t o s e o b s e r v e d a f t e r 7 d p o s t - e n s i l i n g m a y i n d i c a t e t h a t a c e t i c a c i d p r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s m s h a d a f r u c t o s e p r e f e r e n c e , a n d i n c r e a s e d t h e i r m e t a b o l i c a c t i v i t y d u r i n g t h e l a t e r 7 5 T a b l e 2 - 6 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t Y e a r P r o b a b i l i t y C a r b o h y d r a t e , g / 1 0 0 g D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y b D c Y " D d G l u c o s e 0 5 . 3 1 ' 6 . 4 1 ' . 1 2 2 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 3 . 2 4 ' 3 . 6 2 ' 3 2 . 6 1 “ 3 . 4 1 ' 7 1 . 6 8 “ 2 . 3 1 ° 1 4 1 . 5 6 “ 2 . 0 9 “ 2 1 1 . 1 5 ' 1 . 7 4 ' I 4 0 1 . 1 1 ' 1 . 5 2 “ 1 0 0 1 . 0 7 ‘ 1 . 0 1 ‘ F r u c t o s e 0 4 . 8 3 ‘ 6 . 3 0 ’ . 1 3 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 . 9 1 ' 2 . 2 2 ' 3 1 . 3 8 “ 2 . 0 7 ' 7 0 . 9 4 " 1 . 6 8 “ 1 4 0 . 7 6 " 1 . 2 7 " 2 1 0 . 7 3 " 1 . 0 6 " 4 0 0 . 6 7 “ 0 . 8 7 ‘ 1 0 0 0 . 6 9 " 0 . 9 1 ' G a l a c t o s e 0 0 . 0 6 0 . 1 7 . 0 0 2 . 0 0 1 . 0 0 1 . 4 1 2 1 0 . 0 6 0 . 2 4 3 0 . 1 5 0 . 3 1 7 0 . 1 0 0 . 2 9 1 4 0 . 0 9 0 . 2 5 2 1 0 . 1 0 0 . 2 7 4 0 0 . 0 8 0 . 2 4 1 0 0 0 . 0 6 0 . 2 3 X y l o s e 0 0 . 0 7 0 . 0 6 . 0 2 7 . 3 0 1 . 0 0 1 . 8 2 6 1 0 . 0 7 0 . 0 8 3 0 . 0 9 0 . 1 2 7 0 . 1 4 0 . 1 0 1 4 0 . 1 2 0 . 1 2 2 1 0 . 1 6 0 . 2 0 4 0 0 . 2 9 0 . 3 1 1 0 0 0 . 5 6 0 . 6 1 A r a b i n o s e 0 0 . 0 7 “ 0 . 1 6 ' 0 . 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 0 6 ‘ 0 . 1 4 “ “ 3 0 . 0 7 “ 0 . 1 3 “ " 7 0 . 0 9 ' 0 . 1 2 “ ” 1 4 0 . 0 8 “ 0 . 1 1 " 2 1 0 . 0 7 “ 0 . 1 0 I 4 0 0 . 0 7 “ 0 . 0 9 ’ 1 0 0 0 . 0 9 ‘ 0 . 1 5 “ ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f y e a r ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g ‘ I n t e r a c t i o n o f y e a r ' d a y o f e n s i l i n " ° " " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s 1 n t h e s a m e y e a r a n d c a r b o h y d r a t e h e a d i n g d i f f e r ( P < . 0 1 ) 7 6 s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d w h e n c o n d i t i o n s w e r e m o r e a c i d i c . I t s e e m s l i k e l y t h a t t h e y e a s t , m o l d a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s u t i l i z e d o t h e r s u b s t r a t e s r a t h e r t h a n s u g a r s a f t e r t h e i n i t i a l 7 ( I p o s t - e n s i l i n g . G l u c o s e a n d f r u c t o s e c o n t e n t s w e r e l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 . T h e d i f f e r e n c e s i n s u g a r s c o n t e n t b e t w e e n y e a r s s u p p o r t t h e o b s e r v a t i o n o f a g r e a t e r m e t a b o l i c a c t i v i t y o f t h e m i c r o b i a l p o p u l a t i o n ( e . g . e n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s ) i n t h e 1 9 9 3 s i l a g e , a s e v i d e n c e d b y h i g h e r c o n t e n t o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( e . g . a c e t i c a c i d , e t h a n o l ) w i t h l o w e r m i c r o b i a l c o u n t s . F o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) g a l a c t o s e c o n t e n t t h e n f o r a g e e n s i l e d i n 1 9 9 3 . G a l a c t o s e c o n c e n t r a t i o n w a s s i m i l a r t h r o u g h o u t t h e e n s i l i n g p e r i o d . I n t h i s e x p e r i m e n t , i t w o u l d s e e m t h a t g a l a c t o s e c o n t e n t d i d n o t h a v e a m a j o r i n f l u e n c e o n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . X y l o s e c o n t e n t o f s i l a g e s w a s s i m i l a r ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g b o t h y e a r s . O v e r t h e e n s i l i n g p e r i o d , x y l o s e c o n t e n t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d i n c r e a s e d , b u t a g r e a t e r a c c u m u l a t i o n w a s o b s e r v e d d u r i n g t h e l a s t 4 0 d p o s t - e n s i l i n g . T h i s i n c r e a s e i n x y l o s e c o n t e n t m a y b e a t t r i b u t e d t o a c i d h y d r o l y s i s o f t h e h e m i c e l l u l o s e f r a c t i o n o f t h e c e l l - w a l l . I n t h i s e x p e r i m e n t , g r e a t e r x y l o s e c o n t e n t c o r r e s p o n d e d t o t h e i n c r e a s e i n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( e . g . a c e t i c a c i d ) t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . A r a b i n o s e c o n t e n t w a s c o n s t a n t o v e r t i m e i n 1 9 9 3 . I n 1 9 9 4 , a r a b i n o s e c o n t e n t r e m a i n e d c o n s t a n t d u r i n g t h e i n i t i a l 2 1 d o f t h e 7 7 f e r m e n t a t i o n p r o c e s s , b u t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) f o r t h e r e m a i n d e r o f t h e e n s i l i n g p e r i o d . S i m i l a r t o x y l o s e , t h i s i n c r e a s e i n a r a b i n o s e c o n t e n t m a y r e s u l t f r o m a c i d h y d r o l y s i s o f t h e h e m i c e l l u l o s e f r a c t i o n o f t h e c e l l - w a l l . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r c o n t e n t t e n d e d t o d e c r e a s e ( P < 0 . 0 6 l a s t h e l e n g t h o f t h e e n s i l i n g p e r i o d i n c r e a s e d i n 1 9 9 4 ( T a b l e 2 - 7 ) . I n 1 9 9 3 , N D F c o n t e n t a f t e r 4 0 d p o s t - e n s i l i n g w a s l o w e r t h a n t h e i n i t i a l N D F , b u t s i m i l a r a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g . F o r a g e e n s i l e d i n 1 9 9 3 h a d h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) A D F t h a n s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 . I n b o t h y e a r s , h e m i c e l l u l o s e d e c r e a s e ( P < 0 . 0 5 ) o v e r t i m e ; w h i c h c o r r e s p o n d e d t o a n i n c r e a s e i n p e n t o s e ( e . g . x y l o s e , a r a b i n o s e ) c o n t e n t . T h e a m o u n t o f h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e s e e m s t o b e g r e a t e r t h a n c a n b e a c c o u n t e d f o r b y t h e l e v e l s o f x y l o s e a n d a r a b i n o s e m e a s u r e d . C e l l u l o s e c o n t e n t w a s s i m i l a r ( P < 0 . 0 5 ) d u r i n g b o t h y e a r s . I n b o t h y e a r s , f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h s i l a g e a d d i t i v e s h a d s i m i l a r c o n c e n t r a t i o n s o f o r g a n i c a c i d s a s c o m p a r e d t o u n t r e a t e d s i l a g e , a n d t h e s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n f o r o r g a n i c a c i d s w a s n o t s i g n i f i c a n t ( d a t a n o t s h o w e d ) . I n t h i s e x p e r i m e n t , d e g r a d a t i o n o f o r g a n i c a c i d s p r e s e n t i n f o r a g e s o r g h u m b e f o r e e n s i l i n g w e r e n o t d e g r a d e d b y e i t h e r t h e s i l a g e e n z y m e o r m i c r o b i a l i n o c u l a n t t r e a t m e n t s . T h e i n t e r a c t i o n b e t w e e n y e a r a n d s i l a g e a d d i t i v e s f o r a n y o f t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s e v a l u a t e d i n t h i s e x p e r i m e n t w e r e n o n - s i g n i f i c a n t ; w h i c h i n d i c a t e s t h a t t h e e f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e s w a s s i m i l a r f o r b o t h y e a r s . F o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n T a b l e 2 - 7 . 7 8 s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t — E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e Y e a r P r o b a b i l i t y I t e m , 9 / 1 0 0 g D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y " D ° Y " D d N D F O 5 7 . 5 2 ' 5 9 . 8 8 ’ . 4 7 5 . 0 0 1 . 0 6 0 . 0 4 0 4 0 5 6 . 1 7 ' 5 7 . 9 6 ' 1 0 0 5 6 . 7 6 ’ 5 6 . 8 5 “ A D F 0 3 4 . 6 5 3 5 . 6 6 . 5 7 0 . 0 3 1 . 0 8 1 . 4 2 1 4 0 3 3 . 9 2 3 5 . 6 9 1 0 0 3 4 . 9 2 3 5 . 1 9 H e m i c e l l u l o s e 0 2 2 . 7 6 ' 2 4 . 2 1 ' . 4 3 0 . 0 0 3 . 1 5 1 . 0 2 2 4 0 2 2 . 2 4 “ 2 2 . 2 7 ' 1 0 0 2 1 . 8 3 ' 2 1 . 6 6 “ C e l l u l o s e 0 2 9 . 5 1 2 8 . 1 4 ° . 4 7 1 . 9 7 1 . 0 0 1 . 0 0 2 4 0 2 9 . 5 3 3 0 . 8 3 E 1 0 0 2 9 . 7 1 2 9 . 7 4 F ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n ° E f f e c t o f y e a r ‘ E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g ‘ I n t e r a c t i o n o f y e a r ' d a y o f e n s i l i n g 5 ° M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d i t e m h e a d i n g d i f f e r ( P < . 0 1 ) “ “ M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d i t e m h e a d i n g d i f f e r ( P < . 0 5 ) 7 9 w i t h e n z y m e s h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) p H a n d h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) L A B p o p u l a t i o n s t h a n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( T a b l e 2 - 8 ) . L a c t i c a c i d c o n t e n t a l s o w a s i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) b y i n o c u l a t i o n w h e n c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s . I n t h i s e x p e r i m e n t , s i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t i n f l u e n c e t h e p r o p o r t i o n o f o t h e r m i c r o b i a l g r o u p s o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . T h e s e r e s u l t s a r e i n a g r e e m e n t w i t h t h o s e o f B o l s e n e t a l . ( 1 9 9 2 ) , w h o r e p o r t e d t h a t e x c e p t f o r L A B , i n o c u l a t i o n d i d n o t a f f e c t o t h e r m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s i n a l f a l f a a n d w h o l e - p l a n t c o r n s i l a g e s . G l u c o s e c o n t e n t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) , b u t f r u c t o s e ( P < 0 . 0 1 ) a n d a r a b i n o s e c o n t e n t w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t . G a l a c t o s e c o n t e n t t e n d e d ( P < . 0 7 ) t o b e l o w e r i n i n o c u l a t e d s i l a g e , b u t n o e f f e c t s o f t h e s i l a g e a d d i t i v e s o n x y l o s e c o n c e n t r a t i o n s w e r e o b s e r v e d . E n z y m e a d d i t i v e d i d n o t a f f e c t ( P < 0 . 0 5 ) A D F , h e m i c e l l u l o s e , a n d c e l l u l o s e c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . H o w e v e r , s i l a g e s c o n t a i n i n g p l a n t c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) N D F c o n t e n t t h a n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t t h e e n z y m e a d d i t i v e . T h e r e w a s a s i g n i f i c a n t s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n o n p H a n d L A B p o p u l a t i o n ( T a b l e 2 - 9 ) . E n s i l i n g o f f o r a g e s o r g h u m w i t h i n o c u l a n t o r i n o c u l a n t p l u s e n z y m e h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) p H a t 3 , 7 a n d 1 4 d o f f e r m e n t a t i o n , a n d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) L A B p o p u l a t i o n 7 d p o s t - e n s i l i n g . S i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n s b e t w e e n s i l a g e a d d i t i v e a n d d a y o f e n s i l i n g o n o t h e r 1 1 1 1 1 5 0 9 2 3 6 8 2 7 4 0 0 8 4 2 8 2 0 0 0 9 6 7 5 8 0 0 6 6 1 1 1 0 4 4 0 0 0 0 8 3 0 9 3 5 6 8 3 4 1 1 1 1 1 4 7 0 3 3 6 0 1 0 9 5 0 0 6 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 . . . . . . . . . . . . . . 1 " ' E ‘ 7 4 1 1 5 3 1 2 1 1 . . . . . 2 2 0 0 0 “ 9 8 . 3 ‘ 5 9 . 3 ' 4 9 . ? 5 3 4 3 0 3 0 . . . 3 7 3 3 4 d 2 0 1 1 1 3 8 3 0 0 . . . . . 1 6 0 0 0 s t m m x s n ) ) ) 5 1 0 0 . . 0 0 < < P P ( ( r r e e f f f f i i d d s s t t p p i i r r c c s s r r e e p p u u s s 0 1 . 0 < P ( r e f f i d s t p i r c s r e p u s e e e k k i i l l n n u u M h h t D t i k i l n u h t i i w f w a m w M e y m m E a o e w m g o w l r o w o r g 0 a fl e n i r s a i e t m e d a m m R a f t e r a h i 0 t r 1 e e e m e m l m t l o a a g c a l s c u a j a i o i m m b r m e i d i c d m s r a s o h e e r s e h m h s r a h t s d t d d i d a E t e i i m n c e e s w i c a c c a e t r n f n i d n i c c s s d a a e e i a a m e o o r f b s e s s s a i c c o t c o i o s s o t n e i i u r a i i r n t m o H t c i s n c l t t t t p y a e s c c a b o c c e h o t t c a m u l l u a a a c r u t n e a l a y r r m L L L P B E E G F G X A Y A E A W a o s s s n d n g a e n n a / r a a e u p e t e M f x M S ' c E M ‘ b “ " ° 0 T a b l e 2 8 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . — S i l a g e A d d i t i v e I t e m N o A d d i t i v e E n z y m e l n o c u l a n t E + I S E M ' P r o b a b i l i t y p H I I . I ' l fi b 7 . 0 2 “ 3 . 3 5 4 . 3 2 3 . 1 0 # 3 0 0 0 0 5 Q Q fi N F N P O O O 3 0 8 1 0 1 0 1 3 ) ” P I - P o N N O O O 3 . 8 8 d 7 . 4 2 ‘ 3 . 5 8 4 . 4 4 . 0 0 7 8 0 N D F 5 8 . 8 3 ’ 5 7 . 0 2 “ 5 7 . 3 5 “ 5 6 . 8 1 “ . 3 8 7 . 0 0 2 A D F 3 2 . 9 0 3 4 . 3 6 3 4 . 7 9 3 4 . 9 6 . 4 6 6 . 1 3 5 H e m i c e l l u l o s e 2 2 . 9 2 2 2 . 6 6 2 2 . 5 6 2 1 . 8 5 . 3 5 1 . 1 7 8 C e l l u l o s e 3 0 . 1 6 2 9 . 7 4 2 8 . 8 9 2 9 . 5 1 . 3 8 5 . 1 4 2 e D 0 0 4 2 3 “ 1 1 9 9 6 t 6 7 4 0 0 ' . . . . . a y A r t e p i l i “ m D b e a b t o a r P 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 . . . . . n 0 0 “ 4 8 2 i 0 0 A 1 6 6 1 1 0 0 9 . . . . . d e l i s n e m ‘ 0 u M 2 3 2 1 7 8 9 5 9 0 2 1 3 . . . h . E 0 S . g r o s e g a r o f f o n o i s s e c n t c u a l u “ 9 9 0 0 9 5 5 8 2 0 s c . . . . . . . o . 3 5 4 5 5 6 5 5 3 3 3 3 3 3 l n 5 4 l a i b o r c e v i i m t d n a i d d A e e m g y 8 7 3 7 9 ' ' ‘ 3 0 0 H a 2 4 5 5 5 8 7 6 p n i l . . . . . z . . . 3 3 3 3 3 3 n o g n i l i s n e S E 5 4 e v i t i f 4 8 6 3 d 1 0 1 d ’ ' “ 1 o 4 5 5 6 A 3 8 7 4 . . . . . . . . y o 4 5 3 a N 3 3 3 3 3 d d n a s e v i t i d d a e g a l i . s t n f e o m n s t o c r e i f v f n E e y a D 0 0 1 ) 1 0 . < P ( r e f f l d w o r . g n . l . l e l m s n a e s f e o h t y a _ m d y s t b p . l e v r . e e 9 E t t H d m r b I c p i n a e g h i I r e n d e S e i t s t n l c _ a t s s l . r a e e y e e fi m f v p i l u e a a l t l s . l a i n e a t f l a d l c o l a _ s d k e a . r e t c a a i l _ r l e f n m s o i m d m i s r g o u o a f h r y l o s h r r a e t s n r e s d i a f o e r o f d l f w o t f t a a t c o s d c r g t a n - 2 e l b a T — I c L a c i a b o r e a s t t a c t a ’ a n e c a n e e e / a f f t u e f t n f M f M L E Y L E S I E c “ ' ' " ‘ “ ' s c t + Q P B E E O m m N e c e s e e m I l l - l m ¢ n m m m m m ' 6 ' ) I Q m 1 : ) ' 6 1 ' 6 ' ) Q m 7 5 a a u M I D “ ) ” ( ‘ 0 u . V t h — O @ Q ’ O O H ‘ I - O C D M N O ’ I O Q ‘ V I D V $ m c o 5 c o ¢ ~ 5 m o m m u m c m m m o m o m o n N o m o w e ¢ o m q o o m 5 m 5 o n 8 u - N I D V C N M I O M N Q O Q ' v - Q I O O B V Q L D m u 5 ¢ o o q m m m u m m g g k m a o m o o — m m m m m m o m m w m o m m o u 5 o m m m 0 % 3 5 5 0 0 m o — o m e o 5 m ¢ ¢ N m 5 m m o o m m m w m u d i n n e - Q o O o o p m 5 P § ¢ § o p m 5 3 § 8 § o w m 5 3 5 8 2 o p m 5 3 § $ 2 c o m p o 5 o m m m w 5 m q u m m m o o m w m 5 — o p m o m m 5 5 5 e m m u u m u u ¢ ¢ ¢ m ¢ ¢ ¢ ¢ N M N N N N V M m a m m m 5 5 5 e m n N N N N N é ¢ ¢ m ¢ ¢ ¢ ¢ N N N N N N m n m 5 5 m m 5 5 5 c m e w w u N N é ¢ d ¢ é ¢ v ¢ N N N N N M ¢ M 0 5 0 0 5 5 5 ¢ m ¢ N N N N N d ¢ ¢ ¢ ¢ ¢ ¢ ¢ N M N M N N m é 5 5 0 6 5 N N B Q O ‘ O Q O C O M - I D O F O 8 1 8 2 m i c r o b i a l g r o u p s w e r e n o t o b s e r v e d . L a c t i c a c i d c o n t e n t w a s t h e o n l y f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t i n f l u e n c e d b y t h e s i l a g e a d d i t i v e s d u r i n g t h e c o u r s e o f e n s i l i n g ( T a b l e 2 - 1 0 ) . I n o c u l a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m r e s u l t e d i n h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) l a c t i c a c i d c o n c e n t r a t i o n s a f t e r 1 , 3 , a n d 7 d p o s t - e n s i l i n g , a s c o m p a r e d t o s i l a g e w i t h o u t m i c r o b i a l i n o c u l a n t . T h i s i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d c o n t e n t c o r r e s p o n d e d w i t h t h e g r e a t e r L A B p o p u l a t i o n a n d l o w e r p H f o u n d i n i n o c u l a t e d f o r a g e s o r g h u m . T h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n g l u c o s e , g a l a c t o s e o r x y l o s e c o n t e n t ( T a b l e 2 - 1 1 ) w e r e c o n s i s t e n t a t e a c h e n s i l i n g p e r i o d . F r u c t o s e c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) f r o m d 1 u n t i l t h e e n d o f f e r m e n t a t i o n i n t r e a t m e n t s c o n t a i n i n g b a c t e r i a l i n o c u l a n t a s c o m p a r e d t o f o r a g e e n s i l e d w i t h o u t t h e m i c r o b i a l s t a r t e r c u l t u r e . I t a p p e a r s t h a t t h e m i c r o b i a l c u l t u r e a d d e d i n t h i s e x p e r i m e n t h a d a g l u c o s e p r e f e r e n c e o v e r f r u c t o s e , a s e v i d e n c e d b y t h e h i g h e r f r u c t o s e a n d l o w e r g l u c o s e c o n t e n t o b s e r v e d i n i n o c u l a t e d s i l a g e s . A r a b i n o s e w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) a f t e r 1 4 , 2 1 , a n d 4 0 d p o s t - e n s i l i n g i n s i l a g e c o n t a i n i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s a s c o m p a r e d t o s i l a g e w i t h o u t a d d i t i v e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s o r m i c r o b i a l i n o c u l a n t . T h e s u m o f t h e 5 i n d i v i d u a l W S C i n t h i s e x p e r i m e n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g , i n d i c a t e t h a t f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h b a c t e r i a l i n o c u l a n t ( 3 . 1 7 g / 1 0 0 g D M ) o r i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s ( 2 . 9 5 g / 1 0 0 g D M ) h a d g r e a t e r r e s i d u a l W S C a t t h e e n d o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s t h a n c o n t r o l s i l a g e ( 2 . 3 3 g / 1 0 0 g D M ) o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s ( 2 . 3 5 g / 1 0 0 g D M ) . I n o t h e r e x p e r i m e n t s , c o r n s i l a g e t r e a t e d w i t h l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t 8 6 4 4 4 2 0 . 9 9 . . y t i l i 1 1 1 b a b o r P 0 0 0 0 0 0 . . . 1 0 0 4 3 2 6 1 4 . . . ' 0 1 M . 0 E S l + E t n a l u c o n l e M E r g 0 o D 0 g / I , y a D n o t i c t u a d t n e P m - r d e n F n e m n o r 1 v n e . 0 1 - 2 e l b a T d i c a c i t e c ) 5 0 . 0 < P ( r e f f . l d w o r e m a s e h t n . 1 s t p _ l r c n a s e r e e m v p i u e t l s h r i e t g d e s n a d k f l e a i o 1 f l e s o n r g u o f a r y l o r 1 h t e n s o i d i c a d i c a c i n d i c a c o l c i n i r a o A L B r t y i c t p a u o P d c r n n e e a a f t e t f n S E I M " h w d f l t r o t E c a s t a E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e t S i l a g e A d d i t i v e E n Z fl n A ' D ‘ . 6 3 2 D C . 0 0 1 A h . 1 8 7 N 0 a d d i t i v e . 0 9 4 0 0 8 3 8 2 9 3 2 9 0 2 5 8 4 7 0 I 2 8 2 4 5 4 2 9 3 3 0 2 5 4 5 8 0 0 1 1 1 1 1 1 3 9 3 1 1 6 3 1 2 8 1 3 5 8 7 3 U C O O 7 4 0 8 1 5 2 2 0 0 2 . 0 J 5 . 4 2 9 5 4 7 6 3 9 5 6 9 9 9 9 9 9 9 1 0 . . 6 8 4 7 6 0 0 0 8 4 0 5 5 5 . 5 0 0 5 7 8 9 W 8 6 0 9 9 9 6 8 5 0 J O 0 J 0 5 2 A 0 3 5 6 9 9 8 6 7 9 3 3 0 2 5 9 fi s j j a s J J 0 3 5 6 9 9 8 6 0 1 m m . 0 0 1 . 5 9 1 . 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 . 0 c c c c c c 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 . 0 0 0 0 8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 m m m m m m m m 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 9 9 9 9 9 9 9 9 0 0 1 3 7 M fl 4 0 1 . 4 9 2 0 . 0 9 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 . c c c c c c c 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 9 9 9 9 9 9 9 9 0 0 1 3 7 M fl 4 0 1 6 3 0 3 7 5 3 2 J 5 0 J 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 7 6 1 4 8 8 9 1 1 4 9 1 9 2 7 0 9 9 9 L 9 L 9 1 6 2 1 0 4 2 9 8 2 5 8 1 0 0 7 7 9 9 9 L L L 9 9 3 4 7 8 4 2 0 5 1 5 9 0 9 9 8 7 9 9 9 L 9 9 9 9 4 0 o l a 7 l m m w l n a d % i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g E f f e c t o f d a e b c d t . . 3 7 7 0 9 0 9 6 1 . 1 1 0 0 0 0 . . 7 0 0 . 2 5 0 . n e m n o r i v n e e t a r e p m 6 ' 8 e t M E a S 1 . n i d e l i s n e m E H u h g r o s e g a t n a l r u o f f o t n e t n o c C S W n o g n i l i s n e f o y a d d n a s e v i i d d a e g a l i s f o s t c e f f E . 1 1 - 2 e l b a T c o n l M h D 0 g 1 0 r a d e C r y a o . / g t b 0 1 0 0 2 4 1 e s o t e c s a o l l a y G X e s o n i b a r A ' o d r d h a a n a f r n e e e o r r m t S t e d n p p v d i i a u u t s s l i i e s d e e n g d k k e a a l i i . u l l f s n e o n g a l u u f Y o h h f f t e e f f n E " M M I E ‘ " ‘ 3 ) 5 0 . 0 < P ( r e f f i d w o r g n i l e i s m n a e s f e o h t y a n ' I d y s t b p p i i e r r v c c i s s t r r i g e e i a s t t n d i o r i w w f f t o o c s s t t a n n c c r a a e e e P r o b a b i l i t y A b . 0 0 1 S i l a g e A d d i t i v e A ' D ‘ D O . 0 0 1 E n z y m e N o A d d i t i v e D a y . 1 7 3 2 4 4 6 0 9 4 a 7 9 3 2 J o 9 8 4 4 3 6 6 9 3 2 1 0 5 0 9 9 9 L L L L L 9 7 3 4 1 9 0 1 0 A 2 J O J A O 5 3 3 2 2 1 1 1 0 0 1 3 7 M fl w m G l u c o s e . 0 0 1 . 0 0 1 3 9 . 4 . 4 : V 2 . 5 6 9 5 8 3 3 4 5 1 1 0 0 0 0 0 4 1 0 0 6 s O t C U r F m 5 . . 0 0 1 . 9 0 2 . 0 2 3 2 4 5 1 7 6 8 4 1 1 2 2 1 1 1 1 9 9 9 9 9 9 9 9 0 6 2 8 5 7 4 4 1 1 2 1 1 1 1 1 9 9 9 9 9 9 9 9 4 7 5 0 1 0 8 5 1 1 2 2 2 2 1 1 9 9 9 9 9 9 9 9 0 4 1 1 7 2 5 5 1 1 2 2 1 2 1 1 9 9 9 9 9 9 9 9 0 0 1 3 7 M fl 4 w . 8 8 8 0 . 3 9 5 7 1 2 3 3 1 1 0 0 1 1 1 3 3 5 9 9 9 9 9 9 9 9 7 8 1 2 3 3 5 2 0 0 1 1 1 1 2 6 9 9 9 9 9 9 9 9 6 7 2 2 1 4 2 1 0 0 1 1 1 1 3 6 9 9 9 9 9 9 9 9 7 8 9 2 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 3 6 9 9 9 9 9 9 9 9 0 1 3 7 ” . 0 2 1 0 . 1 2 E E E E 1 8 8 2 3 1 1 4 1 0 0 1 1 1 1 1 9 9 9 9 9 9 9 9 8 1 1 0 1 0 0 0 1 9 9 9 9 9 9 9 9 r : 5 3 2 3 9 7 7 9 1 J J J 0 0 0 0 J 0 0 0 0 0 0 0 0 8 1 0 9 0 9 9 9 2 1 1 1 | 0 0 1 9 9 9 9 9 9 9 9 0 t s i n t h e s a m e r o w d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 8 5 h a d h i g h e r W S C a f t e r 1 1 0 d p o s t - e n s i l i n g t h a n c o r n s i l a g e t r e a t e d w i t h o u t m i c r o b i a l c u l t u r e ( C l e a r e e t a l . , 1 9 9 0 ) . T h e h i g h e r r e s i d u a l W S C c o n t e n t f r o m t h e c u r r e n t e x p e r i m e n t a n d C l e a r e a n d c o - w o r k e r s m a y i n d i c a t e a l e s s e x t e n s i v e f e r m e n t a t i o n i n t h e i n o c u l a t e d s i l a g e . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r a f t e r 4 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g t e n d e d t o b e l o w e r ( P < 0 . 0 9 ) i n f o r a g e s o r g h u m c o n t a i n i n g e n z y m e s t h a n f o r a g e e n s i l e d w i t h o u t a d d i t i v e o r L A B i n o c u l a n t ( T a b l e 2 - 1 2 ) . T h e s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n s o n o t h e r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s w e r e n o t s i g n i f i c a n t . I n t h i s e x p e r i m e n t , e n z y m e m i x t u r e s d e c r e a s e d t h e N D F f r a c t i o n a f t e r 1 0 0 d o f f e r m e n t a t i o n a s c o m p a r e d t o s i l a g e w i t h o u t e n z y m e a d d i t i v e , b u t t h i s d i d n o t h a v e a s i g n b i f i c a n t e f f e c t o n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . P r e v i o u s r e s u l t s w i t h e n z y m e - t r e a t e d f o r a g e s h a v e s h o w n v a r i a b l e s u c c e s s o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n , b u t a r e d i f f i c u l t t o c o m p a r e b e c a u s e o f t h e v a r i a b i l i t y i n e n z y m e s c o m p l e x e s , d i f f e r e n t a m o u n t s o f a c t i v i t y , a n d i n t e r a c t i o n s w i t h p l a n t m a t u r i t y a n d p l a n t s p e c i e s . T r o p i c a l S i l a g e T h e o r g a n i c a c i d c o n t e n t s o f f r e s h a n d e n s i l e d f o r a g e w e r e d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 1 ) a c r o s s y e a r s ( T a b l e 2 - 1 3 ) . M a l i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s a c i d s w e r e g r e a t e r i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . A d d i t i o n a l l y , t h e c o n c e n t r a t i o n o f t h e s e a c i d s d e c r e a s e d o v e r t h e e n s i l i n g p e r i o d ( P < 0 . 0 1 ) . F o r a l l e n s i l i n g p e r i o d s , c i t r i c a c i d t e n d e d ( P < 0 . 0 8 ) t o b e h i g h e r i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 , b u t s u c c i n i c a c i d c o n t e n t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) . F o r a l l e n s i l i n g p e r i o d s , c i t r i c a c i d t e n d e d y t i l i b a b o r P e v i t i d d A 0 7 9 4 0 6 . . 0 2 6 5 0 1 . . 2 5 8 2 0 3 7 4 0 1 1 1 . . . . 7 0 8 . 8 7 0 6 6 6 . . 2 0 6 1 1 6 . . . 5 5 4 3 3 3 “ 7 2 8 9 7 2 2 2 4 ' 0 0 7 0 0 9 . . . 8 7 6 4 2 2 7 6 2 3 1 . . . . . . . . . 3 5 5 3 2 1 7 9 0 6 5 5 5 3 3 3 2 2 2 2 2 3 " 5 ' 0 2 4 9 7 . 7 3 8 7 8 2 3 6 5 7 1 1 1 5 2 5 8 8 . . . . . . . . . . . 8 5 6 5 3 4 3 2 2 9 9 9 5 5 5 3 3 3 2 2 2 2 2 2 ’ ’ ‘ 7 3 8 1 1 1 5 6 9 3 2 5 0 7 8 9 5 0 . . . . . . . . . 9 8 9 6 5 5 8 0 1 5 5 5 3 3 3 2 3 3 0 O 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 4 4 ) 0 1 . 0 < P ( r e f f i d w o r g n i l e i m s n a e s f e o h t y a n i . d t s n e m n o r i v n e n y t b p e v i r c a i e t s i r m g e d e v d n p e i u i a h s l t i e i t e s d g s e f a n k d i o e o l a l l i e n u e i s r s f l o o o g r f a h . 2 F F l l l r y o e u e i a D D n c l s d t i w 1 l N A i - m e C d o r f f i a o o t s 2 e c H t t a d n e l b a T — n a c c r a e e e e t t f f M S f f n E E I ' 9 b ° ‘ " E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e I t e m , 9 / 1 0 0 g D M D a y N o a d d i t i v e E n z y m e l n o c u l a n t E + l S E M ' A ” D ° A " D d 2 3 . 1 1 2 2 . 3 6 2 3 . 2 9 5 7 . 5 0 “ 5 6 . 4 1 ' 5 6 . 5 3 ' 2 2 . 3 7 2 1 . 3 0 2 1 . 8 7 2 9 . 6 4 3 0 . 2 2 2 8 . 6 8 . 6 7 1 . 8 1 9 . 2 4 3 . 0 1 9 . 1 5 0 8 6 i ‘ D " 4 4 7 8 9 7 0 6 1 Y . . . 1 0 0 . y t i l 1 1 1 1 i ° b 0 a b o r P b Y 0 0 0 0 0 . 0 0 0 . . . 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 . . . . ' M 9 3 5 5 8 7 E 0 1 0 9 5 1 S . . . . 4 E F ‘ ‘ = “ ° “ ' “ 9 ' ' ' ' " 0 6 2 4 1 3 1 9 1 2 0 3 5 0 ' 4 0 2 9 2 0 6 8 8 8 2 9 0 9 7 4 4 4 3 3 4 1 6 3 7 8 5 7 2 7 2 2 9 8 6 0 6 4 6 . , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 4 2 2 2 2 2 2 0 3 3 2 2 2 E ‘ F ‘ F ° ' I ’ “ ' h ' ' ' “ “ “ ) ) 0 1 1 0 . . 0 0 < < P P ( ( r r e e f f f f i i d d g g n n i i d d 4 0 7 3 3 1 1 3 9 0 4 9 3 4 7 ‘ 9 a 9 6 5 0 4 3 3 2 2 5 5 4 0 4 4 6 4 5 6 5 5 7 3 9 9 4 4 7 6 6 3 3 3 3 8 7 1 5 6 4 7 9 8 4 3 1 e 5 a r a e Y 3 9 9 h . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . e 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 0 0 2 2 2 2 0 0 y 0 0 0 0 a 0 1 3 7 3 3 3 7 0 0 0 0 0 7 7 0 0 1 1 1 4 4 4 0 0 0 4 0 1 1 1 1 h d d i i c c a a c c i i n n a a g g r r o o d d n n a a r D 1 1 1 1 1 1 1 1 r 2 2 2 2 4 4 4 4 a M D g 0 0 1 / g , d i c a i r c t i i a e e y y e e m m a a s s e e h g t h n t i n n i l i i s n s s t e t p p i f r i o r c n c s a y s r a e r e g n d e p m p u i l y u s e s i b h e s t e k n r k i c i e t e c i n f i l a o e l n f o y n u c r u h h t t i e n y d o i w d f f i w r o o s t c s a n t t a n d a c c r n e e e e a a f e f t M t f f n M E E I S ° ; f " 9 , c i o r f c a i l c a r o y l a c e r a a x u S C M O n a g r O _ T a b l e 2 - 1 3 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n o r g a n i c a c i d c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t 8 7 8 8 ( P < 0 . 0 8 ) t o b e h i g h e r i n 1 9 9 3 t h a n i n 1 9 9 4 , b u t s u c c i n i c a c i d c o n t e n t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) . S i m i l a r t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , a l l o r g a n i c a c i d s w e r e d e g r a d e d i n t h e t r o p i c a l s i l a g e . M a l i c a n d s u c c i n i c a c i d s w e r e t h e m a j o r o r g a n i c a c i d s f o u n d i n t h e f r e s h a n d e n s i l e d f o r a g e s o r g h u m , a n d t h e i r c o n c e n t r a t i o n d e c r e a s e d m o r e d u r i n g t h e e n s i l i n g p e r i o d t h a n c i t r i c a n d o x a l o a c e t i c a c i d s . A c i d i t y a s m e a s u r e d b y p H , o f t h e t r o p i c a l s i l a g e w a s i n f l u e n c e d s i m i l a r l y b y l e n g t h o f e n s i l i n g a c r o s s y e a r s ( T a b l e 2 - 1 4 ) . O v e r t i m e , p H o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e w a s d o w n - t r e n d i n g t h r o u g h o u t t h e p e r i o d o f e n s i l i n g ; b u t w a s v a r i a b l e , a n d r e a c h e d t h e 4 . 2 v a l u e a f t e r 2 1 d o f f e r m e n t a t i o n . I n t h i s e x p e r i m e n t , h i g h e r a n d m o r e v a r i a b l e p H v a l u e s w e r e f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t i n c o m p a r i s o n t o t h e t e m p e r a t e l o c a t i o n . T h i s o b s e r v a t i o n s u g g e s t s t h a t m i c r o b i a l e c o l o g y w a s c h a n g i n g a n d d i f f e r e n t s u b s t r a t e s w e r e b e i n g u s e d , t h a t w o u l d i m p l y a v e r y h e t e r o g e n o u s m i c r o b i a l p o p u l a t i o n e x i s t e d i n t h e t r o p i c a l s i l a g e . D i f f e r e n c e s i n p H b e t w e e n l o c a t i o n s m a y b e a l s o a s s o c i a t e d w i t h t h e h i g h e r b u f f e r i n g c a p a c i t y o f t h e v e g e t a t i v e m a t e r i a l p r i o r t o e n s i l i n g i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , a n d t h e h i g h e r o r g a n i c a c i d c o n t e n t s t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) . M i c r o b i a l p o p u l a t i o n s w e r e d i f f e r e n t a c r o s s y e a r s a s e v i d e n c e d b y t h e s i g n i f i c a n t y e a r b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n . L a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) t h e i n i t i a l 7 d p o s t - e n s i l i n g i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 , b u t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e r e s t o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . 8 9 T a b l e 2 - 1 4 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t Y e a r P r o b a b i l i t y I t e m D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y ” D “ Y “ ' D ' j p H 0 5 . 5 6 5 . 6 1 . 0 4 3 . 1 6 3 . 0 0 1 . 7 6 0 1 4 . 7 4 4 . 7 3 3 4 . 5 6 4 . 5 0 7 4 . 5 5 4 . 4 8 1 4 4 . 3 4 4 . 3 4 2 1 4 . 5 1 4 . 4 2 4 0 4 . 1 1 4 . 0 7 1 0 0 4 1 4 4 . 1 2 I I . I . I E , L a c t i c a c i d b a c t e r i a 0 4 . 8 3 ’ 4 . 2 1 " . 1 1 5 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 5 . 9 6 ' 8 . 4 5 ' 3 7 . 7 0 ' 8 . 6 2 ' 7 7 . 6 5 ' 7 . 8 7 9 1 4 7 . 0 9 9 7 . 0 5 " 2 1 6 . 6 6 “ “ 6 6 0 I 4 0 6 . 8 0 9 " 6 4 5 . 1 0 0 6 . 7 3 " 5 7 9 . E n t e r o b a c t e r i a c e a e 0 7 . 0 1 ' 5 . 4 7 ‘ . 2 5 5 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 6 9 6 ' 7 . 9 6 ' 3 5 2 6 ° 6 . 3 4 “ 7 3 4 3 " 5 . 9 8 . ‘ 1 4 3 6 2 h 3 . 6 1 I L 2 1 2 9 6 I 4 . 3 8 1 4 0 3 2 4 ' 3 . 4 9 | k 1 0 0 2 2 4 ' 3 . 8 7 t Y e a s t s a n d m o l d s 0 6 . 1 1 “ 3 . 1 4 " . 1 4 9 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 4 1 6 . 3 0 “ 5 . 5 4 I 3 6 . 3 4 ” 6 . 8 8 " 7 6 . 8 9 ' 7 . 4 7 ' 1 4 6 . 5 3 ' 6 . 2 1 h 2 1 6 . 7 5 ' 5 . 9 7 " 4 0 6 . 8 2 ’ 5 . 3 3 I 1 0 0 6 . 8 3 ' 4 . 8 7 I L a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t 0 2 . 5 5 ' 2 . 9 5 " . 1 7 3 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 3 . 9 9 " 5 . 0 3 I 3 4 . 7 2 9 6 . 2 4 ‘ I 7 6 . 0 4 ' 7 . 0 9 ' 1 4 5 . 9 4 ' 6 . 2 0 ° 2 1 6 . 0 8 ' 5 . 8 2 " 4 0 5 . 7 8 ' 5 . 1 1 I 1 0 0 6 . 1 0 ' 4 . 5 9 ‘ ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f e a r ‘ E f f e c t o f a y o f e n s i l i n g " I n t e r a c t i o n o f y e a r b y d a y o f e n s i l i n g ' c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ' ° " " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d i t e m h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 9 0 I n t h i s e x p e r i m e n t , a g r e a t e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n f o u n d i n 1 9 9 4 d u r i n g t h e f i r s t w e e k p o s t - e n s i l i n g d i d n o t r e s u l t i n l o w e r p H v a l u e s ; w h i c h m a y i n d i c a t e d i f f e r e n c e s i n c o u n t s o r a c t i v i t y o f o t h e r m i c r o b i a l g r o u p s o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t b e t w e e n y e a r s . A d d i t i o n a l l y , i t m a y s u g g e s t t h a t w h a t h a p p e n s e a r l y i n t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d i s o f l e s s i m p o r t a n c e t h a n i s c u r r e n t l y t h o u g h t . I n 1 9 9 3 , e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f e n s i l i n g p e r i o d i n c r e a s e d , w h e r e a s , i n 1 9 9 4 t h e p o p u l a t i o n i n c r e a s e d b y d a y 1 b e f o r e s h o w i n g t h e d e c l i n i n g t r e n d . Y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 7 d p o s t - e n s i l i n g i n b o t h y e a r s , b u t t h e c h a n g e s w e r e m u c h m o r e d r a m a t i c i n 1 9 9 4 . L o w W S C c o n t e n t o f t r o p i c a l g r a s s e s a n d l o w h o m o f e r m e n t a t i v e L A B p o p u l a t i o n d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s h a v e b e e n d e s c r i b e d a s t h e m a j o r p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f t r o p i c a l f o r a g e s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . H o w e v e r , i n t h i s e x p e r i m e n t , L A B p o p u l a t i o n s i n t h e s i l a g e w e r e s i m i l a r b e t w e e n t h e t w o e n v i r o n m e n t s . T h e e n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t s o b s e r v e d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t w e r e m a r k e d l y g r e a t e r t h a n m i c r o b i a l c o u n t s t y p i c a l l y f o u n d i n g r a s s e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . T h e h i g h e r c o u n t s o f t h e s e m i c r o o r g a n i s m s , d e s c r i b e d a s u n d e s i r a b l e f o r t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s , a p p e a r t o b e t h e p r o b l e m i n a c h i e v i n g a s a t i f a c t o r y f e r m e n t a t i o n i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . S i m i l a r t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , a c e t i c a c i d c o n t e n t i n c r e a s e d w i t h l e n g t h o f t h e e n s i l i n g p e r i o d ( T a b l e 2 - 1 5 ) . A g r e a t e r 9 1 a n d m o r e v a r i a b l e a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n w a s f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . T h i s c h a n g e i n a c e t i c a c i d c o n t e n t i n f o r a g e e n s i l e d i n 1 9 9 4 , m a y c o r r e s p o n d t o t h e h i g h e r e n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d m o r e y e a s t s a n d m o l d s a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s f o u n d d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . S i n c e e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n d e c r e a s e d a f t e r 2 1 d p o s t - e n s i l i n g , i t w o u l d s e e m t h a t o t h e r a c e t i c a c i d p r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s m s ( e . g . h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a , y e a s t s a n d m o l d s , l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t ) a r e r e s p o n s i b l e f o r a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n a t l a t e r s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . L a c t i c a c i d w a s t h e m a j o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f f o r a g e s o r g h u m i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . A g r e a t e r l a c t i c a c i d p r o d u c t i o n a f t e r 3 d p o s t - e n s i l i n g w a s f o u n d i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 a s c o m p a r e d t o s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 3 . T h i s h i g h e r l a c t i c a c i d m a y i n d i c a t e a m o r e a c t i v e L A B p o p u l a t i o n i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 . I n b o t h y e a r s , l a c t i c a c i d c o n t e n t i n c r e a s e d a f t e r d 1 4 p o s t - e n s i l i n g ; w h i c h c o r r e s p o n d s t o c h a n g e s i n p H a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s . A f t e r 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , l a c t i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e . I t w o u l d a p p e a r f r o m t h i s o b s e r v a t i o n t h a t l a c t i c a c i d i s b e i n g u s e d a s a s u b s t r a t e b y t h e m i c r o b i a l e c o s y s t e m l a t e i n t h e e n s i l i n g p e r i o d . I n t h i s e x p e r i m e n t , f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t f o r 1 0 0 d h a d l o w a c e t i c a c i d c o n t e n t . L e v e l s o f a c e t i c a c i d i n d i c a t e d t h a t f e w a c e t i c a c i d - p r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s m s w e r e p r e s e n t i n t h e s i l a g e m i c r o f l o r a , t h a t m i c r o o r g a n i s m s r e s p o n s i b l e f o r a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n h a d v e r y l o w . 9 m ) 0 0 ’ 9 h 0 0 1 o . 0 " 9 2 T a b l e 2 - 1 5 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v r r o n m e n t . Y e a r P r o b a b i l i t y F e r m e n t a t i o n d E n d - P r o d u c t , g / 1 0 0 g D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y " D ‘ Y ' D A c e t i c a c i d 0 0 . 0 4 " 0 . 0 8 “ . 0 4 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 2 1 “ 0 . 2 5 “ 3 0 . 2 3 “ 0 . 7 1 ' 7 0 . 3 0 ' 0 . 7 4 ' 1 4 0 . 3 3 ' 0 . 8 0 ’ 2 1 0 . 3 8 ' 0 . 6 9 ' 4 0 0 . 3 7 ' 0 . 6 7 ' 1 0 0 0 5 1 ’ 0 . 7 2 ' L a c t i c a c i d 0 0 . 1 9 “ 0 . 1 0 . 2 2 3 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 . 5 4 ‘ I 1 . 1 4 ' 3 2 . 1 9 ' 7 . 2 4 ' 7 3 . 1 7 ' 7 . 2 3 ' 1 4 3 . 5 5 ' 7 . 5 3 ' 2 1 2 . 4 8 ' 6 . 0 5 ' 4 0 1 . 8 1 " 4 . 5 9 “ 1 0 0 1 . 5 1 ‘ I 3 . 2 0 " P r o p i o n i c a c i d 0 0 . 0 0 9 0 . 0 0 9 . 0 1 0 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 7 1 0 . 0 0 9 0 . 0 0 ! I 3 0 . 0 0 " 0 . 0 0 “ 7 0 . 0 0 9 0 . 0 0 9 1 4 0 . 0 9 ‘ 0 . 0 4 “ 2 1 0 . 0 7 ' 0 . 0 4 “ 4 0 0 . 0 4 ' 0 . 0 5 ' 1 0 0 0 . 0 4 ’ 0 . 0 2 " B u t y r i c a c i d 0 0 . 0 0 0 . 0 0 . 0 0 6 . 8 9 9 . 0 0 1 . 1 5 0 1 0 . 0 3 0 . 0 4 3 0 . 0 5 0 . 0 6 7 0 . 0 8 0 . 0 4 1 4 0 . 0 5 0 . 0 5 2 1 0 . 0 6 0 . 0 6 4 0 0 . 0 4 0 . 0 4 1 0 0 0 . 0 4 0 . 0 5 E t h a n o l 0 0 . 0 2 ’ 0 . 0 8 1 . 0 5 8 . 1 9 8 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 1 2 ' 0 . 4 8 " 3 0 . 2 9 " 0 . 6 5 “ 7 0 . 6 3 ' 0 . 8 1 ' 1 4 1 . 1 1 ' 1 1 0 ° 2 1 0 . 6 4 0 0 . 5 1 0 0 0 . 7 1 9 . 1 9 . ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f y e a r ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g ‘ I n t e r a c t i o n o f y e a r b y a y o f e n s i l i n g ‘ 9 " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 9 3 m e t a b o l i c a c t i v i t y , o r t h a t o t h e r m i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g p r o c e s s a r e c a p a b l e o f u t i l i z i n g a c e t i c a c i d a s a s u b s t r a t e . I n s i m i l a r e x p e r i m e n t s p e r f o r m e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t o f H a w a i i , ( K u n g J r . e t a l . , 1 9 8 2 ) l a c t i c a c i d w a s a l s o t h e m a j o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t o f w h o l e p l a n t s u g a r c a n e ( S a c c h a r u m o f f i c i n a r u m ) e n s i l e d a t 5 d i f f e r e n t s t a g e s o f m a t u r i t y f o r 6 0 d . H o w e v e r , r e s u l t s f r o m t h e c u r r e n t e x p e r i m e n t a n d t h e K u n g J r . s t u d y a r e i n d i s a g r e e m e n t w i t h o t h e r s t u d i e s ( C a t c h p o o l e a n d W i l l i a n s , 1 9 6 9 ; C a t c h p o o l e a n d H e n z e l , 1 9 7 0 ; P a n d i t h a r a t n e e t a l . , 1 9 8 6 ) w h i c h i n d i c a t e d t h a t a c e t i c a c i d i s t h e m a j o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f t r o p i c a l g r a s s e s . T h e h i g h a c e t a t e s i l a g e s d e s c r i b e d i n t h e i r e x p e r i m e n t s w e r e u t i l i z i n g l e g u m e s ( e . i . P h a s e o l u s a t r o p u r p u r e u s , D e s m o d i u m i n t o r t u m , L o t o n o n i s b a i n e s s i , S e t a r i a s p h a c e l a t a , o r C h l o r i s g a y a n a ) o r g r a s s s p e c i e s ( P a n i c u m m a x i m u m ) w i t h d i f f e r e n t b u f f e r i n g c a p a c i t y a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s t h a n t h e f o r a g e s o r g h u m e v a l u a t e d i n t h i s e x p e r i m e n t o r t h e s u g a r c a n e b a g a s s e . L o n g e r e n s i l i n g p e r i o d s ( 2 0 0 d ) w e r e a l s o u t i l i z e d i n t h o s e s t u d i e s a s c o m p a r e d t o t h e l e n g t h o f e n s i l i n g u t i l i z e d i n t h e c u r r e n t e x p e r i m e n t ( 1 0 0 d ) . I t h a s b e e n s h o w n t h a t i n c r e a s i n g t h e l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n i n g r a s s s i l a g e d e c r e a s e s t h e h o m o f e r m e n t a t i v e L A B p o p u l a t i o n a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t , a n d i n c r e a s e s t h e p H , h e t e r o f e r m e n t a t i v e L A B a n d a c e t i c a c i d c o n t e n t ( T j a n d r a a t m a d j a e t a l . , 1 9 9 1 ) . P r o p i o n i c a n d b u t y r i c a c i d s w e r e a l s o d e t e c t e d i n b o t h y e a r s . B u t y r i c a n d p r o p i o n i c a c i d c o n t e n t s i n t h e t r o p i c a l s i l a g e w e r e g r e a t e r t h a n 9 4 c o n c e n t r a t i o n s o b s e r v e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . H o w e v e r , c o n c e n t r a t i o n s o f t h e s e t w o a c i d s w e r e n o t s u f f i c i e n t l y h i g h t o p l a y a m a j o r r o l e i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n b o t h y e a r s , e t h a n o l p r o d u c t i o n i n c r e a s e d d u r i n g t h e i n i t i a l 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , b e i n g s l i g h t l y h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . A f t e r 1 4 d p o s t - e n s i l i n g , e t h a n o l p r o d u c t i o n d e c r e a s e d a s l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n i n c r e a s e d i n 1 9 9 4 , b u t t h i s g e n e r a l t r e n d w a s n o t o b s e r v e d i n 1 9 9 3 . T h e s e d i f f e r e n c e s i n e t h a n o l c o n t e n t b e t w e e n y e a r s m a y b e a t t r i b u t e d t o d i f f e r e n t m e t a b o l i c a c t i v i t y o f m i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h e t h a n o l p r o d u c t i o n . A s o b s e r v e d w i t h s i l a g e s p r e p a r e d f r o m f o r a g e s g r o w n i n a t e m p e r a t e c l i m a t e , g l u c o s e a n d f r u c t o s e w e r e a l s o t h e m a j o r W S C a s s o c i a t e d w i t h t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t r o p i c a l c l i m a t e ( T a b l e 2 - 1 6 ) . I n b o t h y e a r s , g l u c o s e a n d f r u c t o s e d e c r e a s e d o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , w i t h t h e g r e a t e s t d e c r e a s e o c c u r i n g w i t h i n t h e f i r s t 7 d . T h e g r e a t e r d i s a p p e a r a n c e o f g l u c o s e a n d f r u c t o s e t h e f i r s t w e e k p o s t - e n s i l i n g c o r r e s p o n d s t o t h e m a x i m u m L A B c o u n t s o b s e r v e d i n t h i s e x p e r i m e n t . H o w e v e r , t h i s d e c l i n e i n s u g a r c o n t e n t a l s o c o r r e s p o n d s t o t h e d e c r e a s e i n t h e e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n t h e f i r s t w e e k o f e n s i l i n g . E n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d L A B m u s t c o m p e t e f o r t h e a v a i l a b l e s u b s t r a t e s f o r g r o w t h . T h e h i g h l e v e l s o f a c e t i c a c i d w o u l d s u g g e s t t h e f e r m e n t a t i o n w a s n o t h o m o f e r m e n t a t i v e a n d t h a t a c e t i c a c i d p r o d u c i n g b a c t e r i a u t i l i z e d s o m e o f t h e s u b s t r a t e . G a l a c t o s e c o n t e n t w a s g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) i n 1 9 9 4 t h a n 1 9 9 3 , b u t a s i m i l a r p a t t e r n a c r o s s y e a r s 9 5 T a b l e 2 - 1 6 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t Y e a r P r o b a b i l i t y C a r b o h y d r a t e , g / 1 0 0 g D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y " D c Y ' D " G l u c o s e 0 3 . 2 8 ' 2 . 9 3 ' . 0 3 4 . 2 4 2 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 . 1 2 ' 0 . 6 4 ' 3 0 . 5 1 “ 0 . 5 1 9 7 0 . 4 1 " 0 . 4 4 " 1 4 0 . 1 4 ' 0 . 4 7 " 2 1 0 . 1 2 ' 0 . 3 6 ' 4 0 0 . 0 8 " 0 . 3 0 ‘ 1 0 0 0 . 0 4 " 0 . 2 F r u c t o s e 0 2 . 6 3 ' 3 . 2 5 ' . 0 4 6 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 5 4 ' 0 . 4 9 ' 3 0 . 3 4 " 0 . 3 6 “ 7 0 . 2 2 “ 0 . 3 7 “ 1 4 0 . 2 " 0 . 4 1 9 ' 2 1 0 . 1 7 " 0 . 3 0 “ “ 4 0 0 . 1 4 " 0 . 2 2 " 1 0 0 0 . 0 6 ' 0 . 1 3 ' G a l a c t o s e 0 0 . 0 5 0 . 2 0 . 0 6 8 . 0 0 1 . 0 0 1 . 1 5 1 1 0 . 0 4 0 . 1 0 3 0 . 0 4 0 . 0 8 7 0 . 1 2 0 . 2 3 1 4 0 . 1 3 0 . 5 4 2 1 0 . 1 1 0 . 1 8 4 0 0 . 0 6 0 . 1 7 1 0 0 0 . 0 5 0 . 1 4 X y l o s e 0 0 . 3 7 ’ 0 . 6 7 “ . 0 4 3 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 0 . 3 3 ' 0 . 6 9 “ 3 0 . 3 2 ' 0 . 5 7 “ “ 7 0 . 1 2 ' 0 . 6 5 ” 1 4 0 . 1 5 ' 0 . 7 5 ' 2 1 0 . 1 3 ' 0 . 5 5 “ 4 0 0 . 1 1 ' 0 . 1 9 ' 1 0 0 0 . 0 7 ' 0 . 1 9 ' A r a b i n o s e 0 0 . 0 6 0 . 0 9 . 0 1 2 . 0 0 1 . 0 0 6 . 2 4 3 1 0 . 0 7 0 . 0 8 3 0 . 0 7 0 . 0 7 7 0 . 0 6 0 . 0 8 1 4 0 . 0 7 0 . 1 3 2 1 0 . 0 7 0 . 1 0 4 0 0 . 0 5 0 . 1 0 1 0 0 0 . 1 1 0 . 1 2 ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f y e a r ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g " I n t e r a c t i o n o f y e a r b y d a y o f e n s i l i n g " ° " " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d c a r b o h y d r a t e h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 9 6 w a s o b s e r v e d . A s m a l l i n c r e a s e i n g a l a c t o s e c o n t e n t w a s o b s e r v e d a f t e r 1 4 - 2 1 d o f f e r m e n t a t i o n , h o w e v e r , t h e c h a n g e s i n g a l a c t o s e c o n t e n t d i d n o t c o r r e s p o n d w i t h a n y m a j o r c h a n g e s i n m i c r o b i a l p o p u l a t i o n o r o t h e r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . I n c o n t r a s t t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , x y l o s e c o n t e n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) t h a n x y l o s e c o n t e n t i n v e g e t a t i v e m a t e r i a l p r i o r t o e n s i l i n g . A r a b i n o s e c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g t h a n i n i t i a l a r a b i n o s e c o n c e n t r a t i o n ; w h i c h m a y r e s u l t f r o m c e l l - w a l l h y d r o l y s i s d u r i n g t h e l a s t t h i r d o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r l e v e l s w e r e r e d u c e d ( P < 0 . 0 1 ) a s a r e s u l t o f f e r m e n t a t i o n ( T a b l e 2 - 1 7 ) . T h o u g h m o r e v a r i a b l e , A D F a n d c e l l u l o s e c o n t e n t s i n c r e a s e d a s l e n g t h o f e n s i l i n g i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) . T h i s m a y r e s u l t f r o m a c o n c e n t r a t i o n o f t h e s e c o n s t i t u t e n t s w h i c h a r e m o r e r e s i s t a n t t o d e g r a d a t i o n . H e m i c e l l u l o s e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) a s l e n g t h o f t h e e n s i l i n g p e r i o d i n c r e a s e d . T h i s d e c r e a s e i n h e m i c e l l u l o s e c o n t e n t d i d n o t c o r r e s p o n d t o a n i n c r e a s e i n x y l o s e , b u t m a y e x p l a i n t h e i n c r e a s e i n a r a b i n o s e c o n t e n t . T h e r e a r e t w o p o s s i b l e e x p l a n a t i o n s f o r t h e d i f f e r e n c e s o b s e r v e d i n 4 o r 5 c a r b o n s u g a r a p p e a r a n c e a n d h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e . F i r s t l y , i t m a y b e t h a t f o r a g e s g r o w n i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t p o s s e s s l e s s x y l o s e a n d m o r e a r a b i n o s e s u g a r s . A n o t h e r p o s s i b i l i t y m a y i n v o l v e t h e r a t e o f r e l e a s e v e r s u s m e t a b o l i s m b y m i c r o o r g a n i s m s . P e r h a p s t h e r a t e o f x y l o s e r e l e a s e d f r o m t h e c e l l w a l l i s s l o w e r t h a n i t s r a t e o f u t i l i z a t i o n b y t h e s i l a g e m i c r o f l o r a , b u t t h e r a t e o f a r a b i n o s e h y d r o l y s i s i s h i g h e r t h a n i t s r a t e o f u t i l i z a t i o n . 9 7 T a b l e 2 - 1 7 . E f f e c t s o f y e a r a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n s t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . Y e a r P r o b a b i l i t y l t e m , g / 1 0 0 9 o f D M D a y 1 9 9 3 1 9 9 4 S E M ' Y " D ° Y " D d N D F 0 6 5 . 8 5 6 6 . 3 5 . 3 4 1 . 4 3 9 . 0 0 1 . 4 1 5 4 0 6 3 . 2 4 6 2 . 9 3 1 0 0 6 3 . 2 8 6 3 . 7 5 A D F 0 3 7 . 2 3 ' 3 9 . 7 0 ' . 3 8 3 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 5 4 0 3 7 . 8 6 ' 3 5 . 7 7 ' 1 0 0 3 9 . 2 3 ' 4 0 . 0 2 ' H e m i c e l l u l o s e 0 2 8 . 8 4 ' 2 6 . 4 3 ‘ . 2 5 5 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 4 0 2 5 . 8 2 ' 2 5 . 5 2 ' 1 0 0 2 4 . 4 1 9 2 4 . 4 3 ‘ I C e l l u l o s e 0 3 0 . 1 1 ' 3 2 . 5 0 ' . 4 7 1 . 0 2 9 . 0 0 1 . 0 0 8 4 0 3 1 . 5 1 ' 3 1 . 4 4 ' 1 0 0 3 2 . 9 3 “ 3 2 . 9 6 ’ ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n ° E f f e c t o f y e a r ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g " I n t e r a c t i o n o f y e a r b y a y o f e n s i l i n g “ 9 M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e y e a r a n d i t e m h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 9 8 T h e e f f e c t s o f a d d i t i v e s w e r e s i m i l a r d u r i n g b o t h y e a r s . S i m i l a r t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , i n t h i s s t u d y s i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t c h a n g e t h e p l a n t o r g a n i c a c i d p r o f i l e s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . S i l a g e t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) p H , a n d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t t h a n c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s ( T a b l e 2 - 1 8 ) . S i m i l a r t o t h e r e s u l t s o b s e r v e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , s i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t p e r m a n e n t l y i n f l u e n c e o t h e r m i c r o b i a l g r o u p s o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n t h e t r o p i c a l s i l a g e . I n o c u l a t e d s o r g h u m s i l a g e a l s o h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) g l u c o s e t h a n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t m i c r o b i a l i n o c u l a n t , b u t h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) f r u c t o s e c o n c e n t r a t i o n . A r a b i n o s e c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) t h a n c o n t r o l s i l a g e s , b u t s i m i l a r t o f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h e i t h e r t h e e n z y m e o r m i c r o b i a l c u l t u r e o n l y . T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n o n p H ( T a b l e 2 - 1 9 ) , b u t p H v a l u e s w e r e n u m e r i c a l l y l o w e r m o s t o f t h e e n s i l i n g p e r i o d s i n t r e a t m e n t s c o n t a i n i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t . F o r a g e s o r g h u m t h a t w a s i n o c u l a t e d b e f o r e e n s i l i n g h a d a g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) L A B p o p u l a t i o n a f t e r 1 d p o s t - e n s i l i n g . L i k e w i s e i n o c u l a t e d s i l a g e t e n d e d ( P < 0 . 0 7 ) t o h a v e l o w e r e n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d y e a s t a n d m o l d ( P < 0 . 0 6 ) p o p u l a t i o n s a f t e r 3 a n d 7 d o f f e r m e n t a t i o n , r e s p e c t i v e l y , a s c o m p a r e d t o s i l a g e w i t h o u t a m i c r o b i a l i n o c u l a n t . T h e l o w e r p H f o u n d i n s i l a g e t r e a t e d w i t h i n o c u l a n t m a y e x p l a i n y t i l i b a b o r P ' . t n e m n o r i 9 7 9 5 1 8 5 5 6 0 1 9 6 9 0 . . . . . 2 2 6 5 0 0 0 8 0 1 0 0 1 0 2 . . . . . . . v 1 1 0 4 5 3 9 7 6 4 9 3 8 8 n e l a c i p o r t a n i d M E S 2 3 0 2 0 1 6 0 7 1 0 4 1 2 0 0 0 0 0 0 0 0 2 3 2 3 1 0 . . . . . . . . . . . . . . ' I l 2 " 6 8 7 4 5 6 9 1 e 9 l i + . . . . . 4 6 4 5 5 s E n e m u h g r o s e t n a l u c g o a n ? H 4 4 4 1 3 2 2 2 . . . . 0 4 8 1 6 l 6 3 2 3 r o f e v f i o t i s d c d i A t s e e g m ‘ ' d i 5 6 0 0 7 2 5 3 0 9 5 6 1 r y a l 6 6 0 7 7 1 3 4 0 0 5 2 3 i z . . . . . . . . . . . . S n 4 6 4 6 5 0 0 0 0 3 0 0 0 E e v i t i d d A o N e t c a r a h c g n i l i s n e e h t n o s e v i 6 7 6 5 6 0 2 4 . . . . 4 6 9 2 6 2 3 3 ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d w o r e m a s e t h i d d a e g a l i s f o s t c t n i s t p i r M n D c s a f r e e o m p l g u a s e h i 0 r e t 0 e k t i 1 a l f o e / f f m E e d i c d W r m n g u o h r s h s t i d a i I c i c e e c a c a i e s s r e t e r i f w d d e d a . c a s s o t n e c o i o a e s o o f n c l r s o s 8 o i i i r n t c s i d e g n a 1 c t t p y a / c b a o n r - 2 e l b a T _ e h c o t u l l u a c t a r u l r a y r a p u e t f M x S E c A L E G G P B F X A ‘ W W ' d b ° p H l l . I ' l fi b L a c t i c a c i d b a c t e r i a E n t e r o b a c t e r i a c e a e Y e a s t s a n d m o l d s L a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t s E E L m E D I fl I i Q D E D d ' E E D d I m i s c N D F A D F H e m i c e l l u l o s e C e l l u l o s e 4 6 W b b m m k fi m fi Q Q 0 0 0 0 0 0 . 5 8 “ 0 . 0 8 “ 6 3 . 7 0 3 8 . 4 1 2 5 . 7 5 3 1 . 9 7 4 . 4 4 ’ 0 . 6 6 " 0 . 1 0 0 . 3 3 0 . 0 7 ’ . 0 2 1 . 0 0 1 . 0 5 7 . 0 0 1 . 1 2 7 . 8 1 9 . 0 7 4 . 1 4 6 . 0 8 6 . 6 2 5 ( O L D V O ) I — u — h e — r - e - e - I - 9 9 3 3 0 7 7 0 0 1 . . 6 . 1 3 3 1 0 1 0 0 0 . . 6 5 4 2 1 6 . . I + e m y z n E 2 6 0 . H t . 9 1 - 2 e l b a T n m p J < < P P ( ( r r e e f f f f . i l d d w w g o o n r r i l i e e s m m n a a e s s f o e e h h y t t a n I n d , I _ y s s b t t p p . e i l v r r n i c c a t s s e i r r % e e m d e n v p p u u s t s a e y g a i r e a s t t m n e fi " u s s i h fl e d e a n % e e d k a k t c l i l a i l f e c a o i o a m s f r l m l a b fi e t m i e n o n r u u d s r a s o s o h f d h i n c a r l a e h e n r t t c a i a i d a b e t c a r t i t o s s o f i d i w w f f r o t f o c o s a s t t d e s t a c a t a n e L E Y c c c r g n n a n a L a e e e / a f t u f e e t f f n f S E I c E M M ' h ‘ ° ' ' " E f f e c t s o f s i l a g e a d d i i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v u r o n m e n P r o b a b i l i t y S i l a e A d d i t i v e A ‘ D ‘ S E M ‘ l n o c m a n t D a y N o A d d e e l m m p . 0 0 1 4 3 0 4 4 3 5 4 5 6 3 3 2 3 9 0 5 4 4 4 4 4 5 4 2 9 7 7 6 5 7 3 4 5 3 3 2 3 0 1 5 4 4 4 4 4 4 4 5 0 8 4 3 3 7 9 6 8 7 6 4 6 1 1 5 4 4 4 4 4 4 4 3 3 9 2 2 4 8 6 7 9 6 7 4 5 1 1 5 4 4 4 4 4 4 4 0 0 1 3 7 M N 4 0 1 . 1 6 3 U V F M S O S O 2 6 6 6 6 6 4 2 5 7 8 7 6 6 6 6 0 2 0 6 6 8 4 8 A J 2 9 9 3 6 2 5 7 8 7 6 6 6 6 “ 4 1 8 7 1 3 5 5 1 1 1 5 5 5 0 0 9 5 0 6 0 4 8 0 5 6 £ 6 J £ 6 3 3 6 7 7 7 6 6 6 0 0 1 3 7 M N 4 0 1 ‘ 0 0 . 0 0 1 . 3 6 1 6 8 0 9 9 2 2 4 A a fi n J a fi A 6 6 5 4 3 3 3 3 9 8 2 5 4 0 6 4 2 4 7 8 9 5 9 9 5 1 5 5 5 5 5 2 9 8 3 9 7 3 8 4 1 7 8 8 9 7 8 7 5 1 5 4 5 5 2 2 2 0 5 9 6 3 0 9 6 J 6 J 6 6 6 6 6 7 6 5 3 3 3 3 4 o 0 1 3 7 1 fl 4 m . 0 6 0 . 0 0 1 . 2 1 1 8 5 8 2 7 4 2 5 2 5 A 2 3 A £ 6 4 5 6 7 6 6 5 5 8 0 0 5 1 2 6 8 8 6 2 0 7 2 3 1 4 5 5 1 5 5 5 5 0 & 0 7 6 6 7 7 6 1 8 4 0 3 0 7 4 5 5 1 5 5 5 5 4 W 6 7 3 1 4 0 J A s s s A p a 4 6 6 6 6 6 6 5 0 O 1 3 7 M fl 4 0 1 . 0 0 1 . 2 4 4 5 2 9 9 9 8 2 0 J 4 6 J 6 6 A A 2 4 5 6 6 5 5 5 2 9 0 8 7 5 8 6 6 5 4 5 3 0 4 3 2 4 5 5 5 5 5 5 3 6 9 0 6 9 3 3 9 6 5 6 1 0 4 4 2 4 5 5 5 5 5 5 . 2 6 5 8 6 9 7 0 J A a z c z A z 2 4 5 6 6 6 5 5 0 0 1 3 7 M N 4 0 1 e a n m 9 Y 8 e 1 0 1 t h e l o w e r e n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s e a r l y i n t h e f e r m e n t a t i o n . H o w e v e r a t d 1 0 0 p o s t - e n s i l i n g , a l l s i l a g e s h a d s i m i l a r a m o u n t o f e n t e r o b a c t e r i a c e a e a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s . O v e r t h e e n s i l i n g p e r i o d , l a c t i c a c i d w a s t h e o n l y f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t i n f l u e n c e d b y s i l a g e a d d i t i v e s ( T a b l e 2 - 2 0 ) . S i l a g e s c o n t a i n i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 5 ) l a c t i c a c i d c o n t e n t a f t e r 3 , 7 a n d 1 4 d p o s t - e n s i l i n g a s c o m p a r e d t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t a d d i t i v e s o r t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s . I n c o n t r a s t t o s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , t h e i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d c o n t e n t o v e r t i m e d u e t o i n o c u l a t i o n d i d n o t c o r r e s p o n d t o p e r i o d s o f i n c r e a s e d L A B c o u n t s . G l u c o s e w a s t h e o n l y W S C i n f l u e n c e d o v e r t i m e b y s i l a g e a d d i t i v e s ( T a b l e 2 — 2 1 ) . I n o c u l a t e d s i l a g e h a d l o w e r g l u c o s e ( P < 0 . 0 1 ) c o n t e n t a f t e r 3 , 7 , a n d 1 4 d p o s t - e n s i l i n g a s c o m p a r e d t o s i l a g e t r e a t e d w i t h o u t m i c r o b i a l i n o c u l a n t . T h e s e t i m e p e r i o d s w i t h l o w g l u c o s e c o n c e n t r a t i o n s c o r r e s p o n d e d w i t h t h e m a x i m u m l a c t i c a c i d p r o d u c t i o n i n i n o c u l a t e d s i l a g e s . T h e o t h e r s u g a r s d e c l i n e d l i n e a r l y ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e f o r a l l t r e a t m e n t s . H o w e v e r , s i l a g e t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) f r u c t o s e c o n t e n t t h a n t r e a t m e n t s w i t h o u t t h e m i c r o b i a l c u l t u r e . N e i t h e r s i l a g e a d d i t i v e a f f e c t e d a n y o f t h e s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e f r a c t i o n s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e ( T a b l e 2 - 2 2 ) . T h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t u t i l i z e d i n t h i s e x p e r i m e n t , d e c r e a s e d t h e p H a n d g l u c o s e c o n t e n t , b u t i n c r e a s e d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n , l a c t i c a c i d c o n t e n t a n d f r u c t o s e i n f o r a g e s o r g h u m , r e g a r d l e s s o f e n v i r o n m e n t . T h e 9 4 6 4 3 0 2 9 9 7 6 0 6 8 8 . . . . . 1 1 1 0 0 0 0 0 0 . . . 1 0 0 9 7 5 5 5 6 6 9 9 . . . . 4 0 3 1 1 8 0 0 0 . . . ‘ D ' A y t i l i b a b o r P t n a l u c o n l e v i t i d d A e g a e l i S t n e m n o r i v n e o N m y E i t d A i d e v z n M / g d n P - t c o r u d y a D E D 9 0 0 1 , ) 5 0 . 0 < P ( r e f f _ l d w o g n r i l e i s m n a e s f e o h t y a n _ I d s y t b p ' e i v r i c n a t s e i r e % e m v d p i a u e t s h i e t g d e d a k f l a i o r l e s n r g u o f a r l o h t c r i a c n i e i t c o i p o i y t a u L B r a i o s d n h w t E d i f f r o o t a c s t t a P d c c r n n e e e a a f t f e t f n f S E E I M ' " d i c a d i c a c i n d i c a l o E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l T a b l e 2 - 2 0 . F e r m e n t a t i n A b . 1 8 9 S E M ' . 0 5 7 E + l . 0 0 1 6 3 3 4 4 9 2 0 2 4 5 5 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 7 6 3 2 3 6 2 5 0 2 4 6 5 4 4 5 0 0 0 0 0 0 0 0 6 4 5 0 0 7 1 6 0 2 6 6 6 6 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 7 4 9 5 7 3 0 2 4 6 5 5 4 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 7 M fl m m 1 A c e t i c a c i d . 3 1 5 4 9 0 0 0 2 9 8 1 3 8 6 3 3 1 7 0 1 5 5 6 4 3 2 8 9 0 0 0 9 0 3 1 6 6 6 9 3 3 7 0 1 5 6 5 4 3 2 3 9 T O T 8 2 3 1 9 6 6 0 0 3 9 0 0 3 4 5 4 3 1 2 7 . 9 2 . 2 6 1 8 J 0 4 0 0 2 0 0 0 1 3 4 4 4 3 1 0 O 1 3 7 M fl 4 0 1 fl o w . 0 0 1 m m m m m m w m 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 6 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 5 3 4 0 0 0 . 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 m 0 0 1 5 3 4 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 7 M N W 0 1 0 6 4 6 6 7 4 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 5 7 6 5 4 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 m m m m m m w w 0 0 0 0 0 0 0 0 3 5 6 5 6 4 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 7 M fl w m 0 3 5 7 1 5 4 0 0 0 0 1 0 0 0 6 8 7 3 6 0 9 3 0 2 4 7 1 5 4 5 0 0 0 0 L 0 0 0 “ 4 7 0 2 3 3 3 4 6 9 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 5 0 0 7 6 6 7 0 3 4 6 1 6 4 0 0 0 0 L 0 0 0 1 3 7 M fl w 1 y o f _ e n s r l r n b c d 1 1 0 5 7 9 4 6 7 5 5 4 . . . . 1 0 0 3 6 0 0 0 0 . . . 2 0 6 5 0 8 1 0 0 1 2 0 . . . . 9 4 0 . 6 6 6 1 6 9 1 6 0 0 0 0 . . . . ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d w g o n i r l i e s m n e a s f o a ‘ y t a d n i y s t b p e i v r i c n a s t e i r e d e m v d p i a u e t s h i o t d g e d a k f a _ l i o i l e s r g n u o a f 0 0 1 0 1 0 0 0 2 4 2 4 1 1 e s e s o o r n l o h t e c s a o l l a y G X i b a r r i a e . n s d t o n d i f f w r o o t A c a s t t a d n c c r n e a e e a f f t e t f f n S I E E M ' " ° ‘ " e v i t i d d A e g a l i S . 1 2 - 2 e l b a T o N d A i d e v i t M g D C / g a y a D r d o b r a y h e t , 0 0 1 E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n W S C c o n t e n t o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t P r o b a b i l i t y A ' D ‘ D O . 0 0 1 A h . 0 0 2 S E M ' E + l l n o c u l a n t E n z y m e J 3 4 3 2 2 J J 3 0 0 0 0 0 0 0 S S T T 5 8 4 7 D fi fi A A l i i 3 0 0 0 0 0 0 0 1 4 V ¢ n 4 9 3 6 D fi fi fi fi l l J 3 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 7 M fl w w 6 s O c m G 1 8 2 5 3 9 4 9 9 4 3 2 3 1 1 0 5 5 5 5 5 5 5 5 5 3 2 3 6 4 4 0 J J J J J O 3 0 0 0 0 0 0 0 O 1 3 7 4 1 0 W 1 2 4 1 e 3 o t c u r F d o w 0 6 8 9 2 5 0 0 1 0 0 3 1 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 3 4 7 5 6 9 6 6 1 0 0 1 1 0 0 0 . 5 5 5 5 5 5 5 0 2 0 6 6 9 7 6 1 1 1 0 1 6 1 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 6 8 4 9 6 5 2 9 J o b J J J J D 0 0 0 0 0 0 0 0 G a l - . G — I e d . l . 0 0 1 . 6 0 8 0 9 1 1 6 7 3 4 5 4 5 3 5 3 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 2 2 1 2 7 6 0 3 5 5 4 4 2 2 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 6 2 1 0 9 2 6 3 5 5 5 4 4 3 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 0 1 3 7 ” 2 1 4 0 1 0 0 9 8 1 9 3 1 9 2 0 0 1 0 1 1 0 1 5 5 5 5 5 5 5 5 7 5 7 6 0 8 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 5 5 5 5 5 5 5 5 6 0 5 8 7 8 6 2 D J D D D Q D J 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 7 M y o f e n s i l i n g y t i l i b a b o r P e v i t i d d A e g a l i S 3 5 5 4 1 0 3 1 . . 5 . 1 0 0 . 6 5 4 9 1 1 7 1 1 1 1 1 . . . . 6 3 3 1 2 4 0 6 4 5 3 6 . . . . 4 4 7 5 6 4 3 6 4 5 6 6 2 0 5 2 1 5 . . . . . . . . . 9 7 8 7 5 4 2 1 2 3 3 3 2 2 2 3 3 3 1 1 9 8 0 1 . . . 2 7 4 1 2 3 . . . 5 3 4 0 1 2 6 6 6 3 3 3 5 8 7 9 3 6 4 0 0 0 4 1 6 9 6 8 9 2 4 3 6 3 9 5 . . . . . . . . . . . . 5 2 2 7 9 4 7 7 5 1 1 2 6 6 6 3 3 3 2 2 2 3 3 3 7 5 7 7 4 9 7 2 6 0 1 1 1 9 8 2 9 7 5 8 9 1 6 3 . . . . . . . . . . . . 6 3 3 8 7 4 1 1 3 8 0 6 6 6 6 3 3 2 2 2 3 3 3 4 y a 0 g n i l i s n e f D 0 o . t n e m n o r i v n e M D g s e 0 l o 0 1 / 9 , m e t I y a d y b e v i t i d d a e g a l o n o i t c a r e t n I d l i e s o s l f u l e c i m e u l l H e C T a b l e 2 - 2 2 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d d a y o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l N o A d d i t i v e E n z y m e l n o c u l a n t E + | S E M ' A b D ° A ' D ‘ N D F 0 4 0 1 0 0 A D F 0 1 0 0 ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n b E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g 3 7 . 7 3 3 7 . 3 8 3 9 . 6 0 2 8 . 0 7 2 5 . 7 9 2 4 . 7 6 6 6 . 7 9 6 2 . 7 0 6 3 . 2 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 4 2 3 1 0 4 1 0 5 l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t s e e m e d t o h a v e a g r e a t e r d o m i n a t i o n o f t h e f e r m e n t a t i o n i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . T h e L A B i n o c u l a n t a p p l i e d i n t h i s s t u d y c o n s i s t e d o f a s t r a i n o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m w h i c h i s a p e r s i s t e n t s p e c i e s f o u n d i n t e m p e r a t e s i l a g e , a n d w a s a p p l i e d a t 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l , t h e o p t i m u m a p p l i c a t i o n r a t e i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . P r e v i o u s e x p e r i m e n t s a l s o s h o w e d t h a t L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m w a s t h e p r e d o m i n a n t l a c t i c a c i d b a c t e r i a l s t r a i n i n f o r a g e s ( S o r g h u m b i c o l o r c v . S u g a r d r i p , P a n i c u m m a x i m u n , D i g i t a r i a d e c u m b e n s , S e t a r i a s p h a l a c e t a ) e n s i l e d i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( T j a n d r a a t m a d j a e t a l . , 1 9 9 0 ) . H o w e v e r , t h e d i f f e r e n t c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f t h e f o r a g e , g r e a t e r a m o u n t o f u n d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s p r e s e n t i n t h e c h o p p e d f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g a n d d u r i n g t h e e n s i l i n g p e r i o d , o r a n i n a b i l i t y f o r t h e a d d e d o r g a n i s m s t o c o m p e t e a t t h e a m b i e n t t e m p e r a t u r e f o u n d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , m a y h a v e a f f e c t e d t h e g r o w t h r a t e a n d m e t a b o l i c a c t i v i t y o f t h e m i c r o b i a l c u l t u r e . S i m i l a r t o f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e c l i m a t e , t h e e n z y m e a d d i t i v e d i d n o t i m p r o v e t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . I m p l i c a t i o n s A d d i t i o n o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a s a s i l a g e a d d i t i v e w a s e f f e c t i v e i n d e c r e a s i n g t h e p H , a n d i n c r e a s i n g t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n , a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t a t e a r l y s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s i n f o r a g e 1 0 6 s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . F o r a g e s o r g h u m i n o c u l a t e d i n t h e t e m p e r a t e a r e a h a d a g r e a t e r f r u c t o s e c o n t e n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g i n c o m p a r i s o n w i t h s i l a g e s w i t h o u t t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t . H o w e v e r , i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t f r u c t o s e l e v e l s w e r e n o t e l e v a t e d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g i n t h e i n o c u l a t e d t r e a t m e n t s . M o r e s t u d i e s n e e d t o b e c o n d u c t e d t o e v a l u a t e o t h e r b a c t e r i a l i n o c u l a n t s o r s p e c i f i c s t r a i n s o f L A B t h a t m a y b e m o r e s u i t a b l e f o r u s e i n t r o p i c a l f o r a g e s . E v a l u a t i o n o f p r e p a r a t i o n s c o n t a i n i n g d i f f e r e n t e n z y m e ( 5 ) , e n z y m a t i c a c t i v i t y o r a p p l i c a t i o n r a t e s s h o u l d a l s o b e c o n d u c t e d . C H A P T E R 3 A T W O Y E A R S T U D Y O N T H E E F F I C A C Y O F S I L A G E A D D I T I V E S T O E N H A N C E T H E E N S I L I N G O F F O R A G E S O R G H U M I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S . I I . A E R O B I C S T A B I L I T Y A b s t r a c t A n e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n a n d a m i c r o b i a l i n o c u l a n t o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . F o r a g e s o r g h u m w a s h a r v e s t e d i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 a f t e r 9 0 d o f g r o w t h a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g , a n d a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o , M a y a g u e z . I n b o t h e n v i r o n m e n t s , c h o p p e d f o r a g e w a s p l a c e d i n t o P V C l a b o r a t o r y s i l o s f o r 4 0 a n d 1 0 0 d , a n d w a s a s s i g n e d t o o n e o f f o u r t r e a t m e n t s ; n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) , e n z y m e s ( . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l ) , m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) , a n d e n z y m e s p l u s m i c r o b i a l i n o c u l a n t . D u p l i c a t e s i l o w e r e p r e p a r e d i n b o t h y e a r s a t e a c h l o c a t i o n f o r e a c h t r e a t m e n t a n d f o r e a c h e n s i l i n g p e r i o d . A f t e r r e m o v a l , s i l a g e ( 4 0 0 g ) w a s p l a c e d i n t o l a r g e s t y r o f o a m c o n t a i n e r s l i n e d 1 0 7 1 0 8 w i t h a p l a s t i c b a g a n d e x p o s e d t o a i r f o r O , 1 , 3 , 5 , a n d 7 d . A f t e r e a c h e x p o s u r e p e r i o d , s i l a g e w a s a n a l y z e d f o r p H , m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s ( y e a s t a n d m o l d s , a n d t o t a l b a c t e r i a ) , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( a c e t i c , l a c t i c , p r o p i o n i c a n d b u t y r i c a c i d s , a n d e t h a n o l ) , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( g l u c o s e , f r u c t o s e , g a l a c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e ) . T e m p e r a t u r e w a s m o n i t o r e d d a i l y . T h e c r i t i c a l p e r i o d o f a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n a p p e a r s t o o c c u r b e t w e e n 0 a n d 3 d i n t h e t e m p e r a t e s i l a g e , a n d b e t w e e n 0 a n d 1 d i n t h e t r o p i c a l s i l a g e . I n b o t h l o c a t i o n s , i n o c u l a t e d s i l a g e s p o i l e d f a s t e r t h a n s i l a g e t r e a t e d w i t h o u t t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t . S i l a g e e x p o s e d t o a i r a f t e r 4 0 d o f f e r m e n t a t i o n w a s l e s s s t a b l e t h a n s i l a g e e x p o s e d a f t e r 1 0 0 d , b u t a m o r e p r o n o u n c e d e f f e c t d u e t o l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n w a s o b s e r v e d i n t h e t e m p e r a t e s i l a g e . I n t r o d u c t i o n A e r o b i c d e t e r i o r a t i o n c a n a c c o u n t f o r a s m u c h a s 3 5 % o f t h e t o t a l D M l o s s t h a t o c c u r s d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s ( H o n n i g a n d W o o l f o r d , 1 9 7 9 ; W o o l f o r d , 1 9 9 0 ) . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , u t i l i z a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s ( e . g . m i c r o b i a l i n o c u l a n t , e n z y m e s ) t o i m p r o v e t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s h a s s h o w n v a r i a b l e s u c c e s s . A m i c r o b i a l i n o c u l a n t a p p e a r e d t o l o w e r t h e s t a b i l i t y o f h i g h m o i s t u r e c o r n e n s i l e d f o r 4 0 d ( W a r d y n s k i e t a l . 1 9 9 3 ) . W h e a t a n d s o r g h u m e n s i l e d f o r 4 5 d a n d t r e a t e d w i t h a b a c t e r i a l i n o c u l a n t s p o i l e d f a s t e r t h a t c o n t r o l s i l a g e s ( W e i n b e r g e t a l . , 1 9 9 3 ) . N o 1 0 9 d i f f e r e n c e s a t t r i b u t e d t o m i c r o b i a l i n o c u l a n t o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f c o r n e n s i l e d f o r 4 0 a n d 1 8 6 d , a n d s o r g h u m e n s i l e d f o r 3 0 a n d 1 6 0 d w a s o b s e r v e d b y S a n d e r s o n ( 1 9 9 3 ) . L i k e w i s e , u t i l i z a t i o n o f p l a n t c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s a l s o h a s i m p r o v e d o r s h o w n ( J a a k k o l a , e t a l . , 1 9 9 1 ) l i t t l e e f f e c t ( S t o k e s , 1 9 9 2 ) o n a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n . H o w e v e r , t h e r e i s a l i m i t e d i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f t r o p i c a l f o r a g e s . B e c a u s e o f t h e w a r m e r c l i m a t e o n e w o u l d e x p e c t a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e s t o b e m o r e c h a l l e n g e d t h a n i n a t e m p e r a t e r e g i o n . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f a c o m m e r c i a l p l a n t c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e p r e p a r a t i o n a n d a h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a i n o c u l a n t o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d u n d e r a t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . T h e e f f e c t o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n ( 4 0 o r 1 0 0 d ) o n a e r o b i c s t a b i l i t y w a s a l s o d e t e r m i n e d . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e L o c a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t , v e g e t a t i v e m a t e r i a l , h a r v e s t i n g a n d e n s i l i n g p r o c e s s , a n d e x p e r i m e n t a l t r e a t m e n t s u t i l i z e d i n t h i s e x p e r i m e n t a r e d e s c r i b e d i n C h a p t e r 2 . I n b o t h 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , a n d a t e a c h l o c a t i o n , d u p l i c a t e s i l o s f r o m e a c h t r e a t m e n t w e r e e m p t i e d a f t e r 4 0 o r 1 0 0 d o f f e r m e n t a t i o n , p l a c e d i n t o s t y r o f o a m c o n t a i n e r s l i n e d w i t h a p l a s t i c b a g a n d e x p o s e d t o a i r f o r 7 d . A f t e r 0 , 1 , 3 , 5 , a n d 7 d o f a e r o b i c e x p o s u r e , + ( B * C * D I m + ( A * B * C * D ) , i . , . + E i i k ' m 1 1 0 s a m p l e s w e r e a n a l y z e d f o r p H a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s a s p r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( C h a p t e r 2 ) . T o t a l b a c t e r i a c o u n t s w e r e p e r f o r m e d u s i n g s e l e c t i v e m e d i a ( T r y p t i c s o y a g a r w i t h 1 1 . 5 % a g a r ) a n d e n u m e r a t e d a f t e r 2 d o f i n c u b a t i o n . F e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s a n d W S C w e r e q u a n t i f i e d b y i o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y a s d e s c r i b e d i n C h a p t e r 2 . T e m p e r a t u r e w a s m o n i t o r e d t w i c e d a i l y w i t h a t h e r m o m e t e r e m b e d d e d i n t h e s u r f a c e o f t h e e x p o s e d s i l a g e . I n b o t h y e a r s , s t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d w i t h i n e n v i r o n m e n t a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h a 2 ( y e a r s ) b y 2 ( l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n ) b y 4 ( s i l a g e a d d i t i v e s ) b y 5 ( d a y s o f a e r o b i c e x p o s u r e ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s ( S t e e l a n d T o r r i e , 1 9 8 0 ) u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l P r o c e d u r e o f S A S ( 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l s f o r p H , m i c r o b i a l g r o u p s , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d W S C w e r e a s f o l l o w s : Y . . . “ = p + A i + t 3 i + ( M B ) i i + c , + ( A * C ) i , , + ( 3 * 0 ) , + ( A * B * C ) , , . . , + D , + ( A * D ) , , + ( t a m ) j l + ( A * B * D ) m + ( 0 0 ) , . + ( A * c * p ) , , . W h e r e : Y = I n d i v i d u a l v a r i a b l e m e a s u r e d ( e . g . g l u c o s e , f r u c t o s e ) , u = O v e r a l l m e a n A i = E f f e c t o f y e a r 3 = E f f e c t o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n A * B - - l l * - 3 C i , A * D i , B * D , . A * C * D M i j k l r n 1 1 1 I n t e r a c t i o n o f y e a r b y l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y s i l a g e a d d i t i v e I n t e r a c t i o n o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y s i l a g e a d d i t i v e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y s i l a g e a d d i t i v e E f f e c t o f l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f y e a r b y s i l a g e a d d i t i v e b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e I n t e r a c t i o n o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y s i l a g e a d d i t i v e b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e . I n t e r a c t i o n o f y e a r b y l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n b y s i l a g e a d d i t i v e b y l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e r a n d o m r e s i d u a l e r r o r 1 1 2 M e a n s e p a r a t i o n w a s p e r f o r m e d b y B o n f e r r o n i t - t e s t . T h e m o d e l f o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t w a s s i m i l a r e x c e p t t h a t 8 d a y s o f a e r o b i c e x p o s u r e w e r e u t i l i z e d . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n T e m p e r a t e S i l a g e I t i s w e l l d o c u m e n t e d t h a t a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o c c u r s f r o m t h e m e t a b o l i s m o f s u g a r s a n d o r g a n i c a c i d s b y m i c r o o r g a n i s m s , a n d i s u s u a l l y d e t e c t e d b y a n i n c r e a s e i n p H a n d t e m p e r a t u r e ( S p o e l t r a e t a l . , 1 9 8 8 ) . I n t h i s e x p e r i m e n t , p H i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e i n c r e a s e d ( T a b l e 3 - 1 ) . T h i s t r e n d o c c u r r e d d u r i n g b o t h y e a r s . B y t h e t h i r d d a y , p H w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a n d c o n t i n u e d i n a l i n e a r f a s h i o n t h r o u g h d - 5 . D u r i n g b o t h y e a r s , t h e m a x i m u m t e m p e r a t u r e ( P < 0 . 0 1 ) w a s o b s e r v e d w i t h i n 2 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . T h e r e a f t e r t e m p e r a t u r e d e c r e a s e d s l i g h t l y u n t i l t h e e n d o f t h e a e r o b i c e x p o s u r e p e r i o d . Y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a t a e x p o n e n t i a l r a t e a f t e r 3 a n d 5 d a y s o f a e r o b i c e x p o s u r e i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , r e s p e c t i v e l y . S i m u l t a n e o u s i n c r e a s e s i n p H a n d t e m p e r a t u r e w i t h g r o w t h o f y e a s t s a n d m o l d s w e r e o b s e r v e d i n t h i s e x p e r i m e n t . S i m i l a r r e l a t i o n s h i p s h a v e b e e n r e p o r t e d i n p r e v i o u s s t u d i e s ( C o u r t i n a n d S p o e l t r a , 1 9 9 0 ; R u s t a n d Y o k o y a m a , 1 9 9 2 ) c o n d u c t e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s . T o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) b y 5 % a n d 1 2 % a f t e r 3 o r 5 d o f a e r o b i c e x p o s u r e i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , e g a l i s m y t u i h g r l i b a b 1 1 0 0 0 0 . . 1 1 0 0 0 0 o . . s r P o 1 1 0 0 0 0 . . ‘ M 2 0 7 6 E 0 4 S . . 9 0 . e g a r o f f o n o i t a l u p o p l a i b o r c i m d n a , e r u t a r e p m e t , H p n o e r u s o p t x n e e m c n i o b r o i r v e n a e f o e t h a t r g e n p e m l e t d n a a r n i a r e i a y o f t o d s e t c s e o f p f x E e 1 - 3 e l b a T ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a e h m e t i n a n i h t i w n m u l e o r c u s e o m p a x e c i b s e h t e o n r r i u e a s s t o p f p o i x r e h c t s c g r i n e n a e b e p m o l l u r a s e i e y h a r b e t e f r t f o a a o e m h y r t h k i l n u h , a i r G o e r s g f r t a e n o r i e e e r y l f o n w d i f f f s r o o t o a c n d t t a g a . a a ) C ° ( e r u t I ' t c r I e p m b l a e o I ' n c e e e / e a f u t M T I f T t c r t f f n f S c E I E " " ' " ‘ " ' " Y e a r I t e m A e r o b i c e x p o s u r e I d ) 9 3 p H 3 0 o m N O r m m n o P c h m o n Y e a s t s a n d m o l d s O I - ( ‘ O L O N O P C ‘ O L D N . 0 8 7 Y " D ° Y ' D ‘ l . 2 6 9 . 0 0 1 . 2 3 4 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 3 1 1 4 r e s p e c t i v e l y . B a s e d o n p r o l i f e r a t i o n o f m i c r o o r g a n i s m s o v e r t i m e , y e a s t s a n d m o l d s a p p e a r t o b e t h e m a j o r p e r p e t r a t o r s o f d e t e r i o r a t i o n d u r i n g t h e i n i t i a l s t a g e s o f a e r o b i c e x p o s u r e , a n d t o t a l b a c t e r i a s e e m t o b e r e s p o n s i b l e f o r t h e i n c r e a s e i n p H . T h i s o b s e r v a t i o n i s s u p p o r t e d w i t h a p r e v i o u s s t u d y ( M o o n e t a l . , 1 9 8 3 ) w h i c h i n d i c a t e d t h a t y e a s t s a n d m o l d s a r e t h e m o s t i m p o r t a n t m i c r o o r g a n i s m s i m p l i c a t e d i n t h e i n i t i a t i o n o f a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n . H o w e v e r , i n m a i z e s i l a g e , a c e t i c a c i d b a c t e r i a i n a d d i t i o n t o y e a s t s a n d m o l d s h a v e b e e n i m p l i c a t e d i n t h e i n i t i a t i o n o f a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n ( S p o e l t r a e t a L , 1 9 8 8 L I n b o t h y e a r s , a c e t i c a c i d c o n t e n t s u b s t a n t i a l l y d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 5 d o f a e r o b i c e x p o s u r e ( T a b l e 3 - 2 ) . R a t e o f a c e t i c a c i d u t i l i z a t i o n v a r i e d b e t w e e n y e a r s , a s i n d i c a t e d b y t h e d e c r e a s e i n a c e t i c a c i d c o n t e n t a t d 1 o f a e r o b i c e x p o s u r e i n t h e 1 9 9 4 s i l a g e a s c o m p a r e d t o d 3 i n 1 9 9 3 . L a c t i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) a s l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e i n c r e a s e d i n b o t h y e a r s , b u t a g r e a t e r u t i l i z a t i o n o f l a c t i c a c i d w a s o b s e r v e d b e t w e e n 0 a n d 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . O n l y s m a l l c o n c e n t r a t i o n s o f b u t y r i c a n d p r o p i o n i c a c i d s w e r e o b s e r v e d i n t h i s s t u d y , a n d a s i g n i f i c a n t r e s p o n s e a t t r i b u t e d t o y e a r , a d d i t i v e , d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e o r l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n w a s n o t o b s e r v e d . D a t a f o r t h e s e t w o v o l a t i l e f a t t y a c i d s i s p r e s e n t e d i n A p p e n d i x A . E t h a n o l c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t h e e x p o s u r e p e r i o d i n b o t h y e a r s . C h a n g e s i n m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o b s e r v e d o v e r t i m e i n t h i s e x p e r i m e n t m a y d D " Y y t i l i 2 5 1 0 0 0 . . b 1 1 a ° b D o r P 0 0 0 0 . . ” 8 3 1 0 Y 4 0 . . ' M E 7 6 2 0 . . S 0 0 ) ) 1 5 0 0 . . 0 0 < < P P ( ( r r e e f f 4 d 8 8 6 1 3 3 9 5 4 8 2 2 9 . . . . g . . . . g . . 6 F f ° l H I ' ' ' ‘ f i 7 4 8 6 5 2 4 5 d ‘ ‘ i 7 5 2 1 0 0 0 0 0 0 n n i i d d a a e e h h t r a t e Y 3 5 3 2 6 2 7 2 8 4 2 4 9 . . . . . . . . . . 7 6 2 1 1 0 0 0 0 0 E ’ ' h ° ° ' 3 " 0 4 3 8 7 2 4 ‘ 0 0 ) 1 ( ( e c c u u d d o o r r p p - - d d n n e e n n o o i i t t a a t t n n e e m m r r e e f f n n a a n n i i h h t t i i w r w u s o p x E c i n n m m u u l l e o o r c c u s e e o m m b p o r e A M D a a x e s s c e i h b t e h t e n o n r i i r e u s a s s t t o f p p p i o i x r r h c e c t s s n g r c r a n e i e e p e p b m o l u u r s s 0 y 0 1 l n o i t , d t i c c u a a d o n i r t c o e P m - r d e n F E t a d t t a e a c e c r M e h n c A t t M a f “ f E f t n e ' e e f m ' " S E E I 9 a ' " ‘ ‘ “ l e e h a b e e k k t r i i f f o o a l l e n n h y u u r t o r g r t a n o i r i f t h h e e e w w y l n o l s n a d f i f s r o t o n c n a T a b l e 3 - 2 . E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t 1 . 8 8 ‘ 1 . 5 8 ‘ 0 . 0 8 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 . 8 4 ’ 0 . 6 5 ' 1 . 4 9 ‘ 0 . 5 5 ' 0 . 2 9 “ 0 . 2 1 “ 0 . 2 1 “ 0 . 2 9 “ L a c t i c a c i d C r - m m h O e - C O L D N O v - ( ‘ O L D I N 1 1 5 1 1 6 i n d i c a t e t h a t t h e r a t e a n d e x t e n t o f d e t e r i o r a t i o n w a s h i g h e r i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . H o w e v e r , i n b o t h y e a r s t h e g r e a t e s t a m o u n t o f d e t e r i o r a t i o n o c c u r r e d b e t w e e n 0 a n d 3 d a s e v i d e n c e d b y c h a n g e s i n m i c r o b i a l c o u n t s , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , p H a n d t e m p e r a t u r e . A r a p i d d e c l i n e i n h e x o s e a n d p e n t o s e c o n t e n t w a s o b s e r v e d w i t h i n 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e ; w h i c h c o r r e s p o n d e d t o t h e i n c r e a s e i n p H , t e m p e r a t u r e a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s ( T a b l e 3 - 3 ) . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t , d e m o n s t r a t e d t h a t a g r e a t e r d i s a p p e a r a n c e o f p l a n t o r g a n i c a c i d s a n d w a t e r s o l u b l e s u g a r s o c c u r r e d d u r i n g t h e f i r s t 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . I t a p p e a r e d t h a t d i f f e r e n c e s i n m i c r o b i a l a c t i v i t y o r s u b s t r a t e a v a i l a b i l i t y r a t h e r t h a n s u b s t r a t e p r e f e r e n c e w e r e t h e m a j o r f a c t o r s t h a t i n f l u e n c e d t h e v a r i a t i o n i n r a t e a n d e x t e n t o f d e t e r i o r a t i o n a c r o s s y e a r s . T h e a c c u m u l a t i o n o f l a c t i c a c i d a n d l o w e r p H d u e t o i n o c u l a t i o n , h a s b e e n p r o m o t e d a s a s t r a t e g y t o i m p r o v e a e r o b i c s t a b i l i t y . U n f o r t u n a t e l y , t h e l o w p H a n d h i g h l a c t i c a c i d c o n t e n t i n h i b i t s a e r o b i c b a c t e r i a b u t d o e s l i t t l e t o e l i m i n a t e y e a s t a n d m o l d g r o w t h w h e n a i r i s p r e s e n t . R a p i d a c c u m u l a t i o n o f l a c t i c a c i d a l s o i s r e c o m m e n d e d t o i m p r o v e D M r e c o v e r y f r o m t h e s i l o . H o w e v e r , i t a p p e a r s t h a t t h i s s t r a t e g y r e s u l t s i n l e s s s t a b l e m a t e r i a l , e s p e c i a l l y w h e n e p i p h y t i c y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s a r e h i g h . T h e e f f i c a c y o f s i l a g e a d d i t i v e s s h o u l d b e b a s e d o n n u t r i e n t p r e s e r v a t i o n f r o m t h e f i e l d t o c o n s u m p t i o n . R e s u l t s f r o m C h a p t e r 2 i n d i c a t e d t h a t f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l y t i l i b a b o r P 4 6 0 3 0 0 . . 1 1 1 0 0 0 0 . . 0 0 . 1 0 0 . ‘ M E 5 5 2 1 6 0 1 0 0 0 . . . . . S 0 0 0 0 0 4 9 ) d ( e r u s o p x E c i b o r e A M D g 0 0 1 / g , s e t a e c e s o t c . s 3 o r - 3 e l b a T d y h o b r a C u u l r G F ' “ “ ' “ h 1 7 2 8 3 5 1 0 0 0 . . . . . 0 0 0 0 0 ) 5 0 . 0 < P ( ) 1 0 . 0 < P ( r r e e f f f f i i d d ' “ “ “ “ ' ' i ' ' ' ' ' ’ ‘ ' ’ ' ' ' ' g n 7 4 5 3 2 7 1 3 2 1 1 0 2 1 1 0 1 3 1 1 0 . 1 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 d a e h e t a r d y h o b r a c g n i d a e h e t a r d y h o b r a c a a n n i i h h t t i i w w n m u l o n m u l o e c r c u e s e o m p a x s e e c h i t m a s e h t b n e n o i r i r u s e s s t a t o p p f i p i o r x r c e c h s n s t r a g e c r i e n p e b p e u m o u l s r s e e y e h a e k t i b k f i r l e e g r s s r f a n t r o e e i f o l o a n h u e r t y o h n u h t i o o w t n c i a b l a e y n l w d f s o f i s r o o n a t n d a t a t c a a c r e n c e r e G e A a e M f f M t f t f “ n " S E E I “ 0 ' “ ‘ “ “ “ E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t 9 3 Y b D 0 Y " D d X y l o s e C ’ s - C O L O N ( D u - C O L O N O F C O I D N O v - ( ‘ O L D N O F C O L D I ‘ 0 . 0 8 E 0 . 0 5 F 6 0 0 3 " 0 . 0 4 “ 0 . 0 2 6 1 . 3 7 ‘ 1 . 0 3 ’ 0 . 6 4 “ 0 . 6 9 “ 0 . 6 2 “ 0 . 9 8 ‘ 0 . 7 7 ' 0 . 3 1 “ 0 . 2 5 “ 0 . 2 1 “ 0 . 2 5 ’ 0 . 2 4 “ 0 . 0 9 ' 0 . 0 3 “ 0 . 0 3 “ 0 . 1 3 5 0 . 1 4 F 0 . 0 9 f 0 . 0 6 6 0 . 0 4 " . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 7 1 1 8 i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s i n c r e a s e d t h e a c i d i t y , l a c t i c a c i d c o n t e n t , a n d r e s i d u a l f r u c t o s e c o n t e n t , b u t d i d n o t i n f l u e n c e o t h e r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s . H o w e v e r , w h e n t h e r e s u l t i n g s i l a g e w a s e x p o s e d t o a e r o b i c c o n d i t i o n s , i n o c u l a t e d s i l a g e h a d h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) p H t h a n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( T a b l e 3 - 4 ) . T e m p e r a t u r e a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n i n o c u l a t e d f o r a g e a s c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s , b u t s i m i l a r t o f o r a g e t r e a t e d w i t h i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s . T o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f s i l a g e a d d i t i v e s . I n t h i s e x p e r i m e n t , u t i l i z a t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t r e s u l t e d i n m o r e u n s t a b l e s i l a g e a s e v i d e n c e d b y a g r e a t e r p H , t e m p e r a t u r e , a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s . T h e s e r e s u l t s a g r e e w i t h R u s t e t a l . ( 1 9 8 9 ) , a n d W a r d y n s k i e t a l . ( 1 9 9 3 ) ; w h o r e p o r t e d t h a t i n o c u l a t e d c o r n s i l a g e a n d h i g h m o i s t u r e c o r n w e r e l e s s s t a b l e u p o n e x p o s u r e t o a i r t h a n c o n t r o l s i l a g e . E t h a n o l w a s t h e o n l y f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t i n f l u e n c e d b y s i l a g e a d d i t i v e s d u r i n g t h e e x p o s u r e p e r i o d . C o n t r o l s i l a g e h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) e t h a n o l c o n t e n t t h a n s i l a g e t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t , b u t s i m i l a r t o t r e a t m e n t s c o n t a i n i n g t h e e n z y m e m i x t u r e . T h e s i m i l a r c o u n t s o f t o t a l b a c t e r i a a m o n g e x p e r i m e n t a l t r e a t m e n t s a n d h i g h e r e t h a n o l c o n t e n t i n i n o c u l a t e d s i l a g e s , m a y i n d i c a t e t h a t t h e n e g a t i v e e f f e c t o f i n o c u l a t i o n o n a e r o b i c s t a b i l i t y i s m a n i f e s t e d i n g r e a t e r y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s . G l u c o s e c o n t e n t t e n d e d ( P < 0 . 1 0 ) t o b e h i g h e r , b u t f r u c t o s e w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) i n c o n t r o l s i l a g e o r y t i l i b a b o r P ‘ M 1 8 6 9 5 5 2 7 1 1 0 8 4 0 0 0 0 4 2 0 0 0 1 0 2 1 0 0 3 0 . . . . . . . . . . 6 3 5 7 8 8 0 4 0 5 5 6 5 3 E 0 2 0 0 1 0 0 S . . . . . . . ‘ 6 2 3 “ “ ’ I ‘ 1 I 7 4 9 1 3 + . E 5 . 3 2 t n a l 4 4 0 0 1 7 . . . . . 0 0 0 0 0 “ ' d “ “ 2 4 4 6 7 5 4 0 0 1 u . . . . . c o n l e m y z n E e v i t i d d A o N s y a d 7 r o f m e t I 0 0 0 0 0 ' ‘ ‘ 0 0 0 " 4 7 6 1 3 1 0 . . . . . 0 0 0 0 0 ) 1 ) 0 0 . 1 0 . < 0 P < ( P " ‘ “ ( ' 8 7 5 0 e r 2 r 5 0 0 2 f e 1 . . . . . f f 0 0 0 0 0 i f d i d w o w r o r e m e a m s a s e h e t h t n i n i s t s p t i p r i n c r a s c r s e e r m p e u p e s u h l s e e t a e e s s i k e f i k r e o o s o l i e E s o t t n e n l o t c i s a r u n c c a b o r h o u m u u a l l r h M h t e l r a y r s i t G F G X A D e w i d r w r g f s a d g 0 n s n / 0 a n a 1 e a u t f M e S c / g ' M W ' ‘ “ b " T a b l e 3 - 4 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t a n d e x p o s e d t o a i r S i l a g e A d d i t i v e p H 4 . 6 6 ‘ 1 4 . 6 6 d 5 . 1 3 “ T e m p e r a t u r e ( ° C ) 2 2 5 2 ' 2 2 . 6 4 ‘ 2 3 . 7 1 “ I I . I . I G b Y e a s t s a n d m o l d s 6 . 4 0 ‘ 6 . 4 8 " 6 . 7 6 d T o t a l b a c t e r i a 7 . 7 7 7 . 6 4 7 . 5 9 E E E U D E D I E I I D D E D d ' E E D d I ” n o A c e t i c a c i d 0 . 8 7 1 . 0 8 0 . 8 6 L a c t i c a c i d 3 . 6 3 3 . 7 9 3 . 4 1 E t h a n o l 0 . 4 7 ‘ 0 . 6 1 “ 0 . 6 4 “ 0 . 7 8 3 . 3 6 0 . 5 3 “ . 0 4 1 . 0 3 2 . 0 0 8 . 0 1 4 . 0 0 8 . 0 0 1 . 0 0 1 1 1 9 1 2 0 s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h e n z y m e s i n c o m p a r i s o n t o t r e a t m e n t s c o n t a i n i n g t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t . X y l o s e w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f s i l a g e a d d i t i v e . G a l a c t o s e c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n s i l a g e c o n t a i n i n g t h e e n z y m e m i x t u r e , a n d a r a b i n o s e c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n s i l a g e t r e a t e d w i t h i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s a s c o m p a r e d t o t h e o t h e r t r e a t m e n t s . T h e p H w a s s i m i l a r f o r a l l t r e a t m e n t s a t d 0 a n d 1 o f a e r o b i c e x p o s u r e , b u t s i l a g e t r e a t e d w i t h b a c t e r i a l i n o c u l a n t h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) p H f r o m d 3 t o 7 t h a n c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h t h e e n z y m e m i x t u r e ( T a b l e 3 - 5 ) . I n i t i a l t e m p e r a t u r e w a s s i m i l a r f o r a l l t r e a t m e n t s , b u t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n s i l a g e t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a f t e r 1 a n d 2 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . A f t e r 3 d o f e x p o s u r e , t e m p e r a t u r e f o r a l l t r e a t m e n t s w e r e s i m i l a r . A s i g n i f i c a n t s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e i n t e r a c t i o n w a s n o t o b s e r v e d f o r y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s . E v e n t h o u g h t h e t o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) i n t h e e n s i l e d f o r a g e s o r g h u m c o n t a i n i n g t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t b e f o r e e x p o s u r e t o a i r , a f t e r 1 d o f a e r o b i c e x p o s u r e t h e b a c t e r i a l p o p u l a t i o n w a s s i m i l a r a m o n g t r e a t m e n t s . T h e g r e a t e r p H a n d t e m p e r a t u r e o b s e r v e d i n s i l a g e s c o n t a i n i n g t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t w i t h i n 3 d a f t e r a e r o b i c e x p o s u r e , a n d t h e h i g h e r y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s o v e r t h e e n t i r e a e r o b i c e x p o s u r e p e r i o d , i n d i c a t e s t h a t i n o c u l a t i o n i n c r e a s e d t h e r a t e o f d e t e r i o r a t i o n i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . I n i t i a l a c e t i c a c i d l e v e l s w e r e s i m i l a r f o r a l l t r e a t m e n t s ( T a b l e 3 - 6 ) . S i l a g e c o n t a i n i n g m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) a c e t i c a c i d c o n t e n t a f t e r 1 0 0 2 5 0 0 5 7 0 7 0 . . . . 1 1 0 0 0 0 . . 1 1 0 0 0 0 . . 8 8 0 . 1 0 0 . 5 7 5 . 3 2 1 . ' ' “ 1 0 5 6 9 4 4 3 7 4 9 4 0 2 1 3 . . . . . . . . 0 2 6 6 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 “ ’ “ 0 7 5 9 1 2 4 5 7 9 . . . . . 7 7 7 7 7 F “ 0 4 0 1 . 4 5 0 . ) ) 5 1 4 2 8 4 9 . . . . . 7 7 7 8 7 0 0 e < r P u ( < P ( s r o r e e f p f f x i f e d i d c w i o w b o r o r r e e e a m m f a o s h e t g h t e n a s e h t n r i e n u l i s s o t y p b p x i s t p i r e c e r v c n s c i s a t r i e b i e r e p e d p m l u o v d r a s u i a s e i e t h a r e i e e t g d e k ) s C d f o a t i i k d f l ° ( l e o m a r g t h i o a s g f h a l a l o n i m e h s u n u r h r o r l n e t u r d t e i e r i t n t e n i s l f w a r e p m a s t s a c o w a f d i f f b r o o o t s s l g d a a c c r a a n c t t a n n a e e e / e e e t T e f t f u o M Y T t f n f f M S E c E I " " “ ' " ‘ “ ' m ' T a b l e 3 - 5 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t — S i l a g e A d d i t i v e P r o b a b i l i t y I t e m A e r o b i c E x p o s u r e ( d ) N o A d d i t i v e E n z y m e s l n o c u l a n t E + l S E M ' A “ D “ A ' D " p H [ 1 ' I ' I E . O c - m m h o l — w a m c o r x ( D e - M I D I " O u — m m h 3 . 6 0 3 . 6 0 4 . 2 1 “ 5 . 4 6 “ 6 . 4 3 “ 2 0 . 9 6 2 2 . 4 8 “ 2 4 . 6 9 “ 2 4 . 5 5 ' 2 3 . 1 0 2 2 . 3 8 2 1 . 6 9 2 1 . 2 7 4 . 4 6 5 . 4 2 6 . 8 5 7 . 5 1 7 . 7 5 3 . 6 1 3 . 6 0 4 . 2 0 “ 5 . 4 0 “ 6 . 5 1 “ 2 0 . 6 4 2 2 . 6 8 “ 2 3 . 3 7 “ 2 2 . 9 4 “ 2 2 . 6 0 2 2 . 7 0 2 3 . 1 0 2 1 . 9 7 4 . 5 4 5 . 6 9 7 . 0 3 7 . 4 5 7 . 7 1 7 . 2 9 F 0 7 . 4 5 7 . 7 4 7 . 6 6 “ 8 . 0 5 3 . 5 6 3 . 7 6 4 . 7 2 6 . 0 9 7 . 3 2 7 . 7 8 7 . 9 0 3 . 5 6 3 . 6 6 5 . 2 7 ‘ 6 . 1 7 ‘ 6 . 9 1 ' 4 . 6 5 5 . 9 2 7 . 2 9 7 . 5 9 7 . 9 9 7 . 0 4 ‘ 3 7 . 3 0 7 . 5 7 6 . 0 2 0 " 8 . 2 5 . 1 0 2 . 1 2 7 . 0 0 1 1 2 1 1 2 2 1 d o f a i r e x p o s u r e t h a n s i l a g e w i t h o u t t h e i n o c u l a n t . A f t e r 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e , c o n t r o l s i l a g e h a d l o w e r a c e t i c a c i d c o n t e n t t h a n s i l a g e s c o n t a i n i n g a d d i t i v e s , b u t n o d i f f e r e n c e s d u e t o s i l a g e a d d i t i v e s w e r e o b s e r v e d a f t e r 5 a n d 7 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . L a c t i c a c i d c o n t e n t w a s s i m i l a r ( P < 0 . 0 1 ) a t d 0 a n d 1 o f a e r o b i c e x p o s u r e r e g a r d l e s s o f s i l a g e a d d i t i v e . A f t e r 3 d , s i l a g e s c o n t a i n i n g t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) l a c t i c a c i d c o n t e n t t h a n s i l a g e w i t h o u t t h e m i c r o b i a l a d d i t i v e . T h e s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h t h e m i c r o b i a l a d d i t i v e h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) e t h a n o l c o n t e n t t h e f i r s t d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e , t h e r e a f t e r , e t h a n o l l e v e l s w e r e s i m i l a r a m o n g t r e a t m e n t s a t e a c h d a y t e s t e d . T h e r e w a s a s i g n i f i c a n t s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e i n t e r a c t i o n o n f r u c t o s e ( P < 0 . 0 1 ) a n d a r a b i n o s e ( P < 0 . 0 5 ) c o n t e n t ( T a b l e 3 - 7 ) . S i l a g e s t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t h a d g r e a t e r f r u c t o s e c o n t e n t a t d 0 a n d 1 o f a e r o b i c e x p o s u r e t h a n s i l a g e s w i t h o u t t h e s t a r t e r c u l t u r e , b u t f o r a l l t r e a t m e n t s , f r u c t o s e c o n t e n t w a s s i m i l a r t h e r e a f t e r . D i f f e r e n c e s i n a r a b i n o s e c o n t e n t a m o n g t r e a t m e n t s w e r e a l s o o b s e r v e d t h e i n i t i a l 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e , b u t t h e r e a f t e r c h a n g e s w e r e s m a l l a n d a g e n e r a l t r e n d w a s n o t o b s e r v e d . C h a n g e s i n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( e . g . l a c t i c a c i d ) a n d W S C ( e . g . f r u c t o s e ) f u r t h e r s u p p o r t t h e p r e m i s e t h a t i n o c u l a t i o n i n c r e a s e d t h e r a t e o f d e t e r i o r a t i o n i n f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r . I t i s w e l l d o c u m e n t e d t h a t l o n g e r s t o r a g e i n t e r v a l s i m p r o v e t h e s t a b i l i t y o f s i l a g e s ( M u c k , 1 9 8 8 ; P i t t e t a l . , 1 9 9 1 a , 1 9 9 1 b ) . I n t h i s s t u d y , s i l a g e s ‘ D 4 “ 0 A 0 1 1 0 0 0 0 . . . 1 0 0 . 2 1 . 0 I + E t n a l u ' ' ' ' c 6 7 5 6 3 2 7 4 4 3 o 9 6 7 1 2 1 6 9 0 8 n . . . . . . . . . . l 1 1 1 0 0 0 0 7 5 1 s e “ m 2 0 2 1 4 y 3 8 7 1 4 z . . . . . n 0 0 1 1 1 E e v i t i d d A o N t n e m n “ “ “ “ ' 4 7 4 5 . 3 6 9 2 5 1 2 3 4 0 1 8 5 3 3 3 0 . . . . . . . . . . < 7 5 3 0 0 0 0 0 1 1 e ) 1 0 P r ( u s r o e f p f o x i r d i ( ) v e n r e u e d c w i o b r o r s e e e a o t a r e p p x E c i b m o r m a f o s h e t h e g t r n n u e i e l t a n i e A M r D s o s y t p b p x i e e r v c n c i s a i t r b i e i e a g o t 0 0 e d o p m r v d u i a e s e t a i e h e d g 1 f t k / g , n s o t i c t u a d t o d i c a n r c e P i d i c a d a o i f a l o h n e s t u l i r g o a g f r l o n h r i e t e s l n i o w f i f d o t o r s a t t n a c d c c m - t i n e e a f e f e r t d e t e n c c t f M n f E E F E A a S I “ L “ “ “ ° “ c r a T a b l e 3 - 6 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d 1 . 7 4 1 . 3 8 “ 0 . 7 6 0 . 2 3 0 . 2 7 O I - f fl l fl f ~ O P M L O F E t h a n o l 0 P M ! ! ! “ 7 . 2 8 5 . 2 4 3 . 2 4 “ 2 . 4 1 “ 0 . 8 1 “ 0 . 8 8 ' 0 . 9 3 ' 0 . 5 8 0 . 2 7 0 . 4 1 S i l a g e A d d i t i v e 1 . 0 3 “ 0 . 8 0 ' 0 . 4 8 0 . 3 7 0 . 5 4 1 . 6 4 0 . 8 1 ' 1 . 0 9 0 . 1 7 0 . 2 0 7 . 7 8 6 . 2 0 1 . 5 0 ' 0 . 7 0 ' 0 . 6 0 ' 0 . 8 4 ' 1 . 1 0 “ 0 . 4 5 0 . 1 6 0 . 1 3 S E M ' 0 . 3 8 0 . 0 9 P r o b a b i l i t y A b . 2 2 1 . 0 0 1 D e . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 2 3 m 1 “ 5 7 3 2 u “ 6 0 2 9 D 0 9 6 8 4 0 h . . . . . g t y A r o i l i b “ 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 s a 0 0 0 0 0 b . . . . . D o r P 5 5 7 2 “ A 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 . . . . . ' M E 0 2 1 0 7 3 . . 0 0 0 0 . . 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H e x o s e c o n t e n t w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n . S i m i l a r t r e n d s i n p H e l e v a t i o n w e r e o b s e r v e d f o r s i l a g e s s t o r e d f o r b o t h 4 0 a n d 1 0 0 d ( T a b l e 3 - 9 ) , h o w e v e r t h e r a t e a n d e x t e n t o f c h a n g e w e r e g r e a t e r i n s i l a g e s s t o r e d f o r 4 0 ( 1 . T e m p e r a t u r e r e a c h e d i t s m a x i m u m v a l u e a f t e r 1 a n d 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e f o r s i l a g e s o p e n e d a f t e r 4 0 o r 1 0 0 d , r e s p e c t i v e l y . F o r b o t h f e r m e n t a t i o n p e r i o d s , y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a t a e x p o n e n t i a l r a t e a f t e r 5 d o f a e r o b i c e x p o s u r e , b u t a g r e a t e r i n c r e a s e w a s o b s e r v e d w h e n s i l a g e w a s o p e n e d a f t e r 4 0 d . T o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n i n c r e a s e d a s t h e t i m e o f e x p o s u r e i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) r e g a r d l e s s o f f e r m e n t a t i o n p e r i o d . A c e t i c a n d l a c t i c a c i d l e v e l s d e c r e a s e d o v e r t i m e w i t h s i l a g e s s t o r e d f o r 4 0 a n d 1 0 0 d , b u t t h e r a t e o f d e c l i n e w a s g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) f o r s i l a g e s s t o r e d f o r t h e s h o r t e r t i m e p e r i o d ( T a b l e 3 - 1 0 ) . E t h a n o l c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e f o r f o r a g e s o r g h u m s i l a g e o p e n e d a f t e r 4 0 o r 1 0 0 d . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n l e n g t h o f s t o r a g e a n d t i m e o f e x p o s u r e w a s d e t e c t e d ( P < 0 . 0 5 ) b u t a d i v e r g e n t t r e n d w a s n o t o b s e r v e d . T h e s o l u b l e s u g a r s d e c r e a s e d t h r o u g h o u t t h e e x p o s u r e p e r i o d f o r s i l a g e s s t o r e d f o r e i t h e r 4 0 o r 1 0 0 ( I ( T a b l e 3 - 1 1 ) . T h e r e w a s a n o v e r a l l t e n d e n c y f o r t h e 4 0 d s i l a g e s t o h a v e l o w e r s u g a r l e v e l s a f t e r 7 d o f e x p o s u r e , b u t t h e 1 2 6 T a b l e 3 - 8 . E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t a n d e x p o s e d t o a i r f o r s e v e n d a y s L e n g t h o f F e r m e n t a t i o n ( d ) I t e m 4 0 1 0 0 S E M ' P r o b a b i l i t y p H 5 . 2 7 “ 4 . 5 2 “ . 0 3 2 . 0 0 1 T e m p e r a t u r e ( ° C ) 2 3 . 9 5 “ 2 2 . 1 5 “ . 0 1 4 . 0 0 1 I I . I . 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I n 1 9 9 4 , a c i d i t y w a s s i m i l a r a t d 0 a n d 1 , b u t t h e n d e c r e a s e d a s l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e i n c r e a s e d . O v e r a l l , s i m i l a r t r e n d s o c c u r r e d o v e r t i m e i n b o t h y e a r s . T e m p e r a t u r e r e a c h e d a m a x i m u m v a l u e a f t e r 1 d o f a e r o b i c e x p o s u r e i n 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 , t h e n s l i g h t l y d e c r e a s e d u n t i l t h e e n d o f t h e a e r o b i c e x p o s u r e p e r i o d . T h e s e s i l a g e s w e r e u n s t a b l e b a s e d o n c r i t e r i a o f a n e x p o n e n t i a l i n c r e a s e ( P < 0 . 0 1 ) i n y e a s t s a n d m o l d s a n d t o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s w i t h i n t h e f i r s t 2 4 h i n 1 9 9 3 . I n 1 9 9 4 , m i c r o o r g a n i s m s e n u m e r a t e d i n c r e a s e d o v e r t i m e , b u t a t a s l o w e r r a t e ( P < 0 . 0 1 ) . I n c o n t r a s t t o f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , i t a p p e a r s t h a t g r e a t e r d e t e r i o r a t i o n i n t r o p i c a l s i l a g e o c c u r r e d b e f o r e 1 d o f a e r o b i c e x p o s u r e , a s e v i d e n c e d b y c h a n g e s ~ « l n p H , t e m p e r a t u r e a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s . T h e h i g h e r p H , a m b i e n t t e m p e r a t u r e a n d y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s w h e n t h e t r o p i c a l s i l a g e i s e x p o s e d t o a i r m a y b e r e s p o n s i b l e f o r t h e h i g h e r r a t e o f d e t e r i o r a t i o n . I t h a s b e e n s h o w n i n m o d e l s d e v e l o p e d b y d i f f e r e n t a u t h o r ' s ( C o u r t i n a n d S p o e l t r a , 1 9 9 0 ; W o o l f o r d , 1 9 9 0 : P i t t e t a l . , 1 9 9 1 ; M u c k a n d O ' K e i l y , 1 9 9 2 ) t h a t i n i t i a l c o u n t s o f y e a s t s a n d m o l d s , h i g h p H a n d h i g h t e m p e r a t u r e s n e g a t i v e l y i n f l u e n c e t h e s t a b i l i t y o f s i l a g e s . A c e t i c a c i d c o n t e n t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h e i n i t i a l 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e i n t h e 1 9 9 3 s i l a g e , t h e n d e c r e a s e d t h e r e a f t e r ( T a b l e 3 - 1 6 ) . I n 1 9 9 4 , a c e t i c a c i d d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e f i r s t 3 d o f e x p o s u r e a n d , t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t . I n b o t h y e a r s , l a c t i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) 4 2 0 . 1 1 0 0 0 0 . . 1 1 0 0 0 0 . . 1 0 0 . 1 0 0 5 1 0 0 0 0 . . . ' M 1 0 5 2 1 0 E 1 3 1 S . . . : “ “ " “ 0 ' ' 8 4 7 9 9 5 7 7 2 2 2 5 5 4 4 . . . . . . . . 9 6 4 2 3 1 0 9 2 3 3 3 2 3 3 3 ) d ( e r u s ) 5 0 . 0 < P ( ) 1 0 . 0 < P ( r r e e f f f f i i d d g g n n i i d d a a e e h h m m e e t t i i n n a a n n i i h h t t i i w w n m n m o u p x E c i b o r e A ) C . s d u e l r o u c s o e p m x a l o c e m a e s s c e e i h h b t o t n e i r n r e i u a s s t s f t o o p p i x h r p i r c e s t c g s n r c n r a i e e e b l p e p u m s o l u r a s y e e i e h a r k b e ° t l ( e o o m a i r f n a o u m e n h y u r t h k e i r i f t l a l . I n t r t a e i n o m u f r h E e d h o g r s t e t r a w e c e r i t w ' e a a y l n f I o b r I s 5 1 - 3 l e t e l b a T p a s m a a d t t a g a t c r a e e e o e / e M I e T f Y T I a f u t M ' n c e t n f f f * ” S E c ' E m ' l “ “ “ ° “ “ ' “ d f s f i f s r o n t o o c n E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t p H O c — C O L O B O v - N C ‘ O V L D C D N ( D c - C O L O N O v - ( ‘ O I D N Y e a r 9 3 ' m c o f i o S a R fi P N Q fi « c r o t c h : N & & m Q fi N Q Q Q fi Q Q m h h h h m r x r x r x N % & % R " . N . 0 6 7 P r o b a b i l i t y Y “ D ° . 0 0 1 . 0 0 1 Y ‘ D “ . 0 0 1 1 3 6 1 3 7 a s l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e i n c r e a s e d . L e v e l s w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n 1 9 9 4 a s c o m p a r e d t o 1 9 9 3 . E t h a n o l c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 1 d , b u t l o w e r t h e r e a f t e r . S i n c e y e a s t s a r e k n o w n t o p r o d u c e e t h a n o l , t h i s o b s e r v a t i o n w o u l d s u p p o r t t h e p r e m i s e t h a t y e a s t s a r e t h e e a r l y i n i t i a t o r s o f t h e d e t e r i o r a t i o n p r o c e s s . S i m i l a r t o s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n t h e t e m p e r a t e c l i m a t e , m i c r o b i a l e c o l o g y a n d r a t e o f d e t e r i o r a t i o n d i f f e r b e t w e e n y e a r s i n t h e t r o p i c a l s i l a g e , b u t t h e m a j o r c h a n g e s o c c u r r e d w i t h i n t h e i n i t i a l 2 4 h o f a e r o b i c e x p o s u r e . S u g a r s l e v e l s w e r e l o w i n a l l s i l a g e s a n d t e n d e d t o d e c r e a s e a s l e n g t h o f e x p o s u r e i n c r e a s e d ( T a b l e 3 - 1 7 ) . S u g a r s l e v e l s w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n 1 9 9 4 t h a n i n 1 9 9 3 . I n c o n t r a s t t o w h a t h a p p e n e d d u r i n g a e r o b i c e x p o s u r e o f t e m p e r a t e s i l a g e , m i c r o o r g a n i s m s i n t r o p i c a l s i l a g e a p p e a r e d t o u t i l i z e o r g a n i c a c i d s t o g r e a t e r e x t e n t t h a n r e s i d u a l s u g a r s . T h e c h a n g e s i n m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s a n d r e s i d u a l W S C o b s e r v e d i n t h i s e x p e r i m e n t , s u g g e s t t h a t l a c t a t e a s s i m i l a t i n g ( C a n d i d a k r u s e i ) r a t h e r t h a n s u g a r s u t i l i z i n g ( S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e ) a r e t h e p r e d o m i n a n t y e a s t s a s s o c i a t e d w i t h t h e i n s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m , a n d t h a t a c e t i c a c i d b a c t e r i a w h i c h o x i d i z e e t h a n o l t o a c e t i c a c i d a n d ; a c e t i c a n d l a c t i c a c i d s t o C 0 2 a n d H 2 0 ( F e n t o n e t a l . , 1 9 9 5 ) m a y a l s o p l a y a m a j o r r o l e i n t h e d e t e r i o r a t i o n . I n c o n t r a s t t o t h e r e l a t i v e l y l a r g e n e g a t i v e e f f e c t o f i n o c u l a t i o n o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , i n 1 1 1 0 0 0 0 . . 0 0 . 1 1 1 0 0 . 6 0 0 0 0 0 . . 1 1 0 3 0 0 2 . . . ' M 6 4 5 2 0 6 E 0 1 0 S . . . “ ' “ “ “ 7 4 7 4 3 3 5 0 0 6 . . . . - ' ° h . 0 9 2 5 5 3 9 7 0 . . 2 . . . 3 2 2 2 1 0 0 0 0 0 r a e Y “ “ “ “ ' 9 8 7 3 1 4 4 3 8 7 3 9 i 4 1 . . . . . . 0 0 0 0 0 0 ) d ( e r u s o p x E c e r u i s t n b o r e e m A n o r i v n e l a c M D g o p x e c i b o r e r u e s a o p f x o e h n t c a g i n e b i e p o 0 r 0 t 1 [ g n o i t , d t i c c u a m o l r e e h a t f f o o y b r a h e r t y o r g r f a n r o e e e y n l a o d t c o i t n r e P m - r d e h n r c t e e a e f f t i e n A F E E t f f h n S E g E I f ' “ “ e “ l o d f f r o o n a a d t t c c i t c a T a b l e 3 - 1 6 . E f f e c t s o f y e a r a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a 9 4 P r o b a b i l i t y Y “ D 0 Y “ D “ 1 . 5 7 “ 1 . 0 5 ' 0 . 9 3 “ L a c t i c a c i d O P M L D N O I - O O I D N b N K fi m Q Q Q fi Q o — o o o O P M I D N 0 . 3 5 ' “ 0 . 7 0 “ 0 . 4 6 ' “ 0 . 3 9 “ 0 . 5 2 ' M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e c o l u m n w i t h i n a f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 1 3 8 “ 0 7 5 D 2 5 3 “ 0 3 6 Y . . . 0 0 1 6 5 0 . . e g a 5 l “ 0 i D 6 s 1 1 0 0 1 . . 8 0 0 1 1 0 0 . . . m u h g r o “ 0 0 0 0 1 1 1 1 s 0 0 0 0 Y 1 0 0 . . . . . e g a r o f f o s t n ‘ 7 3 4 5 7 e M 2 2 2 1 1 t E 0 0 0 0 0 n . . 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O n d 1 , t e m p e r a t u r e w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) f o r s i l a g e s t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t , b u t t h e r e a f t e r t e m p e r a t u r e s w e r e s i m i l a r ( T a b l e 3 - 1 8 ) . O t h e r m e a s u r e s o f a e r o b i c s t a b i l i t y s u c h a s p H , m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e s i m i l a r i n f o r a g e s o r g h u m u p o n e x p o s u r e t o a i r r e g a r d l e s s o f a d d i t i v e t r e a t m e n t ( T a b l e s 3 - 1 8 , 3 - 1 9 , 3 - 2 0 ) . R e s u l t s f r o m c h a p t e r 2 i n d i c a t e d t h a t t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m d i f f e r w h e n e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , a n d t h e u t i l i z a t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t i m p r o v e d t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s i n b o t h l o c a t i o n s . H o w e v e r , b a s e d o n m i c r o b i o l o g i c a l ( e . g . y e a s t s a n d m o l d s p o p u l a t i o n s ) a n d b i o c h e m i c a l ( e . g . r e s i d u a l s u g a r c o n t e n t ) c h a n g e s o b s e r v e d o v e r t i m e i n b o t h e n v i r o n m e n t s , t h e i n o c u l a n t r e d u c e d t h e s t a b i l i t y o f t h e s i l a g e s . T h e f a s t e r p H d e c l i n e a n d a c c u m u l a t i o n o f l a c t i c a c i d d u r i n g f e r m e n t a t i o n d u e t o t h e i n o c u l a n t m o s t l y l i k e l y i n h i b i t e d p r o d u c t i o n o f t h e c o n d i t i o n s t h a t r e n d e r s t a b i l i t y t o s i l a g e s . I t w o u l d a p p e a r t h a t o t h e r f a c t o r s b e s i d e s p H a n d l a c t i c a c i d a r e a l s o i m p o r t a n t i n s t a b i l i t y o f s i l a g e s . I n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r a f t e r 4 0 d o f f e r m e n t a t i o n w a s l e s s s t a b l e t h a n s i l a g e o p e n e d a f t e r 1 0 0 d . I n c o n t r a s t , l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n h a d s m a l l e r e f f e c t s i n s i l a g e s f r o m t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . T h e r e w a s a t e n d e n c y f o r s i l a g e f e r m e n t e d f o r 4 0 d t o h a v e a g r e a t e r t e m p e r a t u r e i n c r e a s e d u r i n g e x p o s u r e t h a n s i l a g e m 6 3 u 0 9 5 5 A . : 1 1 0 0 0 . h g r o s e g a r o f f o s n o i t a l u p o p l a i b o 0 6 0 . 1 0 0 . 1 5 4 4 5 3 . . 0 6 4 . r l 0 4 6 3 9 2 2 8 7 9 5 1 4 0 9 6 5 4 4 6 c i m d n a , e r u t a r + . . . . . . . . . . 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E 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 p x e c i b o r e a t f n o e m h t n g o n r e i l v n e d n a l a s c e i v p i t i d d o r t a a n i e g r a i l a i s o t f o d s e t s c g o e f f p 0 x 0 E e 1 1 9 , s . e 0 2 - 3 e t a r d y h o l b b a T r a C 5 9 6 7 1 2 1 1 1 2 . . . . . 0 0 0 0 0 5 0 9 7 7 1 0 0 0 1 . . . . . 0 0 0 0 0 ) d ( e r e r u s o p x e c i b u o s o p x E c i b o r e A M r e a f o h t e g r n e u l s o y p b x e e v D c n i e d e t e t h i a e g f a s o s o d o f a o l i h t s e n c s i a o b e t r g o a g f r n o l l a l a i e b e o m v t i d d r a i e a y r G X A r e i e l s n o d f f i r o o t a d t c t a c c r n e e e a f f t t f f n S E E I “ “ “ “ S i l a g e A d d i t i v e N o A d d i t i v e E + I P r o b a b i l i t y A b D c G l u c o s e F r u c t o s e 0 " ” t h O P M I D N O P M L D N O e - M l n l ‘ O F M L O " 0 . 1 1 0 . 1 6 0 . 1 0 0 . 0 6 0 . 0 4 0 . 1 0 0 . 1 1 0 . 1 0 0 . 0 8 0 . 0 8 0 . 0 8 0 . 0 9 0 . 0 7 0 . 0 4 0 . 0 4 0 . 2 1 0 . 1 8 0 . 2 1 0 . 1 3 0 . 1 5 0 . 1 9 0 . 1 4 0 . 1 3 0 . 1 1 0 . 0 7 0 . 0 8 0 . 0 9 0 . 0 9 0 . 0 7 0 . 0 5 0 . 0 8 0 . 0 8 0 . 1 1 0 . 0 8 0 . 0 5 0 . 1 3 0 . 2 0 0 . 1 8 0 . 1 1 0 . 1 9 0 . 1 7 0 . 1 9 0 . 1 2 0 . 0 6 0 . 0 6 0 . 1 6 0 . 1 3 0 . 1 0 0 . 0 9 0 . 0 5 0 . 1 1 0 . 1 6 0 . 0 9 0 . 0 3 0 . 0 8 0 . 0 3 0 . 0 3 0 . 0 2 . 0 7 0 . 1 6 0 . 1 8 5 . 7 0 6 . 7 3 4 1 4 3 1 4 4 f e r m e n t e d f o r 1 0 0 d , h o w e v e r , t h e s e d i f f e r e n c e s a r e s m a l l a n d m a y b e o f l i t t l e p r a c t i c a l s i g n i f i c a n c e ( T a b l e 3 - 2 1 ) . L e n g t h o f f e r m e n t a t i o n d i d n o t i n f l u e n c e t h e r a t e o f p H d e c l i n e . C o l l e c t i v e l y , t h e p a t t e r n o f c h a n g e s o b s e r v e d i n a l l c r i t e r i a t o m e a s u r e s t a b i l i t y w e r e s i m i l a r . Y e a s t a n d m o l d a n d t o t a l b a c t e r i a p o p u l a t i o n s w e r e g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) i n t h e 4 0 d a s c o m p a r e d t o 1 0 0 d s i l a g e s . A c e t i c a c i d s l e v e l s w e r e g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) w h e r e a s l a c t i c a c i d a n d e t h a n o l l e v e l s w e r e l e s s i n t h e 1 0 0 d s i l a g e s ( T a b l e 3 - 2 2 ) . G l u c o s e a n d f r u c t o s e l e v e l s w e r e h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) i n t h e 4 0 d s i l a g e ( T a b l e 3 - 2 3 ) , b u t g a l a c t o s e a n d x y l o s e w e r e l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) . T h e r e w e r e f e w s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n s b e t w e e n l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n a n d s i l a g e a d d i t i v e s d e t e c t e d i n t h i s s t u d y ( T a b l e s 3 - 2 4 , 3 - 2 5 , 3 - 2 6 ) . P a r a m e t e r s w h e r e a s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n w a s d e t e c t e d i n c l u d e d y e a s t s a n d m o l d s ( P < 0 . 0 6 ) , e t h a n o l ( P < 0 . 0 1 ) , a n d a r a b i n o s e ( P < 0 . 0 6 ) c o n t e n t . I n t o t a l , t h e r e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e d t h a t t h e e f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m w e r e e s s e n t i a l l y t h e s a m e r e g a r d l e s s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n i n t r o p i c a l s i l a g e s . I m p l i c a t i o n s U t i l i z a t i o n o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t d i d n o t p r e v e n t t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e o r t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I n c o n t r a s t , i n o c u l a t i o n i n c r e a s e d t h e r a t e o f d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t e m p e r a t e l o c a t i o n , a n d a m o r e p r o n o u n c e d n e g a t i v e e f f e c t w a s n o t i c e d y t i l i b a b o r P ) d ( n o i t a t n e m r e F ) 1 0 . f 0 o h t g n e L < P ( r e f f i d g n i d a e h m e t e r u s i o p n x a e n c i i h b t o i r w e a n f o m u l h o t c g n e e l y m a s b e n e t h o r i n u i t s a n s o t o t p n i p x e e m t a n r i r c t c a n i e e b e s f r m l m o f r o r a e i e e h f a r h e p u s t e t e f f g f n o o t k a i o e m l h h l n r t t h u o g g f s r n o n r e e e n l l e h r t f i o d i f f f w r o o t o a c s d n t t a g c c r n e e e / a a f t f u e t f n f f S E E I c M “ “ “ “ “ “ ' T a b l e 3 - 2 1 . E f f e c t s o f l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t l t e r o n A e r o b i c E x p o s u r e I d ) 4 0 1 0 0 S E M ' L “ D “ L ' D “ p H 4 . 1 1 ? . 1 0 0 . 9 7 5 . 0 0 1 . 0 0 1 T e m p e r a t u r e ( ° C ) 3 0 . 0 7 2 9 . 5 0 ‘ . 3 2 5 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 b 1 - I D ( V ) I n F P ‘ ( V ) ( D r - C O L O N O c — N M V I D m h I I ' I ' I E . 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E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o A c e t i c a c i d N o a d d i t i v e 0 . 3 3 E n z y m e 0 . 2 9 l n o c u l a n t 0 . 3 4 E + l 0 . 3 9 0 . 0 6 0 . 0 6 0 . 0 7 0 . 0 7 . 0 5 1 . 9 9 2 . 0 0 1 . 3 3 6 . 0 0 6 . 0 0 1 . 1 0 8 . 0 0 6 1 4 9 e g a l i “ L “ 1 6 5 9 0 s 7 A 4 9 1 6 1 8 6 6 0 m . . . . . u y h g t i l “ r 1 i L 5 6 5 7 b 2 0 0 2 a 0 0 0 0 0 8 b o r P . . . . . “ 1 3 A 6 8 2 4 4 6 9 7 6 1 1 0 1 . . . . . o s e g a r o f f o s t n e t n o c e 2 2 1 1 1 ' t 0 0 0 0 0 M a E . . . . . 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C H A P T E R 4 M I C R O B I A L I N O C U L A N T A N D E N Z Y M E S I N F O R A G E S O R G H U M E N S I L E D A T T W O S T A G E S O F M A T U R I T Y I N A T R O P I C A L E N V I R O N M E N T . A b s t r a c t A n e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e b e n e f i c i a l e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s ( e n z y m e s a n d i n o c u l a n t ) o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . F o r a g e s o r g h u m w a s h a r v e s t e d a f t e r 9 0 ( 2 2 . 7 5 % D M ) a n d 1 1 0 d ( 3 2 . 7 3 % D M ) o f g r o w t h i n t h e L a j a s A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o , a n d w a s m e c h a n i c a l l y c h o p p e d i n t o 2 . 5 c m p i e c e s . C h o p p e d f o r a g e a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y w a s a s s i g n e d t o o n e o f f o u r t r e a t m e n t s ; n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) , e n z y m e s ( . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l ) , i n o c u l a n t ( 1 0 “ c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) a n d e n z y m e s p l u s i n o c u l a n t , a n d p l a c e d i n t o P V C s i l o s . T h r e e s i l o s p e r t r e a t m e n t a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y w e r e o p e n e d a f t e r 6 e n s i l i n g p e r i o d s ( 0 , 1 , 3 , 7 , 2 1 , a n d 1 0 0 d ) a n d a n a l y z e d f o r p l a n t o r g a n i c a c i d s ( c i t r i c , m a l i c , o x a l o a c e t i c , a n d s u c c i n i c a c i d s ) , p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n ( e n t e r o b a c t e r i a c e a e , l a c t i c a c i d b a c t e r i a , y e a s t s a n d m o l d s , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t ) s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - 1 5 2 1 5 3 p r o d u c t s ( o r g a n i c a c i d s a n d e t h a n o l ) a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( g l u c o s e , f r u c t o s e , g a l a c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e ) . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ( N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e , a n d c e l l u l o s e ) w e r e d e t e r m i n e d a t d 0 a n d 1 0 0 p o s t - e n s i l i n g . F o r a e r o b i c s t a b i l i t y s t u d i e s , d u p l i c a t e s i l o s f o r e a c h t r e a t m e n t a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y w e r e o p e n e d a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g a n d e x p o s e d t o a i r f o r 7 d . A c i d i t y , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e d e t e r m i n e d a f t e r 0 , 3 , a n d 7 d . T e m p e r a t u r e w a s m o n i t o r e d d a i l y . F e r m e n t a t i o n p a t t e r n s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e v a r i e d w i t h s t a g e o f m a t u r i t y . A d d i t i o n o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m , b u t a m o r e b e n e f i c i a l r e s p o n s e w a s o b s e r v e d i n t h e m o r e i m m a t u r e s i l a g e . A g r e a t e r d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e n s i l e d a t 9 0 o r 1 1 0 d o c c u r r e d w i t h i n t h e f i r s t 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . S i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t p r e v e n t t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e , r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . I n t r o d u c t i o n A s p l a n t m a t u r e , n u m e r o u s c h a n g e s o c c u r i n p l a n t c o m p o s i t i o n ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) , a n d e p i p h y t i c m i c r o f l o r a ( W o o l f o r d , 1 9 8 4 ) w h i c h m a y i n f l u e n c e t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s a n d t h e e f f e c t i v e n e s s o f s i l a g e a d d i t i v e s ( S a t t e r e t a l . , 1 9 9 1 ) . I n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , e n s i l i n g o f f o r a g e s a t d i f f e r e n t s t a g e s o f m a t u r i t y w i t h o r w i t h o u t s i l a g e a d d i t i v e s h a s b e e n t h e s u b j e c t o f m a n y 1 5 4 s t u d i e s . I n o n e s t u d y , a d i f f e r e n t f e r m e n t a t i o n p a t t e r n w a s o b s e r v e d w h e n f o r a g e s o r g h u m w a s e n s i l e d w i t h s i l a g e a d d i t i v e s a t v a r i o u s s t a g e s o f m a t u r i t y ( B l a c k e t a l , 1 9 8 0 ) . B o l s e n e t a l . ( 1 9 9 2 ) , r e p o r t e d t h a t f i n a l p H i n a l f a l f a s i l a g e d e c r e a s e d a s s t a g e o f m a t u r i t y a d v a n c e d . L i k e w i s e , t h e e f f e c t o f m a t u r i t y ( S t o k e s , 1 9 9 2 ) a n d s i l a g e a d d i t i v e s ( R u s t e t a l . , 1 9 8 9 ) o n a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s h a v e s h o w n v a r i a b l e r e s u l t s . F o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t h e e n d o f f l o w e r i n g s t a g e w a s m o r e s t a b l e t h a n s o r g h u m e n s i l e d a t m i l k s t a g e ( W e i n b e r g e t a l . , 1 9 9 3 ) . C l e a r e e t a l ( 1 9 9 0 ) f o u n d t h a t i n o c u l a t e d c o r n s i l a g e h a d l o w e r p H a f t e r 4 8 a n d 7 2 h o f a e r o b i c e x p o s u r e t h a n u n t r e a t e d c o r n s i l a g e . M o o n e t a l . ( 1 9 8 3 ) , r e p o r t e d t h a n i n o c u l a t i o n o f w h e a t s i l a g e w i t h b a c t e r i a o r f u n g i a c c e l e r a t e d a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n a f t e r 4 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , s i l a g e f e r m e n t a t i o n i s d i f f e r e n t t h a n t y p i c a l l y o b s e r v e d i n a t e m p e r a t e c l i m a t e ( M c D o n a l d , 1 9 9 1 ) , a n d a d i f f e r e n t r e s p o n s e t o a e r o b i c e x p o s u r e w o u l d b e e x p e c t e d . A d d i t i o n a l l y , f o r a g e s m a t u r e a t a f a s t e r r a t e i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 4 ) . I n p r e v i o u s c h a p t e r s ( 3 a n d 4 ) w e d e m o n s t r a t e d t h a t t h e a p p l i c a t i o n o f a l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s d e c r e a s e d t h e p H , a n d i n c r e a s e d l a c t i c a c i d b a c t e r i a a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d o f g r o w t h , b u t d i d n o t p r e v e n t a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n . H o w e v e r , t h e d i v e r s i t y o f m i c r o o r g a n i s m s o n t h e f o d d e r p l a n t a t d i f f e r e n t 1 5 5 s t a g e s o f m a t u r i t y p r i o r t o e n s i l i n g a n d t h e i r s u b s e q u e n t g r o w t h d u r i n g s i l a g e f e r m e n t a t i o n i n t r o p i c a l c l i m a t e s i n u n k n o w n . I n a d d i t i o n , t h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f t r o p i c a l f o r a g e e n s i l e d a t d i f f e r e n t s t a g e s o f m a t u r i t y i s n o t w e l l d o c u m e n t e d . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t o f a h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a n d a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e F o r a g e H a r v e s t i n g a n d E n s i l i n g F o r a g e s o r g h u m ( H i E n e r g y H y b r i d , A g r i - p r o S e e d , H e r e f o r d , T X ) w a s h a r v e s t e d a t 9 0 ( 2 3 . 7 5 % D M ) a n d 1 1 0 ( 3 2 . 7 3 % D M ) d o f g r o w t h a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r e E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o ( 6 7 ° 0 0 ' w e s t l o n g i t u d e , 1 8 ° 0 0 ' n o r t h l a t i t u d e ) , l o c a t e d a t t h e s o u t h w e s t e n d o f t h e i s l a n d 2 7 m a b o v e t h e s e a . H a r v e s t e d f o r a g e s o r g h u m a t b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y w a s c h o p p e d m e c h a n i c a l l y i n t o 2 . 5 c m p i e c e s w i t h a f o r a g e h a r v e s t e r . C h o p p e d f o r a g e w a s a n a l y z e d f o r D M ( 5 5 ° C f o r 7 2 h ) , a s h ( 5 5 0 ° C f o r 1 2 h ) , t o t a l - N ( A O A C , 1 9 9 0 ) , b u f f e r i n g c a p a c i t y ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) , o r g a n i c a c i d c o n t e n t , w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ( V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 1 , M e t h o d A ) , a n d e p i p h y t i c m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s . V e g e t a t i v e m a t e r i a l p r i o r t o e n s i l i n g a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y 1 5 6 w a s t r e a t e d w i t h o n e o f f o u r t r e a t m e n t s : n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) , e n z y m e s ( V i s c o z y m e m L , N o v o N o r d i s k B i o i n d u s t r i a l s , I n c . F a r h m a m , S u r v e y , U K ) . l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t ( E c o s l e M , Z e n e c a B i o p r o d u c t s , F a r n h a m , S u r v e y , U K ) , a n d e n z y m e s p l u s i n o c u l a n t . T h e e n z y m e a d d i t i v e c o n s i s t e d o f a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B — g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e a n d w a s a p p l i e d a t . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l . T h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n s i s t e d o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d w a s a p p l i e d a t 1 0 “ c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l . T r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d t o w e i g h e d p o r t i o n s ( 1 . 6 k g ) o f f o r a g e , m a n u a l l y m i x e d , a n d p a c k e d i n t o l a b o r a t o r y s i l o s f i t t e d w i t h r e l e a s e v a l v e s t o a l l o w g a s e s c a p e . L a b o r a t o r y s i l o s w e r e m a i n t a i n e d a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 7 - 3 0 ° C ) u n t i l o p e n e d . T h e c o n t r o l t r e a t m e n t r e c e i v e d a s i m i l a r a m o u n t o f w a t e r a s f o r a g e t r e a t e d w i t h t h e a d d i t i v e s . S a m p l e c o l l e c t i o n a n d a n a l y s i s T r i p l i c a t e s i l o s f o r e a c h t r e a t m e n t a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y w e r e a n a l y z e d f o r p l a n t o r g a n i c a c i d c o n t e n t , p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n , s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s a f t e r 0 , 1 , 3 , 7 , 2 1 , a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g . F i f t y g o f f o r a g e f r o m e a c h s i l o w e r e p l a c e d i n t o 4 5 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r a n d h o m o g e n i z e d f o r 5 m i n u t e s w i t h a S t o m a c h e r a p p a r a t u s ( T e k m a n 3 5 0 0 , C i n c i n n a t i , O H ) . H o m o g e n a t e s w e r e s t r a i n e d t h r o u g h 8 l a y e r s o f c h e e s e c l o t h a n d a n a l y z e d f o r p H w i t h a p H m e t e r f i t t e d w i t h a c o m b i n a t i o n e l e c t r o d e ( F i s h e r S c i e n t i f i c , P i t t s b u r g h , P A ) . F o r m i c r o b i a l 1 5 7 s u c c e s s i o n d e t e r m i n a t i o n s , t e n f o l d d i l u t i o n s o f t h e c l a r i f i e d h o m o g e n a t e w e r e p r e p a r e d f o r e a c h s a m p l e i n s t e r i l e p e p t o n e s o l u t i o n ( . 1 % ) a n d e n u m e r a t e d f o r f o u r d i s t i n c t g r o u p s o f m i c r o o r g a n i s m s . P l a t e s f o r a l l g r o u p s o f m i c r o b e s w e r e p o u r e d w i t h s e l e c t i v e m e d i a a n d e n u m e r a t e d a f t e r s p e c i f i c i n c u b a t i o n p e r i o d s . M i c r o b i a l g r o u p s i n c l u d e d : l a c t i c a c i d b a c t e r i a ( R o g o s a S L a g a r , D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , M I ) e n u m e r a t e d a f t e r 2 d o f i n c u b a t i o n , E n t e r o b a c t e r i a c e a e ( V i o l e t r e d a g a r , D i f c o , L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , M I , m o d i f i e d w i t h 5 % g l u c o s e ) e n u m e r a t e d a f t e r 1 d o f i n c u b a t i o n , y e a s t s a n d m o l d s ( R o s e b e n g a l a g a r s u p p l e m e n t e d w i t h c h l o r a m p h e n i c o l , D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , M I ) e n u m e r a t e d a f t e r 7 d , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t ( Y e a s t n i t r o g e n b a s e s u p p l e m e n t e d w i t h . 0 1 % l a c t i c a c i d a n d 1 . 5 % a g a r ; D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , M I ) e n u m e r a t e d a f t e r 3 d o f i n c u b a t i o n . P l a n t o r g a n i c a c i d s ( c i t r i c , m a l i c , o x a l o a c e t i c , a n d s u c c i n i c a c i d s ) , a n d s i l a g e f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( l a c t i c , a c e t i c , p r o p i o n i c a n d b u t y r i c a c i d s , a n d e t h a n o l ) w e r e d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e - e x c l u s i o n h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ( B I O R A D a m i n e x H P X - 8 7 H ) f o l l o w i n g t h e g e n e r a l p r o c e d u r e o f C a n a l e e t a l . , ( 1 9 8 4 ) . M o b i l e p h a s e c o n s i s t e d o f . 0 0 5 N H 2 8 0 4 a t a f l o w r a t e o f . 9 m l / m i n . C o l u m n w a s m a i n t a i n e d a t 6 5 ° C b y a n e x t e r n a l c o l u m n h e a t e r ( W a t e r s M i l l i p o r e ) . T h r e e m l o f h o m o g e n a t e f r o m e a c h t r e a t m e n t , m a t u r i t y , a n d e n s i l i n g p e r i o d w e r e f i l t e r e d t h r o u g h 2 p m i o n c h r o m a t o g r a p h y s y r i n g e s f i l t e r s ( G e l m a n A c r o d i s k , 2 5 m m , A n n A r b o r , M I ) i n t o 4 m l H P L C s a m p l e v i a l s ( N a t i o n a l S c i e n t i f i c , A t l a n t a , G A ) . F i l t e r e d s a m p l e s w e r e s t o r e d 1 5 8 a t - 2 0 “ C u n t i l a n a l y s i s . F i f t e e n p l o f t h e f i l t e r a t e w e r e i n j e c t e d b y a n a u t o i n j e c t o r ( W a t e r W I S P 7 1 2 ) a n d a n a l y t e s w a s d e t e c t e d b y r e f r a c t i v e i n d e x ( W a t e r s 4 1 0 r e f r a c t i v e i n d e x d e t e c t o r ) . P e a k h e i g h t s w e r e q u a n t i f i e d b y a c o m m e r c i a l H P L C s o f t w a r e p r o g r a m ( T u r b o c h e m 3 , P E N e l s o n ) a n d c o m p a r e d t o c o m m e r c i a l s t a n d a r d s . W a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e a l s o d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y ( B i o r a d a m i n e x H P X - 8 7 P ) , e x c e p t t h a t 2 0 p l o f c l a r i f i e d e x t r a c t w e r e i n j e c t e d . M i l l i p o r e w a t e r a t a f l o w r a t e o f . 6 m l / m i n w a s u s e d a s t h e m o b i l e p h a s e , a n d c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 8 5 ° C . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ; N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n N D F a n d A D F ) , a n d c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n ( A D F a n d l i g n i n ) , w e r e d e t e r m i n e d a f t e r 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g ( G o e r i n g a n d V a n S o e s t , 1 9 7 0 ; V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 1 M e t h o d A ) . A e r o b i c S t a b i l i t y D u p l i c a t e s i l o s f r o m e a c h t r e a t m e n t a t e a c h s t a g e o f m a t u r i t y w e r e o p e n e d a f t e r 1 0 0 d o f e n s i l i n g . A f t e r e m p t y i n g , 4 0 0 g f r o m e a c h s i l o w e r e p l a c e d i n t o s t y r o f o a m c o n t a i n e r s l i n e d w i t h p l a s t i c , a n d e x p o s e d t o a i r f o r 7 d . A f t e r 0 , 3 , a n d 7 d o f a e r o b i c e x p o s u r e ; p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d W S C c o n t e n t w e r e d e t e r m i n e d a s p r e v i o u s l y d e s c r i b e d . T e m p e r a t u r e w a s m o n i t o r e d t w i c e d a i l y w i t h t h e r m o m e t e r s e m b e d d e d i n t h e s u r f a c e o f t h e e x p o s e d s i l a g e . S t a t i s t i c a l A n a l y s e s 1 5 9 R e s u l t s f r o m t h e e n s i l i n g p r o c e s s ; p H , m i c r o b i a l s u c c e s s i o n , f e r m e n t a t i o n - e n d p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ; w e r e a n a l y z e d a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h a 2 ( s t a g e o f m a t u r i t y ) b y 4 ( s i l a g e a d d i t i v e s ) b y 6 ( d a y o f e n s i l i n g ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l s u b r o u t i n e o f S A S ( 1 9 9 0 ) w i t h t h e f o l l o w i n g m o d e l : Y i j k l W h e r e : Y i j l t l A * C m w e j k p + A i + 1 3 3 + ( A * B ) , j + C , + ( A * C ) , . , + ( B * C ) i k + ( A * B * C h k + - E W I n d i v i d u a l r e s p o n s e v a r i a b l e m e a s u r e d ( e . g . p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t ) O v e r a l l m e a n E f f e c t o f s t a g e o f m a t u r i t y E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e I n t e r a c t i o n o f s t a g e o f m a t u r i t y b y s i l a g e a d d i t i v e E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g I n t e r a c t i o n o f s t a g e o f m a t u r i t y b y d a y o f e n s i l i n g I n t e r a c t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g I n t e r a c t i o n o f s t a g e o f m a t u r i t y b y s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g 1 6 0 E m , I = r e s i d u a l e r r o r B o n f e r r o n i - t t e s t s w e r e u s e d f o r m e a n s e p a r a t i o n . T h e m o d e l f o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t w a s s i m i l a r e x c e p t t h a t t w o d a y s o f e n s i l i n g ( 0 a n d 1 0 0 d ) w e r e u t i l i z e d . A e r o b i c s t a b i l i t y d a t a w a s a n a l y z e d a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h a 2 ( s t a g e o f m a t u r i t y ) b y 4 ( s i l a g e a d d i t i v e s ) b y 3 ( l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l S u b r o u t i n e o f S A S ( 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l f o r a e r o b i c s t a b i l i t y w a s s i m i l a r t o t h e m o d e l f o r f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s e x c e p t t h a t d a y o f e n s i l i n g w a s s u b s t i t u t e d b y t h e d a y s o f a e r o b i c e x p o s u r e ( e . g . t e m p e r a t u r e , 8 d ; p H , 3 d ) . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n F o r a g e C o m p o s i t i o n I n i t i a l D M , t o t a l - N c o n t e n t , N D F , a n d h e m i c e l l u l o s e w e r e h i g h e r i n f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f g r o w t h t h a n i n s o r g h u m h a r v e s t e d a t 9 0 d , b u t p H , a n d b u f f e r i n g c a p a c i t y w e r e l o w e r ( T a b l e 4 1 ) , O r g a n i c m a t t e r , c e l l u l o s e , A D F a n d l i g n i n c o n t e n t s w e r e s i m i l a r r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . I n i t i a l g l u c o s e c o n t e n t w a s h i g h e r i n f o r a g e h a r v e s t e d a t 1 1 0 d , b u t g a l a c t o s e a n d p e n t o s e c o n t e n t w e r e l o w e r . F r u c t o s e w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . M a l i c a n d s u c c i n i c a c i d s w e r e t h e m a j o r o r g a n i c a c i d s p r e s e n t i n f o r a g e s o r g h u m p r i o r t o e n s i l i n g , a n d w e r e f o u n d a t s i m i l a r c o n c e n t r a t i o n s f o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y . C i t r i c a c i d c o n t e n t w a s 1 6 1 T a b l e 4 - 1 . C h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t M a t u r i t y ( d a y s ) I t e m 9 0 S D 1 1 0 S D ' C I . I C . . D M , % 2 3 . 7 5 0 . 5 4 3 2 . 7 3 1 . 4 1 O M b 9 3 . 0 8 1 . 0 2 9 4 . 0 5 0 . 8 7 N D F “ 6 6 . 5 0 2 . 5 3 6 8 . 0 2 2 . 2 0 A D F b 3 9 . 9 9 2 . 4 2 3 9 . 1 2 2 . 4 1 H e m i c e l l u l o s e “ 2 6 . 3 0 0 . 8 1 2 8 . 9 0 1 . 0 6 C e l l u l o s e “ 3 2 . 5 0 2 . 4 3 3 2 . 9 2 2 . 3 9 L i g n i n “ 5 . 5 4 0 . 7 8 5 . 3 9 0 . 7 7 G l u c o s e “ 2 . 9 3 0 . 1 7 7 . 2 5 0 . 7 9 F r u c t o s e “ 3 . 2 5 0 . 3 0 3 . 6 1 1 . 0 1 G a l a c t o s e “ 0 . 2 0 0 . 0 5 0 . 0 9 0 . 0 4 X y l o s e “ 0 . 6 7 0 . 0 6 0 . 0 5 0 . 0 3 A r a b i n o s e “ 0 . 0 9 0 . 0 2 N D N D T o t a l - N “ 1 . 0 4 0 . 0 9 0 . 7 4 0 . 0 1 p H 5 . 6 1 0 . 2 9 5 . 4 4 0 . 0 2 B u f f e r i n g c a p a c i t y “ 2 4 . 2 7 2 . 7 5 1 9 . 6 5 1 . 5 7 D . E . | C i t r i c “ 0 . 7 0 0 . 2 0 1 . 4 7 0 . 4 2 M a l i c “ 4 . 6 2 0 . 4 0 4 . 8 8 0 . 1 3 O x a l o a c e t i c “ 1 . 1 9 0 . 1 7 0 . 1 4 0 . 0 2 S u c c i n i c “ 3 . 2 1 0 . 6 5 3 . 7 0 0 . 8 9 E . I . I I ' [ l d E n t e r o b a c t e r i a c e a e 5 . 4 7 0 . 9 6 3 . 3 9 0 . 3 0 L a c t i c a c i d b a c t e r i a 3 . 3 0 0 . 7 0 6 . 5 3 0 . 1 3 Y e a s t s a n d m o l d s 3 . 1 4 0 . 4 4 4 . 4 7 0 . 4 5 L a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t s 2 . 7 5 0 . 4 1 3 . 3 5 0 . 1 0 “ S t a n d a r d d e v i a t i o n “ g l 1 0 0 g D M “ m e q / 1 0 0 g D M “ c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l N D = - N o d e t e c t a b l e 1 6 2 l o w e r i n t h e m o r e i m m a t u r e f o r a g e , b u t o x a l o a c e t i c a c i d w a s h i g h e r . A l l f o u r e p i p h y t i c m i c r o o r g a n i s m s e n u m e r a t e d i n c h o p p e d f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g w e r e h i g h e r i n s o r g h u m h a r v e s t e d a t 1 1 0 d a s c o m p a r e d t o 9 0 d o f g r o w t h . A s e x p e c t e d , f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t d i f f e r e n t s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t d i f f e r i n t h e i r i n i t i a l c h e m i c a l c o m p o s i t i o n a n d e p i p h y t i c m i c r o f l o r a . T h e s e c h a n g e s i n c h e m i c a l c o m p o s i t i o n a n d e p i p h y t i c m i c r o o r g a n i s m s i n t h e p l a n t m a t e r i a l d u e t o s t a g e o f m a t u r i t y h a v e b e e n e x t e n s i v e l y r e v i e w e d ( M c D o n a l d e t a l . 1 9 9 1 ; V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . E n s i l i n g C h a r a c t e r i s t i c s S i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n s b e t w e e n m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g w e r e e v i d e n t f o r m a l i c , o x a l o a c e t i c a n d s u c c i n i c a c i d s ( T a b l e 4 - 2 ) . O v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , c i t r i c a c i d c o n t e n t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d o f m a t u r i t y t h a n i n s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , c i t r i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f e n s i l i n g i n c r e a s e d . F e r m e n t a t i o n o f m a l i c a c i d o c c u r r e d o v e r t i m e i n b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , b u t a f a s t e r d e c r e a s e w a s o b s e r v e d i n f o r a g e e n s i l e d a t 9 0 d t h a n a t 1 1 0 d . O x a l o a c e t i c a c i d d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e i n s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d , b u t r e m a i n e d c o n s t a n t i n s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d . A d d i t i o n a l l y , o x a l o a c e t i c a c i d l e v e l s w e r e g r e a t e r i n t h e 9 0 d m a t u r i t y f o r a g e a s c o m p a r e d t o t h e 1 1 0 d . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , s u c c i n i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) a s l e n g t h o f e n s i l i n g i n c r e a s e d . I n t h i s l a c i p 1 1 1 o r t a n i d e l i s n e 0 0 0 0 0 0 . . . y t i l i 1 0 b 0 m o a b . u h g r o s e g a r o f f o t n e t n r P ' M o E 1 1 1 0 0 0 0 0 0 . . . 1 6 0 8 7 1 c S . . d i c a c i n a g r o t n a l p n o g n i l i s n e f o y a d d n a y t i r u t a m f o e g a t s t n f e o m s n o ) 1 0 . 0 < P ( “ 3 r 1 . 1 e f f i d g n i d a e h d i c a “ 1 c 3 i . 1 n a n a g r o n a n i h t i w n m u l o c g n i e l m i a s n s e e f h o t y n i a d s t y p b i r e c v s i r t t c r e i f v f n E e . 2 - 4 e l b M O a T t e c a c o i l l a a x c e e i p e d g m n u v d i s i a e l t h i e i e s k t d g n i d a f e l a l o n i f u e s r o g i o h a f r r l y t o i a i e s d n w o d f f i s r t o o a c n d a t t a c c r n e e e e a t f t f M f n f ' S " E E I “ ' ' “ “ “ “ M a t u r i t y ( d ) O r g a n i c A c i d , g / 1 0 0 g D M D a y o f E n s i l i n g 9 0 1 1 0 C i t r i c P P S u c c i n i c ‘ 0 s f ( . 5 . fl . . ‘ 0 . ‘ - o w m h g g o P m n g g o P m n g g o P m n fi g P . 0 7 4 . 1 6 0 M b D c . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 6 3 1 6 4 e x p e r i m e n t , a l l p l a n t o r g a n i c a c i d s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e w e r e d e g r a d e d , r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . O v e r t h e e n s i l i n g p e r i o d , a s i m i l a r t r e n d i n p H w a s o b s e r v e d f o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y ( T a b l e 4 - 3 ) . A c i d i t y i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f e n s i l i n g i n c r e a s e d i n f o r a g e e n s i l e d a t 9 0 o r 1 1 0 d , b u t a g r e a t e r d e c r e a s e i n p H v a l u e s f r o m d 3 t o 2 1 w e r e o b s e r v e d i n s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d o f m a t u r i t y t h a n a t 9 0 d . S i g n i f i c a n t s t a g e o f m a t u r i t y b y d a y o f e n s i l i n g i n t e r a c t i o n s f o r a l l m i c r o b i a l g r o u p s e n u m e r a t e d w e r e o b s e r v e d . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s r e a c h e d i t s m a x i m u m c o u n t s a f t e r 3 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n d e c r e a s e d a s l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n i n c r e a s e d . A g r e a t e r i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a f t e r 3 , 7 , a n d 2 1 d p o s t - e n s i l i n g w e r e o b s e r v e d i n f o r a g e e n s i l e d a t 1 1 0 d . E n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n i n c r e a s e d d u r i n g t h e f i r s t 2 4 h a n d t h e n d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h r o u g h o u t t h e r e m i n d e r o f t h e e n s i l i n g p e r i o d . Y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a t a e x p o n e n t i a l r a t e 1 a n d 3 d p o s t - e n s i l i n g i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 a n d 1 1 0 d , r e s p e c t i v e l y , t h e n d e c r e a s e d f o r t h e r e m a i n d e r o f t h e e n s i l i n g p e r i o d . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , g r o w t h c u r v e o f l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t f o l l o w e d t h e s a m e t r e n d a s e x h i b i t b y y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s . H o w e v e r , g r e a t e r y e a s t , m o l d , a n d l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t p o p u l a t i o n s w e r e o b s e r v e d i n s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d o f m a t u r i t y . A d i f f e r e n t t r e n d i n a c e t i c a c i d c o n t e n t o v e r t i m e w a s o b s e r v e d b e t w e e n “ L 1 ' 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 M . . . . . l a c i p o r t a n i d e l i s y t i n l “ 1 1 1 e i 0 0 D 0 b 0 0 0 1 1 0 0 m b . . a . . . 0 0 u o r h P “ 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 M 0 0 0 0 0 . . . . . e 3 0 0 0 E . 1 1 2 ' M 3 4 0 1 1 1 1 S . . 0 . . g r o s e g a r o f f o n o i s s c c u s l a i b o r c i m m f a t s t f e o m n s t o c r e i f v f n E e . 3 — 4 e l b d 1 5 0 ' 5 1 . 5 n a H p n o g n i l o n 0 e E f g o i s y n D “ 0 8 . 5 ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a i “ ‘ “ “ “ “ “ “ ' ' l j ' ’ e s n e f o y a d d n a y t i r u t g 2 9 4 8 7 5 4 2 4 7 7 3 9 9 h 1 7 1 8 9 5 4 8 0 0 5 9 2 8 . . . . . . . . . . . . . . m 4 5 3 5 6 7 5 2 4 5 6 7 5 4 e t i n a n i h t i w n m u l o c g n e a n i i l m l i a 0 0 s n e s e 1 h f o t n y i a a d s t y p b i r e c v s n r i a t e t i p s a e y e g e d u m d v n l s i a i l a e e t h i e k i i s r d i g s n d i n e d l a f a n e t l o u i a g t l m e s t f o r g a o m d n s l o a f h i y r l o s h t i m i r i a e e s d n r w o f m e s t t s e t a r n c o a t t a a d c g c r e n e e e / I M H p a e t a f f t u c t f n f f ‘ “ a s d f i f s a o o t f a Y E I T a S “ E c L “ “ “ “ “ ' “ I I ' I ' l fi . L a c t i c a c i d b a c t e r i a O l — M h a o 0 . — E n t e r o b a c t e r i a c e a e F 0 0 F C I - ( ‘ O h a o 0 . — O F M B E M a t u r i t y ( d ) 9 0 5 . 6 1 ' 4 . 2 1 “ 5 . 4 7 “ 7 . 9 6 ' 6 . 3 4 “ 5 . 9 8 “ 4 . 3 8 ‘ 3 . 8 7 ’ 4 . 1 2 ' 3 . 3 6 “ 6 . 1 4 “ 6 . 7 8 ‘ 6 . 9 4 ' 6 . 0 5 “ 5 . 6 3 “ 1 6 5 1 6 6 s t a g e s o f m a t u r i t y ( T a b l e 4 - 4 ) . A c e t i c a c i d l e v e l s r e a c h e d m a x i m u m v a l u e s 3 d p o s t - e n s i l i n g , a n d t h e n r e m a i n e d c o n s t a n t o r d e c r e a s e d i n t h e 9 0 o r 1 1 0 d s i l a g e , r e s p e c t i v e l y . A c e t i c a c i d c o n t e n t w a s g r e a t e r i n t h e 9 0 d s i l a g e a s c o m p a r e d t o t h e 1 1 0 d s i l a g e . L a c t i c a c i d w a s t h e m a j o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t a s s o c i a t e d w i t h t h e e n s i l i n g o f f o r a g e s o r g h u m . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , l a c t i c a c i d r e a c h e d i t s m a x i m u m v a l u e a f t e r 3 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n d e c r e a s e d t h e r e a f t e r . L a c t i c a c i d l e v e l s m e a s u r e d b e t w e e n d 1 - 2 1 w e r e g r e a t e r f o r t h e 9 0 d m a t u r i t y f o r a g e a s c o m p a r e d t o 1 1 0 d s i l a g e . I n t h i s s t u d y t h e h i g h e s t l a c t i c a c i d l e v e l s w e r e n o t a s s o c i a t e d w i t h t h e g r e a t e s t p o p u l a t i o n o f L A B . S m a l l l e v e l s o f b u t y r i c a c i d w e r e o b s e r v e d a f t e r 1 d p o s t - e n s i l i n g a n d r e m a i n e d r e l a t i v e l y c o n s t a n t t h e r e a f t e r . P r o p i o n i c a c i d l e v e l s w e r e s m a l l a n d d e t e c t e d o n l y 2 1 d p o s t - e n s i l i n g . S i m i l a r t o r e s u l t s o b t a i n e d i n C h a p t e r 2 , c o n c e n t r a t i o n s o f b u t y r i c a n d p r o p i o n i c a c i d s w e r e n o t o f m a j o r s i g n i f i c a n c e i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , e t h a n o l c o n t e n t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h r o u g h 7 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n d e c r e a s e d s l i g h t l y . T h e g r e a t e s t e t h a n o l c o n t e n t w a s o b s e r v e d o n d - 7 i n t h e 1 1 0 d m a t u r i t y s i l a g e . G l u c o s e a n d f r u c t o s e w e r e t h e m a j o r w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s p r e s e n t i n t h e f r e s h f o r a g e a t b o t h m a t u r i t i e s ( T a b l e 4 - 5 ) . B o t h o f t h e s e s u g a r s w e r e m e t a b o l i z e d r a p i d l y d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s . T h e m a j o r i t y o f t h e g l u c o s e ( P < 0 . 0 1 ) a n d f r u c t o s e ( P < 0 . 0 5 ) w a s m e t a b o l i z e d d u r i n g t h e f i r s t 2 4 h . G l u c o s e l e v e l s c o n t i n u e d t o d e c l i n e i n t h e i m m a t u r e f o r a g e w h e r e a s t h e l a c i p o r t a n i d e l i s n e m u h g r o s e g a r o f f o s t c u d o r p - d n e n o i t a t n e m r e f 1 0 0 3 0 0 5 0 1 . . . 1 0 0 . 1 0 0 . 9 9 8 . 0 1 0 . 0 0 . 0 8 9 1 . n ( ) d o g y t i n r i u l t i a s n e f o y a d d n a y t i r u t a m f M “ ' 8 5 0 2 . . 0 0 g n i l i s n o E 0 0 0 e g a t s t n f e o m n s t o c r e i f v f n E e . 4 - 4 f o y a D M D g 0 0 1 / g , d n i o t i c d i d c a t u i a d c c c a i ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a e h t c u d o r p - d n e n o i t a t n e m r e f a n i h t i w n m u l o g c n i l e i m s a n e s f e o h t y n a i d s t y p b i r e c v s n i a r t e i e g p e d m v d n u i a i s e t l h i e i e t d s k g d a n i f a e l l o f e s u i n r g o o a f h r l y o t r i i a e s d w n o d f f i o o t s r c n a a e c t o n r e P i m - t c i t n o i p l b a l o n a h t t a a d c c r n e e e e a M f t f t f n f E I E “ “ ' r d e o c e n r c a t S T F E A L P E “ “ “ “ “ — 1 0 0 B u t y r i c a c i d 0 P M P ‘ P O N r _ O k a g g 9 0 3 3 ' . 8 . 0 0 0 0 0 0 9 3 % 0 ° . 0 . 0 0 S E M ' . 0 3 2 . 1 8 0 . 0 1 0 . 0 6 0 P r o b a b i l i t y . 5 4 8 D o . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 6 7 1 6 8 l e v e l s w e r e u n c h a n g e d a f t e r 3 d i n t h e 1 1 0 d m a t u r i t y f o r a g e . W i t h f r u c t o s e , t h e l e v e l s d e c l i n e d t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d r e g a r d l e s s o f m a t u r i t y . G a l a c t o s e l e v e l s i n t h e 9 0 d s i l a g e w e r e s i m i l a r t h r o u g o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d , w h e r e a s l e v e l s i n c r e a s e d o v e r t i m e i n t h e m a t u r e f o r a g e . A s a r e s u l t o f t h e s e t r e n d s , t h e f i n a l c o n c e n t r a t i o n o f g a l a c t o s e w a s h i g h e r i n t h e m a t u r e s i l a g e . I t a l s o a p p e a r s t h a t g a l a c t o s e w a s n o t m e t a b o l i z e d b y t h e m i c r o b i a l e c o s y s t e m . X y l o s e c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e i n t h e 9 0 d s i l a g e , b u t i n c r e a s e d s l i g h t l y i n t h e 1 1 0 d m a t e r i a l . T h i s w o u l d s u g g e s t s o m e h e m i c e l l u l o s e d e g r a d a t i o n w a s o c c u r r i n g i n t h e s i l a g e p r e p a r e d f r o m t h e 9 0 d m a t u r i t y f o r a g e s o r g h u m . A r a b i n o s e l e v e l s t e n d e d t o i n c r e a s e ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d w i t h b o t h d e g r e e s o f m a t u r i t y , h o w e v e r , t h e l e v e l s w e r e s m a l l . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r , h e m i c e l l u l o s e a n d c e l l u l o s e l e v e l s w e r e g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) i n s i l a g e m a d e f r o m t h e m o r e m a t u r e f o r a g e a s c o m p a r e d t o t h e 9 0 d f o r a g e ( T a b l e 4 - 6 ) . T h e N D F c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s w i t h b o t h m a t u r i t i e s . T h i s l o s s i n N D F c o n t e n t w a s t h e r e s u l t o f h e m i c e l l u l o s e h y d r o l y s i s w h i c h c o u l d r e s u l t f r o m m i c r o b i a l a c t i v i t y o r t h e a c i d c o n d i t i o n s . H e m i c e l l u l o s e c o n t e n t w a s a l s o l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) i n t h e 9 0 d f r e s h f o r a g e t h a n 1 1 0 d . A c i d d e t e r g e n t f i b e r l e v e l s w e r e s i m i l a r a c r o s s m a t u r i t i e s a n d l e n g t h o f e n s i l i n g . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e t h a t e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t v a r i e d w i t h s t a g e o f m a t u r i t y . 1 1 0 0 0 0 . . 1 0 0 . 8 9 9 3 0 0 . . ) d ( y t i r u t a M g n i l i s ) ) 5 1 0 0 . . 0 0 < < P P ( ( r r e e f f f f i i d d g g n n i i d d a a e e h h e e t t a a r r d d y y h h o o b b r r a a c c a a n n i i h h t t i i w w n n m m u u l l o o c c g n e e i m l m i a a s s n s 0 0 0 0 0 E f o t n e m n o y r a i D v n e l a M c i p o r t D g 0 0 1 / g , . e 5 t — 4 e l b a n e e e h f h t o t n n i y i a s d s t t p y p i b i r r c e c v s n i r a e t s r e p i p e g u e d n s u m v d i s i a l e e t i k e h i e s k i d g t n i d a l f a e l l n o f u n i u e s o r g h h o a f t r l i y t o r i a i w e s d n w o c c r e n e e e M e a r d e y s e h o s e s o e d f i f s s s r o t o n c n o a a t t a a t d e n o t o c s i T C G F A G X “ “ “ “ “ “ b c c a b o a f f t M r u u l l a t ‘ " f n f a l r a y r S m E I E “ “ ' E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a 9 0 S E M ' P r o b a b i l i t y M b D C U M ' - N F O N I - v - t e e m w o o o m m e 8 5 8 % 0 0 0 6 0 6 0 0 0 0 6 0 . 1 2 “ . 1 2 1 . 1 1 2 . 0 0 9 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 3 0 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 6 9 “ L 4 7 3 5 0 7 0 0 “ 2 6 4 0 M . . . . l a c i p o r t a n i d e l i s y t i n “ 1 1 l 5 e i D 0 0 8 b 0 0 8 8 3 9 . a b o r P . . . “ 1 0 0 0 2 7 1 1 M 0 2 0 0 . . . . ' M 1 5 4 0 7 6 3 7 E 5 5 3 7 S . . . . m u h g r o s e g a r o f f o s t n e t n o c e t a r d y h o b r “ ' a c 0 9 8 0 7 1 9 7 1 2 3 9 3 7 4 0 2 1 . . . . . . . . l 1 8 3 9 9 8 8 8 4 r a 6 6 2 3 3 2 3 3 e f r f u t c ) d u ( r t s n y t i r u o t i d g n i d a e h e a M 4 4 4 2 5 6 t 6 8 “ ' g n i 8 9 0 6 2 9 2 1 0 . . . . . . . . l 5 3 2 2 9 9 6 4 9 6 6 2 2 3 3 3 3 i s n e f o y ) 1 0 . 0 < P ( a r d y h o b r a c a e y h a t d n i y s b t e p i r a n d d n a y t i r n g u t a i l i s n m 0 0 0 0 f f 1 1 1 1 E 0 0 0 0 0 0 0 0 i h t i w n m u g l n o c i l i s e n m e a f s o o o y a D e g a t t s n e f m o n v s o t r c e i f v f n E e M D n i a t c i s e g r e d m v d n e g i 0 0 i a p e t u l h i e s i d g t n s d a e 1 e / g f a l k e o i i f s o e s l o r g n o a u f . e 6 t u r i h a e l n s e s d t l o - o a i , o r l l y 4 e l b a r w l e d f f i d u c r o o t y F F i m l a t s t a c h c l d D D c r n e e n e e e o b r a N A H C a f f t a t f n f e E I E S M T C _ “ “ “ “ “ 1 7 0 1 7 1 B a s e d o n c h a n g e s i n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s t h r o u g h o u t t h e e n s i l i n g p e r i o d , i t a p p e a r s t h a t t h e m i c r o b i a l e c o l o g y a n d s u b s t r a t e u t i l i z a t i o n d i f f e r w h e n f o r a g e s o r g h u m w a s e n s i l e d a t d i f f e r e n t s t a g e s o f m a t u r i t y . T h e s m a l l e r e n t e r o b a c t e r i a c e a e p o p u l a t i o n a n d l o w e r a c e t i c a c i d c o n t e n t f o u n d i n t h e 1 1 0 d s i l a g e a t e a r l y s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n i s l i k e l y a r e s u l t o f t h e l o w e r p H o b s e r v e d . A d d i t i o n a l l y , f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d h a d g r e a t e r o x a l o a c e t i c a c i d c o n t e n t t h a n f o r a g e e n s i l e d a t 1 1 0 d . O x a l o a c e t i c a c i d h a s a s t r o n g e r b u f f e r i n g c a p a c i t y a n d h a s b e e n s h o w n t h a t i n f l u e n c e t h e p H o f s i l a g e s ( P l a y n e a n d M c D o n a l d , 1 9 6 6 ) . T h e g r e a t e r i n c r e a s e i n l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s i n t h e 1 1 0 d s i l a g e d i d n o t r e s u l t i n h i g h e r l a c t i c a c i d c o n t e n t , w h i c h m a y i n d i c a t e t h a t a m o r e a c t i v e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n m a y b e p r e s e n t i n f o r a g e e n s i l e d a t 9 0 d o r s u b s t r a t e w a s l i m i t i n g . Y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n s s e e m t o p l a y a p r e d o m i n a n t r o l e i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d , a s e v i d e n c e d b y t h e h i g h e r e t h a n o l c o n t e n t d u r i n g t h e i n i t i a l o n e t h i r d o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d , t h e d e c r e a s e i n l a c t i c a c i d , a n d i n c r e a s e i n a c e t i c a c i d p r o d u c t i o n a t l a t e r s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s m a y i n d i c a t e a s h i f t i n l a c t i c a c i d b a c t e r i a f r o m h o m o f e r m e n t a t i v e t o h e t e r o f e r m e n t a t i v e . S u b s t r a t e a v a i l a b i l i t y a n d u t i l i z a t i o n w a s v a r i a b l e i n f o r a g e e n s i l e d a t 9 0 d a s e v i d e n c e d b y c h a n g e s i n w a t e r s o l u b l e ( e . g . x y l o s e , a r a b i n o s e ) a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e ( e . g . h e m i c e l l u l o s e ) c o n t e n t s . 1 7 2 I n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d , i t a p p e a r s t h a t a l i m i t e d m i c r o b i a l a c t i v i t y o c c u r s a f t e r t h e f i r s t 2 1 d p o s t - e n s i l i n g a s e v i d e n c e d b y c h a n g e s i n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s . H e m i c e l l u l o s e h y d r o l y s i s w a s o b s e r v e d i n s o r g h u m e n s i l e d a t b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y . H o w e v e r , t h i s d e c r e a s e i n h e m i c e l l u l o s e c o n t e n t d i d n o t r e s u l t i n h i g h e r x y l o s e c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d ; w h i c h m a y i n d i c a t e a g r e a t e r r a t e o f x y l o s e u t i l i z a t i o n t h a n x y l o s e d e g r a d a t i o n . I n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d , t h e d e c r e a s e d h e m i c e l l u l o s e a f t e r 1 0 0 ( I p o s t - e n s i l i n g m a y c o r r e s p o n d t o t h e i n c r e a s e i n g a l a c t o s e a n d p e n t o s e c o n t e n t . T h e s e c h a n g e s i n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s a n d w a t e r s o l u b l e s u g a r s i n t h e m o r e m a t u r e s i l a g e m a y i n d i c a t e a g r e a t e r h e m i c e l l u l o s e h y d r o l y s i s t h a n u t i l i z a t i o n , a n d s u p p o r t t h e o b s e r v a t i o n o f a l i m i t e d m i c r o b i a l a c t i v i t y i n t h e m o r e m a t u r e s i l a g e a f t e r t h e i n i t i a l t h i r d o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . E v e n t h o u g h f e r m e n t a t i o n p a t t e r n s s e e m t o d i f f e r o v e r t i m e i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 a n d 1 1 0 d , f i n a l p H , a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( e x c e p t a c e t i c a c i d ) w e r e s i m i l a r . H o w e v e r , t h e r e s i d u a l W S C w e r e h i g h e r i n t h e s i l a g e f r o m t h e m o r e m a t u r e f o r a g e . T h e s e r e s u l t s s u p p o r t t h e o b s e r v a t i o n s o f T j a n d r a a t m a d j a e t a l . ( 1 9 9 4 ) w h o f o u n d t h a t f i n a l p H a n d r e s i d u a l W S C i n c r e a s e d w i t h i n c r e a s i n g m a t u r i t y i n f o r a g e s e n s i l e d i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . P a n d i t h a r a t n e e t a l . ( 1 9 8 8 ) , a l s o r e p o r t e d d i f f e r e n t f e r m e n t a t i o n p a t t e r n s i n g u i n e a g r a s s e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t a f t e r t w o r e g r o w t h p e r i o d s . 1 7 3 S i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t i n f l u e n c e t h e o r g a n i c a c i d h y d r o l y s i s i n f o r a g e s o r g h u m r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y ( D a t a n o t s h o w e d ) . F o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 o r 1 1 0 d a n d t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s h a d l o w e r p H ( P < 0 . 0 1 ) t h a n c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d o n l y w i t h t h e e n z y m e m i x t u r e ( T a b l e 4 - 7 ) . T h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t t r e a t m e n t s h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 5 ) l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n t h a n n o n - i n o c u l a t e d s i l a g e s r e g a r d l e s s o f m a t u r i t y s t a g e o f t h e f o r a g e . S i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t i n f l u e n c e o t h e r p o p u l a t i o n s o f m i c r o b i a l g r o u p s a n d d i d n o t a l t e r t h e l e v e l s o f a c e t i c , p r o p i o n i c , b u t y r i c a c i d s o r e t h a n o l ( T a b l e 4 - 8 ) . L a c t i c a c i d l e v e l s w e r e s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) f o r s i l a g e s t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t . P r e v i o u s r e s u l t s ( C h a p t e r 2 ) i n d i c a t e d t h a t t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t d e c r e a s e d g l u c o s e , b u t i n c r e a s e d f r u c t o s e c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a f t e r 9 0 d . I n t h i s e x p e r i m e n t , s m a l l i n c r e a s e s i n g a l a c t o s e a n d a r a b i n o s e c o n t e n t s i n f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d t h e e n z y m e w a s o b s e r v e d ( T a b l e 4 - 9 ; P < 0 . 0 1 ) . T h e o t h e r s u g a r s w e r e a s i m i l a r l e v e l s f o r t h e f o u r t r e a t m e n t s . E v e n t h o u g h W S C c o n t e n t s w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y i n f l u e n c e d b y s i l a g e a d d i t i v e s , a n u m e r i c a l t r e n d f o r l o w e r g l u c o s e a n d g r e a t e r f r u c t o s e c o n t e n t d u e t o i n o c u l a t i o n w a s o b s e r v e d , w h i c h s u p p o r t t h e r e s u l t s f r o m C h a p t e r 2 . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s w e r e s i m i l a r f o r a l l t r e a t m e n t s ( T a b l e 4 - 1 0 ) . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e d t h a t t h e b e n e f i c i a l c h a n g e s d u e t o i n o c u l a t i o n ( p H , l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n , a n d f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ) w e r e g r e a t e r i n f o r a g e s o r g h u m l a “ c M i p o “ A 1 0 0 3 0 6 0 1 9 6 3 1 r . . . . t a n i d 1 1 1 1 “ M 0 0 0 0 0 0 0 0 e . . . . l i s n e m “ 0 8 3 2 1 1 3 9 u A 0 1 9 8 h . . . . g r o s e g a r o f f M ' 3 0 8 9 E 0 S . 2 0 0 . . . o n o i s s e c c u s l ' ' ' “ a 1 8 0 7 3 i 5 5 4 3 1 b . . . . 1 4 4 4 4 o r c i m d n a H p ’ “ ' ' n 7 5 8 5 o . . . . 0 8 1 0 0 9 4 4 4 4 ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a e h m e t i n a n i h t i w n m y u t l i o u t a m c e m e e e e e v v v v v i i i i i t t t t t t t t t t n n n n n t e m l m m m m l l l l d d d d d i g u u u u u y y y y y d d d d d a I a a a a l d a c c c c c z z z z z l l l d l o o o o o a a i n n n n n s o o o o o n n n n n + f + + + + i i i i i e e e e e r a a a a a y t i r u t a m f o e g a t s d e v n i a t i s d e v i d A e g a l i t s n f e o m n s o t c f n E e . 7 S E E E N E E N E l l l N E N E N E E l l t s a e y o e g a e h t t n s i y b e s t p i v r g a t n i c y t s r a i e n e e i v r s a i f t . e i r i e e d r m v d p u l i a u a e t t c a d e t s a i l r l h i e a d e m g e c t a t i o i a d k b r m G d d t e I c i n m f i a f l i s o l o i a e s m r g e n u s o a g f h a h r l a o s ' c a c i a a b e r i e t t e s n r s i o f s w o t d f f i o t f r a r o t c o s - l 4 e e c t a c c m e t s a t t a t n d g c r l t a n e a H f b I I E L L p Y a T n e e / a e a f t u f e t f f f n S E E I c M “ “ “ “ “ “ ' M a t u r i t y ( d ) P r o b a b i l i t y . 0 8 . 0 0 1 . 0 0 1 . 6 7 5 0 1 . 0 0 “ Q F C D O ) N P I - D O I D Q V I ‘ 0 . t h O m e m m o m q q p q h o m m [ \ f ‘ l ‘ f ‘ I D I D I D V ( 0 0 0 0 I O I D I D I D m m m m 5 5 9 m N M N N o n — c m o c a n t o : - o m h h m m m fi m m m fi m m m m 0 3 0 0 6 1 1 7 4 5 8 0 . 8 5 5 2 1 2 5 2 . . 4 . 8 0 4 2 5 8 . . 6 1 1 0 6 2 9 9 0 2 8 0 8 7 3 . . . . . “ 6 7 a n i d e l i s n e m u h g r o s e g a r o M 2 4 1 0 f f o s t c u d o r p - d E 0 1 0 S . . . 9 9 4 7 1 1 1 1 4 4 3 3 5 9 2 5 r ) 1 0 . 0 < P ( n 2 2 2 2 0 0 0 0 0 0 0 9 0 0 0 0 1 e . . . . . . . . . . . . . 1 . . . 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 n o i t d ) a ( e f f i d g n i d a t e y t i r u t a M n e m r e f n o y t i r u t a m f o e g a t s d n a s e h t c u d o r p - d n e n o i t a t n e m r e f a n i h t i w n e e e e v v v v i i i i t t t t t t t t n n n n i e e e i i i e a a a a d d d d m m m l l l m l d d d d y y y y u u u u a I I a a I a l c c c c z z z z o o o o o o o o n n n n n n n n + + + + m N E E N E E N E E l l l E N E l y u t l i v o i c r t i d t d n a e m e n g a o l r i i s v n M f o e s l D a g t c c i e p f o 0 0 f r 1 E t / g n , u t a e m m a f o s e e g a h t t n s i y s b t p e i v r n y i c a t t s e i i r e r d e m v u d p i t a u e t h i t d d f a a s m e g e f k a o t o i e s l e n d i c r d g . d i o d t a 8 c i c i i — u c a t c c 4 a d a a i e i i r i e P t o n r c c i n o c o g u a f r l a o r h i t e t n s s o i d i f w f r o o t a s c t t a d l t n t y p c c r b e c t o m - r d n e e e a a f t f a c a r u e T e n F E A L B P t f n f S E E I M “ “ “ “ ' “ E t h a n o l S i l a g e A d d i t i v e N o a d d i t i v e E n z y m e l n o c u l a n t E + I 9 0 3 . 0 5 ' 3 . 0 8 ’ 3 . 3 1 “ 3 . 4 3 “ . 0 0 2 . 0 7 1 P r o b a b i l i t y A G M d . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 A “ M “ . 0 1 2 1 7 5 “ M y t i l i b a b o r P “ A 5 9 6 1 1 8 9 6 5 7 6 7 . . . . 1 1 1 0 0 0 0 . . 0 0 . 8 2 5 1 0 9 0 8 2 0 4 0 . . . . 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S i m i l a r t o r e s u l t s f r o m C h a p t e r 2 , t h e e n z y m e m i x t u r e d i d n o t i m p r o v e t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . A e r o b i c S t a b i l i t y A c i d i t y o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) a s l e n g t h o f e x p o s u r e i n c r e a s e d w i t h b o t h m a t u r i t i e s l T a b l e 4 - 1 1 ) . A m u c h l a r g e r i n c r e a s e ( P < 0 . 0 5 ) i n p H o c c u r r e d i n t h e 1 1 0 d m a t u r i t y f o r a g e t h a n t h e m o r e i m m a t u r e f o r a g e . M a x i m u m t e m p e r a t u r e d u r i n g a i r e x p o s u r e w a s a t t a i n e d w i t h i n 1 d a n d 2 d f o r t h e 9 0 a n d 1 1 0 d m a t u r i t y s i l a g e s , r e s p e c t i v e l y . F o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , a c e t i c a c i d w a s l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e t h a n d 0 , b u t u n c h a n g e d t h e r e a f t e r ( T a b l e 4 — 1 2 ) . L a c t i c a c i d l e v e l s w e r e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) b y 7 5 a n d 6 3 % d u r i n g t h e e x p o s u r e p e r i o d f o r t h e 9 0 a n d 1 1 0 d m a t u r i t y f o r a g e s . C l e a r l y , t h e l a c t i c a c i d w a s m e t a b o l i z e d b y t h e s p o i l a g e o r g a n i s m s . E t h a n o l c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e t h a n ( I 0 i n t h e 9 0 d f o r a g e . A n o p p o s i t e t r e n d w a s o b s e r v e d i n t h e 1 1 0 d m a t u r i t y f o r a g e . E t h a n o l c o n t e n t w a s l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) a f t e r 3 a n d 7 d o f a i r e x p o s u r e a s c o m p a r e d t o d 0 . I n t h e i m m a t u r e f o r a g e , e t h a n o l w a s p r o d u c e d d u r i n g t h e e x p o s u r e p e r i o d w h e r e a s i t d i s a p p e a r e d w i t h t h e m o r e m a t u r e f o r a g e . A n e t d i s a p p e a r a n c e o f g l u c o s e d u r i n g t h e e x p o s u r e p e r i o d w a s n o t o b s e r v e d i n t h i s s t u d y ( T a b l e 4 - 1 3 ) . H o w e v e r , t h e r e s i d u a l g l u c o s e 1 0 3 0 0 0 . . 1 1 0 0 0 0 . . ' M E 2 6 . 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E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d P r o b a b i l i t y D c F “ I P o m n 0 m m 0 0 h 0 . 0 3 0 . 2 8 0 . 0 5 . 0 0 1 . 7 0 2 . 0 0 1 1 8 0 3 6 0 . 1 1 3 0 0 0 0 2 . . 0 . 1 0 0 . 0 6 2 8 0 0 . . ' 7 3 5 2 2 M 0 0 0 0 0 E . . . . . 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E f f e c t s o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d l e n g t h o f a e r o b i c e x p o s u r e o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m A r a b i n o s e o w n 0 m m c a n o w n o w n 9 0 0 . 3 8 “ 0 . 1 4 ' 0 . 0 9 “ 0 . 2 5 “ 0 . 0 3 , P r o b a b i l i t y M b D C . 9 8 6 M ‘ “ D “ I . 3 5 1 . 0 0 1 . 0 1 4 1 8 1 1 8 2 l e v e l s f r o m d 0 w e r e g r e a t e r f o r t h e m a t u r e f o r a g e ( 1 1 0 d ) a s c o m p a r e d t o t h e l e s s m a t u r e ( 9 0 d ) . F r u c t o s e ( P < 0 . 0 1 ) , x y l o s e ( P < 0 . 0 1 ) , a n d a r a b i n o s e ( P < 0 . 0 6 ) c o n t e n t d e c r e a s e d o v e r t h e p e r i o d o f a e r o b i c e x p o s u r e w i t h b o t h f o r a g e m a t u r i t i e s . G a l a c t o s e l e v e l s d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) d u r i n g t h e e x p o s u r e p e r i o d w i t h t h e m a t u r e f o r a g e w i t h l i t t l e c h a n g e i n t h e i m m a t u r e f o r a g e . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e t h a t f o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , t h e m a j o r i t y o f t h e d e t e r i o r a t i o n o c c u r r e d w i t h i n t h e f i r s t 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e . H o w e v e r , b a s e d o n d i f f e r e n c e s i n u t i l i z a t i o n o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s a n d r e s i d u a l w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s o f t h e s i l a g e s d u r i n g e x p o s u r e t o a i r , i t a p p e a r s t h a t t h e m i c r o b i a l e c o l o g y a s s o c i a t e d w i t h t h e d e t e r i o r a t i o n ( e . g . y e a s t s a n d m o l d s ; s u g a r u t i l i z i n g o r l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t s ) w a s d i f f e r e n t b e t w e e n s t a g e s o f m a t u r i t y . A l l t r e a t m e n t s a d d e d t o t h e i m m a t u r e f o r a g e s o r g h u m a n d e n s i l e d h a d s i m i l a r p H v a l u e s u p o n e x p o s u r e t o a i r ( T a b l e 4 - 1 4 ) . H o w e v e r , w i t h f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d , s i l a g e t r e a t e d w i t h b a c t e r i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s h a d h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) p H t h a n s o r g h u m e n s i l e d w i t h o u t a n i n o c u l a n t . T e m p e r a t u r e t e n d e d t o b e g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) f o r t h e i m m a t u r e f o r a g e a s c o m p a r e d t o t h e m a t u r e f o r a g e , a n d t h e i n o c u l a t e d s i l a g e s a l s o h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) t e m p e r a t u r e s . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n s i l a g e a d d i t i v e a n d s t a g e o f m a t u r i t y f o r a c e t i c a n d l a c t i c a c i d s w a s n o t o b s e r v e d ( T a b l e 4 - 1 5 ) . E t h a n o l c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) i n f o r a g e e n s i l e d a t 9 0 d o f g r o w t h a n d c o n t a i n i n g t h e “ M 0 1 “ 0 A 0 . r i a y t i l i o “ a 0 b 1 3 1 . 1 0 t 0 b 0 o M . . r P 1 “ 0 1 0 A 0 0 . . ' 5 4 M 4 0 E . 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I n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d o f g r o w t h , i n o c u l a t e d s i l a g e s h a d l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) e t h a n o l c o n t e n t t h a n n o n - i n o c u l a t e d s i l a g e s . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n s i l a g e a d d i t i v e a n d s t a g e o f m a t u r i t y w a s o b s e r v e d ( P < 0 . 0 1 ) f o r f r u c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e ( T a b l e 4 - 1 6 ) . M o s t o f t h e c h a n g e s i n t h e s e s u g a r s o c c u r r e d i n t h e m o r e m a t u r e f o r a g e s . F r u c t o s e l e v e l s w e r e l o w e s t i n t h e i n o c u l a t e d t r e a t m e n t s , w i t h e n z y m e o n l y t r e a t m e n t b e i n g i n t e r m e d i a t e . G l u c o s e a n d g a l a c t o s e w e r e l o w e s t ( P < 0 . 0 1 ) f o r t h e i n o c u l a t e d a s c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l t r e a t m e n t s . T h e e n z y m e t r e a t m e n t s i n c r e a s e d t h e l e v e l s o f x y l o s e a n d a r a b i n o s e i n t h e m a t u r e f o r a g e d u r i n g e x p o s u r e p e r i o d w i t h s m a l l e r e f f e c t s i n t h e i m m a t u r e f o r a g e s . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t f u r t h e r s u p p o r t t h e p r e v i o u s c o n c l u s i o n f r o m C h a p t e r 2 , t h a t s i l a g e a d d i t i v e s d o n o t i m p r o v e t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . R a t h e r , f o r b o t h s t a g e s o f m a t u r i t y , a d d i t i o n o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s a p p e a r s t o i n c r e a s e d t h e r a t e o f d e t e r i o r a t i o n . I m p l i c a t i o n s U t i l i z a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s i n t h e f o r m o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t s h o w e d l i t t l e i m p r o v e m e n t o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s , a n d d i d n o t p r e v e n t t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a f t e r 9 0 o r 1 1 0 d o f g r o w t h i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . I n f a c t t h e b a c t e r i a l i n o c u l a n t u t i l i z e d i n d e 8 1 9 1 s 0 9 1 0 o p x y t e i l i b a b o r P e g a l i s m u h 3 0 0 0 . . . . 6 8 0 . g 4 1 1 r 1 0 0 o 0 0 0 . . . 1 0 0 . s e g a r o f f o s t n 4 0 e . t n o c e t a r d y h o b r a 0 " " " ‘ " h h 9 h " 5 6 0 2 2 6 6 8 ) 4 0 1 0 0 2 1 1 . . . . . . . . 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 . c 0 ) d e ( l b y u t < P ( r e l i f o r s u t a M r e t a w n o y t i " 9 " I " 2 6 8 2 9 2 7 8 2 1 1 0 f i d g n i d 1 0 1 2 1 1 1 1 1 2 1 a 1 . . . . . . . . . . . . 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 e h e t a r d y r h u t a m f o e g e e e e e v v v v v i i i i i t t t t t a n n n n n t t t t t t a a a a a i i e e i i i e e e s m m l l m m m l l l t d d d d d n d d d d d y y y y y u u u u u a a I a a a I l o b r a c a n i h t i w n d e n m a n c c c c c m z z z z z l + + o o o o o u o o o n n n n n o o n n n n n l + + H y o t N E E N E E N E E N E E N E E l l l l l o s r e v i v fi i n d e d l a a c e g i a p l o i r s t f a o n s i t r c i e a f f o E t . 6 1 i c r u e t m a a m s f o e h e t g a n i t s s t y p b i r e c v s n y i a t t r e e p i i e d r m u v d u s i a t e t h i e a e t g d m k d a i f a l f l o i o n e s u r e g o g h f a r l a o t r i t i e e e e s s w s n s s o d i f f o 4 t e s o o r o o t c t c s a n c t t a d c a a o e u l l b G a T u l l r a y F X G c c r n e e e e a f t f t f n f M S E E I " ' “ ” ° ° C a r b o h y d r a t e , g / 1 0 0 g D M S i l a g e A d d i t i v e 9 0 1 1 0 S E M ' A " M ° A ’ M ‘ A r a b i n o s e 0 . 5 8 0 . 3 4 0 . 2 3 0 . 2 5 0 . 0 9 " 0 . 0 6 9 0 . 1 O " 0 . 0 8 ' 9 0 . 1 3 0 . 1 4 0 . 0 7 0 . 0 6 0 . 1 5 9 0 . 7 1 ' 0 . 3 1 ' 0 . 4 2 ' 0 . 0 8 0 . 0 3 0 . 0 2 0 . 0 6 . 2 5 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 3 4 . 0 0 1 . 5 8 6 1 8 6 1 8 7 t h i s e x p e r i m e n t i n c r e a s e d t h e r a t e o f d e t e r i o r a t i o n ( e . g . t e m p e r a t u r e , u n d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s , s u b s t r a t e a v a i l a b i l i t y ) . T h e r e f o r e , e v a l u a t i o n o f s e l e c t e d b a c t e r i a l s t r a i n s m o r e s u i t a b l e f o r t r o p i c a l f o r a g e s s h o u l d b e c o n d u c t e d t o i m p r o v e t h e q u a l i t y o f e n s i l e d f e e d s t u f f s i n t r o p i c a l a r e a s . H I C H I G Q N S T A T l l l l l l l l l i l i l l l l “ l 1 ‘ v . v . : ’ v r ‘ . f . s s f fi ! ) w . H l i : 3 n r 5 h I a . . l c l A ! . 6 a i p V ? . h ” . . . ? k . k “ . I z i . ‘ 4 q . fl 1 $ a e 3 I l k 1 fl n L . 3 $ . . u u i i . . J I ! : 5 . ‘ I . n 7 3 ! ' i F . . ! ” . ? 5 ? 3 . n a r u c ‘ 9 9 1 . 9 . . M F R I » . . 3 ‘ l e ‘ 4 1 9 6 6 4 8 0 L c U h fl I i i B Q v R a e A n s r R S i Y t t a y t e M l I V I l fi l fl fl ’ l fl fl j fl m fl i w fl f i fl fl l fl l f fi fl f n i i fi I S T U D I E S O N T H E E F F I C A C Y O F A H O M O F E R M E N T A T I V E L A C T I C A C I D - P R O D U C I N G B A C T E R I A L I N O C U L A N T A N D C O M M E R C I A L , P L A N T C E L L - W A L L - D E G R A D I N G E N Z Y M E M I X T U R E S T O E N H A N C E T H E F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S A N D A E R O B I C S T A B I L I T Y O F F O R A G E S E N S I L E D I N T E M P E R A T E A N D T R O P I C A L E N V I R O N M E N T S B v A b n e r A n t o n i o R o d r i g u e z - C a r i a s V O L U M E I I A D I S S E R T A T I O N S u b m i t t e d t o M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y i n p a r t i a l f u l f i l l m e n t o f t h e r e q u i r e m e n t s f o r t h e d e g r e e o f D O C T O R O F P H I L O S O P H Y D e p a r t m e n t o f A n i m a l S c i e n c e 1 9 9 6 C H A P T E R 5 F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S O F J O H N S O N G R A S S E N S I L E D A T T W O R E G R O W T H P E R I O D S W I T H S I L A G E A D D I T I V E S A b s t r a c t A n e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s ( m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s ) o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f J o h n s o n g r a s s ( S o r g h u m h a / a p e n s e ) e n s i l e d a f t e r t w o r e g r o w t h p e r i o d s . J o h n s o n g r a s s w a s h a r v e s t e d a t 4 5 ( 2 2 . 6 4 D M % ) a n d 1 1 0 d o f r e g r o w t h ( 4 3 . 8 4 D M % ) a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r e E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o . F o r a g e a t e a c h v e g e t a t i v e s t a g e w a s p l a c e d i n t o P V C l a b o r a t o r y s i l o s a n d a s s i g n e d t o t w o t r e a t m e n t s : n o a d d i t i v e ( c o n t r o l ) a n d e n z y m e s p l u s i n o c u l a n t . E n z y m e w a s a p p l i e d a t . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l a n d t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a t 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l . T h r e e s i l o s p e r t r e a t m e n t a t e a c h r e g r o w t h p e r i o d w e r e o p e n e d a f t e r 7 e n s i l i n g p e r i o d s ( O , 1 , 3 , 7 , 1 4 , 2 1 a n d 1 0 0 d ) a n d a n a l y z e d f o r p H , l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s ( L A B ) , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( a c e t i c , l a c t i c , a n d b u t y r i c a c i d s , e n d e t h a n o l ) , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( g l u c o s e , 1 8 8 1 8 9 f r u c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e ) . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t w a s d e t e r m i n e d a t d O a n d 1 0 0 p o s t - e n s i l i n g . F e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s i n J o h n s o n g r a s s s i l a g e v a r i e d d u e t o r e g r o w t h p e r i o d . F o r b o t h s t a g e s o f r e g r o w t h , J o h n s o n g r a s s t r e a t e d w i t h m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s h a d l o w e r p H a n d h i g h e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t s t h a n c o n t r o l s i l a g e s . S i l a g e a d d i t i v e s a l s o d e c r e a s e d b u t y r i c a c i d c o n t e n t i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 4 5 d , a n d e t h a n o l c o n t e n t i n t h e m o r e m a t u r e f o r a g e . I n t r o d u c t i o n I n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s , t h e i n t r o d u c t i o n o f s i l a g e a s a m a j o r f e e d c o m p o n e n t i n t o r u m i n a n t d i e t s t o a v o i d t h e f l u c t u a t i o n i n f o r a g e q u a n t i t y a n d q u a l i t y d u r i n g t h e d r y s e a s o n r e p r e s e n t s a n u r g e n t n e e d . J o h n s o n g r a s s ( S o r g h u m h a l a p e n s e ) i s a p e r e n n i a l p l a n t t h a t g r o w s w i l d i n s o u t h w e s t P u e r t o R i c o . B e c a u s e o f i t s a g g r e s s i v e n e s s , a b u n d a n c e , a n d h i g h y i e l d , p r o d u c t i o n o f s i l a g e c o u l d r e p r e s e n t a t o o l t o i m p r o v e i t s u t i l i z a t i o n . H o w e v e r , i n t r o p i c a l c l i m a t e s , f o r a g e s a r e g e n e r a l l y l o w i n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s a n d a t e n s i l i n g , r e s u l t i n f e r m e n t a t i o n s t h a t f a i l t o a c h i e v e a c c e p t a b l e p o p u l a t i o n s o f l a c t i c a c i d p r o d u c i n g b a c t e r i a ( M c D o n a l d , 1 9 9 1 ) . R e s u l t s f r o m C h a p t e r s 2 a n d 4 i n d i c a t e d t h a t a d d i t i o n o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s i m p r o v e d t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e n s i l e d a t 9 0 o r 1 1 0 d o f g r o w t h . 1 9 0 T h e r e i s l i m i t e d i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e e f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f a n e n z y m e m i x t u r e a n d b a c t e r i a l i n o c u l a n t o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t o f P u e r t o R i c o . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r e E x p e r i m e n t S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o . J o h n s o n g r a s s ( S o r g h U m h a l a p e n s e l w a s h a r v e s t e d m a n u a l l y a t 4 5 ( 2 2 . 6 4 D M % ) a n d 1 1 0 d ( 4 3 . 8 4 D M % ) o f r e g r o w t h a n d c h o p p e d i n t o 2 . 5 c m p i e c e s . C h o p p e d f o r a g e f r o m e a c h v e g e t a t i v e s t a g e w a s a s s i g n e d t o t w o t r e a t m e n t s ; n o a d d i t i v e ( C o n t r o l ) a n d e n z y m e s ( V i s c o z y m e m L , N o v o N o r d i s k B i o i n d u s t r i a l s , I n c . F a r n h a m , S u r v e y , U K ) p l u s m i c r o b i a l i n o c u l a n t ( E c o s y l m ' Z e n e c a B i o p r o d u c t s , F a r n h a m , S u r v e y , U K ) , a n d p a c k e d i n t o P V C s i l o s . L a b o r a t o r y s i l o s w e r e f i t t e d w i t h r e l e a s e v a l v e s f o r p r o v i d e g a s e s c a p e a n d m a i n t a i n e d a t r o o m t e m p e r a t u r e . T h e e n z y m e a d d i t i v e c o n s i s t e d o f a n e n z y m e m i x t u r e c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B - g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e a n d w a s a p p l i e d a t 0 . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l . T h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t c o n s i s t e d o f L a c t o b a c i / I u s p l a n t a r u m a n d w a s a p p l i e d t o t h e f o r a g e a t a r a t e o f 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l . T r i p l i c a t e s a m p l e s o f e a c h t r e a t m e n t a t e a c h v e g e t a t i v e s t a t e w e r e 1 9 1 o p e n e d a t 0 , 1 , 3 , 7 , 1 4 , 2 1 , a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g . A f t e r s i l o s w e r e o p e n e d , f i f t y g o f f o r a g e w e r e p l a c e d i n t o 4 5 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r a n d h o m o g e n i z e d f o r 5 m i n u t e s i n a S t o m a c h e r a p p a r a t u s ( T e k m a r 3 5 0 0 , T e k m a r , C i n c i n n a t i , O H ) . H o m o g e n a t e s w e r e s t r a i n e d t h r o u g h 8 l a y e r s o f c h e e s e c l o t h a n d a n a l y z e d f o r p H w i t h a p H m e t e r f i t t e d w i t h a c o m b i n a t i o n e l e c t r o d e ( F i s h e r S c i e n t i f i c , P i t t s b u r g h , P A ) . F o r L A B e n u m e r a t i o n , t e n - f o l d s e r i a l d i l u t i o n s w e r e p r e p a r e d f o r e a c h s a m p l e a t e a c h e n s i l i n g d a y i n s t e r i l e p e p t o n e s o l u t i o n ( 0 . 0 1 % ) . P l a t e s w e r e p o u r e d w i t h a R o g o s a S L a g a r ( D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , M I ) , i n c u b a t e d f o r 4 8 h a t 4 0 ° C a n d m a n u a l l y e n u m e r a t e d w i t h a d i g i t a l c o l o n y c o u n t e r . F e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s w e r e d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e - e x c l u s i o n H P L C ( B I O R A D a m i n e x H P X - 8 7 H ) f o l l o w i n g t h e g e n e r a l p r o c e d u r e s o f C a n a l e e t a l . ( 1 9 8 4 ) . M o b i l e p h a s e c o n s i s t e d o f . 0 0 5 N H 2 8 0 4 a t a f l o w r a t e o f . 9 m l / m i n . C o l u m n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 6 5 ° C b y a n e x t e r n a l c o l u m n h e a t e r ( W a t e r s M i l l i p o r e ) . T h r e e m l o f h o m o g e n a t e f r o m e a c h t r e a t m e n t w e r e f i l t e r e d t h r o u g h . 2 p m i o n c h r o m a t o g r a p h y s y r i n g e f i l t e r s ( G e l m a n A c r o d i s k , 2 5 m m , A n n A r b o r , M I ) i n t o 3 m l H P L C s a m p l e v i a l s ( N a t i o n a l S c i e n t i f i c , A t l a n t a , G A ) . F i l t e r e d s a m p l e s w e r e s t o r e d a t - 2 0 ° C u n t i l a n a l y s i s . F i f t e e n [ l l o f t h e f i l t e r e d s a m p l e s w e r e i n j e c t e d b y a n a u t o i n j e c t o r ( W a t e r W I S P 7 1 2 ) a n d a n a l y t e s w e r e d e t e c t e d b y r e f r a c t i v e i n d e x ( W a t e r s 4 1 0 r e f r a c t i v e i n d e x d e t e c t o r ) . P e a k h e i g h t s w e r e q u a n t i f i e d b y a c o m m e r c i a l H P L C s o f t w a r e p a c k a g e ( T u r b o c h r o m 3 , P E N e l s o n ) a n d c o m p a r e d t o s t a n d a r d s f o r t h e s e l e c t e d 1 9 2 a n a l y t e s ( S u p e l c o ) . W a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( g l u c o s e , f r u c t o s e , x y l o s e , a n d a r a b i n o s e ) w e r e a l s o d e t e r m i n e d b y i o n e x c h a n g e - e x c l u s i o n H P L C ( B i o r a d a m i n e x H P X - 8 7 P ) e x c e p t t h a t 2 0 p l o f t h e f i l t e r e d s a m p l e w e r e i n j e c t e d . M i l l i p o r e w a t e r w a s u s e d f o r t h e m o b i l e p h a s e a t a f l o w r a t e o f . 6 m l / m i n a n d t h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 8 5 ° C . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s ; N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n N D F a n d A D F ) , a n d c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n A D F a n d l i g n i n ) , w e r e d e t e r m i n e d a t 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g ( G o e r i n g a n d V a n S o e s t , 1 9 7 0 ; V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 1 M e t h o d A ) . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h 2 ( r e g r o w t h p e r i o d s ) b y 2 ( s i l a g e a d d i t i v e s ) b y 6 ( e n s i l i n g p e r i o d s ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s ( S t e e l a n d T o r r i e , 1 9 7 8 ) u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l P r o c e d u r e o f S A S ( 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l s f o r p H , l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s w e r e a s f o l l o w s : Y i j k l = u + A , 8 , . ( A * B ) , i + C k + ( A * C ) , . , + ( B * C ) , . , + ( A * B * C ) , j . , + E W W h e r e : Y i j k l = I n d i v i d u a l r e s p o n s e v a r i a b l e m e a s u r e d ( e . g . p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ) , u = O v e r a l l m e a n 1 9 3 A i = E f f e c t o f r e g r o w t h p e r i o d B i = E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e A ‘ I B i i = I n t e r a c t i o n o f r e g r o w t h p e r i o d b y s i l a g e a d d i t i v e C , = E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g A * C i k = I n t e r a c t i o n o f r e g r o w t h p e r i o d b y d a y o f e n s i l i n g B * C j k = I n t e r a c t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g A * B * C i j k = I n t e r a c t i o n o f r e g r o w t h p e r i o d b y s i l a g e a d d i t i v e b y d a y o f e n s i l i n g E m a = r a n d o m r e s i d u a l e r r o r B o n f e r r o n i - t t e s t w a s u s e d f o r m e a n s e p a r a t i o n ( S A S , 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l f o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s w a s s i m i l a r e x c e p t t h a t o n l y 2 ( 0 a n d 1 0 0 d ) e n s i l i n g p e r i o d s w e r e u t i l i z e d . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n T h e p H o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h w a s r e d u c e d ( P < 0 . 0 1 ) a f t e r d 1 p o s t - e n s i l i n g a n d r e m a i n e d c o n s t a n t t h e r e a f t e r ( T a b l e 5 - 1 ) . H o w e v e r , i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h , p H d e c r e a s e d m o r e s l o w l y ( P < 0 . 0 1 ) a n d a f t e r t h e f i r s t 2 1 d p o s t - e n s i l i n g i n c r e a s e d t o 4 . 9 4 b y d - 1 0 0 . T h i s w o u l d s u g g e s t t h a t a l e s s e f f i c i e n t f e r m e n t a t i o n o c c u r r e d i n t h e m a t u r e f o r a g e . A d d i t i o n a l l y , t h e f i n a l p H w a s l o w e r i n s i l a g e m a d e f r o m t h e i m m a t u r e a s c o m p a r e d t o m a t u r e f o r a g e . F o r b o t h r e g r o w t h y t i l i b a b o r P ) 1 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a e h m h " 9 9 h ' 9 ' ' ) 5 3 3 2 8 4 7 0 e d 8 6 8 3 5 9 9 8 t . . . . . . . . i 4 4 4 “ 9 9 9 I I 7 7 6 6 9 9 9 r ‘ * ' g e 1 0 7 4 2 4 7 7 7 7 6 0 6 5 . . . . . . 1 . . . 2 0 2 4 6 6 8 7 7 7 ( d o i r e P h t w o R 4 4 4 4 4 4 0 4 1 6 h 1 8 . 6 n a n i h t i w n m u l o c g n e i l m i a s s n e e f o h t n y i a d y s t p i 0 b 1 2 0 1 0 3 7 4 r 1 1 2 d c 1 n s o a i d e o g r r e p i n e m u r i p l s e e l a h p e i i h t s t r k h w i n e f l t o e t o n a w r f m u o o g r o h r e r g r s y r a e e e n r r d h t i o f w d i f f r o o t f s a n c o t t a d c n c r g a e e e / e a f u t f M t n f f f S E c I “ E ' 9 ' ‘ ' " ' ° T a b l e 5 - 1 . E f f e c t o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n p H a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n o f J o h s o n g r a s s s i l a g e I t e m D a y o f E n s i l i n g 4 5 1 1 0 S E M ' R " 0 " R " D d p H 0 5 . 6 9 ' 5 . 8 5 ' . 0 8 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 4 . 9 8 9 " 5 . 1 4 9 4 . 9 3 " h L a c t i c a c i d b a c t e r i a “ 0 4 . 7 4 i 4 . 6 6 i . 1 1 6 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 1 9 4 1 9 5 p e r i o d s , l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n r e a c h e d i t s m a x i m u m c o u n t s w i t h i n 1 d p o s t - e n s i l i n g , t h e n d e c r e a s e d t h r o u g h o u t t h e e n s i l i n g p e r i o d . G r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n n u m b e r s w e r e f o u n d i n t h e m o r e i m m a t u r e s i l a g e ; w h i c h c o r r e s p o n d t o t h e h i g h e r a c i d i t y o b s e r v e d t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . A c e t i c a c i d l e v e l s i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d i n t h e i m m a t u r e f o r a g e w h e r e a s l e v e l s w e r e e s s e n t i a l l y t h e s a m e o v e r t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d i n t h e m a t u r e f o r a g e ( T a b l e 5 - 2 ) . L a c t i c a c i d c o n t e n t r e a c h e d a m a x i m u m ( P < 0 . 0 1 ) v a l u e b y d - 3 w i t h f o r a g e f r o m b o t h r e g r o w t h p e r i o d s . H o w e v e r , t h e e x t e n t a n d r a t e o f d e c l i n e t i l l o p e n i n g w a s g r e a t e r i n t h e s i l a g e f r o m t h e i m m a t u r e f o r a g e . L a c t i c a c i d l e v e l s w e r e v e r y l o w i n a l l s i l a g e s i n t h i s s t u d y . F o r b o t h r e g r o w t h p e r i o d s , b u t y r i c a c i d w a s d e t e c t e d t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . I n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 1 1 0 d , c o n c e n t r a t i o n s o f b u t y r i c a c i d w e r e b e l o w t h e m i n i m u m v a l u e ( . 1 % D M ) t o i n f l u e n c e t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s ( M c D o n a l d e t a l . , 1 9 9 1 ) , b u t i n t h e m o r e i m m a t u r e s i l a g e , b u t y r i c a c i d r e a c h e d l e v e l s h i g h e r t h a n . 1 % D M a f t e r 7 , 1 4 , a n d 2 1 d o f f e r m e n t a t i o n . T h e g r e a t e r b u t y r i c a c i d l e v e l s f o u n d i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a f t e r 4 5 d o f r e g r o w t h , m a y r e s u l t f r o m t h e h i g h w a t e r c o n t e n t o f t h e f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g ; w h i c h m a y h a v e p r o m o t e d t h e g r o w t h o f m i c r o o r g a n i s m s a s s o c i a t e d w i t h b u t y r i c a c i d p r o d u c t i o n ( e . g . c l o s t r i d i a , y e a s t s a n d m o l d s ) . P r o p i o n i c a c i d w a s n o t d e t e c t e d t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d i n e i t h e r r e g r o w t h p e r i o d ( D a t a n o t s h o w n ) . 1 0 0 . 2 3 0 . 4 5 0 . 1 0 0 . 6 3 5 . e g a l i s s s a r g n o s n h o 1 ) J ' M f E 1 5 0 9 7 3 1 0 0 S . . . o s t c u d o 0 . 0 < P ( r e f f r i p - d g d I " " " ' n " 3 2 8 3 6 e 0 ) 9 2 5 3 5 0 1 2 1 0 2 7 1 1 9 1 i d 1 0 7 4 4 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 d 1 1 4 0 6 0 ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' h 9 “ ' ' ' n ( 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . a 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 n o i t d o i a r t e n P e m r h e t f r n g e 5 R 4 o g n i l i s n e f o s y a g d n d n a d i l i s n E o 0 f i r o 3 7 0 ( ( 3 7 ) ) 4 4 1 1 1 1 1 1 2 2 e y 1 p h a D t n e h m e t i n a n i h t i w n m u l g o n c i l e i s m n a e s f e o h t y a n d i s y t b p i d r o c i s r r e r g e r f M D 9 o 0 t c 0 1 e / f f 9 E , n o d t i i c d i c . 2 - a e d p e o g p u i n h m r t i s e w e l e h p i o k s t i n r h e g l f t n e o w f u o o r r o f r h r g o y t r a e i e n w r d o d f i s r o o t n c a d t t a a c e c r n e e e a M f f t t n f f “ S " E I E c f t u a d a a t c 5 o n r e e P l m - b d r a e n c i t e c i r y t u T F E ' " ” " ° A B 9 P r o b a b i l i t y R b D O R ‘ D ‘ L a c t i c a c i d ( 1 ) 3 7 1 4 2 1 1 0 0 E t h a n o l 0 0 ° . - N N C 0 - 0 m b m m O P Q F O u . u . u . 5 7 ¢ “ ) o q o . 0 I L m u 8 L 0 0 < r . . . . . 0 ' 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 . 0 0 ° 0 . 0 5 F 0 . 1 0 E 0 . 0 7 E 0 . 0 7 E 0 . 0 5 F 0 . 0 3 F . 0 7 4 . 0 0 1 . 0 0 1 1 9 6 1 9 7 E t h a n o l c o n t e n t i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 5 ) a f t e r 2 1 d p o s t - e n s i l i n g i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 4 5 a n d a f t e r 3 d i n t h e 1 1 0 d s i l a g e , t h e n f o r b o t h r e g r o w t h p e r i o d s , e t h a n o l d e c r e a s e d u n t i l t h e e n d o f t h e f e r m e n t a t i o n p e r i o d . I n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h , g l u c o s e c o n t e n t d e c l i n e d r a p i d l y ( T a b l e 5 - 3 ) , w h i c h c o r r e s p o n d s w i t h c h a n g e s o b s e r v e d i n a c i d i t y a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s . A f t e r 1 d p o s t - e n s i l i n g , g l u c o s e c o n t e n t c o n t i n u e d t o d e c r e a s e b u t a t a s l o w e r r a t e . I n t h e 1 1 0 d r e g r o w t h s i l a g e , g l u c o s e l e v e l s w e r e l o w e r a n d d e c l i n e d t i l l d - 1 0 0 . F r u c t o s e c o n t e n t w a s v a r i a b l e a n d n o c o n s i s t e n t t r e n d s e m e r g e d e v e n t h o u g h a s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n w a s d e t e c t e d . X y l o s e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) t h r o u g h o u t t h e e n s i l i n g p e r i o d w i t h t h e i m m a t u r e f o r a g e , b u t d i d n o t c h a n g e w i t h t h e m o r e m a t u r e f o r a g e . A r a b i n o s e r e m a i n e d s i m i l a r t h r o u g h o u t t h e f e r m e n t a t i o n . C o n c e n t r a t i o n s o f W S C e v a l u a t e d i n t h i s e x p e r i m e n t w e r e l o w e r i n t h e m o r e m a t u r e s i l a g e t h a n i n t h e l e s s m a t u r e f o r a g e ; w h i c h c o r r e s p o n d e d t o t h e h i g h e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t o b s e r v e d i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a f t e r 4 5 0 1 o f r e g r o w t h . H e m i c e l l u l o s e c o n t e n t d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) o v e r t i m e f o r s i l a g e s f r o m b o t h r e g r o w t h p e r i o d s ( T a b l e 5 - 4 ) . C e l l u l o s e , N D F , a n d A D F c o n t e n t s w e r e g r e a t e r i n t h e m o r e m a t u r e f o r a g e . T h e s i l a g e s i n t h i s e x p e r i m e n t d i d n o t r e a c h a p H o f 4 . 2 , o r a l a c t i c a c i d c o n c e n t r a t i o n g r e a t e r t h a n 1 . 5 % D M ; w h i c h a r e t h e r e c o m m e n d e d l e v e l s f o r a s t a b l e s i l a g e ( M c C u l l o u g h , 1 9 7 8 ) . T h e l o w c o n c e n t r a t i o n s o f W S C f o u n d 7 0 0 . 8 7 6 . 6 1 0 . 1 3 5 1 0 0 . . " " " " " ' 9 ' ' ' 1 8 6 5 6 5 4 3 9 6 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 . . . . . . . . . . 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 " ' " 2 2 7 1 . . 0 0 e s o c u e s o t c u l r G F T a b l e 5 - 3 . E f f e c t o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e _ R e g r o w t h P e r i o d ( d ) P r o b a b i l i t y C a r b o h y d r a t e , 9 / 1 0 0 9 D M D a y o f E n s i l i n g 4 5 1 1 0 S E M " R " 0 " R ‘ D ‘ 0 1 3 7 1 4 2 1 1 0 0 . 0 0 1 X y l o s e . 0 2 7 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 I ‘ I ‘ O H O Q O O O O O O O P P A r a b i n o s e . 0 1 2 . 5 5 0 . 0 0 1 . 7 1 1 F F P 8 o o o q o o O P N . 5 : 0 O O o r m h g g g o — m h v . _ . _ 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 0 6 6 6 6 0 0 0 0 0 F F P N v — m m o o q q q q o O 3 2 ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n " E f f e c t o f r e g r o w t h p e r i o d ‘ E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g " I n t e r a c t i o n o f r e g r o w t h p e r i o d b y d a y o f e n s i l i n g “ 9 " M e a n s w i t h u n l i k e s u p e r s c r i p t s i n t h e s a m e c o l u m n w i t h i n a c a r b o h y d r a t e h e a d i n g d i f f e r ( P < 0 . 0 1 ) 1 9 8 ‘ D ' R 3 3 3 6 5 1 2 7 5 9 2 1 . . . . 5 0 7 1 1 0 4 1 0 . . . 0 2 0 1 0 0 0 0 7 . . . 7 2 5 0 . . 0 1 3 5 0 5 8 1 2 2 8 8 4 1 . . . . . . 0 0 8 6 4 4 7 7 2 2 3 3 5 2 4 1 1 5 9 5 . . . . 5 8 6 9 9 4 6 6 3 3 g n i l i s n E f o y a D M 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 g n i l i s n e f o y a d y b d o i r e n d D o a p 9 0 g e i n h m r i e l t w e p i s o 0 h 1 / 9 t h n r t g e f w e o f o r o r , r s e t a r d y e o o g y f s o l u l r e a e r d n d f f i o e t r o o l t t o d a s a c h e c c l r o c u F F n e e e a f f b i t r D D m a e N A l l e t f f n S E E I C H C ' " ° " T a b l e 5 - 4 . E f f e c t o f r e g r o w t h p e r i o d a n d d a y s o f e n s i l i n g o n s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f J o h s o n g r a s s s i l a g e R e g r o w t h P e r i o d ( d ) P r o b a b i l i t y 1 1 0 R b D O 2 8 . 0 2 2 7 . 1 7 3 3 . 8 7 3 3 . 1 7 4 2 . 0 2 4 2 . 8 0 . 1 7 2 1 9 9 2 0 0 i n J o h n s o n g r a s s a t 4 5 o r 1 1 0 d o f r e g r o w t h m a y b e t h e m a j o r l i m i t i n g f a c t o r t o t h e u s e o f e n s i l i n g t o i m p r o v e t h e u t i l i z a t i o n o f J o h n s o n g r a s s . H o w e v e r , o t h e r f a c t o r s s u c h a s t h e p r e s e n c e o f u n d e s i r a b l e m i c r o o r g a n i s m s ( e . g . e n t e r o b a c t e r i a c e a e , y e a s t s a n d m o l d s ) n o t e n u m e r a t e d i n t h i s e x p e r i m e n t m a y a l s o h a v e i n f l u e n c e d t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . F o r b o t h r e g r o w t h p e r i o d s , J o h n s o n g r a s s t r e a t e d w i t h t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s h a d l o w e r ( P < 0 . 0 1 ) p H a n d h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s t h a n c o n t r o l s i l a g e s ( T a b l e 5 - 5 ) . A c e t i c a c i d l e v e l s w e r e s i m i l a r f o r t h e t r e a t e d a n d u n t r e a t e d s i l a g e s ( T a b l e 5 - 6 ) . H o w e v e r , s i l a g e s f r o m t h e s h o r t e r r e g r o w t h p e r i o d h a d m o r e a c e t i c a c i d t h a n t h e 1 1 0 d r e g r o w t h . L a c t i c a c i d l e v e l s w e r e i n c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) b y t h e u s e o f t h e i n o c u l a n t a n d e n z y m e m i x t u r e . T h e c o n t r o l s i l a g e f r o m t h e 1 1 0 d r e g r o w t h p e r i o d t e n d e d t o h a v e m o r e l a c t i c a c i d t h a n t h e 4 5 d r e g r o w t h f o r a g e . U t i l i z a t i o n o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s t h e e n z y m e m i x t u r e d e c r e a s e d ( P < 0 . 0 1 ) b u t y r i c a c i d c o n t e n t i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 4 5 d a n d e t h a n o l i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h . N o e f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e b y r e g r o w t h p e r i o d i n t e r a c t i o n o n c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s w a s o b s e r v e d ( T a b l e 5 - 7 ) . F o r b o t h r e g r o w t h p e r i o d s , h e m i c e l l u l o s e w a s l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) i n s i l a g e s c o n t a i n i n g t h e i n o c u l a n t p l u s t h e e n z y m e , b u t n o e f f e c t s o n N D F , A D F , a n d c e l l u l o s e w e r e o b s e r v e d . T h e s e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t a d d i t i o n o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e t o J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 4 5 o r 1 1 0 d o f r e g r o w t h s h o w e d a s m a l l y t i l i b a b o r P 8 1 0 . 1 0 0 . 1 0 0 . 1 4 ) 1 0 0 . . 0 < P ( r e f f i d ) 8 6 d 8 6 n ( i l ' ‘ g d o i r e P h t . . 6 6 d a e h m e t i w n o a r g e 9 ' 7 9 7 2 . . R 6 7 n i h t i w n m u e l v o i t i d c e d m a a e s l g o l r t n a e l h i t + s n o i C E y b s d o i n r a d e o e p t p i r c s r e e i h m v p r e i u t l e t w a s ' p h i o i a r t h d e r i r e t t g f t a i d k e o w a l e o e m n r c r u r g a g r o l s h b r e o f a h d i c a c e n r s i e t o r i f w d f i f r o o t f a o c s t t a d n c c r g i n e e e a / t a f t f u e c a L t f n f S E E I f M c ' " ' " ° " T a b l e 5 - 5 . E f f e c t o f s i l a g e a d d i t i v e s a n d r e g r o w t h p e r i o d o n p H a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s o f J o h n s o n g r a s s s i l a g e I t e m S i l a g e A d d i t i v e 4 5 1 1 0 S E M ' R " A ° R ' A ‘ p H C o n t r o l 4 . 9 7 ' 5 . 3 6 ' . 0 4 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 0 1 E + l 4 . 7 0 9 4 . 7 2 9 2 0 1 0 1 1 0 1 0 . . 5 7 4 . e g a l i ) ) s s s a r g n o s h o J f o s t c u d o r p - d n e n o i t 0 6 1 3 3 0 0 5 0 . . . ' M E S ) 0 8 3 7 8 2 a d 0 0 3 6 0 1 5 0 0 . . 0 0 < < P P ( ( r r e e f f f f i i d d g g n n i i d d a a e e h h t t c c u u d d o o r r p p - - d d n n e e n n t ( . . . . . o 1 o n 0 0 0 0 0 1 e m r e f n o d o i r e P h t d w o o i r 0 8 7 5 ’ 2 r e p g 0 3 2 1 6 e 5 . . . . . R 4 0 0 0 0 i i t t a a t t n n e e m m r r e e f f a a n n i i h h t t i h i t w o r g e w w n n m m u u e l l v o r o d n e v i c c t i d e e a m i t d m a a a s e i s e s v d l g i d l l e e t A o o r l l o i r r l e t a l h h i t t d s t + t + n n + n d a g a l n n o o o E E E C C C e i g S i i y b s s t t d p p o i i i r r n r c c a d e o e s s p r r e e e i h m v p p r a l i s f o t c e f f E . 6 - M 9 0 0 1 / 9 n , o t D i t u u e e t w s p s h i o t d e r h e k f t i a i d k g o w e l l o n e r n r g u r u o f a r o g l h h r e i t d s e n r d t i i c i c t c u c a d i d f f i w w o i i r o o t a d a a s a c s 5 n t o c t t a e P e n r c i t c i i r d n c c r n a e e e a l - m e t y a f t f e b r d c a u e c t a e n A L B t f n f S E E I M M : ’ T F E ' " 5 " ° 5 . 1 8 ‘ 0 . 0 4 0 O E t h a n o l C o n t r o l 0 . 0 4 0 . 0 7 E E + I 0 . 0 6 0 . 0 4 F . 0 2 7 . 0 4 1 . 0 2 1 . 0 0 1 P r o b a b i l i t y fi l l . 0 0 1 A C . 5 4 3 . 0 0 1 . 0 0 1 R " A ‘ I . 7 4 0 . 0 2 1 2 0 2 s 6 0 5 A ‘ 1 4 7 4 0 2 9 8 5 3 8 s 1 7 3 9 9 4 6 a . . . . . . . ' r R g n o s n h 4 9 0 5 3 0 3 9 9 4 4 1 3 7 o ° 1 8 0 2 2 0 8 J A . . . . . . . f o s t n e t n o c e t a r d y h o b r a c l a ” 1 1 6 0 R 1 0 0 5 5 0 0 0 . . . . ' M 2 8 0 6 8 4 2 r 2 0 1 0 3 9 0 u E 0 0 0 0 7 5 . S . . . . . . 1 v A l l l l l l l l l o o o o o o o o I l l l r r r r r r r r i t t t t t t + t t n n n n n n n n + + + + d E l o o o o o o o o i C E C C C C C E C E C E a e g a l S i e M / a E s 9 , e n t fl a r e o e s o w e o e r r r g o f a r o l g o r e i l e n r s . d 7 - 5 y h o b fl m e e s s o fi m s o o t e n s i m m c c o b l u l e c i e s d f f i r o o t o c a l a t t u c c r d l e e e n e u F l r r m u a l a fl m l f f t b F a l y r e e t n f f D C G X A A H C l fi S E E I a T ' ‘ " ° t c u r t s d n a e l b u 0 1 1 5 4 l o s r e t a w n o d o i r e p h t w o r g e r d v e n a i t i s d e d i t i d e g a s f D o 9 t e 0 c g e a f l f i 0 1 3 6 0 5 8 1 8 6 8 8 4 9 . . . . . . 0 9 8 6 4 4 7 6 2 2 3 3 5 1 9 7 2 4 7 7 9 5 8 1 . . . . . . 7 6 9 9 3 3 6 6 3 3 3 3 e v i t i d d a e g a l s y b d o i r n a d p e o e i h m v r e i t e w t p h i o t d r h f t d g R e g r o w t h P e r i o d ( d ) P r o b a b i l i t y 8 3 N ! - E + I G O O ) V ' C O P M N F 0 0 N A ! 0 0 E + I E + I I ‘ m 7 ‘ 0 ) N P _ q q q o o q o o o o o o o o ( 5 0 ' 0 0 ' d o d o ' N D F 2 8 . 0 2 2 7 . 1 7 4 2 . 0 2 4 2 . 8 0 . 0 1 8 . 0 0 2 . 7 0 9 . 4 6 0 . 7 9 4 . 3 7 2 m m 2 0 4 i m p r o v e m e n t i n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s , a s e v i d e n c e d b y l o w e r p H , h i g h e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t . T h e s i l a g e a d d i t i v e a l s o d e c r e a s e d t h e b u t y r i c a c i d c o n t e n t i n t h e l e s s m a t u r e f o r a g e a n d e t h a n o l i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a f t e r 1 1 0 d o f r e g r o w t h . H o w e v e r , q u a l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e d i d n o t r e a c h t h e c r i t e r i a t o b e c o n s i d e r e d a s a g o o d q u a l i t y s i l a g e . R e s e a r c h t o e v a l u a t e o t h e r s o u r c e s o f a d d i t i v e s a n d a p p r o p i a t e a p p l i c a t i o n r a t e s f o r t h e i n o c u l a n t o r t h e e n z y m e n e e d t o b e c o n d u c t e d f o r t r o p i c a l f o r a g e s . I m p l i c a t i o n s T r e a t m e n t o f J o h n s o n g r a s s w i t h s i l a g e a d d i t i v e s ( m i c r o b i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s ) i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s , r e g a r d l e s s o f s t a g e o f r e g r o w t h . H o w e v e r , m o r e r e s e a r c h n e e d s t o b e c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e p o t e n t i a l o f J o h n s o n g r a s s a s a f o r a g e s o u r c e i n t r o p i c a l c l i m a t e s . C H A P T E R 6 C E L L - W A L L D I S A P P E A R A N C E I N F O R A G E S O R G H U M A N D J O H N S O N G R A S S A F T E R T R E A T M E N T W I T H A C O M M E R C I A L M U L T I - E N Z Y M E P R E P A R A T I O N A b s t r a c t T h e e f f e c t s o f a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n o n c e l l w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m t w o t r o p i c a l f o r a g e s w e r e d e t e r m i n e d . J o h n s o n g r a s s ( S o r g h u m h a l a p e n s e ) a t 4 5 ( 2 2 . 6 4 D M % ) a n d 1 1 0 ( 4 3 . 8 4 D M % ) d o f r e g r o w t h , a n d f o r a g e s o r g h u m ( H i g h e n e r g y h y b r i d , A g r i p r o - s e e d , H e r e f o r d , T X ; 2 6 . 0 4 D M % ) a t 9 0 d o f g r o w t h w e r e h a r v e s t e d a n d t r i p l i c a t e s a m p l e s w e r e i n c u b a t e d i n s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( p H = 4 . 5 ) a t 4 0 ° C f o r 7 d w i t h a c o m m e r c i a l m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , l 3 - g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e . T h e e n z y m e w a s a p p l i e d a t 0 , 1 , 4 , a n d 8 X t h e a p p l i c a t i o n r a t e r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . R e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e o f t h e e n z y m e w a s . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l . C e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e w a s c a l c u l a t e d b y t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e i n i t i a l ( d 0 ) a n d f i n a l ( d 7 ) N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e , a n d c e l l u l o s e c o n t e n t f r o m 2 0 5 2 0 6 e a c h s a m p l e . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) f o r J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d t h a n f o r J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o r f o r f o r a g e s o r g h u m . F o r b o t h f o r a g e s e v a l u a t e d , a p p l i c a t i o n o f t h e e n z y m e m i x t u r e a t 8 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e i n c r e a s e d N D F , h e m i c e l l u l o s e a n d c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e i n c o m p a r i s o n t o t h e 0 , 1 o r 4 X l e v e l s . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e d t h a t c e l l - w a l l f r a c t i o n d i s a p p e a r a n c e d i f f e r s a m o n g f o r a g e e v a l u a t e d w h e n t r e a t e d w i t h a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n . R a t e s o f a p p l i c a t i o n g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d a p p e a r e d t o i m p r o v e d c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m . I n t r o d u c t i o n B e c a u s e o f s e a s o n a l r a i n f a l l , p r o d u c t i o n o f h i g h q u a l i t y c o n s e r v e d f o r a g e f o r u s e a s a f e e d s t u f f d u r i n g d r y p e r i o d s i s a c r i t i c a l n e e d i n t r o p i c a l c l i m a t e s . P r e s e r v a t i o n o f f o r a g e b y e n s i l i n g r e q u i r e s a d e q u a t e a m o u n t s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( W S C ) t o e n s u r e a f e r m e n t a t i o n d o m i n a t e d b y l a c t i c a c i d p r o d u c i n g b a c t e r i a ( L A B ) . H o w e v e r , t r o p i c a l g r a s s e s a r e g e n e r a l l y l o w i n W S C ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) t h e r e b y , l i m i t i n g t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n t e m p e r a t e c l i m a t e s , u t i l i z a t i o n o f c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s t o a c c e l e r a t e t h e f e r m e n t a t i o n b y p r o v i d i n g h i g h e r a m o u n t s o f W S C p r o d u c e d f r o m t h e h y d r o l y s i s o f s t a r c h , c e l l u l o s e a n d h e m i c e l l u l o s e t o o l i g o s a c h a r i d e s a n d s i m p l e s u g a r s h a s b e e n s t u d i e d w i t h v a r i a b l e r e s u l t s ( J a s t e r a n d M o o r e , 1 9 8 8 ; V a n V u u r e n e t a l . , 1 9 8 9 ; C h e n e t a l . , 1 9 9 4 ) . R e p o r t s h a v e s h o w n 2 0 7 t h a t t h e e f f i c a c y o f a n e n z y m e p r e p a r a t i o n c a n b e i n f l u e n c e d b y f o r a g e s p e c i e s , e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s a n d a p p l i c a t i o n r a t e s ( H e n d e r s o n e t a l . , 1 9 8 2 ; S p o e l t r a a n d V a n W i k s e l a a r , 1 9 9 2 ) . T h e r e i s l i m i t e d i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e u t i l i z a t i o n o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s t o i m p r o v e s i l a g e f e r m e n t a t i o n i n t r o p i c a l c l i m a t e s . W e p r e v i o u s l y s h o w e d ( R o d r i g u e z e t a l . , 1 9 9 4 ) t h a t a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n a p p l i e d a t t h e r e c o m m e n d e d r a t e d i d n o t i m p r o v e t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m . T h e o b j e c t i v e o f t h i s s t u d y w a s t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t s o f t h i s m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s o n t h e i n v i t r o c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m g r o w n i n P u e r t o R i c o . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e J o h n s o n g r a s s ( S o r g h u m h a l a p e n s e ) a t 4 5 ( 2 2 . 6 4 D M % ) a n d 1 1 0 ( 4 3 . 8 4 D M % ) d o f r e g r o w t h a n d f o r a g e s o r g h u m ( H i E n e r g y H y b r i d , A g r i p r o s e e d , H e r e f o r d , T X ) a t 9 0 d o f g r o w t h w e r e h a r v e s t e d b y h a n d a t t h e L a j a s A g r i c u l t u r e E x p e r i m e n t a l S t a t i o n , U n i v e r s i t y o f P u e r t o R i c o . S a m p l e s f r o m e a c h f o r a g e w e r e o v e n - d r i e d a t 6 0 ° C f o r 7 2 h , g r o u n d i n a U d y m i l l ( A r t h u r T h o m a s C 0 . P h i l a d e l p h i a ; 1 m m s c r e e n ) , a n d s t o r e d a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 7 - 3 0 ° C ) u n t i l a n a l y s i s . F o r c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e d e t e r m i n a t i o n , t r i p l i c a t e s a m p l e s f r o m e a c h f o r a g e ( . 5 g ) w e r e t r e a t e d w i t h f o u r l e v e l s o f a l i q u i d , m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n ( V i s c o z y m e T M 1 2 0 L , N o v o N o r d i s k B i o i n d u s t r i a l s , D a n b u r y , C T ) c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B - g l u c a n a s e , 2 0 8 h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e ( T a b l e 6 - 1 ) . T h e e n z y m e p r e p a r a t i o n w a s a p p l i e d o n a d r y w e i g h t b a s i s a t 0 , 1 , 4 a n d 8 X t h e r a t e s u g g e s t e d b y t h e m a n u f a c t u r e r ( . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l ) . F o r a g e s a m p l e s w e r e i n c u b a t e d a t 4 0 ° C f o r 7 d i n 7 5 m l t e s t t u b e s c o n t a i n i n g t h e r e s p e c t i v e e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d s u f f i c i e n t s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( . 1 M ; p H = 4 . 5 ) t o p r o v i d e a t o t a l v o l u m e o f 5 0 m l . P l a n t c e l l - w a l l f r a c t i o n s ; N D F , A D F , h e m i c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n N D F a n d A D F ) , a n d c e l l u l o s e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n A D F a n d l i g n i n ) w e r e d e t e r m i n e d a t t h e b e g i n n i n g a n d e n d o f t h e i n c u b a t i o n p e r i o d ( G o e r i n g a n d V a n s o e s t , 1 9 7 0 ; V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 1 , m e t h o d A ) . D i s a p p e a r a n c e s o f p l a n t c e l l - w a l l f r a c t i o n s w e r e c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e i n i t i a l a n d f i n a l p r o p o r t i o n s o f e a c h f r a c t i o n i n t h e f o r a g e r e s i d u e . S t a t i s t i c a l a n a l y s e s w e r e p e r f o r m e d a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n b y a n a l y s i s o f v a r i a n c e ( S t e e l a n d T o r r i e , 1 9 8 0 ) u t i l i z i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l P r o c e d u r e o f S A S ( 1 9 9 0 ) u s i n g t h e f o l l o w i n g m o d e l : Y i j k = u + A i + B j + ( A ‘ I B ) i j + E i j k W h e r e : Y = P l a n t c e l l - w a l l f r a c t i o n d i s a p p e a r a n c e ( i . e N D F , A D F ) u = O v e r a l l m e a n A = E f f e c t o f f o r a g e s p e c i e s B = E f f e c t o f e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e A * B = I n t e r a c t i o n o f f o r a g e s p e c i e s b y e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e 2 0 9 T a b l e 6 - 1 . D e s c r i p t i o n o f t h e c o m m e r c i a l m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n e v a l u a t e d — T r a d e N a m e V i s c o z y m e T M 1 2 0 L S u p p l i e r N o v o N o r d i s k B i o - l n d u s t r i a l s D a n b u r y , C T S o u r c e A s p e r g i l l u s n i g e r A c t i v e E n z y m e s a r a b i n a s e c e l l u l a s e B — g l u c a n a s e h e m i c e l l u l a s e x y l a n a s e D e c l a r e d A c t i v i t y 1 2 0 F B G / m l 1 R e c o m m e n d e d A p p l i c a t i o n R a t e . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l O p t i m u m p H c o n d i t i o n s 3 . 3 - 5 . 5 O p t i m u m t e m p e r a t u r e c o n d i t i o n s 4 0 - 5 0 ° C 9 p r o t e i n / 1 0 0 m l e n z y m e 8 1 F B G = F u n g a l b e t a - g l u c a n a s e ; w h e r e 1 F 8 6 i s t h e a m o u n t o f e n z y m e w h i c h u n d e r s t a n d a r d c o n d i t i o n s l i b e r a t e s g l u c o s e o r o t h e r r e d u c i n g c a r b o h y d r a t e w i t h a r e d u c i n g p o w e r c o r r e s p o n d i n g t o 1 u m o l g l u c o s e p e r m i n u t e . 2 1 0 E = R a n d o m r e s i d u a l e r r o r M e a n s e p a r a t i o n w a s p e r f o r m e d b y a B o n f e r r o n i - t t e s t . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n I n i t i a l s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f t h e f o r a g e s e v a l u a t e d ( T a b l e 6 - 2 ) a r e s i m i l a r t o v a l u e s p r e v i o u s l y r e p o r t e d f o r t r o p i c a l g r a s s e s ( M i n s o n a n d M c L e o d , 1 9 7 0 ; V i c e n t e - C h a n d l e r e t a l . , 1 9 8 3 ) . A s e x p e c t e d , J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h h a d h i g h e r c e l l - w a l l m a t e r i a l t h a n J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d . F o r a g e s o r g h u m h a d a l o w e r c e l l - w a l l c o n t e n t t h a n J o h n s o n g r a s s , b u t h i g h e r l i g n i n c o n t e n t . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e w a s h i g h e r ( P < . 0 0 1 ) i n J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h t h a n i n J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h , o r f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h ( F i g u r e 6 - 1 ) . F o r b o t h f o r a g e s p e c i e s e v a l u a t e d , a d d i n g t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n a t 4 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e i n c r e a s e d N D F d i s a p p e a r a n c e a s c o m p a r e d t o u n t r e a t e d f o r a g e , b u t N D F d i s a p p e a r a n c e w a s s i m i l a r t o t h e u n t r e a t e d f o r t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e ( F i g u r e 6 - 2 ) . I n c r e a s i n g t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n t o 8 X t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e p r o v i d e d g r e a t e r ( P < 0 . 0 1 ) N D F d i s a p p e a r a n c e t h a n 0 , 1 a n d 4 X t h e s u g g e s t e d a p p l i c a t i o n r a t e . T h i s r e s u l t d i f f e r s f r o m p r e v i o u s l y r e p o r t e d e x p e r i m e n t s e v a l u a t i n g f o r a g e s o r g h u m i n t e m p e r a t e c l i m a t e s ( R o d r i g u e z e t a l . , 1 9 9 5 ) , w h e r e i n c r e a s e d a p p l i c a t i o n r a t e s o f t h e s a m e e n z y m e d i d n o t i m p r o v e N D F d i s a p p e a r a n c e 4 4 0 0 2 3 1 2 4 8 D . . . . . S 0 0 0 1 1 d 0 9 - m u h g r o S 0 8 6 2 1 0 1 3 8 8 . . . . . 4 8 5 9 5 6 2 3 2 m u h g 9 3 5 2 6 r 7 0 7 2 0 o s D . . . . . S 0 0 1 1 1 e s g e a i r c o d f d n e p S 0 1 e 1 a g 7 3 8 4 s s a r o - 8 5 7 3 4 7 n . . . . . 9 8 3 1 a o 4 r s F 6 3 3 3 g n o s n h o J f o n h o J 5 9 6 6 6 ‘ 3 0 2 1 2 s 0 . . . . . n 8 0 0 0 1 1 o i t c a r f l l a d w - l l e c 5 4 — n t 8 3 5 7 7 n 1 3 3 0 8 o a s . . . . . l p n 3 7 1 6 2 h 6 3 3 3 l o a i t i n i f o n o i t i s o p m J n o t i a e t s i n o i o c o v C l e a r u D f e l s . l l d o 2 e r l l n - a c a u i 6 w - m l g n F F i d l n e l D D e i e a l l N H C A L b a T m e C t S ‘ 2 1 1 D h a p p e u a n c a ( a s ) F o r a g e S p e c i e s S E M = . 4 1 8 [ - J o h n a o n 4 5 d I J o h n a o n 1 1 0 d I S o r g h u m 9 0 d I F l g u r e 6 - 1 . N D F d i s a p p e a r a n c e t h o r n J o h n s o n g r a c e a n d f o r a g e s o r g h u m a e r l l t r e a t m e n t w i t h a c o m m e r c i a l e n z y m e m l x t u r e D l l a p p e l a n o e ( 9 6 ) O N A Q 1 2 1 0 S E M I . 4 8 2 a E n z y m e A p p l i c a t l o n R a t e . 0 . 1 . 4 D 8 F i g u r e 6 — 2 . E n z y m e a p p l l c a t l o n r a t e o n N D F d l a a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n t a u a n d f o r a g e s o r g h u m 2 1 3 f r o m f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h . I n t h e l a t t e r s t u d y , N D F d i s a p p e a r a n c e w a s s i m i l a r f o r a p p l i c a t i o n r a t e s u p t o 8 t i m e s t h e m a n u f a c t u r e r r e c o m m e n d a t i o n . I t w o u l d a p p e a r t h a t t h e s u g g e s t e d a p p l i c a t i o n r a t e f o r t h i s e n z y m e p r e p a r a t i o n m a y b e i n a p p r o p r i a t e f o r f o r a g e s h a r v e s t e d i n t r o p i c a l c l i m a t e s . A c i d d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h a n d t r e a t e d w i t h t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n a t 1 a n d 4 X t h e s u g g e s t e d r a t e w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 1 ) t h a n u n t r e a t e d s a m p l e s , b u t l o w e r t h a n 8 X t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e ( F i g u r e 6 - 3 ) . N o n e o f t h e e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e s i m p r o v e d A D F d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h a s c o m p a r e d t o t h e u n t r e a t e d f o r a g e . I n f o r a g e s o r g h u m , A D F d i s a p p e a r a n c e i n c r e a s e d a s a p p l i c a t i o n r a t e o f t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n i n c r e a s e d . T h e l o w e r r e s p o n s e t o t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n o b s e r v e d i n t h e l i g n o - c e l l u l o l y t i c f r a c t i o n o f J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h m a y b e e x p l a i n e d b y a g r e a t e r t h i c k n e s s o f t h e c e l l - w a l l a s c o m p a r e d t o m o r e i m m a t u r e f o r a g e s ( V a n S o e s t , 1 9 9 4 ) . A s p l a n t s m a t u r e , c h a n g e s o c c u r i n t h e d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n w i t h i n a n d b e t w e e n g l u c o s e p o l y m e r s w i t h i n t h e c e l l - w a l l , c r y t a l l i n i t y o f t h e c e l l u l o s e f r a c t i o n i s i n c r e a s e d , a n d p h y s i c a l i n c r u s t a t i o n o f c e l l u l o s e w i t h l i g n i n i s g r e a t e r . T h e s e f a c t o r s c o l l e c t i v e l y r e n d e r t h e p l a n t m a t e r i a l l e s s s u s c e p t i b l e t o e n z y m e d e g r a d a t i o n . H e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e i n J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d o f ) 6 9 ( s o n - r a e p p a s i D 2 1 4 8 S E M - . 6 2 6 g 6 i . g : D 2 J o h n s o n 4 5 d J o h n s o n 1 1 0 d I O I 1 I 4 : 3 8 t . 2 . J A E n z y r n a M u t a t i o n R a h F i g u r e 6 - 3 . I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e s p e c i e s o n A D F d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m 1 2 S E M = . 4 7 9 J o h n s o n 4 5 d J o h n s o n 1 1 0 d S o r g h u m 9 0 d . 0 . 1 I 4 E I B E n z y m a l e p l c a t b n fl a b F i g u r e 6 - 4 . I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e s p e c i e s o n h e m i c e l l u l a s e d l e a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m 2 1 5 r e g r o w t h w a s o n l y i m p r o v e d w h e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e w a s 8 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e ( F i g u r e 6 - 4 ) . I n J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h , h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e i n c r e a s e d a s e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e w a s i n c r e a s e d . A p p l i c a t i o n r a t e s o f 1 a n d 4 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e i n s o r g h u m f o r a g e y i e l d e d g r e a t e r h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e t h a n u n t r e a t e d f o r a g e , b u t l o w e r t h a n 8 X t h e s u g g e s t e d r a t e . I n t h i s s t u d y , f o r b o t h f o r a g e s p e c i e s e v a l u a t e d , h e m i c e l l u l a s e d i s a p p e a r a n c e w a s o b s e r v e d i n t h e c o n t r o l s a m p l e s , w h i c h m a y h a v e r e s u l t e d f r o m m i c r o b i a l a c t i v i t y o r s o l u b i l i t y o f t h e h e m i c e l l u l o s e . I t a p p e a r s t h a t s o l u b i l i t y o f h e m i c e l l u l o s e i s g r e a t e r i n m o r e i m m a t u r e f o r a g e s , b u t i t i s l e s s s u s c e p t i b l e t o e n z y m e a t t a c k . T h i s c o n c e p t i s s u p p o r t e d b y t h e o b s e r v a t i o n o f i n c r e a s e d h e m i c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e a s e n z y m e l e v e l i n c r e a s e d . C e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h , a n d f o r a g e s o r g h u m f o l l o w e d a s i m i l a r p a t t e r n t o A D F d i s a p p e a r a n c e w h e n t r e a t e d w i t h t h e m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n ( F i g u r e 6 - 5 ) . W i t h b o t h f o r a g e s , h i g h e r c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e v a l u e s w e r e o b t a i n e d w h e n t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n w a s a p p l i e d 8 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e . W i t h J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d , c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e w a s a l s o i m p r o v e d w h e n t h e e n z y m e c o m p l e x w a s a p p l i e d 8 X t h e r e c o m m e n d e d r a t e a s c o m p a r e d t o 0 , 1 , a n d 4 X t r e a t m e n t s , b u t a t a l o w e r o r d e r o f m a g n i t u d e t h a n o b s e r v e d w i t h t h e i m m a t u r e f o r a g e . T h e r e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t s u p p o r t t h e p r e m i s e t h a t f o r a g e s h a r v e s t e d ) 5 ' ( e c n a r a e p p a s i D 2 1 6 1 0 “ ‘ F l . \ . J o h n s o n 4 5 d J o h n s o n 1 1 0 d I 0 I 1 I 4 ( : 1 8 E n z y m e A p p l c a t l o n R a t s M u l b b s o f t h e m e a d r a t s b y t h e m a n u f a c t u r e r F i g u r e 6 - 5 . I n t e r a c t i o n b e t w e e n e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e a n d f o r a g e s p e c i e s o n c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m 2 1 7 a t a n e a r l y s t a g e o f m a t u r i t y a r e m o r e s u s c e p t i b l e t o e n z y m e d e g r a d a t i o n t h a n f o r a g e h a r v e s t e d a t l a t e r s t a g e o f g r o w t h . T h i s v a r i a b i l i t y i n r e s p o n s e t o t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n a m o n g f o r a g e s p e c i e s e v a l u a t e d m a y b e d u e t o d i f f e r e n c e s i n c o n c e n t r a t i o n o f i n d i v i d u a l c a r b o h y d r a t e s , c o v a l e n t b o n d i n g o f p h e n o l i c a c i d s t o c e l l - w a l l , o r c r y s t a l l i n e s t r u c t u r e o f t h e c e l l u l o s e i n t h e p l a n t c e l l w a l l . I n s i m i l a r e x p e r i m e n t s c o n d u c t e d i n t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t s , S h e p e r d a n d K u n g , J r . ( 1 9 9 4 ) s h o w e d t h a n a n e n z y m e a d d i t i v e w a s m o r e e f f e c t i v e i n a l t e r i n g t h e f i b e r c o n t e n t o f c o r n a t m i l k s t a g e t h a n b l a c k l a y e r s t a g e o f m a t u r i t y . T h e e n z y m e p r e p a r a t i o n e v a l u a t e d i n t h i s e x p e r i m e n t c o n s i s t e d o f a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g f i v e d i f f e r e n t e n z y m s . I n d i v i d u a l c o n c e n t r a t i o n o f e a c h e n z y m e w e r e n o t p r o v i d e d , a n d d i s a p p e a r a n c e o f s i m p l e s u g a r s ( a r a b i n o s e , x y l o s e ) , o r s p e c i f i c s u g a r s i n t h e h e m i c e l l u l o s e ( x y l a n ) f r a c t i o n w e r e n o t m e a s u r e d . H o w e v e r , i t s a p p e a r s t h a t a n e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e i s n e e d e d i n y o u n g e r f o r a g e s , w h e r e a s o n l y a h e m i c e l l u l a s e i s n e e d e d i n m o r e m a t u r e f o r a g e s . S i m i l a r r e s u l t s w e r e o b s e r v e d w i t h f o r a g e s g r o w n u n d e r t e m p e r a t e c o n d i t i o n s ( H o f f m a n e t a l . , 1 9 9 5 ) ; w h e r e a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n r e d u c e d c e l l w a l l c o n t e n t i n a l f a l f a h a r v e s t e d a t l a t e - b l o o m b y r e d u c i n g t h e h e m i c e l l u l o s e a n d p e c t i n f r a c t i o n s , b u t h a d a l i t t l e e f f e c t o n t h e A D F a n d c e l l u l o s e f r a c t i o n s . 2 1 8 I m p l i c a t i o n s C e l l w a l l d i s a p p e a r a n c e d i f f e r e d a m o n g f o r a g e t y p e i n t h i s e x p e r i m e n t w h e n t r e a t e d w i t h a c o m m e r c i a l m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n . I t a p p e a r s a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r a r e n e e d e d t o e n s u r e a n i m p r o v e m e n t i n c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m J o h n s o n g r a s s a n d f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n a t r o p i c a l c l i m a t e . C H A P T E R 7 N E U T R A L D E T E R G E N T F I B E R D I S A P P E A R A N C E F R O M F O R A G E S O R G H U M T R E A T E D W I T H C O M M E R C I A L E N Z Y M E M I X T U R E S A b s t r a c t F i v e e x p e r i m e n t s w e r e c o n d u c t e d t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t s o f c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . A t 9 0 d o f g r o w t h , f o r a g e s o r g h u m ( 1 9 . 0 6 % D M ) w a s h a r v e s t e d , s t o r e d f r o z e n ( - 2 0 ° C ) o r o v e n - d r i e d ( 6 0 ° C ) , a n d t r e a t e d w i t h 5 e n z y m e p r e p a r a t i o n s . l n c u b a t i o n s i n a l l e x p e r i m e n t s w e r e d o n e i n s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( p H = 4 . 5 ) f o r 7 d a t 4 0 ° C . I n e x p e r i m e n t 1 , f r o z e n - t h a w e d a n d d r i e d f o r a g e s w e r e i n c u b a t e d w i t h a m u l t i - e n z y m e m i x t u r e ( E 1 ) c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B — g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e . E n z y m e m i x t u r e w a s a p p l i e d a t 0 , . 5 , 1 a n d 4 t i m e s t h e r a t e s u g g e s t e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . D i s a p p e a r a n c e o f N D F i n d r i e d s o r g h u m d e c r e a s e d w h e n a p p l i c a t i o n o f E 1 w a s l o w e r t h a n t h e r e c o m m e n d e d r a t e , b u t N D F d i s a p p e a r a n c e d i d n o t i n c r e a s e w h e n E 1 w a s a p p l i e d 4 t i m e s t h e s u g g e s t e d r a t e . I n f r o z e n - t h a w e d s o r g h u m , d i s a p p e a r a n c e o f N D F w a s s i m i l a r f o r a l l a p p l i c a t i o n r a t e s o f E 1 . 2 1 9 2 2 0 I n e x p e r i m e n t 2 , d r i e d f o r a g e s o r g h u m w a s i n c u b a t e d a t 3 p H l e v e l s ( 3 . 5 , 4 . 5 , a n d 5 . 5 ) w i t h E 1 a p p l i e d a t 0 , 1 , 2 , 4 a n d 8 t i m e s t h e r a t e s u g g e s t e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . A c t i v i t y o f E 1 w a s l o w e r a t p H 3 . 5 t h a n a t p H 4 . 5 a n d 5 . 5 w h e n a p p l i e d a t t h e r a t e r e c o m m e n d e d , b u t w a s s i m i l a r a c r o s s p H v a l u e s a t t h e h i g h e r a p p l i c a t i o n r a t e s . A t p H v a l u e s t y p i c a l l y s e e n e a r l y i n t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s , a n i n c r e a s e d a p p l i c a t i o n r a t e o f E 1 a b o v e t h e r e c o m m e n d e d l e v e l d i d n o t i m p r o v e N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . I n e x p e r i m e n t 3 , d r i e d f o r a g e s o r g h u m w a s i n c u b a t e d w i t h a c o m b i n a t i o n s o f c e l l u l a s e ( E 2 ) a n d a m i x t u r e o f x y l a n a s e , c e l l u l a s e a n d I 3 - g l u c a n a s e ( E 3 ) e n z y m e s a p p l i e d a t E 2 : E 3 r a t i o s o f 2 : 1 , 4 : 1 a n d 6 : 1 ( w t / w t ) . E a c h r a t i o w a s a p p l i e d a t 2 , 5 , a n d 1 0 g / t o n o f D M . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e w a s s i m i l a r f o r a l l e n z y m e m i x t u r e s o r a p p l i c a t i o n r a t e s f o r E 2 : E 3 . I n e x p e r i m e n t 4 , x y l a n a s e ( E 4 ) w a s a p p l i e d t o d r i e d f o r a g e a t . 0 8 a n d . 1 6 m l / k g a n d i n e x p e r i m e n t 5 , a n e n z y m e m i x t u r e c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e ( E 5 ) w a s a p p l i e d t o d r i e d s o r g h u m a t . 2 5 a n d . 5 0 m l \ k g o f f r e s h f o r a g e . T h e d i f f e r e n t a p p l i c a t i o n r a t e s o f E 4 a n d E 5 y i e l d e d s i m i l a r N D F d i s a p p e a r a n c e . C o m p a r i s o n o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s a c r o s s e x p e r i m e n t s s h o w e d t h a t f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h E 5 h a d g r e a t e r N D F d i s a p p e a r a n c e t h a n t h e o t h e r e n z y m e m i x t u r e s e v a l u a t e d . C o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s d e g r a d e d s o m e N D F o f f o r a g e s o r g h u m , b u t a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d d i d n o t i m p r o v e d i s a p p e a r a n c e v a l u e s . A c t i v i t i e s o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s w e r e a f f e c t e d b y p H . C o m m e r c i a l e n z y m e 2 2 1 m i x t u r e s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e t h e N D F f r a c t i o n o f f o r a g e s o r g h u m . I n t r o d u c t i o n U t i l i z a t i o n o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s t o i m p r o v e s i l a g e f e r m e n t a t i o n h a s b e e n t h e s u b j e c t o f s e v e r a l s t u d i e s ( J a s t e r a n d M o o r e , 1 9 8 8 ; V a n V u u r e n e t a l . , 1 9 8 9 ; C h e n e t a l . , 1 9 9 4 ; S h e p e r d e t a l . , 1 9 9 5 ; ) . E n z y m e s a r e p r e s u m e d t o a c c e l e r a t e f e r m e n t a t i o n b y p r o v i d i n g m i c r o o r g a n i s m s w i t h h i g h e r c o n c e n t r a t i o n s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s ( W S C ) r e s u l t i n g f r o m t h e h y d r o l y s i s o f s t a r c h , c e l l u l o s e a n d h e m i c e l l u l a s e t o o l i g o s a c c h a r i d e s a n d s i m p l e s u g a r s . R e p o r t s o n t h e e f f i c a c y o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s t o i m p r o v e d s i l a g e f e r m e n t a t i o n h a v e b e e n v a r i a b l e . E n z y m e a p p l i c a t i o n d i d n o t c o n s i s t e n t l y i n c r e a s e t h e W S C i n w i l t e d a l f a l f a ( K u n g J r . e t a l . , 1 9 9 1 ) , b u t i n c o a s t a l b e r m u d a g r a s s t r e a t e d w i t h c e l l u l a s e , s i l a g e c h a r a c t e r i s t i c s a n d f i b e r d i g e s t i b i l i t y w e r e i m p r o v e d ( M c F a n , 1 9 8 6 ) . T h e e f f i c a c y o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s t o i m p r o v e f e r m e n t a t i o n c o u l d b e a f f e c t e d b y f o r a g e s p e c i e , e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s a n d a p p l i c a t i o n r a t e s o f t h e e n z y m e s . I n o n e s t u d y , m a r k e d c e l l u l o s e h y d r o l y s i s o c c u r r e d w h e n . 4 % c e l l u l a s e w a s a d d e d t o g r a s s a n d l e g u m e s i l a g e ( H e n d e r s o n e t a l . , 1 9 8 2 ) . D e g r a d a t i o n o f p l a n t c e l l w a l l s f r o m w h o l e c r o p m a i z e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d w h e n a m u l t i - e n z y m e m i x t u r e c o n t a i n i n g c e l l u l o l y t i c , h e m i c e l l u l o l y t i c , a n d a m y l o l y t i c 2 2 2 a c t i v i t y w a s a p p l i e d a t h i g h e r r a t e s t h a n r e c o m m e n d e d ( S p o e l t r a a n d v a n W i k s e l a a r , 1 9 9 2 ) . R e s u l t s f r o m C h a p t e r 2 i n d i c a t e d t h a t a m u l t i — e n z y m e m i x t u r e a p p l i e d a t . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l h o w e v e r d i d n o t i m p r o v e d t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . T h e o b j e c t i v e s o f t h e f o l l o w i n g s e r i e s o f e x p e r i m e n t s w e r e t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t s o f c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e F o r a g e s o r g h u m ( H I E n e r g y l l , A g r i p r o S e e d , H e r e f o r d , T X ) w a s h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h ( 1 9 . 0 6 % D M ) a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g . F o r a g e w a s c h o p p e d m e c h a n i c a l l y w i t h a f o r a g e h a r v e s t e r ( 2 . 5 c m ) a n d e i t h e r s t o r e d f r o z e n ( - 2 0 ° C ) o r o v e n d r i e d ( 6 0 ° C ) f o r 7 2 h . T h e d r i e d s a m p l e w a s g r o u n d i n a U d y m i l l ( A r t h u r H . T h o m a s C o . , P h i l a d e l p h i a ; 1 m m s c r e e n ) a n d s t o r e d a t r o o m t e m p e r a t u r e u n t i l a n a l y z e d . F o r a g e s a m p l e s w e r e t r e a t e d w i t h f i v e c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s ( T a b l e 7 - 1 ) . I n e x p e r i m e n t ( E x p ) 1 , t r i p l i c a t e s a m p l e s o f d r y ( . 5 g ) a n d t h a w e d ( 2 . 5 g ) f o r a g e s o r g h u m , w e r e t r e a t e d w i t h f o u r l e v e l s o f a l i q u i d , m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n ( E 1 ) c o n t a i n i n g a r a b i n a s e , c e l l u l a s e , B - g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e a n d x y l a n a s e . T h e m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n w a s a p p l i e d a t 0 , . 5 , 1 a n d 4 ( m l \ k g ) t i m e s t h e r a t e s u g g e s t e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . I n c u b a t i o n s w e r e p e r f o r m e d i n 7 5 m l t e s t t u b e s c o n t a i n i n g t h e f o r a g e s a m p l e s , r e s p e c t i v e " m ° m a ) 6 h . t 4 i w H p s e y g d / u g / u d t n a a r d t C ' l y i v l h 0 C m i m M 0 / U t / c G C 0 I o b r a ° 7 3 t A d e r a B 0 c 0 8 0 a F 0 2 1 0 0 - g r u 0 0 0 , n o i h 4 0 c - 0 2 u r l e 6 d c e 0 3 e p 0 r s e n D 0 3 e r s o o i s e m y e e s s h c t t u o l r g o s e a s d o e i d n o c d r a c s d C n z a l 0 l e a a s ° u u 4 g r t a r s x p s e e t e ( d n a a d n e n a e l s e e s c s e n e a v i c n l l a u l u r i b g i a l t a m l l - c r e y e A a c x B h e 6 r n b a u i g l u e s t s u . 4 H n p g n e d d e o n i i i m t c i u r t a n i i s n e p o m r c ) e 1 f e e s d o r r a g o l y n i a m r e d o h d n a m x C t a 1 s s ( e M C r r c m e a u o d g d r o f c u n i u r s p e r g s T n h l c l i i o c s l a i r t . . c c i h w c u u l w g t a d e e r h f t o m y e z m f o e l n y e o e z l m o - s n n n u e I I s s o o f m d n l l i a o n a n t t f r c c e c o d d t u u n n n t i o r c i m r i o o d d 1 a a u u m t l l o n n e i l B i i o o t t r r g g m s i u 1 a m o e k a n n e a P P s p s T - - E E a n L L n r c m r u r e e a p o o h i F F u d i i , , t e C p e d e S r , o t o t , , d d B B n n s e h t r a a i s n n e l e r y p I I N a a t t a a s o t r u o b v n o o l l 6 l c i i n t t c c u l s s t e u e 8 s s e e a a v F v l i w i g n 1 e e n n r e r e u o a u u e e a l a l l 1 h N Q S C Q S C D Z Z o e m r u e h 1 w 1 c e i r e h e r w h e w h e L 0 2 n o i 1 o m w ; t e ; ; y e z g e s n s n a o i e n l d s o l u l a u f n l c l o o e u l l t e p c s l g c n t e y a e A A - a r y u h l r h o t r t m s e e y z s s a a o t m e e t c e m b a i m y n x l r n l m y e n U x o o r s c o C e a u i g p y n a s c o x F C o n o t i i t u l l a l a b a e o h o g w b t l a r r n a p e r P e i i c o = n a i = V B B E i n u t r G c e C e B M n u d t n = C M . 1 - 7 e e m y z l - - - - b n E a 1 2 3 4 F I O C e C T ' ‘ " ' " E E E E r D e s c r i p t i o n o f c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s e v a l u a t e d S o u r c e E 5 - C e l l u l o s e G A s p e r g i l l u s s p p . A s p e r g i l l u s n i g e r N e o c a / I i s m a s t i x T r i c h o d e r m a r e e s i e c e l l u l a s e x y l a n a s e c e l l u l a s e ( 3 - g l u c a n a s e x y l a n a s e c e l l u l a s e h e m i c e l l u l a s e 1 4 5 C M C u / g m ' 2 2 3 2 2 4 e n z y m e p r e p a r a t i o n s a n d s u f f i c i e n t s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( . 1 M ; p H = 4 . 5 ) t o p r o v i d e a t o t a l v o l u m e o f 5 0 m l . E n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e s w e r e 0 , 1 . 2 5 , 2 . 5 0 , a n d 1 0 p l p e r t u b e f o r t h e 0 , . 5 , 1 a n d 4 t i m e s t r e a t m e n t s , r e s p e c t i v e l y . S a m p l e s w e r e i n c u b a t e d a t 4 0 ° C f o r 7 d . I n E x p 2 , d r i e d f o r a g e s o r g h u m ( . 5 g ) w a s i n c u b a t e d i n t r i p l i c a t e w i t h E 1 a t t h r e e p H l e v e l s ( 3 . 5 , 4 . 5 , a n d 5 . 5 ) . I n c u b a t i o n s w e r e p e r f o r m e d a t 4 0 ° C f o r 7 d i n 7 5 m l t e s t t u b e s c o n t a i n i n g 0 , 2 . 5 , 5 , 1 0 , a n d 2 0 p l o f e n z y m e p r e p a r a t i o n a n d s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( . 1 M ) t o p r o v i d e a t o t a l v o l u m e o f 5 0 m l . E n z y m e w a s a p p l i e d a t 0 , 1 , 2 , 4 , a n d 8 t i m e s t h e r a t e s u g g e s t e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . I n E x p 3 , t h e e f f e c t s o f b l e n d s o f a c o n c e n t r a t e d c e l l u l a s e ( E 2 ) a n d a n e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g x y l a n a s e , c e l l u l a s e a n d ( 3 - g l u c a n a s e ( E 3 ) o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m w e r e e v a l u a t e d . E n z y m e p r e p a r a t i o n s w e r e b l e n d e d ( w t / w t ) t o E 2 : E 3 r a t i o s o f 2 : 1 , 4 : 1 ( r e c o m m e n d e d b l e n d ) , a n d 6 : 1 . E a c h e n z y m e E 2 : E 3 r a t i o w a s d i l u t e d w i t h d i s t i l l e d w a t e r ( 1 : 1 0 0 0 ) , a n d a p p l i e d t o d r y f o r a g e a t r a t e s o f 2 , 5 , a n d 1 0 g o f d r y e n z y m e p r e p a r a t i o n p e r t o n o f d r y m a t t e r . T h e E 2 : E 3 m i x t u r e s w e r e a d d e d t o t e s t t u b e s t h a t w e r e p r e p a r e d a s p r e v i o u s l y d e s c r i b e d , a t r a t e s o f 5 . 5 , 1 3 . 7 a n d 2 7 . 5 p l p e r t e s t t u b e f o r t h e 2 , 5 , a n d 1 0 g / t o n o f D M t r e a t m e n t s , r e s p e c t i v e l y . D r y f o r a g e s o r g h u m ( . 5 g ) w a s a d d e d t o e a c h t u b e b e f o r e t h e e n z y m e w a s a d d e d . S o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( . 1 M ; p H = 4 . 5 ) w a s a d d e d t o p r o v i d e a f i n a l v o l u m e o f 5 0 m l . I n c u b a t i o n s w e r e d o n e a t 4 0 ° C f o r 7 d . I n E x p 4 , a c o m m e r c i a l l i q u i d p r e p a r a t i o n o f x y l a n a s e ( E 4 ) , 2 2 5 a n d i n E x p 5 , a c o m m e r c i a l l i q u i d p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e ( E 5 ) w e r e a p p l i e d i n t r i p l i c a t e t o d r y f o r a g e s o r g h u m a t t w o d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s . T w o e n z y m e c o n c e n t r a t i o n s w e r e o b t a i n e d f o r e a c h e n z y m e b y m i x i n g 4 a n d 8 p l o f E 4 , a n d 1 2 . 5 a n d 2 5 p l o f E 5 w i t h a s o d i u m a c e t a t e b u f f e r ( . 1 M ; p H = 4 . 5 ) t o a f i n a l v o l u m e o f 1 L . F i f t y m l f r o m e a c h e n z y m e s o l u t i o n w a s p l a c e d i n t r i p l i c a t e i n 7 5 m l t e s t t u b e s c o n t a i n i n g . 5 g o f d r i e d s o r g h u m . T u b e s w e r e i n c u b a t e d a t 4 0 ° C f o r 7 ( I . T h e s e s o l u t i o n s w e r e e q u i v a l e n t t o . 0 8 a n d . 1 6 m l / k g f o r E 4 a n d . 2 5 a n d . 5 0 m l / k g f o r E 5 . T h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e s f o r E 4 a n d E 5 a r e . 0 8 a n d . 2 5 m l / k g o f f r e s h f o r a g e , r e s p e c t i v e l y . I n t h e f i v e e x p e r i m e n t s , N D F ( V a n S o e s t e t a l . , 1 9 9 1 , M e t h o d A ) w a s d e t e r m i n e d a t d 0 a n d a f t e r 7 d o f i n c u b a t i o n . D i s a p p e a r a n c e o f N D F w a s c a l c u l a t e d b y d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e i n i t i a l a n d f i n a l w e i g h t o f N D F i n e a c h t u b e . S t a t i s t i c a l a n a l y s e s w e r e p e r f o r m e d u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l s P r o c e d u r e o f S A S ( 1 9 9 0 ) . T h e m o d e l f o r e a c h e x p e r i m e n t i n c l u d e d : e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e w i t h i n f o r a g e p r e p a r a t i o n ( d r y o r f r o z e n - t h a w e d ) , E x p 1 ; p H , e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e , a n d t h e i r i n t e r a c t i o n E x p 2 ; a n d e n z y m e r a t i o , a p p l i c a t i o n r a t e , a n d t h e i r i n t e r a c t i o n E x p 3 . I n E x p 4 a n d E x p 5 , a p p l i c a t i o n l e v e l w a s u t i l i z e d a s a c l a s s v a r i a b l e w i t h i n e a c h e n z y m e p r e p a r a t i o n . M e a n s e p a r a t i o n w i t h i n e x p e r i m e n t w a s p e r f o r m e d b y a B o n f e r r o n i t - t e s t . C o m p a r i s o n o f e n z y m e m i x t u r e s a c r o s s e x p e r i m e n t s w a s c a l c u l a t e d u s i n g t h e f o l l o w i n g m o d e l : Y " = u + A I + E i i , u 2 2 6 W h e r e p = O v e r a l l m e a n A = C o m m e r c i a l e n z y m e ( c a l c u l a t e d a s t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n a c t i v i t y o f e a c h e n z y m e u s i n g t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e a n d t h e c o n t r o l g r o u p f o r e a c h e x p e r i m e n t ) E = R a n d o m r e s i d u a l e r r o r R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e f r o m d r i e d f o r a g e s o r g h u m d e c r e a s e d ( P < . 0 5 ) w h e n t h e a p p l i c a t i o n o f E 1 w a s l o w e r t h a n t h e r e c o m m e n d e d r a t e , h o w e v e r a p p l i c a t i o n r a t e s 4 t i m e s t h e r e c o m m e n d e d l e v e l d i d n o t i n c r e a s e N D F d i s a p p e a r a n c e ( T a b l e 7 - 2 ) . I n f r o z e n - t h a w e d s o r g h u m N D F , d i s a p p e a r a n c e w a s s i m i l a r f o r a l l a p p l i c a t i o n r a t e s o f E 1 . I n s i m i l a r e x p e r i m e n t s , H u n t a t a l . ( 1 9 9 5 ) o b s e r v e d a d e c r e a s e i n D M a n d N D F c o n t e n t o f f r e s h , d r i e d , m i d - b l o o m a l f a l f a , a n d l a t e - m i l k t a l l f e s c u e i n c u b a t e d f o r 4 8 h w i t h t w o f i b r o l y t i c - e n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t d i f f e r e n t r a t e s . I n t h i s s t u d y , a s m a l l d i s a p p e a r a n c e o f N D F f r o m d r i e d a n d f r o z e n - t h a w e d s o r g h u m w a s o b s e r v e d i n t h e c o n t r o l s a m p l e s a n d m a y h a v e r e s u l t e d f r o m m i c r o b i a l a c t i v i t y o r s o l u b i l i z a t i o n o f t h e h e m i c e l l u l o s e f r a c t i o n o f t h e c e l l w a l l . T h e l a c k o f r e s p o n s e t o t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n o b s e r v e d i n f r o z e n - t h a w e d f o r a g e s o r g h u m c o u l d b e e x p l a i n e d b y a n i n c r e a s e i n N D F e g a r t y o i f l d e w a i b a b o r h P t - n e z o r f d n . M E a S d e i r d m o r f e c n a r a e p p a s i d F D N n o e a r n o i t a c 4 1 ) 6 9 I e c n a ) r 5 0 . 0 < P ( N r e f f i d w t D a e p p a s i 5 F . D i o l p r p e a ) 1 0 m a s E e 3 ( h ) t 1 e m . y p z x n i = n s a t e p m E i n e ( f m o u r n r c a s e r e p m n e p o t h u e i s c n g h t e t a o e r f f o E s . 2 - 7 i k v f i r t o a e r g a a p r e l e r n s o b u r o r h e f t i o o w r d F P r r a s e d n b e n l b a a t a m e u S M N ° T ' b A p p l i c a t i o n R a t e , M u l t i p l e s o f r a t e S u g g e s t e d b y M a n u f a c t u r e r D r i e d 6 . 2 4 " 7 . 7 4 " 1 0 1 1 " 1 1 0 0 " . 4 7 . 0 0 1 F r o z e n - t h a w e d 3 . 5 0 4 . 3 1 4 . 7 2 5 . 9 0 . 7 1 . 1 9 1 2 2 7 2 2 8 c o n t e n t o f f r e s h f o r a g e d u e t o f r e e z i n g a n d t h a w i n g s e q u e n c e . I n p r e v i o u s e x p e r i m e n t s ( N e l s o n a n d B o z i c h , 1 9 9 5 ) , a l a r g e i n c r e a s e i n N D F c o n t e n t w a s o b s e r v e d i n f r e s h a l f a l f a a f t e r s t o r a g e a t ~ 2 0 ° C . O ' N e i l a n d A l l e n ( 1 9 9 2 ) r e p o r t e d a n i n c r e a s e i n N D F c o n t e n t a f t e r a f r e e z e - t h a w e x p o s u r e , w h i c h w a s s u g g e s t e d a s b e i n g d u e t o b o t h t h e c o n c e n t r a t i o n o f f i b e r c o m p o n e n t s t h r o u g h m i c r o b i a l r e s p i r a t i o n o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s a n d t o a n i n c r e a s e i n t h e a m o u n t o f N D F . K o h n a n d A l l e n ( 1 9 9 2 ) a t t r i b u t e d t h e i n c r e a s e d N D F a f t e r a f r e e z e - t h a w s e q u e n c e i n f r e s h b r o m e g r a s s a n d a l f a l f a t o i n c r e a s e d a c i d d e t e r g e n t i n s o l u b l e p r o t e i n , h e m i c e l l u l o s e a n d l i g n i n . I n E x p 2 , N D F d i s a p p e a r a n c e w a s l e s s ( P < . 0 5 ) a t p H 3 . 5 t h a n a t e i t h e r p H 4 . 5 o r 5 . 5 w h e n t h e e n z y m e w a s a p p l i e d a t 0 o r t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e ( T a b l e 7 - 3 ) . H o w e v e r , a t g r e a t e r e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e s t h e e f f e c t o f p H d i s a p p e a r e d . T h i s w o u l d s u g g e s t t h a t t h e e f f e c t s o f l o w p H o n e n z y m e a c t i v i t y c a n b e o v e r c o m e b y i n c r e a s i n g t h e e n z y m e c o n c e n t r a t i o n . T h e s e r e s u l t s a r e i n a g r e e m e n t w i t h S h e p e r d a n d K u n g J r . ( 1 9 9 4 ) w h o r e p o r t e d t h a t a c t i v i t y o f a e n z y m e c o m p l e x c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e a p p l i e d a t t h e r e c o m m e n d e d r a t e w a s r e d u c e d b y 5 0 % w h e n p H w a s d e c r e a s e d f r o m 4 . 5 t o 3 . 5 . I n e x p e r i m e n t 3 , m o d i f y i n g t h e r a t i o o f E 2 : E 3 d i d n o t a f f e c t N D F d i s a p p e a r a n c e o f f o r a g e s o r g h u m ( T a b l e 7 - 4 ) . F o r a g e s o r g h u m r e c e i v i n g a n y r a t e o f E 2 : E 3 h a d g r e a t e r ( P < . 0 1 ) N D F d i s a p p e a r a n c e t h a n w h e n n o E 2 : E 3 w a s a d d e d . 1 0 . 1 0 . 1 0 . 7 3 4 . y y ” ‘ f 3 7 9 9 4 1 . . . 1 1 0 1 1 1 ” ” y 5 6 f 4 5 5 . . 0 0 1 . 9 1 1 y y " “ ' 8 ) 2 3 6 1 9 3 7 . . . 0 1 1 1 1 1 ( e c n a r a e p p ) 5 0 . ) 5 0 < . a P s i D " z F f ” 8 D 5 N 8 6 5 0 . . . 1 1 9 1 1 < ( r P e ( f f r i e d f f i n d m u w l o o r c e e m m a a s s 3 e e h h t t = n n i i n s s n t t a e o i p p m i i t r r r " “ " a a r s s p n c c c e 0 5 1 e e 6 8 4 m t n i r r e e p p u u n o i . . . s s e t 3 6 6 h t f o e t e e v a a r k k r i i e e s l l r b t n n n o o a o u u r r i r t f h h e o a n t t o i i c d r i w w i r a t a I e p b s s 5 5 5 c d n n p i m . . . n l a a a 3 4 5 a ’ p e e t H p H S p p A M M f 1 ' d ' ' 5 ° u N T a b l e 7 - 3 . I n t e r a c t i o n b e t w e e n p H a n d e n z y m e a p p l i c a t i o n ( E 1 ) r a t e o n n e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . ( E X P . 2 ) A p p l i c a t i o n r a t e , M u l t i p l e s o f r a t e S u g g e s t e d b y M a n u f a c t u r e r F I I ' I ' p H 0 1 2 4 8 S E M “ P b A ° A * P " 2 2 9 “ A * R ° A b R a M E S 0 1 5 ) 6 9 ( e c n a r a e p p a s i D F D N 2 n o i t c a 3 r e t = n i 0 n e a t e a r m n r o e n a i p e t m c n a s e h t i o l i p t p a f v a o o r o i t a R 3 E i y r t b o a r o o r e s b r i i o e t t n a a f o d i r r o r t a a e e r : m c m e d 2 n y y b i E a z z m l t n n u p p S E E A N ° ° ° ° T a b l e 7 - 4 . I n t e r a c t i o n b e t w e e n E 2 t o E 3 r a t i o a n d a p p l i c a t i o n r a t e o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m ( E X P 3 ) A p p l i c a t i o n r a t e , g / t o n / o f D M P r o b a b i l i t y 4 . 7 4 6 . 7 1 7 . 5 6 6 . 5 8 . 5 7 . 5 6 . 0 1 . 6 1 4 . 4 0 6 . 3 5 6 . 4 7 6 . 6 7 4 . 6 7 6 . 2 8 7 . 0 4 7 . 5 1 N ' d ' C D 2 3 0 2 3 1 N o d i f f e r e n c e s i n N D F d i s a p p e a r a n c e b e t w e e n t h e c o n t r o l s a m p l e s a n d t h e s o r g h u m t r e a t e d w i t h E 4 w e r e o b s e r v e d ( T a b l e 7 - 5 ) . N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e i n f o r a g e s o r g h u m w a s s u b s t a n t i a l l y h i g h e r ( P < . 0 5 ) w h e n t r e a t e d w i t h E 5 a s c o m p a r e d t o f o r a g e w i t h o u t e n z y m e a p p l i c a t i o n . H o w e v e r , a n a p p l i c a t i o n l e v e l o f E 5 g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r d i d n o t i n c r e a s e N D F d i s a p p e a r a n c e o f f o r a g e s o r g h u m . I n t h i s s t u d y , w h e n a l l c o m m e r c i a l e n z y m e s w e r e a p p l i e d a t r e c o m m e n d e d r a t e s a n d i n c u b a t e d f o r 7 d , t h e N D F f r a c t i o n f r o m f o r a g e s o r g h u m w a s d e g r a d e d , b u t i n c r e a s i n g t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e b y 2 , 4 o r 8 t i m e s d i d n o t i m p r o v e N D F d i s a p p e a r a n c e . T h e s e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t u n d e r i n v i t r o c o n d i t i o n s , u s i n g e n z y m e p r e p a r a t i o n s a t r a t e s t h a t a r e r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r , a n d u s i n g i n c u b a t i o n p e r i o d s r e p r e s e n t a t i v e o f t h e l e n g t h o f a t y p i c a l a e r o b i c p h a s e d u r i n g t h e e n s i l i n g p r o c e s s d i d n o t i n c r e a s e d N D F d i s a p p e a r a n c e i n f o r a g e s o r g h u m . P r e v i o u s e x p e r i m e n t s h a v e a l s o s h o w n t h a t 5 0 d o f i n c u b a t i o n a n d 5 0 0 t i m e s t h e r e c o m m e n d e d r a t e f r o m a c e l l u l a s e d e r i v e d f r o m T r i c h o d e r m a r e e s i e w a s n e e d e d t o s o l u b i l i z e a l f a l f a N D F a n d c e l l u l o s e ( K u n g J r . e t a l . , 1 9 9 1 ) . H o p k i n g a n d B a s s ( 1 9 8 7 ) d e m o n s t r a t e d t h a t h y d r o l y s i s o f c e l l w a l l i n v i t r o r e q u i r e d a m o u n t s o f c e l l w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s t h a t a r e t o e x p e n s i v e f o r c o m m e r c i a l a p p l i c a t i o n . P i t t ( 1 9 9 1 ) a l s o r e p o r t e d t h a t a p p l i c a t i o n r a t e s h i g h e r t h a n r e c o m m e n d e d , a n d l o n g s t o r a g e t i m e s w o u l d b e n e e d e d t o i n c r e a s e e n z y m e a c t i v i t y i n s i l a g e . s n o i y t t i a l r i 2 a 1 b 1 0 5 0 . . p e r p e m y z n e a b o r P a h M 6 6 t i w d e t a e r t m u h g E 2 3 S . . I % ( e c r n o a s r a e e ° “ b 0 g a r o f m o p 6 7 5 5 9 p 2 3 6 4 2 8 . a . . . . s 6 6 6 6 3 2 1 1 ) i 5 D . F r P f X E e c d n n a r a a 4 e p . p D N d ) ) 5 0 . < P ( P r g a X k s / E l m i ( d s r e e f f i d g i d a e h e m y z n e ( n e t e b a t i r f t t n n e a R n o r 8 6 5 0 e e i 0 1 2 5 g 0 0 t f n . . . . 3 r f a i s h i e i c = t i d e l d p t a p A l d a e r i t l u p e p N a e m y t s i a w b n s r a t e e p t m i t r a r n c m e a p s r y e e r s m p d n u e s a h t e o i t k n a f i o v o r l e n e t u s a r o . z 4 5 r b 5 - 7 e l b a T n E E r h o r e t n i f o w o E i d r a t s a r d n c e i b n a l a m e p t p u M S A N ° ' b 6 2 3 2 ) 5 0 . < P ( r e f f n i a d e s m t p e i r r a c u s q r e s p t u s s a e e l k i f l o n u r o h r t r e i w d r s a n d a n e a M t S m ' h T a b l e 7 - 6 . N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s e x p r e s s e d a s a d i f f e r e n c e a b o v e c o n t r o l E n z y m e m i x t u r e N D F d i s a p p e a r a n c e ( % l S E M ' P r o b a b i l i t y E 1 4 . 4 ° . 1 9 . 0 0 1 E 2 / E 3 1 . 9 ” . 2 1 E 4 0 . 4 ° . 4 8 E 5 7 . 0 b . 4 8 2 3 3 2 3 4 F o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h E 5 h a d g r e a t e r ( P < . 0 5 ) N D F d i s a p p e a r a n c e t h a n f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h o t h e r e n z y m e p r e p a r a t i o n s ( T a b l e 7 - 6 ) w h e n c o m p a r e d a t r a t e s r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r . C e l l w a l l m a t e r i a l f r o m f o r a g e s o r g h u m a p p e a r s t o b e m o r e s u s c e p t i b l e t o d e g r a d a t i o n w h e n t r e a t e d w i t h a n e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g c e l l u l a s e a n d h e m i c e l l u l a s e ( E 5 ) t h a n w h e n a r a b i n a s e , B - g l u c a n a s e o r x y l a n a s e w e r e p r e s e n t i n t h e p r e p a r a t i o n . I t a l s o a p p e a r s t h a t e n z y m e p r e p a r a t i o n s c o n t a i n i n g h e m i c e l l u l a s e ( E 1 a n d E 5 ) h a v e a g r e a t e r a c t i v i t y o n t h e N D F f r a c t i o n o f f o r a g e s o r g h u m t h a n e n z y m e p r e p a r a t i o n s w i t h o u t h e m i c e l l u l a s e , a n d t h e u s e o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s c o n t a i n i n g x y l a n a s e ( E 2 / E 3 a n d E 4 ) h a d m a r g i n a l e f f e c t s o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . R e p o r t s o f d e c l a r e d a c t i v i t y , p e r c e n t a g e s o f i n d i v i d u a l e n z y m e s , s o u r c e , a n d r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e s o f t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n s u t i l i z e d i n t h i s s t u d y d i f f e r a m o n g m a n u f a c t u r e r s . A l s o , g r a m s o f p r o t e i n p e r m l o f e n z y m e p r e p a r a t i o n a n d s u g g e s t e d a p p l i c a t i o n l e v e l b a s e d o n g o f e n z y m e p r e p a r a t i o n p e r t o n o f f o r a g e d i f f e r e d ( T a b l e 7 - 7 ) . P r e v i o u s s t u d i e s ( S h e p e r d e t a l . , 1 9 9 5 ) h a v e s h o w n t h a t e n z y m e p r e p a r a t i o n s c o n t a i n i n g d i f f e r e n t c e l l u l a s e a n d a m y l a s e a c t i v i t i e s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e c e l l w a l l c o m p o n e n t s i n a l f a l f a s i l a g e . D i f f e r e n t f e r m e n t a t i o n p a t t e r n s w e r e o b s e r v e d i n a t i m o t h y , m e a d o w f e s c u e a n d r e d c l o v e r s i l a g e w h e n t w o e n z y m e s p r e p a r a r a t i o n s w e r e a p p l i e d a t t h e s a m e c e l l u l a s e a c t i v i t y , b u t d e r i v e d f r o m d i f f e r e n t m i c r o o r g a n i s m s ( S e l m e r - O l s e n , 1 9 9 4 ) . B e r t i n a n d c o - w o r k e r s . s e r u t x i m s s o r c a t n a t 1 s : n 4 o t c a t d o e n t y s t e i g v i g t u c s a o e i t m a y r z n n o e i t f a o c i s l t p i p n A U : T a b l e 7 - 7 . S u g g e s t e d a p p l i c a t i o n r a t e a n d p r o t e i n c o n t e n t o f t h e e n z y m e p r e p a r a t i o n s e v a l u a t e d E n z y m e S u g g e s t e d A p p l i c a t i o n P r o t e i n C o n t e n t E n z y m e A d d e d E n z y m e A c t i v i t y A d d e d M i x t u r e R a t e ( 9 / 1 0 0 m l e n z y m e ) ( g / t o n ) ( U n i t s / t o n ) ” E 1 . 1 % o f f r e s h f o r a g e 8 7 2 1 0 8 , 9 6 0 E 2 / E 3 5 g \ t o n ' 1 0 0 5 2 7 7 , 5 0 0 E 4 . 0 8 m l \ k g 6 5 4 4 , 5 0 3 , 6 8 0 E 5 . 2 5 m l \ k g 1 2 1 1 0 3 2 , 9 1 5 2 3 5 2 3 6 ( 1 9 8 5 ) f o u n d t h a t e n z y m e s d e r i v e d f r o m A s p e r g i l l u s n i g e r h a d m o r e h e m i c e l l u l o l y t i c a c t i v i t y t h a n T r i c h o d e r m a v i r i d e e n z y m e s , b u t H e n d e r s o n a n d M c D o n a l d ( 1 9 7 7 ) r e p o r t e d t h a t e n z y m e s d e r i v e d f r o m T r i c h o d e r m a v i r i d e w e r e m o r e a c t i v e t h a n e n z y m e s d e r i v e d f r o m A s p e r g i I / u s n i g e r . T h e r e f o r e , a m o r e a p p r o p i a t e c o m p a r i s o n o f e n z y m e m i x t u r e s s h o u l d b e b a s e d o n e q u i v a l e n t c o n c e n t r a t i o n s o f e n z y m e a c t i v i t y , e q u i v a l e n t a m o u n t s o f p r o t e i n ( g / t o n o f f o r a g e ) , a n d e n z y m e s f r o m c o m m o n s o u r c e s . I m p l i c a t i o n s E n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t r e c o m m e n d e d r a t e s d e g r a d e d t h e N D F p o r t i o n i n f o r a g e s o r g h u m , b u t a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d d i d n o t i m p r o v e N D F d i s a p p e a r a n c e . A c t i v i t y o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s c o u l d b e a f f e c t e d b y p H . C o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e t h e N D F f r a c t i o n o f f o r a g e s o r g h u m . C H A P T E R 8 F E R M E N T A T I O N C H A R A C T E R I S T I C S O F F O R A G E S O R G H U M E N S I L E D W I T H C O M M E R C I A L E N Z Y M E M I X T U R E S A b s t r a c t T h e e f f e c t s o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s o n t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t w e r e e v a l u a t e d . F o r a g e s o r g h u m w a s h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g a n d c h o p p e d i n t o 2 . 5 c m p i e c e s . C h o p p e d f o r a g e p r i o r t o e n s i l i n g w a s t r e a t e d w i t h e n z y m e p r e p a r a t i o n s a p p l i e d a t 1 o r 2 X t h e m a n u f a c t u r e r s r e c o m m e n d e d r a t e . E x p e r i m e n t a l t r e a t m e n t s i n c l u d e d ; n o e n z y m e ( c o n t r o l ) , V i s c o z y m e ( . 1 % f r e s h m a t e r i a l ) , E c o g r a m ( . 0 8 a n d . 1 6 m l / k g o f f r e s h m a t e r i a l ) , a n d C e l l u l o s e G ( . 2 5 a n d . 5 0 m l / k g o f f r e s h m a t e r i a l ) . T h r e e s i l o s p e r t r e a t m e n t w e r e o p e n e d a f t e r 3 e n s i l i n g p e r i o d s ( 0 , 4 0 a n d 1 0 0 d ) , a n d a n a l y z e d f o r p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s . T h e p H o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f e n z y m e t r e a t m e n t . A c e t i c a c i d a n d e t h a n o l c o n t e n t s d i f f e r e d a m o n g t r e a t m e n t s a n d a c r o s s t i m e , b u t a c o n s i s t e n t t r e n d 2 3 7 2 3 8 d u e t o e n z y m e a d d i t i v e w a s n o t o b s e r v e d . G l u c o s e c o n t e n t w a s h i g h e r i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h 1 o r 2 X t h e a p p l i c a t i o n r a t e o f c e l l u l a s e G a s c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e s , b u t x y l o s e w a s l o w e r . S t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t w a s s i m i l a r r e g a r d l e s s o f e n z y m e t r e a t m e n t . I n t r o d u c t i o n V a r i a b l e r e s p o n s e s t o e n z y m e a d d i t i o n t o e n h a n c e t h e f e r m e n t a t i o n o f p l a n t m a t e r i a l h a v e b e e n s h o w n ( K u n g J r . e t a l . , 1 9 9 1 ; S h e p e r d e t a l . , 1 9 9 5 ) . E n z y m e p r e p a r a t i o n s d i f f e r i n d e c l a r e d a c t i v i t y , p e r c e n t a g e s o f i n d i v i d u a l e n z y m e s , s o u r c e , a n d r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e s . R e s u l t s f r o m C h a p t e r 2 i n d i c a t e d t h a t a e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g 5 d i f f e r e n t e n z y m e s a n d a p p l i e d a t t h e r e c o m m e n d e d r a t e ( . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l ) d i d n o t i m p r o v e t h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m . P r e v i o u s e x p e r i m e n t s ( C h a p t e r 7 ) a l s o s h o w e d t h a t u n d e r c o n t r o l l e d c o n d i t i o n s ( e . g . p H , t e m p e r a t u r e ) , a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d d i d n o t i m p r o v e d N D F d i s a p p e a r a n c e i n f o r a g e s o r g h u m , a n d t h a t c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e t h e N D F f r a c t i o n o f f o r a g e s o r g h u m . W e d e m o n s t r a t e d t h a t a n e n z y m e m i x t u r e c o n t a i n i n g h e m i c e l l u l a s e a n d c e l l u l a s e i n c r e a s e d t h e N D F d i s a p p e a r a n c e i n f o r a g e s o r g h u m i n c o m p a r i s o n w i t h a p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g 5 d i f f e r e n t e n z y m e s o r a p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g o n l y x y l a n a s e . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o e v a l u a t e t h e e f f e c t o f t h r e e c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s o n t h e 2 3 9 f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m . E x p e r i m e n t a l P r o c e d u r e F o r a g e s o r g h u m ( H i E n e r g y H y b r i d , A g r i - p r o S e e d , H e r e f o r d , T X ) w a s h a r v e s t e d a t 9 0 o f g r o w t h ( 2 0 . 0 4 % D M ) a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y , E a s t L a n s i n g . H a r v e s t e d f o r a g e s o r g h u m w a s c h o p p e d m e c h a n i c a l l y i n t o 2 . 5 c m p i e c e s w i t h a f o r a g e h a r v e s t e r . C h o p p e d f o r a g e , p r i o r t o e n s i l i n g , w a s t r e a t e d w i t h 3 c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s a s s i g n e d t o o n e o f s i x t r e a t m e n t s ( T a b l e 8 - 1 ) . T r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d t o w e i g h e d p o r t i o n s ( 1 . 6 k g ) o f f o r a g e , m a n u a l l y m i x e d , a n d p a c k e d i n t o l a b o r a t o r y s i l o s f i t t e d w i t h r e l e a s e v a l v e s f o r p r o v i d e g a s e s c a p e . L a b o r a t o r y s i l o s w e r e m a i n t a i n e d a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 7 - 3 0 ° C ) u n t i l o p e n e d . T r i p l i c a t e s i l o s f r o m e a c h t r e a t m e n t w e r e a n a l y z e d f o r p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s , a n d w a t e r s o l u b l e a n d s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s a t 0 , 4 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g u s i n g t h e m e t h o d o l o g y d i s c u s s e d i n p r e v i o u s C h a p t e r s . D a t a w a s a n a l y z e d a s a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n w i t h a 6 ( e n z y m e p r e p a r a t i o n s ) b y 3 ( e n s i l i n g p e r i o d s ) f a c t o r i a l a r r a n g e m e n t o f t r e a t m e n t s u s i n g t h e G e n e r a l L i n e a r M o d e l P r o c e d u r e o f S A S ( 1 9 9 0 ) w i t h t h e f o l l o w i n g m o d e l : Y i n , = u + A i + B , - + ( A ‘ I B ) i j + E , W h e r e : Y u k = I n d i v i d u a l r e s p o n s e v a r i a b l e m e a s u r e d ( e . i . p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t ) ' l a i r e t a m h s e t a R n e o ' r ' i g f g g g t k k k k a \ \ \ \ f c l l l l o i m m m m l % p p 1 8 6 5 0 0 1 2 5 A . . . . . s e d m e y e e e e t z a n E s s a a n l s s a a l l u u e u u l e c s s s s s s a l l l a v a u a a n e e e a a a v n n n i c c c i l l l l s l l l e e e e e e a e s e r u t x i t c A u g u u b i a a a i i l l l a m l - l l l l l m m r e y y y e e e e e a x x x c h c s h c h s l a m i e m y z n r t s u d n i o r i e B s s s s t t t t d d d d c c c c u u u u n n n n d d d d a a a a o o o o l l l l r r r r g g g g e i l l p k n n n n P P P P s T - - E E - - E E a u d i i i i , , , , p i o o o o C i , S B B r B B d d d d c r e o y N r u o b v n n n n n a a a a a a a a c c c c l l l l e e e e e e e e v v v v n n n n m e e e e o a e e e l l l e l N Z Z Z Z D C C C C m o c d n a s t n e o l L n ) m i o t r 0 t t a 2 a r e r t f a p e r P n o C 1 ( e m e G G y m z o s s y n m m e e z e o o a a n o r r l l r n o i t a c i l p p a d e t s e g g T u S T 3 e c g g z s o o u u l l e l l t n c c a o i e e E N V E E C C t n e m 1 1 2 4 3 5 6 - t 8 a e m y e r n o i t p i r c s e D . e l b a 2 4 0 2 4 1 u = O v e r a l l m e a n A , = E f f e c t o f e n z y m e m i x t u r e B ’ - = E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g A ‘ I B , j = I n t e r a c t i o n o f e n z y m e m i x t u r e b y d a y o f e n s i l i n g E , , , , = R e s i d u a l e r r o r B o n f e r r o n i - t t e s t w a s u s e d f o r m e a n s e p a r a t i o n . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n N o s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n s b e t w e e n e n z y m e t r e a t m e n t b y d a y o f e n s i l i n g f o r p H o r f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s w e r e o b s e r v e d ( T a b l e 8 - 2 ) . O v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , p H t e n d e d t o b e h i g h e r ( P < 0 . 0 9 ) i n f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h V i s c o z y m e i n c o m p a r i s o n t o f o r a g e t r e a t e d w i t h t h e o t h e r e n z y m e t r e a t m e n t s , b u t w a s s i m i l a r t o c o n t r o l s i l a g e . F o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h E c o g r a m ( T 3 a n d T 4 ) o r C e l l u l a s e G ( T 5 a n d T 6 ) a t 1 o r 2 X t h e s u g g e s t e d a p p l i c a t i o n r a t e h a d l o w e r ( P < 0 . 0 5 ) a c e t i c a c i d c o n t e n t t h a n c o n t r o l s i l a g e o r s i l a g e t r e a t e d w i t h V i s c o z y m e ( T 2 ) . H o w e v e r , e t h a n o l c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) i n s i l a g e s c o n t a i n i n g V i s c o z y m e a n d t h e 2 X a p p l i c a t i o n r a t e o f c e l l u l a s e G a s c o m p a r e d t o t h e o t h e r e n z y m e t r e a t m e n t s . F o r a l l e n z y m e t r e a t m e n t s , l a c t i c a c i d c o n t e n t w a s s i m i l a r o v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e n o d . G l u c o s e c o n t e n t w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) a f t e r 4 0 d p o s t - e n s i l i n g i n s i l a g e s c o n t a i n i n g 1 o r 2 X t h e r e c o m m e n d e d a p p l i c a t i o n r a t e o f E c o g r a m a n d e ‘ D 7 g 2 a r o f ' E 1 . 0 7 0 5 3 2 . . f y 1 0 1 1 0 0 o t 0 0 i . . ° 0 l D . s i t b a c b u o r d P o r 4 7 6 9 4 2 0 0 1 " E p . . . — d n e n o i ‘ 3 2 1 t M 0 4 3 a E 0 6 1 t S . . . n e m r e f d n a H p n 3 6 6 6 3 9 0 6 . . . . . 2 5 5 1 5 9 8 . . 5 5 3 3 6 0 0 o 3 1 5 5 7 3 1 5 . . . . . . . 6 5 8 9 0 5 3 5 7 3 3 8 0 0 g n i l i 0 3 8 0 9 2 4 s 5 3 5 5 4 1 5 n e f o y a d d t n e m t a e r T 4 . . . . . . . 5 7 3 3 9 0 0 3 3 5 3 5 0 2 2 7 5 1 5 5 8 3 . . . . . . . 5 7 3 3 0 0 6 n 1 6 6 6 0 0 4 2 . . . . . . . 3 5 6 6 0 2 8 5 3 7 3 6 0 0 3 3 3 3 8 6 8 7 1 1 1 1 5 3 3 0 . a t n e m t a e r t e m y z n n i e l g 0 0 0 i 0 0 0 0 0 0 0 0 0 f s n o E t c f o e . y f e a f g D E a l i . s 2 - m 8 u h e 4 4 4 1 1 1 ' d i c a c ' d i c a g c l i m i b e r t t a o t H c e I p c a A L T s * 5 0 1 . 6 8 1 . 6 0 1 . 5 8 1 . 5 9 1 . 5 1 8 1 . 7 7 1 . 4 1 1 . 3 3 1 . 2 1 1 . 5 2 0 . 2 3 0 . 0 6 0 . 4 3 0 . 0 6 0 . 0 7 . 1 6 6 . 0 0 1 . 0 0 1 . 9 6 3 1 . 2 0 0 . 7 7 1 . 0 6 0 . 5 6 0 . 8 4 0 . 9 8 0 . 5 7 0 . 9 6 0 . 6 9 0 . 6 0 0 8 6 E t h a n o l ' 0 0 . 4 0 0 1 0 0 0 ' S t a n d a r d e r r o r o f t h e m e a n ° E f f e c t o f e n z y m e ° E f f e c t o f d a y o f e n s i l i n g ° I n t e r a c t i o n o f e n z y m e b y d a y o f e n s i l i n g ' g / 1 0 0 g D M 2 4 2 2 4 3 C e l l u l a s e G a s c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e o f f o r a g e t r e a t e d w i t h V i s c o z y m e ( T a b l e 8 - 3 ) . A f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g , s i l a g e s c o n t a i n i n g C e l l u l a s e G h a d g r e a t e r ( P < 0 . 0 5 ) g l u c o s e c o n t e n t t h a n o t h e r e n z y m e t r e a t m e n t s . I n c o n t r a s t t o g l u c o s e c o n t e n t , x y l o s e c o n c e n t r a t i o n w a s h i g h e r ( P < 0 . 0 5 ) a f t e r 4 0 a n d 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g i n s i l a g e s w i t h o u t e n z y m e a d d i t i v e o r f o r a g e t r e a t e d w i t h V i s c o z y m e . O v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , c o n c e n t r a t i o n s o f f r u c t o s e , g a l a c t o s e a n d a r a b i n o s e w e r e s i m i l a r r e g a r d l e s s o f e n z y m e t r e a t m e n t . O v e r t h e e n t i r e e n s i l i n g p e r i o d , e x c e p t f o r a t e n d e n c y ( P < 0 . 0 9 ) i n c o n t r o l s i l a g e t o h a v e g r e a t e r A D F c o n t e n t a s c o m p a r e d t o s i l a g e c o n t a i n i n g e n z y m e a d d i t i v e s , N D F , h e m i c e l l u l o s e a n d c e l l u l o s e c o n t e n t w e r e n o t i n f l u e n c e d b y e n z y m e p r e p a r a t i o n ( T b a l e 8 - 4 ) . H o w e v e r , f o r a l l c e l l - w a l l f r a c t i o n s , 3 s m a l l n u m e r i c a l d e c r e a s e w a s o b s e r v e d i n s i l a g e s c o n t a i n i n g e n z y m e m i x t u r e s a s c o m p a r e d t o c o n t r o l s i l a g e . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e d t h a t f o r a g e s o r g h u m t r e a t e d w i t h E c o g r a m o r C e l l u l a s e G i n c r e a s e d t h e r e s i d u a l g l u c o s e c o n t e n t a f t e r 1 0 0 d o f f e r m e n t a t i o n . H o w e v e r , n e i t h e r e n z y m e p r e p a r a t i o n i n c r e a s e d t h e a c i d i t y o r l a c t i c a c i d c o n t e n t o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e , a n d a d e c r e a s e i n x y l o s e c o n t e n t w a s o b s e r v e d . A p p l i c a t i o n o f t h e e n z y m e m i x t u r e s d i d n o t s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e c e l l - w a l l c o m p o n e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . E v e n t h o u g h t h e h i g h e r r e s i d u a l g l u c o s e c o n t e n t d u e t o e n z y m e a d d i t i o n m a y i m p r o v e t h e d i g e s t i b i l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e , i t m a y l e a d t o m o r e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n ( S p o e l t r a a n d v a n W i k s e l a a r , 1 9 9 2 ) . T h e r e f o r e m o r e r e s e a r c h ) 5 0 . 0 < P ( r e f f i d g n i d a e h m e t i n a n i h t i w w o r e m a g s n i e l h i t s n n e i f s o t p y i a r d c n a s e y r e m g b n p e e i u h t l s i m s y e n k f z e i o e n l m f n e r y o u o f z r h y o r n a t e n e i d o w d f i f r o t o . e g a l i s m u s h g r o s a c d t t a n c r c a n e e e a e f t f t f n M f S E I E 9 ' ‘ " ° ° T a b l e 8 - 3 . E f f e c t o f e n z y m e t r e a t m e n t a n d d a y o f e n s i l i n g o n w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e — T r e a t m e n t P r o b a b i l i t y I t e m D a y o f E n s i l i n g 1 2 3 4 5 6 S E M ' E b D ° E ' D " G l u c o s e 0 6 . 6 2 6 . 6 4 6 . 2 7 6 . 5 0 6 . 2 2 6 . 5 4 . 3 8 6 . 0 1 1 . 0 0 1 . 0 2 9 4 0 1 . 6 6 ’ 1 . 7 8 ’ 2 . 4 2 ' 2 . 8 5 ' 2 . 4 3 ' 2 . 6 8 ' 1 0 0 0 . 9 4 ' 1 . 0 6 ’ 1 . 9 4 ' 1 . 9 1 ' 2 9 1 ° 2 9 4 ° F r u c t o s e 0 6 . 4 4 6 . 3 3 6 . 6 7 6 . 1 7 6 . 8 6 6 . 1 2 . 2 3 7 . 5 9 7 . 0 0 1 . 8 3 3 4 0 0 . 2 9 0 . 1 9 0 . 3 4 0 . 1 6 0 . 3 4 0 . 4 6 1 0 0 0 . 5 4 0 . 4 4 0 . 4 3 0 . 3 0 0 . 4 3 0 . 5 8 G a l a c t o s e 0 0 . 1 5 0 . 1 9 0 . 1 1 0 . 1 6 0 . 1 2 0 . 2 2 . 0 4 5 . 3 4 0 . 0 0 6 . 4 8 3 4 0 0 . 2 3 0 . 2 8 0 . 2 8 0 . 1 2 0 . 2 6 0 . 2 6 1 0 0 0 . 2 4 0 . 2 5 0 . 1 8 0 . 2 5 0 . 2 4 0 . 2 7 X y l o s e 0 0 . 0 7 0 . 0 5 0 . 0 6 0 . 0 5 0 . 0 6 0 . 0 7 . 0 7 1 . 0 0 1 . 0 0 1 . 0 3 3 4 0 0 . 3 7 " 0 . 3 2 " 0 . 1 8 " 0 . 0 8 ' 0 . 2 0 " 0 . 2 4 " 1 0 0 0 . 6 8 “ 0 . 6 3 “ 0 . 3 4 ' 0 . 1 8 ‘ 0 . 4 5 ' 0 . 3 2 ' A r a b i n o s e 0 0 . 1 6 0 . 1 8 0 . 0 9 0 . 1 5 0 . 1 3 0 . 1 4 . 0 6 2 . 4 5 0 . 0 0 9 . 3 7 0 4 0 0 . 0 9 0 . 0 9 0 . 0 7 0 . 0 6 0 . 0 7 0 . 0 3 1 0 0 0 . 1 3 0 . 1 4 0 . 1 0 0 . 1 1 0 . 1 0 0 . 1 3 2 4 4 e " 3 2 7 g . . . E d 0 5 1 D 7 8 2 a r o f 1 9 3 0 2 0 1 0 f o s t n ° 0 1 0 0 D . . . . 8 6 8 7 1 3 e 7 3 b 6 E . . . t n o c e t a r d y h E . . 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I m p l i c a t i o n s A d d i t i o n o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s d i d n o t c o n s i s t e n t l y a f f e c t p H , f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s o r s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . E n z y m e m i x t u r e s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o i n c r e a s e t h e r e s i d u a l s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e . M o r e r e s e a r c h i n n e e d e d ( e . i . f e e d i n g t r i a l s ) t o j u s t i f y t h e u s e o f e n z y m e p r e p a r a t i o n s a s a s i l a g e a d d i t i v e . C H A P T E R 9 S U M M A R Y A N D C O N C L U S I O N S A s e r i e s o f s t u d i e s w e r e c o n d u c t e d t o a d d r e s s t h e h y p o t h e s i s t h a t a d d i t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s ( m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e s ) i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I n e x p e r i m e n t o n e , a t w o y e a r s t u d y w a s c o n d u c t e d t o e v a l u a t e t h e e f f e c t s o f a l a c t i c a c i d b a c t e r i a l i n o c u l a n t a n d a c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e o n t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s a n d a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 9 0 d o f g r o w t h i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . T h e b a c t e r i a l i n o c u l a n t c o n s i s t e d o f a h o m o f e r m e n t a t i v e s t r a i n o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a p p l i e d a t 1 0 ° c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l . T h e e n z y m e a d d i t i v e c o n s i s t e d o f a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n c o n t a i n i n g a r a b i n o s e , c e l l u l a s e , B - g l u c a n a s e , h e m i c e l l u l a s e , a n d x y l a n a s e a n d w a s a p p l i e d a t . 1 % o f f r e s h m a t e r i a l . I n b o t h l o c a t i o n s , a d d i t i o n o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s w a s e f f e c t i v e i n d e c r e a s i n g t h e p H , a n d i n c r e a s i n g t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e a t e a r l y s t a g e s o f t h e f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . I n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t , i n o c u l a t e d s o r g h u m a l s o h a d g r e a t e r f r u c t o s e 2 4 7 2 4 8 c o n t e n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g a s c o m p a r e d t o s o r g h u m s i l a g e w i t h o u t t h e m i c r o b i a l c u l t u r e . H o w e v e r , f o r a l l t r e a t m e n t s , f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g w e r e s i m i l a r . R e s u l t s f r o m E x p e r i m e n t 1 , a l s o i n d i c a t e d t h a t i n o c u l a t i o n m a y h a v e a n e g a t i v e e f f e c t o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f f o r a g e s o r g h u m e x p o s u r e t o a i r i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . I n t h e t r o p i c a l e n v i r o n m e n t , n o e f f e c t o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t o r e n z y m e o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e w a s o b s e r v e d . F i n d i n g s f r o m E x p e r i m e n t 1 a l s o s h o w e d t h a t t h e m a j o r i t y o f t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o c c u r s w i t h i n t h e f i r s t 3 d o f a e r o b i c e x p o s u r e i n t h e t e m p e r a t e s i l a g e , a n d w i t h i n t h e f i r s t ( I i n t h e t r o p i c a l s i l a g e . I n b o t h e n v i r o n m e n t s , s i l a g e e x p o s u r e d t o a i r a f t e r s h o r t e r f e r m e n t a t i o n p e r i o d s ( 4 0 d ) s p o i l e d f a s t e r t h a n s i l a g e e x p o s e d t o a i r a f t e r 1 0 0 d p o s t - e n s i l i n g , b u t a m o r e p r o n o u n c e d e f f e c t d u e t o l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n w a s o b s e r v e d i n t h e t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . I n E x p e r i m e n t 2 , t h e d i f f e r e n c e s i n e f f e c t i v e n e s s o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e m i x t u r e w h e n f o r a g e s o r g h u m w a s e n s i l e d a t 9 0 a n d 1 1 0 d o f g r o w t h i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t w a s e v a l u a t e d . A d d i t i o n o f t h e b a c t e r i a l i n o c u l a n t a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e n z y m e s i m p r o v e d t h e e n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f f o r a g e s o r g h u m , b u t a m o r e b e n e f i c i a l r e s p o n s e w a s o b s e r v e d i n s i l a g e f r o m t h e m o r e i m m a t u r e f o r a g e . H o w e v e r , s i l a g e a d d i t i v e s d i d n o t p r e v e n t t h e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f f o r a g e s o r g h u m s i l a g e , r e g a r d l e s s o f s t a g e o f m a t u r i t y . 2 4 9 T h e f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d t h e r e s u l t i n g e f f e c t s o f a s i l a g e a d d i t i v e i n J o h n s o n g r a s s ( S o r g h u m j a l a p e n s e ) w a s e v a l u a t e d i n E x p e r i m e n t 3 . J o h n s o n g r a s s w a s e n s i l e d a f t e r 4 5 a n d 1 1 0 d o f r e g r o w t h a n d t r e a t e d w i t h o r w i t h o u t a c o m b i n a t i o n o f t h e m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e . F o r b o t h r e g r o w t h p e r i o d s , J o h n s o n g r a s s t r e a t e d w i t h b a c t e r i a l i n o c u l a n t p l u s e n z y m e s h a d l o w e r p H a n d h i g h e r l a c t i c a c i d b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s a n d l a c t i c a c i d c o n t e n t t h a n c o n t r o l s i l a g e . S i l a g e a d d i t i v e s a l s o d e c r e a s e d b u t y r i c a c i d l e v e l s i n t h e m o r e i m m a t u r e f o r a g e a n d e t h a n o l i n t h e J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t 1 1 0 d . H o w e v e r , f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e d i d n o t r e a c h t h e r e c o m m e n d e d v a l u e s f o r p r o d u c t i o n o f a s t a b l e s i l a g e . M o r e r e s e a r c h n e e d s t o b e c o n d u c t e d t o d e t e r m i n e h o w t o e f f e c t i v e l y e n s i l e J o h n s o n g r a s s . I n E x p e r i m e n t 4 , t h e e f f e c t s o f a c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n o n c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m a n d J o h n s o n g r a s s w h e n h a r v e s t e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t w e r e d e t e r m i n e d . R e s u l t s f r o m t h i s e x p e r i m e n t i n d i c a t e d t h a t d i s a p p e a r a n c e o f t h e c e l l - w a l l f r a c t i o n s d i f f e r s a m o n g f o r a g e t y p e s e v a l u a t e d , a n d t h a t a p p l i c a t i o n r a t e s g r e a t e r t h a n r e c o m m e n d e d b y t h e m a n u f a c t u r e r a r e n e e d e d t o e n s u r e a n i m p r o v e m e n t i n c e l l - w a l l d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m a n d J o h n s o n g r a s s . T h e e v a l u a t i o n o f c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s o n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t w e r e s t u d i e d i n E x p e r i m e n t 5 . F i n d i n g s f r o m t h i s e x p e r i m e n t s h o w e d t h a t ; c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s d i f f e r i n t h e i r a b i l i t y t o d e g r a d e t h e N D F f a o d R c C t t s m i i i a n e o d t t n i e o r f o o e m m e n h a n e o u f h a s n d m p p t v c s n r t o t e s i c t u c e u s a c j u o r u p l r h i r p r s t i n l i b o l s p e l s e o e e r r p i s e e e i z t t s i d o r a p u m v m c a d o d n l f e c n y m e s e i a a i t s a n i f c o i r o t g e r l t e e i e i t e e e o o p i n i c t l e h e r o s f m m n y s e t e n o a t s h e h t r h c t f a n a l t o c t f n t p m y t f n t d a i n n c g m t s e b f r r x e E v o a f e i o n s m , r e r f f o u p a a e t e r i n m f s x f r i g p u f o r p e e a e b d o f e a r m o o r d e c t r a e r f e t o n i r o m r c e o t t h n s a t s m m o t i b f e e l f i c a f f i o r u n p n e t s u t s u l a h r o a t m e r g f i h e m n r m i . c o e e s g t r o i i n n e r e c o h t e a a r s , e t S o a n o e o c A r c s u i t f p s m d s 6 h o u , r e e i n d r a o u t x b d n s i e i l e h r i s f g p r i n p s i c . e i s e d a o t e o e d n r t a l l i o c c h t o a m g r i i a o g a o i n f u r o e h h c s o i u n y g m t i r s i o r f n d e d r c n a n g v n a o p c a h c e e y e s c e e c r a . r m r t t u y e o e a s d l v i o c r i t r a n h u f c e s s h o l h s c e b s t i t e c c a i t c o r a s l l a t . s m s r f a n t a o z a d c a u t g o i i l d o t s n e e f e t s e s c r t r l e b a t r - m d g i b e g a d n m v t e t u t a t n a a o i e e n u i r h i a t i a d e e s b l e t o d n s o t g c a f e m h c t e t e o i n i f m i e n w n a t h s i p n v s t c d c a r o d w a e e n o u l h c t c o i r e e t s m ( v s r m d e s d o v i o z d d n n e e i i e y o e t i . o c ) s t m , r p y e d . n f h c e z l o n g t h n r r l o s ) e i z n a f t m l b l t n p a a g c m h e o a o o a y d t a i f s t u o i e i f h n s ( n c g t e o i d e t ( t a f r r o n l o t y c . o i e f n d e s e t i o c a o a e l r e r e a h e h s o s ; a l o g t s n r a e e d m t t o g u c e e e e h a e m e s t s i f l r u l a i i s h d s n o p e d b y t m x r s a g e s r g r a d s l e a p r o i o a t e m t s p e a t c u t r l u s e i e d t n s g n p o p g r e a g r i i l e c e , o e h e e o n d n m m r r c g o d c s t a t e e i o p t r h e a s i a a e s v n s u r m h g v e s p e i s n s . t n g h e d e a l v e c t f c e a N f i e e a a c c m s r l s e a l , t . n i i d . d h d a p a v d d t a o i e S D i d m p o i a i e n d r t e o F s t m a I n n i t o b i n d i a n v d n n l t v o e u r e t s t o t e e e i t r f l n i t o e r v g t r l b s n h e i d o y p a t e s . o t g e u d p p t f o s e e i o a e d I f s c o ) i d y r i i e a n n H n t . l g o 2 5 0 A n i m a l f e e d i n g t r i a l s s h o u l d a l s o b e c o n d u c t e d t o j u s t i f y t h e u s e o f s i l a g e 2 5 1 a d d i t i v e s a s a m e c h a n i s m s t o i m p r o v e d t h e q u a l i t y o f c o n s e r v e d f e e d s t u f f s . E c o n o m i c s t u d i e s t o d e t e r m i n e t h e f e a s i b i l i t y o f u t i l i z i n g s i l a g e a s a m a j o r f e e d c o m p o n e n t i n r u m i n a n t f e e d i n g s y s t e m s i n t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s n e e d t o b e c o n d u c t e d . A d d i t i o n a l p o s s i b i l i t i e s i n c l u d e ; t h e e v a l u a t i o n o f o t h e r g r a s s e s ( e . g . P e n n i s e t u m p u r p u r e u m ) o r l e g u m e ( e . g . L e u c a e n a l e u c o c h e p h a l a ) s p e c i e s u s e d a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n a s a p o t e n t i a l f e e d r e s o u r c e s , s t u d i e s t o d e t e r m i n e t h e p o s s i b l e b i o l o g i c a l a n d e c o n o m i c b e n e f i t s o f i n d u s t r i a l o r a g r i c u l t u r e b y - p r o d u c t s a s s i l a g e a d d i t i v e s , a n d i m p l e m e n t a t i o n o f m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s ( e . g . f e e d i n g s i l a g e o n l y d u r i n g s p e c i f i c s e a s o n o f t h e y e a r ) t o e v a l u a t e t h e i n t r o d u c t i o n o f s i l a g e a s a m a j o r f e e d c o m p o n e n t i n r u m i n a n t p r o d u c t i o n s y s t e m s . A P P E N D I X — A 2 5 2 T a b l e A - 1 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t ( 9 / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 . ) Y T D C i t r i c M a l i c O x a l o a c e t i c S u c c i n i c 9 4 1 0 0 . 4 5 3 4 . 5 6 7 1 . 1 9 8 1 . 6 5 7 9 4 1 0 0 . 4 1 2 5 . 2 5 6 1 . 2 0 0 1 . 6 9 8 9 4 1 0 0 . 4 6 8 4 . 4 4 1 1 . 2 1 1 1 . 7 6 6 9 4 1 1 0 . 2 6 2 5 . 2 3 1 0 . 8 2 2 0 . 6 1 4 9 4 1 1 0 . 3 0 7 4 . 5 4 4 0 . 7 0 2 0 . 9 9 6 9 4 1 1 0 . 4 3 1 4 . 4 4 8 0 . 5 3 3 0 . 8 1 6 9 4 1 3 0 . 5 6 1 2 . 4 0 8 0 . 7 9 8 0 . 6 1 1 9 4 1 3 0 . 4 4 2 5 . 1 9 6 0 . 8 6 9 0 . 3 1 2 9 4 1 3 0 . 3 8 3 3 . 1 2 4 0 . 8 4 1 0 . 4 4 6 9 4 1 7 0 . 4 9 4 3 . 0 3 5 0 . 9 5 8 0 . 8 7 2 9 4 1 7 0 . 6 1 3 1 . 7 8 1 0 . 8 9 4 0 . 5 1 7 9 4 1 7 0 . 3 7 2 2 . 2 9 2 0 . 7 7 5 0 . 7 8 5 9 4 1 1 4 0 . 5 1 3 0 . 8 7 2 1 . 0 0 3 0 . 6 5 8 9 4 1 1 4 0 . 3 5 7 0 . 9 1 4 0 . 6 5 8 0 . 8 6 8 9 4 1 1 4 0 . 4 8 3 1 . 5 6 0 0 . 8 6 3 0 . 5 6 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. 7 2 4 3 3 1 5 4 1 3 5 7 0 3 3 8 7 2 0 0 2 3 1 3 6 5 6 8 5 6 7 5 6 5 4 6 6 2 3 3 5 9 4 7 4 0 2 8 3 2 1 3 0 0 0 0 0 3 6 6 7 4 4 6 5 5 1 1 1 4 4 8 7 7 0 1 6 8 7 1 0 3 4 5 6 8 8 8 1 8 1 1 6 1 7 3 8 8 4 3 8 6 8 1 7 2 5 7 7 9 9 3 0 7 3 7 7 6 0 4 1 2 7 6 2 8 3 3 8 9 4 7 8 4 2 3 7 2 3 3 7 8 5 3 5 4 0 6 0 2 4 7 4 4 4 3 9 9 6 3 5 3 3 3 8 3 8 4 4 4 8 8 3 3 3 0 3 5 5 5 8 1 1 1 1 1 1 1 1 0 8 6 2 4 3 x . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 a l o a c e t i c 8 7 8 6 6 2 5 2 0 1 7 8 9 5 7 7 8 7 9 8 6 6 2 7 9 7 7 7 3 3 8 7 0 4 0 9 6 3 6 6 6 5 2 8 7 7 7 8 6 1 0 2 6 5 6 5 7 5 4 . . . . . . 5 5 1 1 2 0 6 9 4 2 8 6 8 0 4 9 9 2 6 8 7 6 1 4 7 5 0 4 4 4 8 6 5 3 0 4 2 7 5 8 9 7 6 5 2 4 3 8 6 4 5 8 1 7 7 9 6 8 2 8 3 4 8 2 6 3 5 9 3 8 7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 4 0 0 0 4 4 4 4 4 4 2 8 3 9 5 5 5 5 5 5 7 2 2 8 7 7 3 9 6 2 6 6 7 7 2 6 5 5 8 5 4 0 0 0 7 4 9 7 5 5 0 3 3 5 5 0 0 0 S 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 2 2 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 1 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 1 u . c 6 c i n i c 8 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 5 4 6 4 2 5 4 5 5 7 4 6 6 5 4 4 5 6 5 4 3 4 8 5 7 6 7 2 1 0 9 6 8 9 0 0 5 6 7 7 9 5 9 9 7 7 2 4 3 0 0 2 9 8 8 1 0 3 3 0 5 6 4 7 3 0 1 5 8 1 9 6 1 9 4 7 0 1 1 2 9 7 3 4 8 9 4 6 4 1 3 9 4 1 8 6 8 7 4 5 5 2 3 4 0 1 6 3 2 4 5 9 5 5 9 1 1 0 0 6 7 0 9 6 7 8 8 1 1 2 3 0 9 9 7 3 5 5 0 2 7 2 6 2 7 3 9 3 3 7 5 7 8 9 3 3 3 3 6 0 4 4 0 0 4 0 2 6 9 3 7 5 5 5 5 5 1 4 0 4 4 4 0 0 6 2 8 7 5 6 6 T a b l e A - 1 . C o n t . 2 5 3 2 5 4 T a b l e A - 1 . C o n t . Y T D C i t r i c M a l i c O x a l o a c e t i c S u c c i n i c 9 3 2 7 0 . 4 8 0 1 . 3 8 6 0 . 9 2 7 1 . 6 6 5 9 3 2 7 0 . 6 2 1 1 . 6 6 8 0 . 7 4 7 1 . 6 2 6 9 3 2 1 4 0 . 6 8 2 1 . 2 7 8 0 . 9 0 0 1 . 9 9 2 9 3 2 1 4 0 . 4 7 0 1 . 4 3 3 0 . 8 5 6 1 . 8 8 3 9 3 2 1 4 0 . 4 8 3 1 . 4 4 6 0 . 9 7 8 1 . 6 8 7 9 3 2 2 1 0 . 6 4 6 1 . 0 9 8 0 . 9 9 2 1 . 6 8 3 9 3 2 2 1 0 . 4 5 5 0 . 7 4 8 1 . 1 1 6 0 . 7 0 6 9 3 2 2 1 0 . 7 0 3 0 . 5 8 3 1 . 0 8 6 1 . 6 8 8 9 3 2 4 0 0 . 3 7 2 0 . 2 6 4 0 . 5 3 8 0 . 9 2 7 9 3 2 4 0 0 . 3 8 8 0 . 2 7 7 0 . 6 7 0 1 . 1 8 9 9 3 2 4 0 0 . 3 9 0 0 . 2 8 2 0 . 6 4 1 1 . 5 9 6 9 3 2 1 0 0 0 . 3 9 5 0 . 6 4 9 0 . 8 5 0 0 . 0 6 2 9 3 2 1 0 0 0 . 3 3 8 0 . 5 5 9 0 . 7 5 6 0 . 8 1 8 9 3 2 1 0 0 0 . 3 8 2 0 . 7 5 8 0 . 5 9 7 0 . 8 7 1 9 3 3 0 0 . 1 9 4 2 . 5 4 6 0 . 5 9 1 2 . 9 4 3 9 3 3 0 0 . 1 8 5 2 . 2 5 4 0 . 8 6 1 2 . 5 5 2 9 3 3 0 0 . 1 8 9 2 . 3 9 9 0 . 8 0 5 2 . 3 8 6 9 3 3 1 0 . 0 6 4 2 . 8 2 9 0 . 5 5 7 1 . 8 6 2 9 3 3 1 0 . 1 9 9 1 . 3 5 2 0 . 5 7 9 1 . 7 3 3 9 3 3 1 0 . 3 7 9 1 . 5 0 6 0 . 4 8 4 1 . 7 6 4 9 3 3 3 0 . 3 6 3 1 . 4 9 4 0 . 9 8 0 1 . 5 5 4 9 3 3 3 0 . 3 4 1 1 . 0 5 2 0 . 6 1 2 1 . 4 9 6 9 3 3 3 0 . 3 6 0 1 . 6 7 3 0 . 7 8 9 1 . 4 1 9 9 3 3 7 0 . 6 5 7 1 . 4 8 2 0 . 0 2 4 1 . 8 9 5 9 3 3 7 0 . 6 7 1 1 . 7 3 5 1 . 0 2 6 1 . 6 6 0 9 3 3 7 0 . 6 7 7 1 . 3 6 5 1 . 0 5 3 1 . 5 3 0 9 3 3 1 4 0 . 6 2 7 0 . 9 0 0 1 . 0 8 2 1 . 7 9 2 9 3 3 1 4 0 . 5 7 9 0 . 7 5 1 0 . 8 8 3 1 . 3 6 8 9 3 3 1 4 0 . 5 8 1 0 . 8 9 3 0 . 7 8 4 1 . 2 2 1 9 3 3 2 1 0 . 6 3 1 0 . 9 8 0 1 . 0 3 0 1 . 1 8 7 9 3 3 2 1 0 . 7 8 1 0 . 8 2 4 1 . 0 8 5 1 . 9 7 0 9 3 3 2 1 0 . 7 1 9 0 . 8 3 4 0 . 7 6 9 1 . 8 0 8 9 3 3 4 0 0 . 6 8 5 0 . 5 3 3 0 . 1 3 2 1 . 0 7 2 9 3 3 4 0 0 . 3 1 9 0 . 4 6 7 0 . 5 9 5 1 . 9 1 0 9 3 3 4 0 0 . 5 3 4 0 . 8 2 5 0 . 9 2 9 1 . 1 3 3 9 3 3 1 0 0 0 . 3 5 2 0 . 5 7 4 0 . 5 8 0 0 . 3 0 9 9 3 3 1 0 0 0 . 2 7 1 0 . 7 3 6 0 . 6 4 7 0 . 2 8 0 9 3 3 1 0 0 0 . 2 8 4 0 . 6 2 4 0 . 8 2 2 0 . 8 1 9 9 3 4 0 0 . 1 8 5 2 . 5 0 3 0 . 8 9 3 2 . 5 6 3 9 3 4 0 0 . 1 9 4 2 . 4 4 0 0 . 7 8 7 2 . 2 6 0 9 3 4 0 0 . 1 6 9 2 . 3 7 8 0 . 6 3 0 2 . 7 4 2 9 3 4 1 0 . 2 1 7 1 . 6 9 0 0 . 5 6 4 1 . 6 0 8 9 3 4 1 0 . 5 4 1 1 . 5 2 2 0 . 5 8 5 1 . 6 8 8 9 3 4 1 0 . 5 8 8 1 . 7 7 1 0 . 6 4 5 1 . 7 5 8 9 3 4 3 0 . 2 7 5 1 . 6 6 1 0 . 5 8 2 1 . 9 5 0 9 3 4 3 0 . 5 3 0 1 . 6 6 1 1 . 0 3 1 1 . 7 2 9 9 3 4 3 0 . 5 0 9 1 . 1 0 4 0 . 9 9 9 1 . 8 9 1 9 3 4 7 0 . 6 7 7 1 . 3 2 8 1 . 0 9 8 1 . 3 5 1 9 3 4 7 0 . 3 4 5 1 . 5 1 0 0 . 8 3 4 1 . 6 2 4 9 3 4 7 0 . 9 6 9 1 . 6 9 4 0 . 8 1 1 1 . 7 2 2 9 3 4 1 4 0 . 7 0 1 0 . 9 0 4 0 . 7 9 6 1 . 3 2 3 9 3 4 1 4 0 . 6 8 9 0 . 9 2 9 1 . 0 1 5 1 . 5 6 1 9 3 4 1 4 0 . 5 8 4 0 . 5 7 6 0 . 8 3 8 1 . 4 0 1 9 3 4 2 1 0 . 6 8 4 0 . 9 6 9 0 . 8 7 5 1 . 5 2 3 9 3 4 2 1 0 . 6 8 8 0 . 7 7 1 0 . 8 5 2 1 . 3 9 3 9 3 4 2 1 0 . 6 2 8 0 . 8 7 8 1 . 0 5 5 1 . 1 3 8 9 3 4 4 0 0 . 5 2 3 0 . 5 0 7 1 . 0 7 1 1 . 3 7 5 9 3 4 4 0 0 . 4 9 1 0 . 7 8 1 0 . 7 9 5 1 . 6 1 5 9 3 4 4 0 0 . 4 4 4 0 . 9 5 2 0 . 8 7 7 1 . 1 0 2 9 3 4 1 0 0 0 . 3 5 8 0 . 4 1 6 0 . 6 0 5 1 . 0 5 3 9 3 4 1 0 0 0 . 3 2 0 0 . 4 4 6 0 . 7 7 0 1 . 1 3 4 9 3 4 1 0 0 0 . 3 0 8 0 . 5 6 0 0 . 8 2 8 1 . 0 8 9 A b b r e v i a t i o n s : Y = Y e a r ; T = T r e a t m e n t ( 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ) ; D = D a y o f e n s i l i n g . 1 5 1 3 8 s 2 3 0 1 2 5 4 1 5 3 1 4 1 4 5 5 a a a a z 0 1 0 0 0 z 0 1 0 0 0 e 3 3 5 2 3 1 4 0 2 z 2 5 6 0 1 3 4 5 9 1 1 3 1 2 m 4 1 3 4 m 1 1 3 9 1 2 3 9 0 1 3 3 9 5 1 1 3 6 5 1 2 6 8 3 a a a a a a a a a a s 0 2 6 0 4 8 s 7 2 5 0 4 s 0 3 2 5 7 s 0 0 0 0 4 s 2 3 0 0 3 s 2 6 0 0 3 s 2 6 0 0 3 4 2 3 9 0 3 4 1 0 2 0 2 6 0 1 3 5 4 3 6 2 6 1 1 4 3 5 6 9 2 6 0 a 3 1 2 4 3 8 5 2 2 3 0 a 5 1 3 3 5 5 1 1 3 6 0 a a a 1 4 3 6 3 8 8 4 5 1 7 2 6 1 2 3 6 0 z 1 . 0 a 4 1 3 3 6 0 1 1 3 7 5 1 2 3 8 0 1 3 3 7 5 1 1 5 3 0 1 2 5 4 0 1 3 5 4 0 a a a a a a a 4 4 1 9 0 7 5 5 3 5 1 4 4 3 5 0 8 6 e 4 5 5 8 5 s 2 3 7 0 7 z 0 0 3 0 0 s 2 8 2 3 0 1 1 4 4 3 0 6 0 8 a 6 7 1 2 4 z 2 6 9 0 5 5 0 a 1 3 4 z 2 6 5 0 6 5 0 a 1 1 4 s 2 6 4 0 0 0 5 a 1 2 4 a . 3 A 0 0 0 0 a 1 3 4 s 0 0 0 3 8 1 1 3 1 2 3 1 3 3 8 5 9 0 9 0 1 1 3 1 4 6 5 1 2 3 1 4 6 5 a a a a a a s 2 6 0 3 8 s 2 6 O 2 0 s 0 1 O 4 £ 2 0 3 7 4 3 2 0 2 2 1 3 3 4 0 0 0 1 4 7 7 a 3 0 1 1 3 2 1 5 0 4 5 3 5 3 5 1 2 3 2 5 1 0 a a s J 4 8 9 9 1 9 3 3 4 3 3 2 5 a 1 0 3 0 1 5 1 3 s 5 3 4 0 6 a 0 8 2 1 5 2 3 4 5 4 4 0 7 a 0 6 6 1 3 3 0 4 6 a 5 4 £ 5 5 1 2 1 m 1 3 1 7 0 1 m 2 3 1 6 5 a a s 3 6 4 6 6 s 4 3 6 1 3 1 1 1 1 1 m 3 4 3 5 3 3 1 0 0 6 5 1 5 5 0 2 5 4 0 a a a 1 9 s 2 1 3 0 4 z 2 3 0 4 7 0 a 0 4 3 5 3 5 s 2 3 0 1 a 0 5 0 8 1 4 s 3 J 0 1 2 4 0 s 2 £ 1 a 0 9 4 6 1 a 0 9 0 3 4 z 2 6 0 5 3 a 0 2 0 1 3 s 3 A 0 9 3 a 0 2 3 9 4 0 D 0 0 3 1 1 1 1 1 7 5 a 1 3 6 1 7 0 a 2 3 7 3 a 0 3 3 9 O 7 0 0 s 2 £ 0 7 0 4 3 0 7 0 9 2 2 £ 0 6 0 1 0 a 7 3 3 2 0 D 0 9 0 7 0 1 1 5 a 1 3 4 m 1 . 2 2 4 5 4 1 1 2 3 5 a 4 2 1 2 0 6 4 5 O 1 4 1 3 0 a 3 s 9 9 0 0 0 4 5 W 2 0 1 3 a 1 j L 4 5 3 2 5 5 ( C h a p t e r 2 ) D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n ( c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . T a b l e A - 2 . L A Y Y M E N T p H L A B R e p T r t Y e a r E n v 8 3 2 3 3 5 0 0 0 0 0 0 0 7 M 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 3 8 3 9 9 0 7 5 0 0 0 0 2 4 0 0 7 0 0 0 0 0 0 4 6 7 0 1 2 5 J S J S J Q S S J D D D S D . 0 0 6 0 A 6 6 3 6 0 8 6 J 5 A 9 D A 0 6 6 9 6 6 0 3 6 9 0 3 6 9 £ 5 9 J J J D A D D £ 6 3 A 9 . . 5 4 4 5 5 6 3 3 3 1 1 0 2 3 3 1 0 2 0 3 3 2 2 2 5 4 4 5 5 5 2 3 3 0 2 2 2 3 3 0 2 3 2 0 2 2 2 2 4 4 4 6 6 6 3 0 3 0 2 2 3 2 0 2 1 0 0 4 4 4 1 1 1 0 0 0 m m 0 0 0 1 1 1 3 3 3 7 7 7 1 1 1 2 2 2 4 4 4 1 1 0 0 0 1 1 1 3 3 3 7 7 7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 1 9 3 1 1 1 9 3 9 3 a 9 3 l a l a l a 9 3 9 3 9 3 1 m 9 3 m 1 l 0 9 3 4 . 5 I 4 M 4 4 1 4 5 1 4 3 0 5 0 4 5 6 5 4 5 5 3 4 9 a l c 9 3 7 0 2 7 9 3 4 0 3 2 l 1 9 3 1 1 a 9 3 9 3 l 9 3 a l a 9 3 9 3 l 9 3 9 3 9 3 a l a l a l a l a l 1 1 3 3 3 7 7 7 1 4 1 9 3 4 4 1 m 9 3 4 1 9 3 1 2 4 3 6 1 3 0 5 1 6 2 5 9 3 1 4 7 2 2 9 0 3 2 5 3 0 7 4 0 4 3 4 0 4 4 3 8 3 3 7 3 0 0 2 6 5 4 2 5 5 5 2 5 0 0 0 5 4 7 1 9 2 4 5 5 7 7 5 0 2 2 a 2 9 3 1 l a l a 9 3 0 4 9 3 0 4 9 3 4 0 l 5 . - I 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 9 3 1 m 9 3 1 m 0 0 0 5 2 2 2 6 4 1 6 0 5 4 4 5 2 2 5 2 0 5 1 4 4 8 4 5 4 9 0 6 0 2 0 3 1 8 - 1 1 3 3 3 4 5 2 3 0 7 2 5 2 0 9 0 4 4 6 8 1 4 3 6 5 4 4 4 5 5 4 1 0 4 8 . 1 ! a 7 7 7 4 l 1 a l a 4 1 4 1 1 l 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 2 0 4 0 4 0 4 m 1 m 1 m 1 0 0 0 1 9 6 5 3 4 . 0 4 5 7 5 6 4 6 0 2 9 4 4 0 0 2 5 2 0 0 9 4 7 0 9 3 5 6 0 7 3 4 5 8 5 4 4 1 0 6 9 4 7 7 0 1 4 3 5 0 2 4 6 0 0 8 4 5 5 0 6 4 7 0 0 0 5 6 7 6 9 4 9 0 8 6 5 9 0 2 5 5 4 0 3 0 5 2 7 0 1 6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 3 3 7 5 2 0 2 1 4 3 0 6 0 4 4 9 4 0 2 4 6 3 4 5 3 5 2 9 . 9 2 5 6 C o n t . T a b l e A - 2 . L A Y Y M E N T p H L A B R e p T r t Y e a r E n v 9 0 0 0 0 0 0 6 3 1 1 5 5 0 7 0 0 0 0 0 0 6 “ 0 2 7 0 0 0 0 0 2 8 5 5 5 2 9 4 6 0 0 5 0 0 0 7 0 0 0 0 0 0 0 5 8 2 0 8 5 6 4 9 5 4 6 0 9 6 5 9 6 7 7 1 2 0 6 0 6 6 6 0 9 6 7 6 0 0 9 9 6 9 6 9 4 4 5 6 7 0 1 0 2 9 3 0 9 6 0 6 6 6 3 6 6 3 4 4 6 4 3 6 7 8 1 8 4 2 3 c l 2 3 . ] 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 1 0 0 1 0 0 1 1 0 0 0 2 2 4 4 4 3 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 1 . 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 1 4 9 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 9 4 1 1 1 1 9 4 9 4 9 4 9 4 9 4 m 0 0 m 0 0 1 0 1 1 9 4 1 1 9 4 1 1 9 4 1 3 9 4 9 4 9 4 9 4 9 4 9 3 3 7 7 4 7 9 4 fl fl fl 4 0 4 0 0 4 m m m 0 0 0 1 1 1 3 3 3 w 7 0 2 0 4 0 M 6 0 4 0 2 0 9 0 0 7 4 0 9 4 3 6 3 0 7 8 1 0 6 0 9 0 2 0 2 0 6 0 4 9 6 0 3 4 0 7 5 2 8 2 9 2 9 0 6 0 3 0 0 7 3 0 8 9 1 0 9 0 2 0 0 0 8 0 6 0 5 8 2 0 3 8 0 7 0 7 6 0 4 5 9 2 5 4 7 0 6 9 1 0 6 0 9 2 0 0 7 8 2 0 0 9 0 6 0 7 0 9 4 5 5 5 5 2 1 4 . 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 “ fl “ fl “ m a y “ “ u u u fl m u u u m fl fl u 1 7 m 1 7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 w u fl m m m 9 9 4 9 4 9 4 9 4 9 4 9 4 9 3 3 9 0 0 2 3 n 0 1 3 d 1 2 5 7 C o n n T a b l e A - 2 . L A Y Y M E N T p H L A B R w T n Y e a r E m 8 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 2 2 5 3 7 0 7 6 5 4 0 3 0 0 0 7 0 0 0 0 0 0 0 0 5 9 1 4 6 8 5 2 4 0 0 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 5 9 9 J S S D S S S S J S S . 3 4 2 A 9 J A 3 9 J J 8 8 J 3 £ 0 0 6 D 3 3 3 £ 3 £ 9 J A 3 0 J J D D £ 8 J £ fi £ 9 £ fi £ 6 6 £ 3 3 8 A J 5 3 3 2 0 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 4 5 3 5 5 5 4 5 5 3 3 3 2 2 0 3 2 0 2 2 2 2 2 2 3 4 5 5 5 5 5 5 5 3 3 4 2 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 6 7 7 7 6 4 7 4 5 9 0 6 8 0 6 9 4 5 3 8 3 4 8 4 0 3 8 0 5 W 3 2 0 1 6 3 6 4 2 0 0 2 1 1 5 6 1 8 4 3 4 9 7 0 9 1 6 8 4 0 5 3 3 0 1 0 6 6 7 7 1 6 7 6 3 7 7 1 5 0 8 2 4 0 1 2 5 5 5 6 4 4 0 2 0 8 4 9 1 6 0 2 4 8 9 0 0 1 8 5 5 3 0 6 1 0 3 4 3 3 4 0 4 6 2 6 4 9 0 1 3 7 6 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 . 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 4 4 4 1 1 1 0 0 0 4 4 4 4 4 4 1 1 1 0 0 m w m 1 1 1 2 2 2 4 4 4 1 1 1 1 1 1 2 2 2 4 4 1 1 1 0 0 1 0 0 7 7 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 . 1 1 1 1 . 2 5 8 T a b l e A - 2 . C o n t . E n v Y e a r T r t 0 R e p p H L A B E N T Y M L A Y 2 9 3 1 1 2 4 . 8 4 5 . 4 2 7 . 4 5 7 . 2 5 4 . 0 5 2 9 3 1 1 3 4 . 7 6 5 . 4 6 7 . 7 7 7 . 1 1 3 . 9 9 2 9 3 1 3 1 4 . 7 8 6 . 8 9 5 . 8 7 6 . 7 3 5 . 5 5 2 9 3 1 3 2 4 . 8 1 7 . 3 7 5 . 2 9 7 . 2 4 5 . 6 4 2 9 3 1 3 3 4 . 5 2 7 . 8 0 5 . 7 8 6 . 7 8 6 . 2 1 2 9 3 1 7 1 4 . 9 3 7 . 7 3 3 . 8 5 6 . 2 5 4 . 4 6 2 9 3 1 7 2 4 . 8 8 7 . 7 7 4 . 0 3 7 . 1 2 7 . 0 1 2 9 3 1 7 3 4 . 5 0 7 . 0 2 3 . 9 9 5 . 9 4 5 . 2 1 2 9 3 1 1 4 1 4 . 5 9 6 . 4 4 2 . 9 0 5 . 9 4 5 . 5 1 2 9 3 1 1 4 2 4 . 5 1 6 . 9 6 2 . 8 4 6 . 4 1 5 . 3 9 2 9 3 1 1 4 3 4 . 2 4 7 . 0 4 2 . 6 0 5 . 8 0 5 . 4 9 2 9 3 1 2 1 1 4 . 7 7 7 . 0 9 2 . 0 0 6 . 6 3 6 . 5 4 2 9 3 1 2 1 2 4 . 5 7 6 . 9 9 3 . 3 1 7 . 7 0 6 . 7 1 2 9 3 1 2 1 3 4 . 4 5 6 . 4 8 1 . 0 0 6 . 7 6 6 5 5 2 9 3 1 4 0 1 4 . 3 0 7 . 3 0 3 . 2 6 6 . 1 0 5 3 5 2 9 3 1 4 0 2 4 . 2 7 7 . 0 9 2 . 7 3 7 . 3 8 5 4 3 2 9 3 1 4 0 3 4 . 1 0 6 . 4 4 0 . 0 0 6 . 7 7 6 . 5 1 2 9 3 1 1 0 0 1 4 . 1 9 6 . 5 0 3 . 0 0 6 . 3 0 5 . 2 0 2 9 3 1 1 0 0 2 4 . 1 9 6 . 7 5 2 . 3 0 6 . 2 0 5 . 1 0 2 9 3 1 1 0 0 3 4 . 1 6 6 . 4 3 1 . 0 0 7 . 3 0 6 . 2 0 2 9 3 2 0 1 5 . 5 5 4 . 0 1 7 . 2 9 5 . 9 1 2 . 7 4 2 9 3 2 0 2 5 . 2 6 4 . 3 4 7 . 3 7 6 . 0 2 2 . 2 5 2 9 3 2 0 3 6 . 0 2 3 . 4 8 7 . 0 9 5 . 8 4 2 . 5 8 2 9 3 2 1 1 4 . 7 3 6 . 0 4 7 . 6 5 6 . 9 0 4 . 0 0 2 9 3 2 1 2 4 . 8 9 5 . 1 2 7 . 7 1 6 . 9 9 4 . 2 1 2 9 3 2 1 3 4 . 7 4 5 . 9 9 8 . 2 0 6 . 9 5 3 . 9 8 2 9 3 2 3 1 4 . 8 5 6 . 9 2 5 . 7 7 6 . 2 8 4 . 5 3 2 9 3 2 3 2 4 . 8 6 8 . 0 1 4 . 9 8 6 . 7 5 4 . 9 3 2 9 3 2 3 3 4 . 8 0 7 . 7 6 4 . 8 3 6 . 7 7 5 . 3 6 2 9 3 2 7 1 4 . 5 4 7 . 7 4 3 . 5 0 7 . 1 8 6 . 6 9 2 9 3 2 7 2 4 . 6 1 7 . 7 4 3 . 4 9 7 . 5 8 6 . 1 0 2 9 3 2 7 3 4 . 4 6 7 . 4 7 3 . 7 0 6 . 4 0 5 . 3 3 2 9 3 2 1 4 1 4 . 3 9 7 . 1 0 3 . 8 3 6 . 3 5 5 . 8 9 2 9 3 2 1 4 2 4 . 4 6 7 . 7 6 4 . 2 4 6 . 8 7 6 . 6 5 2 9 3 2 1 4 3 4 . 3 1 7 . 2 5 4 . 3 4 5 . 8 1 4 . 4 6 2 9 3 2 2 1 1 4 . 6 4 5 . 7 2 2 . 7 3 5 . 5 7 5 . 5 6 2 9 3 2 2 1 2 4 . 7 9 7 . 2 0 4 . 3 0 7 . 9 5 7 . 4 9 2 9 3 2 2 1 3 4 . 6 3 7 . 3 8 3 . 9 3 6 . 6 8 5 . 7 6 2 9 3 2 4 0 1 4 . 2 1 6 . 1 6 2 . 3 0 5 . 4 1 5 . 2 9 2 9 3 2 4 0 2 4 . 2 5 7 . 0 9 2 . 6 0 7 . 7 0 7 . 2 3 2 9 3 2 4 0 3 4 . 2 3 6 . 7 8 2 . 0 0 7 . 1 8 6 . 5 7 2 9 3 2 1 0 0 1 4 . 1 7 6 . 3 4 2 . 3 0 6 . 5 4 5 . 7 8 2 9 3 2 1 0 0 2 4 . 3 1 6 . 6 5 2 . 3 0 6 . 7 0 6 . 2 0 2 9 3 2 1 0 0 3 4 . 1 9 6 . 7 0 1 . 0 0 7 . 2 0 6 . 8 5 2 9 3 3 0 1 4 . 9 9 5 . 4 3 6 . 5 9 6 . 2 5 2 . 5 1 2 9 3 3 0 2 5 . 2 6 5 . 6 9 6 . 9 6 6 . 1 5 2 . 2 3 2 9 3 3 0 3 5 . 9 5 5 . 5 5 6 . 2 9 6 . 1 8 2 . 6 1 2 9 3 3 1 1 4 . 6 6 6 . 5 7 6 . 0 9 5 . 0 1 3 . 8 6 2 9 3 3 1 2 4 . 5 6 6 . 5 3 6 . 1 0 6 . 3 2 4 . 0 5 2 9 3 3 1 3 4 . 6 2 6 . 2 4 5 . 8 1 5 . 5 5 3 . 8 7 2 9 3 3 3 1 4 . 4 4 6 . 6 6 5 . 3 7 5 . 7 0 4 . 4 4 2 9 3 3 3 2 4 . 4 8 8 . 2 1 5 . 4 2 6 . 6 6 4 . 6 5 2 9 3 3 3 3 4 . 3 0 7 . 6 4 4 . 6 7 5 . 2 3 4 . 1 9 2 9 3 3 7 1 4 . 4 0 7 . 9 9 3 . 7 1 6 . 3 9 6 . 2 2 2 9 3 3 7 2 4 . 5 5 7 . 7 1 3 . 4 9 7 . 1 1 7 . 0 9 2 9 3 3 7 3 4 . 5 0 7 . 2 7 3 . 2 0 7 . 1 9 5 . 3 2 2 9 3 3 1 4 1 4 . 3 5 7 . 2 6 5 . 0 4 6 . 9 0 6 . 6 7 2 9 3 3 1 4 2 4 . 2 0 7 . 2 6 4 . 7 0 7 . 3 3 7 . 2 8 2 9 3 3 1 4 3 4 . 2 6 7 . 0 1 3 . 4 7 7 . 3 4 6 . 0 0 2 9 3 3 2 1 1 4 . 3 7 7 . 4 4 3 . 2 4 6 . 4 8 6 . 2 8 2 9 3 3 2 1 2 4 . 4 3 6 . 7 0 1 . 0 0 5 . 7 7 5 . 6 3 2 9 3 3 2 1 3 4 . 4 0 7 . 5 4 3 . 5 5 6 . 8 8 6 . 7 4 2 9 3 3 4 0 1 4 . 0 5 6 . 5 7 4 . 3 8 6 . 4 5 4 . 6 5 2 9 3 3 4 0 2 4 . 0 3 7 . 0 6 4 . 6 8 8 . 4 3 5 . 6 7 2 9 3 3 4 0 3 4 . 0 5 7 . 0 8 4 . 2 1 8 . 2 7 6 . 9 4 2 1 m 1 5 4 0 0 2 2 5 w 1 6 3 0 2 3 7 m 1 6 9 0 2 1 8 0 5 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 0 0 1 1 1 3 3 3 7 7 7 2 1 1 7 8 3 9 5 9 0 3 1 0 9 0 2 2 “ 5 7 3 9 7 5 0 1 5 7 8 3 2 2 5 4 3 3 0 9 2 5 1 0 5 0 7 2 5 7 8 8 6 3 3 3 0 0 8 5 5 1 4 9 3 1 2 3 2 9 2 1 4 2 4 4 8 4 “ 0 2 1 2 3 5 4 0 9 1 4 1 9 5 8 3 2 2 2 0 1 3 3 5 8 5 1 6 5 4 4 . 1 9 5 0 8 3 2 4 7 5 2 1 2 3 3 4 3 4 3 1 1 2 2 0 1 1 6 4 0 1 5 5 0 2 4 0 4 0 2 4 0 3 9 6 7 6 3 2 4 3 3 0 7 9 5 8 6 4 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 5 3 0 0 7 7 9 0 1 m 2 5 6 0 9 0 4 0 4 0 0 0 3 3 2 0 1 0 4 8 7 1 0 1 5 6 7 3 0 9 2 7 0 3 7 6 0 3 0 3 1 4 9 8 9 4 2 9 1 2 4 1 3 8 9 7 2 3 1 7 4 2 2 9 9 7 3 3 1 1 2 1 3 7 5 5 8 2 3 3 1 5 5 2 2 5 7 4 2 3 2 1 6 8 7 8 0 0 4 2 3 3 2 1 9 5 3 4 4 5 2 7 1 0 8 4 7 0 1 2 5 2 7 2 8 5 7 7 2 1 4 8 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 7 1 4 1 4 1 4 2 1 2 1 2 1 4 0 0 4 3 0 4 1 6 0 4 3 2 1 5 0 5 6 6 8 4 8 2 1 7 0 3 2 6 5 4 3 1 1 0 2 0 3 2 0 1 5 3 0 3 1 0 5 8 2 1 6 0 0 9 0 5 3 3 4 6 0 9 1 3 8 5 1 4 7 9 1 7 1 6 8 2 8 2 3 0 4 1 5 9 0 1 2 3 3 0 2 6 3 3 4 m 5 0 9 1 4 0 0 2 9 1 m 2 4 6 5 6 0 1 9 2 1 2 m 3 6 6 2 8 5 1 0 3 2 2 2 2 2 2 1 0 0 0 1 1 1 1 0 3 3 9 0 6 5 9 2 8 2 5 4 9 3 5 9 3 6 8 4 6 2 1 0 1 1 3 0 5 4 5 8 6 4 2 7 3 7 2 7 2 1 6 3 2 7 3 2 3 8 5 8 2 9 1 2 5 3 1 2 7 0 0 2 4 2 0 4 3 2 1 7 5 3 2 4 0 9 5 3 3 5 7 2 4 2 2 2 3 4 7 1 0 3 7 0 2 1 7 9 0 7 2 0 7 8 0 2 2 9 2 9 7 3 2 0 7 4 2 3 0 8 0 1 2 6 4 7 2 2 1 4 1 4 1 4 2 4 5 2 6 4 5 7 6 3 5 0 0 0 6 9 0 5 7 3 2 1 5 0 7 2 7 1 8 2 2 1 2 5 9 C o n t . T a b l e A - 2 . L A Y Y M E N T p H L A B R e p T r t Y e a r E n v 1 0 0 1 0 0 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 4 4 . 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 2 6 0 T a b l e A - 2 . C o n t . E n v Y e a r T r t D R e p p H L A B E N T Y M L A Y 2 9 4 2 2 1 2 4 . 6 5 5 . 9 2 1 . 0 0 5 . 5 5 5 . 1 5 2 9 4 2 2 1 3 4 . 6 0 6 . 7 7 6 . 7 2 6 . 3 1 6 . 7 9 2 9 4 2 4 0 1 4 . 2 0 5 . 6 5 2 . 4 7 4 . 6 9 4 . 3 0 2 9 4 2 4 0 2 4 . 0 5 6 . 7 4 4 . 0 6 5 . 6 9 4 . 6 0 2 9 4 2 4 0 3 4 . 1 1 7 . 3 7 3 . 8 8 5 . 7 7 4 . 6 0 2 9 4 2 1 0 0 1 4 . 2 0 6 . 0 5 3 . 6 2 4 . 8 4 4 . 6 9 2 9 4 2 1 0 0 2 4 . 1 2 6 . 1 2 5 . 1 0 4 . 7 7 4 . 4 7 2 9 4 2 1 0 0 3 4 . 1 9 5 . 8 2 2 . 4 7 4 . 6 0 4 . 6 0 2 9 4 3 0 1 5 . 2 3 5 . 3 7 4 . 9 8 3 . 5 9 2 . 6 9 2 9 4 3 0 2 5 . 2 4 5 . 1 4 6 . 8 7 3 . 5 5 2 . 6 9 2 9 4 3 0 3 5 . 8 7 5 . 2 7 6 . 0 8 3 . 5 9 3 . 0 4 2 9 4 3 1 1 4 . 6 2 8 . 8 3 8 . 8 5 5 . 1 4 5 . 1 0 2 9 4 3 1 2 4 . 5 7 9 . 1 2 8 . 9 4 5 . 7 0 5 . 5 2 2 9 4 3 1 3 4 . 5 6 9 . 0 7 9 . 0 9 5 . 9 0 5 . 1 4 2 9 4 3 3 1 4 . 3 5 9 . 1 6 5 . 7 1 6 . 0 3 5 . 9 7 2 9 4 3 3 2 4 . 4 0 9 . 1 9 6 . 6 0 6 . 7 8 6 . 4 2 2 9 4 3 3 3 4 . 2 8 8 . 7 5 6 . 5 9 6 . 8 0 6 . 7 5 2 9 4 3 7 1 4 . 1 5 7 . 8 5 5 . 2 9 7 . 5 9 7 . 3 0 2 9 4 3 7 2 4 . 2 5 8 . 4 1 4 . 2 5 7 . 6 9 7 . 3 2 2 9 4 3 7 3 4 . 4 0 8 . 5 5 3 . 1 9 6 . 3 6 6 . 2 3 2 9 4 3 1 4 1 4 . 4 2 6 . 9 1 4 . 0 2 6 . 2 1 6 . 1 2 2 9 4 3 1 4 2 4 . 1 5 6 . 7 0 3 . 5 1 6 . 6 5 6 . 6 5 2 9 4 3 1 4 3 4 . 2 2 6 . 6 5 2 . 9 0 5 . 8 6 5 . 5 4 2 9 4 3 2 1 1 4 . 2 5 6 . 7 7 5 . 8 4 6 . 2 5 6 . 0 2 2 9 4 3 2 1 2 4 . 3 5 6 . 4 7 3 . 3 0 6 . 1 0 5 . 9 7 2 9 4 3 2 1 3 4 . 3 5 6 . 3 6 4 . 0 9 5 . 8 9 5 . 6 6 2 9 4 3 4 0 1 4 . 1 4 6 . 3 0 2 . 0 0 5 . 1 2 5 . 5 5 2 9 4 3 4 0 2 4 . 1 0 5 . 8 0 4 . 4 8 4 . 7 7 4 . 8 4 2 9 4 3 4 0 3 4 . 0 5 6 . 4 6 4 . 0 4 5 . 1 7 5 . 2 8 2 9 4 3 1 0 0 1 4 . 2 0 5 . 9 2 4 . 0 8 5 . 0 4 4 . 0 0 2 9 4 3 1 0 0 2 4 . 0 8 4 . 8 8 3 . 0 0 4 . 9 5 4 . 3 0 2 9 4 3 1 0 0 3 4 . 1 0 6 . 0 2 3 . 3 8 4 . 7 7 4 . 3 0 2 9 4 4 0 I 5 . 4 3 4 . 4 5 5 . 3 1 2 . 0 0 2 . 6 9 2 9 4 4 0 2 5 . 3 2 5 . 2 0 6 . 0 2 2 . 7 7 2 . 6 0 2 9 4 4 0 3 5 . 8 8 5 . 3 6 6 . 3 6 2 . 4 7 3 . 4 9 2 9 4 4 1 1 4 . 5 2 8 . 8 5 7 . 5 3 5 . 3 4 4 . 4 9 2 9 4 4 1 2 4 . 7 0 8 . 9 4 7 . 4 4 5 . 8 6 5 . 0 4 2 9 4 4 1 3 4 . 6 4 9 . 0 9 7 . 0 9 5 . 3 8 5 . 1 5 2 9 4 4 3 1 4 . 3 5 8 . 9 4 6 . 0 2 7 . 0 7 6 . 0 3 2 9 4 4 3 2 4 . 2 2 8 . 7 1 5 . 9 4 6 . 9 0 6 . 7 1 2 9 4 4 3 3 4 . 2 9 9 . 1 3 6 . 4 1 7 . 0 0 6 . 5 9 2 9 4 4 7 I 4 . 2 5 8 . 0 9 5 . 9 6 7 . 1 0 7 . 2 4 2 9 4 4 7 2 4 . 2 5 8 . 0 1 5 . 6 0 7 . 2 6 7 . 0 0 2 9 4 4 7 3 4 . 2 5 7 . 5 2 6 . 0 0 7 . 4 6 7 . 4 1 2 9 4 4 1 4 1 4 . 1 1 6 . 9 2 3 . 4 3 6 . 6 0 6 . 5 4 2 9 4 4 1 4 2 4 . 3 9 7 . 2 2 3 . 3 8 6 . 0 4 6 . 0 9 2 9 4 4 1 4 3 4 . 2 0 6 . 5 5 2 . 8 4 5 . 9 6 5 . 9 0 2 9 4 4 2 1 1 4 . 1 5 6 . 6 2 6 . 0 0 6 . 2 2 6 . 0 2 2 9 4 4 2 1 2 4 . 3 5 6 . 5 4 3 . 4 0 6 . 0 7 5 . 4 7 2 9 4 4 2 1 3 4 . 3 5 6 . 6 3 3 . 0 0 5 . 7 1 5 . 0 4 2 9 4 4 4 0 1 4 . 0 2 5 . 8 7 1 . 0 0 5 . 9 1 5 . 9 7 2 9 4 4 4 0 2 3 . 9 1 5 . 9 8 5 . 1 4 5 . 2 7 5 . 7 3 2 9 4 4 4 0 3 3 . 8 7 6 . 7 8 3 . 8 6 5 . 5 7 4 . 9 9 2 9 4 4 1 0 0 1 4 . 0 7 6 . 0 0 4 . 2 0 5 . 2 6 4 . 4 7 2 9 4 4 1 0 0 2 3 . 9 6 5 . 6 5 4 . 4 5 4 . 8 0 4 . 7 7 2 9 4 4 1 0 0 3 4 . 1 0 4 . 9 5 3 . 9 2 4 . 4 7 4 . 8 0 A b b r e v i a t i o n s : E n v = E n v i r o n m e n t , 1 = T e m p e r a t e , 2 = T r o p i c a l ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + l ; D = D a y o f e n s i l i n g ; R e p = R e p l i c a t e , E n t = E n t e r o b a c t e r i a c e a e , L A B = L a c t i c a c i d b a c t e r i a , Y M = Y e a s t s a n d m o l d s , L A Y = L a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t . 2 6 1 T a b l e A - 3 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( 9 / 1 0 0 9 D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y A c e t i c a c i d L a c t i c a c i d P r o p i o n i c a c i d E t h a n o l B u t y r i c A c i d 9 3 1 0 0 . 2 9 4 0 . 9 6 7 6 0 0 . 1 7 1 0 9 3 1 0 0 . 2 3 2 0 . 0 6 6 0 0 0 . 0 6 6 0 9 3 1 0 0 . 3 5 0 0 . 6 9 8 8 0 0 . 1 8 7 0 9 3 1 1 1 . 0 0 7 3 . 5 6 4 7 0 0 . 6 9 1 0 9 3 1 1 1 . 0 9 1 2 . 7 3 8 7 0 . 0 0 7 0 . 4 2 3 0 . 0 0 6 9 3 1 1 1 . 0 0 0 3 . 5 6 7 1 0 . 0 0 4 0 . 5 4 3 0 . 0 0 5 9 3 1 3 1 . 0 0 1 5 . 6 0 3 3 0 . 0 0 5 1 . 7 9 8 0 . 0 0 9 9 3 1 3 1 . 2 8 3 5 . 3 2 8 6 0 . 0 0 6 1 . 2 5 5 0 . 0 0 3 9 3 1 3 1 . 2 9 8 5 . 7 3 1 8 0 . 0 1 8 1 . 1 7 7 0 . 0 0 4 9 3 1 7 1 . 1 9 0 6 . 6 0 4 9 0 . 0 1 9 1 . 2 9 0 0 . 0 0 3 9 3 1 7 1 . 2 0 8 5 . 8 3 6 8 0 . 0 0 9 1 . 9 9 9 0 . 0 0 8 9 3 1 7 1 . 7 9 5 6 . 3 1 9 3 0 . 0 0 8 1 . 3 5 1 0 . 0 0 9 9 3 1 1 4 1 . 5 5 4 9 . 2 9 4 9 0 . 0 0 8 1 . 6 5 2 0 . 0 1 4 9 3 1 1 4 1 . 7 8 6 1 0 . 1 3 8 0 1 . 5 1 3 0 . 0 1 7 9 3 1 1 4 1 . 7 3 5 9 . 3 8 1 5 0 . 0 0 9 1 . 0 3 6 0 . 0 1 6 9 3 1 2 1 1 . 8 2 6 9 . 0 1 7 6 0 . 0 1 0 1 . 4 4 9 0 9 3 1 2 1 1 . 8 0 2 9 . 4 0 4 7 0 . 0 1 0 1 . 2 3 9 0 . 0 1 4 9 3 1 2 1 1 . 8 7 9 9 . 9 1 7 7 0 . 0 0 9 1 . 5 9 9 0 . 0 1 4 9 3 1 4 0 2 . 0 9 6 7 . 6 5 8 0 0 . 0 1 2 1 . 5 1 1 0 . 0 0 8 9 3 1 4 0 2 . 3 2 2 9 . 9 1 6 5 0 . 0 1 2 1 . 1 7 1 0 . 0 0 9 9 3 1 4 0 1 . 2 5 8 6 . 5 3 9 5 0 . 0 1 1 1 . 0 2 0 0 . 0 1 6 9 3 1 1 0 0 2 . 1 5 2 5 . 4 8 0 0 0 . 0 1 5 1 . 0 7 4 0 . 0 1 3 9 3 1 1 0 0 2 . 0 5 0 6 . 3 8 8 0 0 . 0 1 6 1 . 0 3 8 0 . 0 0 8 9 3 1 1 0 0 1 . 8 9 6 6 . 4 1 7 0 0 . 0 1 4 1 . 2 9 5 0 . 0 0 6 9 3 2 0 0 . 1 8 2 0 . 6 0 8 1 0 0 . 3 7 7 0 9 3 2 0 0 . 2 6 6 0 . 5 4 0 1 0 0 . 1 7 3 0 9 3 2 0 0 . 1 8 0 0 . 6 7 2 0 0 0 . 1 5 0 0 9 3 2 1 0 . 9 1 7 3 . 5 8 9 1 0 . 0 0 4 0 . 4 6 1 0 . 0 0 7 9 3 2 1 1 . 1 8 5 4 . 5 3 2 8 0 . 0 0 3 0 . 5 5 8 0 . 0 0 6 9 3 2 1 1 . 0 8 8 3 . 6 2 3 9 0 . 0 0 7 0 . 4 9 3 0 . 0 0 5 9 3 2 3 1 . 4 4 5 6 . 1 9 2 4 0 . 0 1 7 0 . 9 1 4 0 . 0 1 9 9 3 2 3 1 . 1 7 2 5 . 0 1 1 6 0 1 . 1 2 3 0 9 3 2 3 1 . 0 4 6 5 . 8 4 5 7 0 . 0 1 3 1 . 2 4 1 0 . 0 0 4 9 3 2 7 1 . 2 8 7 6 . 5 6 3 7 0 . 0 0 9 1 . 2 0 6 0 . 0 0 3 9 3 2 7 1 . 4 7 3 5 . 5 8 4 1 0 . 0 0 9 1 . 8 7 6 0 . 0 1 8 9 3 2 7 1 . 2 6 4 5 . 9 1 5 1 0 . 0 0 8 1 . 6 7 3 0 . 0 0 9 9 3 2 1 4 1 . 7 7 0 1 0 . 4 8 7 0 . 0 0 8 1 . 7 9 9 0 . 0 1 4 9 3 2 1 4 1 . 6 4 7 9 . 3 8 8 7 0 1 . 3 8 1 0 . 0 1 7 9 3 2 1 4 1 . 8 6 9 8 . 8 6 9 7 0 . 0 0 9 1 . 3 9 7 0 . 0 1 6 9 3 2 2 1 1 . 9 9 9 9 . 1 3 9 9 0 . 0 1 0 1 . 4 6 5 0 9 3 2 2 1 1 . 6 9 2 1 0 . 2 3 4 0 . 0 1 0 1 . 5 1 1 0 . 0 1 4 9 3 2 2 1 1 . 6 9 2 8 . 8 3 3 1 0 . 0 0 9 1 . 6 2 9 0 . 0 1 4 9 3 2 4 0 1 . 7 8 8 7 . 6 0 0 0 0 . 0 1 2 1 . 2 0 7 0 . 0 0 8 9 3 2 4 0 1 . 8 7 8 8 . 5 6 8 4 0 . 0 1 2 1 . 1 6 1 0 . 0 0 9 9 3 2 4 0 1 . 7 8 8 7 . 3 6 4 3 0 . 0 1 1 1 . 2 5 3 0 . 0 1 6 9 3 2 1 0 0 1 . 8 5 0 6 . 3 8 3 0 0 . 0 1 5 1 . 1 0 3 0 . 0 1 3 9 3 2 1 0 0 2 . 0 7 2 5 . 6 0 6 0 0 . 0 1 6 1 . 2 0 3 0 . 0 0 8 9 3 2 1 0 0 2 . 1 1 7 6 . 0 3 3 0 0 . 0 1 4 0 . 8 4 1 0 . 0 0 6 9 3 3 0 0 . 1 9 8 0 . 4 9 9 9 0 0 . 1 9 4 0 9 3 3 0 0 . 1 7 5 0 . 7 7 5 8 0 0 . 1 1 3 0 9 3 3 0 0 . 2 1 7 0 . 4 0 4 5 0 0 . 3 5 6 0 9 3 3 1 1 . 1 4 7 5 . 4 5 1 1 0 . 0 0 4 0 . 6 7 7 0 . 0 0 7 9 3 3 1 1 . 0 1 8 4 . 8 6 9 9 0 . 0 0 3 0 . 4 1 6 0 . 0 0 6 9 3 3 1 1 . 0 5 7 4 . 8 7 2 0 0 . 0 0 7 0 . 4 0 9 0 . 0 0 5 9 3 3 3 1 . 5 6 1 6 . 9 7 2 2 0 . 0 1 7 0 . 9 7 1 0 . 0 0 9 9 3 3 3 0 . 8 3 0 8 . 4 2 0 6 0 . 0 1 1 1 . 5 4 8 0 . 0 2 3 9 3 3 3 1 . 1 0 1 7 . 2 7 0 9 0 . 0 0 3 1 . 3 6 0 0 . 0 0 4 9 3 3 7 1 . 6 1 4 8 . 7 4 0 9 0 . 0 0 9 2 . 2 2 3 0 . 0 0 3 9 3 3 7 1 . 2 5 7 9 . 0 4 8 0 0 . 0 0 9 1 . 6 9 2 0 . 0 1 8 9 3 3 7 1 . 4 5 6 9 . 2 4 0 8 0 . 0 0 8 1 . 0 6 7 0 . 0 0 9 9 3 3 1 4 1 . 7 5 4 9 . 1 5 1 8 0 . 0 0 8 1 . 2 6 9 0 . 0 1 4 9 3 3 1 4 1 . 8 8 4 8 . 5 3 5 1 0 1 . 7 2 8 0 . 0 1 7 8 3 3 1 4 1 . 3 9 4 9 . 4 7 5 7 0 . 0 0 9 1 . 2 8 3 0 . 0 1 6 9 3 3 2 1 1 . 6 8 8 8 . 5 7 1 6 0 . 0 1 0 1 . 4 2 8 0 . 0 1 1 2 6 2 T a b l e A - 3 . C o n t . Y e a r T r t D a y A c e t i c a c i d L a c t i c a c i d P r o p i o n i c a c i d E t h a n o l B u t y r i c A c i d 9 3 3 2 1 1 . 8 0 9 8 . 0 5 5 9 0 . 0 1 0 1 . 6 0 2 0 . 0 1 4 9 3 3 2 1 1 . 7 6 8 9 . 2 9 2 7 0 . 0 0 9 0 . 9 8 6 0 . 0 1 4 9 3 3 4 0 1 . 0 2 2 8 . 4 5 1 1 0 . 0 1 2 0 . 4 7 1 0 . 0 0 8 9 3 3 4 0 1 . 7 7 8 1 0 . 0 3 7 0 . 0 1 2 1 . 8 4 5 0 . 0 0 9 9 3 3 4 0 1 . 9 8 0 7 . 0 4 5 7 0 . 0 1 1 1 . 2 3 7 0 . 0 1 6 9 3 3 1 0 0 1 . 8 4 5 6 . 2 2 3 0 0 . 0 1 5 1 . 0 0 3 0 . 0 1 3 9 3 3 1 0 0 1 . 6 6 3 7 . 7 2 1 0 0 . 0 1 6 1 . 0 4 5 0 . 0 0 8 9 3 3 1 0 0 1 . 8 2 3 6 . 0 4 3 0 0 . 0 1 4 1 . 2 7 1 0 . 0 0 6 9 3 4 0 0 . 1 9 7 0 . 7 9 9 2 0 0 . 1 1 2 0 9 3 4 0 0 . 2 2 8 0 . 3 5 1 2 0 0 . 2 6 0 0 9 3 4 0 0 . 2 0 3 0 . 7 3 0 4 0 0 . 1 3 8 0 9 3 4 1 1 . 1 5 0 4 . 4 8 4 0 0 . 0 0 4 0 . 7 4 1 0 . 0 0 7 9 3 4 1 1 . 0 6 6 4 . 8 7 4 1 0 . 0 0 3 0 . 4 0 0 0 . 0 0 6 9 3 4 1 1 . 0 9 3 5 . 6 1 5 2 0 . 0 0 7 0 . 5 1 4 0 . 0 0 5 9 3 4 3 1 . 3 0 2 7 . 1 1 6 5 0 . 0 1 7 0 . 8 7 0 0 . 0 1 9 9 3 4 3 1 . 2 8 9 7 . 5 3 3 8 0 . 0 1 1 0 . 9 9 4 0 . 0 2 3 9 3 4 3 1 . 1 8 5 6 . 6 5 0 5 0 . 0 1 3 1 . 2 5 8 0 . 0 0 4 9 3 4 7 1 . 3 9 0 1 0 . 2 5 8 0 . 0 0 9 2 . 0 4 3 0 . 0 3 3 9 3 4 7 1 . 4 6 7 1 0 . 0 6 8 0 . 0 0 9 1 . 1 6 1 0 . 0 1 8 9 3 4 7 1 . 4 0 4 1 2 . 4 3 1 0 . 0 0 8 1 . 9 7 5 0 . 0 0 9 9 3 4 1 4 1 . 5 9 9 1 0 . 0 3 8 0 . 0 0 8 1 . 3 0 1 0 . 0 1 4 9 3 4 1 4 1 . 9 7 1 9 . 4 8 3 4 0 1 . 2 0 4 0 . 0 1 7 9 3 4 1 4 1 . 6 4 0 9 . 0 9 8 5 0 . 0 0 9 1 . 5 5 8 0 . 0 1 6 9 3 4 2 1 1 . 9 4 9 9 . 3 0 1 1 0 . 0 1 0 1 . 5 6 4 0 9 3 4 2 1 1 . 8 4 0 7 . 0 1 5 6 0 . 0 1 0 1 . 4 2 6 0 . 0 1 4 9 3 4 2 1 1 . 5 5 8 1 0 . 7 7 5 0 . 0 0 9 1 . 5 2 7 0 . 0 1 4 9 3 4 4 0 1 . 8 3 3 9 . 1 8 3 1 0 . 0 1 2 1 . 3 6 1 0 . 0 0 8 9 3 4 4 0 1 . 3 1 2 9 . 8 3 7 0 0 . 0 1 2 1 . 4 0 1 0 . 0 0 9 9 3 4 4 0 1 . 7 1 6 7 . 6 8 5 0 0 . 0 1 1 1 . 0 1 0 0 . 0 1 6 9 3 4 1 0 0 1 . 6 1 8 7 . 2 0 1 0 0 . 0 1 5 1 . 0 4 8 0 . 0 1 3 9 3 4 1 0 0 1 . 9 1 8 6 . 8 2 8 0 0 . 0 1 6 1 . 1 9 0 0 . 0 0 8 9 3 4 1 0 0 1 . 7 5 4 6 . 8 7 7 0 0 . 0 1 4 1 . 3 8 4 0 . 0 0 6 9 4 1 0 0 . 1 4 8 0 . 3 3 7 0 0 . 0 0 2 0 . 0 7 4 0 . 0 0 7 9 4 1 0 0 . 3 8 5 1 . 0 8 4 0 0 . 0 0 2 0 . 1 8 3 0 . 0 0 8 9 4 1 0 0 . 2 3 4 0 . 9 1 6 0 0 . 0 0 3 0 . 1 3 5 0 . 0 0 6 9 4 1 1 0 . 7 2 1 3 . 8 6 5 0 0 . 0 0 0 0 . 5 0 7 0 . 0 0 4 9 4 1 1 0 . 6 5 5 5 . 0 3 0 0 0 . 0 0 1 0 . 5 4 4 0 . 0 0 5 9 4 1 1 1 . 1 7 9 5 . 0 0 6 0 0 . 0 0 1 0 . 5 8 1 0 . 0 0 2 9 4 1 3 0 . 8 8 3 6 . 8 5 8 0 0 . 0 0 7 0 . 4 7 3 0 . 0 0 5 9 4 1 3 1 . 0 3 5 4 . 6 1 7 0 0 0 . 6 1 8 0 . 0 1 1 9 4 1 3 0 . 8 8 1 6 . 8 5 9 0 0 . 0 0 3 0 . 5 1 4 0 . 0 0 7 9 4 1 7 1 . 1 3 6 5 . 7 0 7 0 0 0 . 6 2 8 0 . 0 0 9 9 4 1 7 1 . 2 0 6 7 . 5 8 8 0 0 0 . 5 9 0 0 . 0 1 1 9 4 1 7 1 . 1 5 9 8 . 3 5 7 0 0 . 0 0 6 0 . 6 4 2 0 . 0 0 7 9 4 1 1 4 1 . 3 1 0 1 0 . 8 7 0 0 . 0 1 1 0 . 6 3 4 0 . 0 1 0 9 4 1 1 4 1 . 3 0 7 8 . 6 2 7 0 0 . 0 1 0 0 . 4 0 4 0 . 0 0 9 9 4 1 1 4 0 . 9 8 4 7 . 5 2 6 0 0 . 0 1 0 0 . 4 3 3 0 . 0 0 7 9 4 1 2 1 1 . 2 7 4 1 0 . 4 2 0 0 . 0 0 2 0 . 3 9 1 0 . 0 0 3 9 4 1 2 1 1 . 3 7 7 9 . 4 2 1 0 0 . 0 0 4 0 . 4 8 0 0 . 0 0 4 9 4 1 2 1 1 . 5 2 9 8 . 9 7 2 0 0 . 0 0 2 0 . 4 0 0 0 . 0 1 6 9 4 1 4 0 1 . 6 3 2 8 . 7 4 5 0 0 . 0 0 8 0 . 3 7 4 0 . 0 1 5 9 4 1 4 0 1 . 5 9 2 7 . 9 4 2 0 0 . 0 0 9 0 . 3 8 5 0 . 0 0 9 9 4 1 4 0 1 . 6 0 1 8 . 1 2 0 0 0 . 0 0 7 0 . 3 5 4 0 . 0 1 4 9 4 1 1 0 0 0 . 3 2 8 2 . 9 5 3 0 0 0 . 2 1 0 0 . 0 0 1 9 4 1 1 0 0 0 . 8 0 9 7 . 8 6 4 0 0 . 0 0 3 0 . 3 4 9 0 . 0 1 5 9 4 1 1 0 0 1 . 9 3 1 8 . 0 6 2 0 0 . 0 0 4 0 . 5 7 3 0 . 0 0 4 9 4 2 0 0 . 1 5 8 0 . 4 4 9 3 0 . 0 0 0 0 . 1 3 7 0 . 0 0 6 9 4 2 0 0 . 2 3 8 0 . 7 0 4 6 0 0 . 4 4 4 0 . 0 0 4 9 4 2 0 0 . 3 8 1 1 . 2 4 9 7 0 . 0 0 1 0 . 3 3 2 0 . 0 0 8 9 4 2 1 0 . 8 3 0 4 . 8 0 3 5 0 0 . 6 7 2 0 . 0 0 4 9 4 2 1 0 . 5 4 0 2 . 9 2 5 8 0 0 . 3 7 3 0 . 0 0 9 9 4 2 1 0 . 8 1 3 4 . 4 9 9 7 0 . 0 0 0 0 . 5 6 9 0 . 0 0 9 9 4 2 3 0 . 9 9 4 5 . 9 2 3 8 0 0 . 5 8 6 0 . 0 0 8 9 4 2 3 1 . 0 1 3 4 . 7 1 7 9 0 0 . 5 4 0 0 . 0 0 9 9 4 2 3 1 . 1 6 1 4 . 6 4 7 1 0 0 . 5 0 3 0 . 0 0 6 9 4 2 7 1 . 2 8 8 9 . 4 1 4 8 0 0 . 6 2 9 0 . 0 0 7 2 6 3 T a b l e A - 3 . C o n t . Y e a r T r t D a y A c e t i c a c i d L a c t i c a c i d P r o p i o n i c a c i d E t h a n o l B u t y r i c A c i d 9 4 2 7 1 . 2 8 9 6 . 9 1 4 3 0 0 . 6 4 6 0 . 0 0 8 9 4 2 7 1 . 2 8 3 6 . 4 0 2 7 0 0 . 6 1 5 0 . 0 0 6 9 4 2 1 4 1 . 4 8 0 9 . 2 1 4 7 0 0 . 5 2 7 0 . 0 1 2 9 4 2 1 4 1 . 3 7 5 9 . 1 6 3 6 0 . 0 0 1 0 . 5 3 6 0 . 0 1 1 9 4 2 1 4 1 . 5 6 4 9 . 0 4 3 2 0 0 . 6 2 8 0 . 0 1 5 9 4 2 2 1 1 . 4 4 4 1 0 . 1 0 8 0 . 0 0 1 0 . 5 7 9 0 . 0 1 2 9 4 2 2 1 1 . 4 9 1 9 . 7 3 4 6 0 . 0 0 1 0 . 4 0 4 0 . 0 1 1 9 4 2 2 1 1 . 6 7 3 9 . 4 6 3 0 0 . 0 0 1 0 . 5 8 2 0 . 0 1 4 9 4 2 4 0 1 . 7 4 1 8 . 4 7 1 0 0 . 0 0 4 0 . 4 0 8 0 . 0 0 9 9 4 2 4 0 1 . 6 5 2 8 . 5 4 1 0 0 . 0 0 1 0 . 3 7 4 0 . 0 1 1 9 4 2 4 0 1 . 5 9 2 8 . 9 6 4 0 0 . 0 0 0 0 . 3 5 9 0 . 0 0 9 9 4 2 1 0 0 1 . 7 4 7 6 . 4 3 8 8 0 . 0 1 1 0 . 5 8 0 0 . 0 0 4 9 4 2 1 0 0 1 . 8 0 5 7 . 6 5 1 7 0 . 0 0 2 0 . 6 1 1 0 . 0 1 3 9 4 2 1 0 0 1 . 9 2 8 6 . 3 3 6 1 0 . 0 1 0 0 . 3 6 5 0 . 0 0 5 9 4 3 0 0 . 1 8 0 0 . 1 6 3 9 0 0 . 1 2 4 0 9 4 3 0 0 . 1 6 0 0 . 4 4 0 8 0 0 . 2 0 6 0 9 4 3 0 0 . 9 9 0 0 . 4 9 6 3 0 0 . 0 7 2 0 9 4 3 1 0 . 9 6 8 3 . 2 1 8 6 0 0 . 2 7 9 0 0 0 3 9 4 3 1 0 . 9 2 0 8 . 2 3 7 2 0 0 . 5 8 4 0 . 0 0 3 9 4 3 1 0 . 7 9 4 3 . 6 3 8 0 0 0 . 4 3 6 0 . 0 0 3 9 4 3 3 0 8 5 2 6 . 3 1 8 3 0 0 . 4 4 2 0 9 4 3 3 0 . 8 3 6 8 . 3 9 8 2 0 0 . 5 3 2 0 . 0 0 6 9 4 3 3 0 . 9 9 2 8 . 0 7 6 5 0 0 . 6 4 9 0 . 0 0 9 9 4 3 7 1 . 2 1 1 5 . 0 7 8 1 0 0 . 2 7 5 0 . 0 0 7 9 4 3 7 0 . 5 8 6 1 2 . 2 7 3 0 1 . 2 0 2 0 . 0 0 2 9 4 3 7 1 . 3 5 9 7 . 0 2 1 0 0 0 . 4 3 6 0 . 0 0 2 9 4 3 1 4 1 . 5 7 4 1 0 . 8 5 3 0 0 . 8 1 6 0 . 0 0 7 9 4 3 1 4 1 2 2 5 1 0 . 3 0 2 0 . 0 0 6 0 . 6 6 6 0 . 0 0 7 9 4 3 1 4 1 . 4 7 8 8 . 6 9 4 5 0 0 . 1 7 1 0 . 0 0 6 9 4 3 2 1 1 . 2 3 1 1 1 . 0 0 2 0 . 0 0 6 0 . 6 7 5 0 . 0 0 7 9 4 3 2 1 1 . 0 3 8 1 1 . 6 7 3 0 . 0 0 1 1 . 6 2 3 0 . 0 0 8 9 4 3 2 1 1 . 1 1 3 1 1 . 8 2 2 0 . 0 0 8 1 . 3 6 7 0 . 0 0 7 9 4 3 4 0 1 . 3 4 2 8 . 4 8 9 0 0 . 0 0 7 0 . 4 1 5 0 . 0 0 9 9 4 3 4 0 1 . 4 5 6 8 . 8 7 4 0 0 . 0 0 6 0 . 4 0 8 0 . 0 0 7 9 4 3 4 0 1 . 5 4 7 8 . 1 1 2 0 0 . 0 0 3 0 . 3 7 4 0 . 0 0 6 9 4 3 1 0 0 1 . 6 9 4 7 . 8 1 8 0 0 . 0 0 2 1 . 7 4 7 0 . 0 0 8 9 4 3 1 0 0 1 . 8 8 5 6 . 8 0 0 2 0 . 0 1 1 0 . 7 4 8 0 . 0 0 8 9 4 3 1 0 0 1 . 2 7 6 6 . 7 0 7 0 0 . 0 0 2 0 . 2 5 1 0 . 0 1 0 9 4 4 0 0 . 1 8 9 0 . 1 4 8 6 0 0 . 1 2 6 0 9 4 4 0 0 . 1 8 8 0 . 4 2 5 7 0 0 . 1 6 4 0 . 0 0 1 9 4 4 0 0 . 2 0 7 0 . 6 3 3 8 0 0 . 1 9 9 0 . 0 0 1 9 4 4 1 0 . 8 3 8 6 . 6 3 7 2 0 0 . 6 9 4 0 . 0 0 2 9 4 4 1 0 . 7 0 9 4 . 9 8 3 1 0 0 . 4 0 8 0 . 0 0 1 9 4 4 1 0 . 5 6 4 5 . 9 0 0 1 0 0 . 4 3 5 0 . 0 0 2 9 4 4 3 0 7 3 0 5 . 9 8 5 5 0 0 . 5 1 1 0 . 0 0 1 9 4 4 3 1 . 2 7 1 5 . 2 1 4 2 0 0 . 2 9 5 0 . 0 0 1 9 4 4 3 0 . 7 4 9 7 . 7 1 0 4 0 0 . 8 9 4 0 . 0 0 5 9 4 4 7 1 . 4 7 6 8 . 5 8 6 7 0 0 . 5 6 6 0 . 0 0 0 9 4 4 7 0 . 8 7 4 9 . 6 1 6 4 0 0 . 4 9 6 0 . 0 0 2 9 4 4 7 0 . 8 2 0 6 . 9 6 3 9 0 . 0 0 5 0 . 5 4 8 0 . 0 0 8 9 4 4 1 4 1 . 4 7 1 8 . 9 5 5 6 0 0 . 6 3 4 0 . 0 0 9 9 4 4 1 4 1 2 3 8 9 . 9 1 4 5 0 . 0 1 3 0 . 6 1 9 0 . 0 0 8 9 4 4 1 4 1 . 5 9 2 8 . 8 5 5 7 0 0 . 5 0 8 0 . 0 1 3 9 4 4 2 1 2 . 0 5 8 1 0 . 1 6 1 0 . 0 0 8 0 . 4 3 4 0 . 0 0 2 9 4 4 2 1 1 . 0 8 2 1 1 . 1 9 4 0 . 0 0 2 0 . 7 2 1 0 . 0 0 8 9 4 4 2 1 1 . 2 6 6 1 1 . 1 3 4 0 . 0 0 4 0 . 6 6 9 0 . 0 1 5 9 4 4 4 0 1 . 4 2 0 8 . 2 4 6 0 0 . 0 0 5 0 . 4 2 5 0 . 0 1 7 9 4 4 4 0 1 . 3 5 0 8 . 0 4 9 0 0 . 0 0 3 0 . 4 1 9 0 . 0 0 9 9 4 4 4 0 1 . 3 2 0 8 . 1 0 6 0 0 . 0 0 1 0 . 3 6 8 0 . 0 0 7 9 4 4 1 0 0 1 . 7 8 3 8 . 7 4 5 8 0 0 . 4 3 1 0 . 0 0 6 9 4 4 1 0 0 1 . 5 0 2 7 . 2 1 4 2 0 . 0 0 3 0 . 3 9 9 0 . 0 1 1 9 4 4 1 0 0 1 . 8 3 7 9 . 0 2 6 2 0 . 0 0 4 0 . 4 8 2 0 . 0 1 2 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I 2 6 4 T a b l e A - 4 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ( 9 / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 4 1 0 6 . 6 8 7 9 0 . 0 8 1 9 0 . 1 6 0 7 0 . 1 4 0 7 6 . 7 1 6 3 9 4 1 0 6 . 4 1 4 5 0 . 0 8 1 3 0 . 1 6 5 4 0 . 1 9 1 1 6 . 5 1 7 7 9 4 1 0 6 . 7 8 0 8 0 . 0 7 3 1 0 . 1 4 6 1 0 . 1 7 0 9 6 . 0 8 8 7 9 4 1 1 2 . 4 1 3 2 0 . 0 6 0 5 0 . 1 9 9 4 0 . 1 8 5 4 1 . 8 9 0 5 9 4 1 1 4 . 4 2 6 9 0 . 0 7 9 9 0 . 1 5 4 3 0 . 1 5 6 5 2 . 3 2 3 2 9 4 1 1 4 . 1 8 1 1 0 . 1 3 3 3 0 . 3 7 5 7 0 . 0 8 3 6 1 . 9 8 3 9 9 4 1 3 3 . 6 3 9 9 0 . 1 0 2 5 0 . 1 5 3 1 0 . 1 1 0 0 1 . 7 6 1 7 9 4 1 3 3 . 6 5 3 6 0 . 1 0 1 3 0 . 3 8 7 8 0 . 1 3 3 3 2 . 6 8 2 4 9 4 1 3 3 . 2 1 5 0 . 0 9 5 6 0 . 3 1 7 9 0 . 0 9 1 1 1 . 0 2 6 0 9 4 1 7 2 . 3 8 7 8 0 . 1 0 4 5 0 . 3 4 9 3 0 . 1 2 9 0 0 . 9 9 4 3 9 4 1 7 2 . 8 7 4 7 0 . 0 8 9 9 0 . 2 8 9 8 0 . 1 5 2 7 0 . 8 4 1 2 9 4 1 7 2 . 3 3 0 7 0 . 1 2 1 6 0 . 3 3 7 7 0 . 1 3 3 3 1 . 2 8 7 4 9 4 1 1 4 2 . 4 2 4 2 0 . 1 0 6 6 0 . 2 9 7 3 0 . 1 2 9 8 0 . 2 0 1 5 9 4 1 1 4 1 . 5 7 7 1 0 . 1 2 1 9 0 . 1 4 2 2 0 . 1 0 2 4 0 . 3 6 3 5 9 4 1 1 4 3 . 3 7 2 4 0 . 1 7 6 3 0 . 3 0 0 6 0 . 0 9 4 5 0 . 6 8 4 8 9 4 1 2 1 1 . 1 5 8 1 0 . 1 3 1 6 0 . 3 3 8 8 0 . 1 1 0 5 0 . 3 0 4 2 9 4 1 2 1 2 . 9 6 8 5 0 . 1 2 9 2 0 . 3 5 6 4 0 . 1 0 2 5 0 . 3 5 7 5 9 4 1 ' 2 1 2 . 9 9 6 7 0 . 1 7 8 6 0 . 3 2 0 1 0 . 0 9 7 8 0 . 2 0 8 3 9 4 1 4 0 0 . 5 8 8 7 0 . 4 5 3 4 0 . 1 0 5 6 0 . 0 8 9 2 0 . 4 3 4 1 9 4 1 4 0 2 . 4 3 9 8 0 . 3 0 5 8 0 . 2 4 8 8 0 . 0 9 2 8 0 . 2 7 6 2 9 4 1 4 0 1 . 9 5 7 8 0 . 3 7 5 7 0 . 3 3 7 1 0 . 0 8 9 2 0 . 1 8 7 4 9 4 1 1 0 0 0 . 5 6 1 8 0 . 6 0 7 7 0 . 1 5 6 6 0 . 1 3 0 2 0 . 5 3 3 9 4 1 1 0 0 1 . 6 0 9 5 0 . 7 7 5 1 0 . 3 6 9 8 0 . 1 8 2 4 0 . 4 5 7 7 9 4 1 1 0 0 0 . 6 4 8 9 0 . 6 7 7 8 0 . 1 9 3 8 0 . 1 0 5 3 0 . 6 3 6 3 9 4 2 0 7 . 6 8 1 2 0 . 0 8 2 9 0 . 2 4 5 7 0 . 2 7 5 5 6 . 9 9 0 4 9 4 2 0 5 . 9 5 8 2 0 . 0 3 6 7 0 . 1 2 2 4 0 . 0 8 6 4 6 . 9 6 2 9 9 4 2 0 6 . 2 9 3 4 0 . 0 5 6 8 0 . 2 1 5 5 0 . 1 9 3 1 5 . 0 5 2 5 9 4 2 1 4 . 4 3 0 7 0 . 0 8 4 7 0 . 3 2 1 4 0 . 1 9 2 4 2 . 4 6 3 8 9 4 2 1 3 . 0 3 5 7 0 . 0 5 8 7 0 . 2 9 8 1 0 . 2 0 6 5 2 . 4 6 2 8 9 4 2 1 3 . 1 0 3 5 0 . 0 7 5 1 0 . 2 3 3 9 0 . 1 5 2 4 1 . 0 8 4 4 9 4 2 3 3 . 8 5 4 3 0 . 1 0 2 2 0 . 2 9 4 7 0 . 1 6 0 0 1 . 9 9 5 9 4 2 3 3 . 6 2 1 3 0 . 1 3 0 5 0 . 2 5 7 4 0 . 2 5 8 9 1 . 4 7 4 9 9 4 2 3 3 . 5 9 2 3 0 . 1 4 9 2 0 . 3 4 7 3 0 . 1 2 5 7 1 . 4 1 8 3 9 4 2 7 2 . 2 0 6 3 0 . 1 1 1 5 0 . 3 1 6 8 0 . 1 5 0 6 1 . 2 0 1 7 9 4 2 7 2 . 7 4 7 2 0 . 0 9 7 2 0 . 2 8 2 3 0 . 1 1 0 0 1 . 0 5 5 4 9 4 2 7 2 . 5 6 2 2 0 . 1 3 7 3 0 . 3 3 3 2 0 . 0 4 7 2 1 . 1 0 9 1 9 4 2 1 4 2 . 3 4 6 2 0 . 0 8 2 2 0 . 2 8 6 8 0 . 0 9 9 3 0 . 9 6 1 2 9 4 2 1 4 2 . 1 3 2 5 0 . 1 1 6 9 0 . 3 6 9 8 0 . 0 8 5 2 0 . 5 5 2 5 9 4 2 1 4 2 . 7 6 8 5 0 . 1 6 6 6 0 . 3 7 8 6 0 . 0 5 6 4 0 . 4 1 7 8 9 4 2 2 1 2 . 2 0 0 0 0 . 0 8 7 3 0 . 2 8 8 4 0 . 0 9 2 9 0 . 1 6 2 4 9 4 2 2 1 2 . 0 4 7 8 0 . 1 1 7 8 0 . 3 3 4 1 0 . 0 5 7 6 0 . 3 5 7 6 9 4 2 2 1 1 . 6 3 8 7 0 . 1 8 9 0 . 2 8 2 1 0 . 0 8 2 1 0 . 2 5 6 2 9 4 2 4 0 1 . 9 1 0 3 0 . 1 9 9 8 0 . 1 5 1 4 0 . 0 7 1 9 0 . 2 4 1 3 9 4 2 4 0 1 . 6 5 9 8 0 . 5 6 1 9 0 . 3 9 7 4 0 . 0 7 8 3 0 . 1 6 6 8 9 4 2 4 0 1 . 7 9 2 3 0 . 2 0 4 4 0 . 3 0 8 8 0 . 1 4 2 6 0 . 1 8 7 3 9 4 2 1 0 0 1 . 0 8 3 5 0 . 7 9 6 5 0 . 2 4 3 7 0 . 1 9 0 0 0 . 5 3 7 2 9 4 2 1 0 0 1 . 0 1 6 4 0 . 5 0 4 5 0 . 2 3 0 6 0 . 0 9 7 9 0 . 3 7 9 5 9 4 2 1 0 0 1 . 0 8 2 1 0 . 6 1 5 7 0 . 2 7 1 1 0 . 1 4 2 5 0 . 4 2 3 9 9 4 3 0 6 . 7 0 8 6 0 . 0 8 1 0 0 . 1 3 8 9 0 . 1 1 3 3 5 . 9 1 7 1 9 4 3 0 6 . 5 9 2 4 0 . 0 6 5 1 0 . 1 6 1 1 0 . 1 7 8 7 6 . 9 5 0 7 9 4 3 0 5 . 9 6 0 9 0 . 0 7 4 2 0 . 1 3 7 2 0 . 1 4 1 1 6 . 0 8 3 6 9 4 3 1 2 . 4 7 6 8 0 . 0 9 7 8 0 . 2 1 5 9 0 . 1 6 0 6 2 . 1 4 2 9 9 4 3 1 3 . 7 0 1 2 0 . 0 7 8 2 0 . 2 3 8 8 0 . 1 5 3 4 2 . 8 3 3 3 9 4 3 1 4 . 7 8 6 2 0 . 0 8 7 1 0 . 2 2 5 1 0 . 1 5 0 2 2 . 3 0 8 2 9 4 3 3 2 . 4 8 2 7 0 . 1 2 2 5 0 . 3 6 7 9 0 . 1 2 3 2 3 . 1 3 7 5 9 4 3 3 3 . 5 6 2 8 0 . 1 4 7 5 0 . 2 9 6 7 0 . 1 3 3 1 1 . 9 8 5 4 9 4 3 3 3 . 2 6 6 6 0 . 1 5 4 3 0 . 2 5 4 5 0 . 1 3 2 7 2 . 1 9 2 1 9 4 3 7 2 . 6 4 5 5 0 . 1 1 6 2 0 . 3 9 5 2 0 . 1 0 4 5 2 . 3 4 3 3 9 4 3 7 2 . 2 5 1 7 0 . 0 8 7 5 0 . 2 7 7 9 0 . 0 9 7 8 2 . 9 9 8 8 9 4 3 7 1 . 8 9 8 3 0 . 1 4 5 2 0 . 1 3 1 4 0 . 1 2 4 5 1 . 3 8 2 2 9 4 3 1 4 1 . 8 1 2 2 0 . 1 1 2 3 0 . 1 9 5 8 0 . 0 9 7 8 1 . 7 6 5 3 9 4 3 1 4 1 . 7 1 3 9 0 . 1 7 3 2 0 . 1 8 6 4 0 . 0 7 1 1 2 . 3 6 5 8 9 4 3 1 4 1 . 9 4 0 2 0 . 1 3 0 9 0 . 1 4 9 0 . 0 6 4 8 1 . 9 7 2 2 2 6 5 T a b l e A - 4 . C o n t . Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 4 3 2 1 1 . 9 2 9 5 0 . 1 5 4 5 0 . 3 3 5 8 0 . 1 0 2 8 2 . 5 8 3 5 9 4 3 2 1 1 . 2 0 9 1 0 . 0 5 8 8 0 . 1 5 4 2 0 . 1 2 4 5 1 . 9 8 6 9 4 3 2 1 0 . 8 3 3 1 0 . 1 4 0 2 0 . 2 0 8 6 0 . 0 0 9 6 0 . 9 8 3 5 9 4 3 4 0 1 . 1 4 8 1 0 . 7 3 7 6 0 . 3 0 9 8 0 . 0 8 8 0 1 . 8 9 8 3 9 4 3 4 0 1 . 2 1 5 0 . 1 3 5 4 0 . 2 2 2 4 0 . 0 8 4 5 1 . 6 5 0 6 9 4 3 4 0 1 . 5 8 4 7 0 . 0 2 9 6 0 . 1 0 3 1 0 . 0 8 3 7 0 . 8 3 3 6 9 4 3 1 0 0 1 . 5 1 7 1 0 . 6 4 4 3 0 . 2 6 3 8 0 . 1 4 2 1 . 9 0 7 3 9 4 3 1 0 0 0 . 7 3 7 1 0 . 6 9 7 5 0 . 1 3 6 6 0 . 1 8 7 5 0 . 9 2 9 6 9 4 3 1 0 0 0 . 8 5 8 9 0 . 5 8 9 1 0 . 2 9 8 7 0 . 1 1 4 8 1 . 2 4 6 8 9 4 4 0 5 . 7 6 0 1 0 . 0 4 9 9 0 . 1 4 9 8 0 . 2 0 8 4 6 . 7 4 7 1 9 4 4 0 6 . 8 0 0 8 0 . 0 4 8 2 0 . 2 1 0 1 0 . 1 6 2 6 5 . 7 1 2 7 9 4 4 0 5 . 3 6 1 9 0 . 0 5 6 8 0 . 2 2 0 2 0 . 1 1 1 3 5 . 9 4 9 2 9 4 4 1 3 . 4 5 8 1 0 . 0 5 8 9 0 . 2 1 8 7 0 . 1 1 4 5 2 . 1 4 4 1 9 4 4 1 3 . 8 5 2 4 0 . 0 8 4 5 0 . 2 2 4 5 0 . 1 0 6 3 2 . 4 7 9 9 9 4 4 1 3 . 6 4 6 9 0 . 0 7 6 2 0 . 2 2 6 8 0 . 1 1 6 9 2 . 5 9 2 6 9 4 4 3 3 . 8 2 5 1 0 . 1 0 9 3 0 . 3 3 0 9 0 . 1 2 4 5 1 . 9 9 4 1 9 4 4 3 3 . 4 2 5 9 0 . 1 1 8 5 0 . 3 7 2 9 0 . 0 8 4 5 2 . 5 7 7 0 9 4 4 3 2 . 8 7 2 9 0 . 1 2 9 0 . 3 7 8 4 0 . 1 0 4 5 2 . 6 3 5 4 9 4 4 7 2 . 3 4 1 7 0 . 0 4 9 9 0 . 2 5 0 6 0 . 1 3 7 5 2 . 0 4 7 9 4 4 7 2 . 2 8 8 5 0 . 0 5 7 1 0 . 2 9 1 7 0 . 1 3 9 8 2 . 5 7 6 3 9 4 4 7 1 . 2 7 8 1 0 . 1 1 8 5 0 . 3 2 4 8 0 . 1 2 2 4 2 . 3 3 1 6 9 4 4 1 4 1 . 2 8 1 9 0 . 0 9 1 9 0 . 2 6 7 3 0 . 1 4 7 8 2 . 0 4 1 2 9 4 4 1 4 1 . 8 2 2 7 0 . 1 1 8 9 0 . 3 0 8 4 0 . 1 7 7 7 2 . 5 9 2 9 9 4 4 1 4 1 . 9 1 8 2 0 . 0 9 7 7 0 . 1 9 9 5 0 . 1 4 7 3 1 . 3 6 6 2 9 4 4 2 1 1 . 4 6 6 6 0 . 2 2 0 . 2 0 8 5 0 . 1 0 1 3 2 . 0 7 3 9 9 4 4 2 1 1 . 3 3 4 7 0 . 1 7 4 9 0 . 2 3 2 0 . 1 4 8 1 0 . 9 7 6 9 9 4 4 2 1 1 . 1 6 9 3 0 . 8 4 3 3 0 . 2 3 4 5 0 . 1 8 3 6 2 . 5 7 0 9 9 4 4 4 0 1 . 6 8 7 4 0 . 2 1 7 7 0 . 1 2 0 6 0 . 0 9 4 5 0 . 8 7 7 9 9 4 4 4 0 1 . 3 4 2 2 0 . 3 5 1 4 0 . 3 4 0 7 0 . 1 7 5 2 2 . 4 0 0 7 9 4 4 4 0 0 . 9 8 2 7 0 . 2 4 3 9 0 . 3 5 2 5 0 . 1 0 4 3 1 . 3 3 8 9 9 4 4 1 0 0 0 . 8 5 3 0 . 8 9 3 8 0 . 2 1 9 3 0 . 2 2 5 3 1 . 0 4 3 4 9 4 4 1 0 0 1 . 2 2 9 3 0 . 3 9 5 6 0 . 1 9 4 0 . 2 0 2 2 1 . 7 5 4 4 9 4 4 1 0 0 0 . 9 3 0 5 0 . 2 1 0 6 0 . 2 3 1 2 0 . 1 6 0 5 1 . 1 4 4 5 9 3 1 0 5 . 4 8 3 9 0 . 0 7 3 7 0 . 0 5 0 9 0 . 0 2 8 6 5 . 5 1 5 9 3 1 0 5 . 1 2 0 4 0 . 0 7 3 1 0 . 0 5 5 5 0 . 0 9 8 2 4 . 5 2 4 9 9 3 1 0 5 . 5 1 1 0 . 0 8 1 3 0 . 0 3 6 3 0 . 0 8 1 2 4 . 4 6 5 2 9 3 1 1 3 . 4 3 6 6 0 . 0 8 6 5 0 . 0 5 1 5 0 . 0 6 1 2 1 . 6 1 3 3 9 3 1 1 3 . 1 4 9 7 0 . 0 7 5 3 0 . 0 4 2 3 0 . 0 5 4 6 1 . 0 6 9 6 9 3 1 1 3 . 2 7 0 5 0 . 0 5 5 6 0 . 0 4 2 4 0 . 0 7 2 8 2 . 5 5 9 3 9 3 1 3 0 . 0 3 5 2 0 . 0 9 9 7 0 . 0 6 9 7 0 . 7 9 9 2 1 . 0 2 4 5 9 3 1 3 3 . 2 1 4 5 0 . 0 1 8 3 0 . 1 6 4 4 0 . 0 7 6 7 1 . 2 5 3 0 9 3 1 3 1 . 4 6 5 7 0 . 0 1 4 7 0 . 1 4 2 5 0 . 0 6 4 5 1 . 1 1 2 4 9 3 1 7 1 . 8 8 1 5 0 . 1 2 6 9 0 . 1 3 4 1 0 . 0 9 6 0 . 6 2 4 8 9 3 1 7 1 . 7 0 3 1 0 . 1 3 5 8 0 . 1 0 2 3 0 . 0 6 7 0 . 7 3 7 6 9 3 1 7 1 . 7 1 8 3 0 . 1 5 5 8 0 . 0 6 8 8 0 . 0 6 7 4 0 . 6 0 5 9 9 3 1 1 4 1 . 5 5 3 1 0 . 1 6 6 2 0 . 0 8 2 4 0 . 0 8 7 7 0 . 5 0 2 9 9 3 1 1 4 1 . 5 6 0 7 0 . 1 4 5 6 0 . 0 9 7 4 0 . 0 7 0 8 0 . 5 9 5 1 9 3 1 1 4 1 . 6 1 4 4 0 . 0 3 4 1 0 . 0 9 4 5 0 . 0 3 2 1 0 . 3 0 4 9 3 1 2 1 1 . 2 4 2 6 0 . 1 0 4 4 0 . 1 1 6 5 0 . 0 7 7 3 0 . 2 6 5 1 9 3 1 2 1 1 . 1 9 1 2 0 . 1 1 8 4 0 . 1 2 0 7 0 . 0 5 2 3 0 . 2 6 9 5 9 3 1 2 1 1 . 2 2 8 8 0 . 1 2 3 4 0 . 0 9 6 7 0 . 0 5 9 0 . 4 3 4 3 9 3 1 4 0 1 . 1 4 5 3 0 . 2 1 3 4 0 . 0 6 3 5 0 . 0 9 0 6 0 . 3 9 6 4 9 3 1 4 0 1 . 1 7 2 4 0 . 3 4 3 8 0 . 0 8 5 2 0 . 0 3 0 3 0 . 4 5 2 4 9 3 1 4 0 1 . 1 0 9 8 0 . 3 3 5 1 0 . 0 7 4 8 0 . 0 2 0 2 0 . 2 2 4 6 9 3 1 1 0 0 1 . 0 6 9 2 0 . 5 0 3 4 0 . 0 6 5 2 0 . 1 2 5 0 . 5 5 9 8 9 3 1 1 0 0 1 . 0 8 1 9 0 . 5 2 6 6 0 . 0 5 8 3 0 . 1 0 8 6 0 . 2 0 3 8 9 3 1 1 0 0 1 . 1 1 7 7 0 . 5 2 4 3 0 . 0 7 6 5 0 . 1 1 5 6 0 . 3 1 3 9 3 2 0 5 . 7 7 7 0 . 0 6 7 8 0 . 0 8 7 0 . 0 8 5 2 4 . 7 3 4 9 3 2 0 4 . 8 2 1 0 . 0 7 6 1 0 . 0 6 9 7 0 . 1 1 1 6 4 . 8 0 0 9 3 2 0 5 . 4 5 3 0 . 0 6 8 2 0 . 1 0 6 8 0 . 0 7 6 4 . 6 2 6 9 9 3 2 1 3 . 2 6 1 0 . 0 4 6 6 0 . 0 4 1 6 0 . 0 5 9 7 1 . 6 7 8 9 9 3 2 1 2 . 9 6 3 0 . 0 4 3 7 0 . 0 2 0 7 0 . 0 3 2 6 1 . 8 4 4 9 9 3 2 1 3 . 5 2 2 0 . 0 8 5 5 0 . 0 7 4 8 0 . 0 9 3 5 1 . 5 4 3 1 9 3 2 3 2 . 7 6 4 0 . 1 5 3 2 0 . 2 7 8 4 0 . 0 7 5 6 0 . 9 1 4 9 9 3 2 3 2 . 6 9 0 0 . 1 0 7 3 0 . 2 4 5 2 0 . 0 6 7 6 0 . 8 1 5 3 . 3 3 2 3 £ 9 6 4 0 . 9 3 1 8 0 . 0 7 5 6 0 . 0 7 9 5 0 . 9 3 6 5 2 6 6 T a b l e A - 4 . C o n t . Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 3 2 7 1 . 7 0 9 0 . 1 0 8 8 0 . 0 9 5 7 0 . 0 7 7 6 0 . 5 1 3 2 9 3 2 7 1 . 7 3 6 3 0 . 1 1 4 6 0 . 0 3 8 5 0 . 0 6 5 8 0 . 7 3 5 2 9 3 2 7 1 . 8 8 9 0 0 . 1 6 8 4 0 . 1 1 1 7 0 . 1 1 0 2 0 . 4 8 4 2 9 3 2 1 4 1 . 7 2 4 0 . 0 9 6 8 0 . 0 8 6 5 0 . 0 8 0 9 0 . 4 2 6 1 9 3 2 1 4 1 . 5 8 7 0 . 1 1 5 1 0 . 1 3 5 1 0 . 0 6 3 1 0 . 5 6 6 9 9 3 2 1 4 1 . 6 5 4 0 . 1 1 0 4 0 . 0 5 4 0 . 0 7 8 0 . 4 5 5 9 9 3 2 2 1 1 . 1 8 2 4 0 . 1 5 5 5 0 . 0 7 1 7 0 . 0 6 1 5 0 . 5 2 2 2 9 3 2 2 1 1 . 1 0 8 3 0 . 1 7 7 3 0 . 1 3 3 7 0 . 0 9 0 7 0 . 3 6 4 3 9 3 2 2 1 1 . 1 9 6 7 0 . 1 3 8 3 0 . 0 9 6 3 0 . 0 2 3 4 0 . 3 7 8 2 9 3 2 4 0 1 . 0 7 2 3 0 . 2 7 9 1 0 . 0 9 7 8 0 . 1 2 4 1 0 . 3 5 7 7 9 3 2 4 0 1 . 0 8 7 6 0 . 3 1 6 3 0 . 0 9 4 5 0 . 0 2 3 4 0 . 3 0 7 7 9 3 2 4 0 1 . 1 6 7 8 0 . 3 8 8 0 . 0 6 0 2 0 . 1 1 6 3 0 . 2 6 8 3 9 3 2 1 0 0 1 . 0 3 0 7 0 . 7 2 0 6 0 . 0 4 5 6 0 . 0 9 1 9 0 . 3 9 9 8 9 3 2 1 0 0 1 . 0 5 6 7 0 . 4 0 2 6 0 . 0 5 4 6 0 . 0 9 4 5 0 . 4 8 1 2 9 3 2 1 0 0 1 . 1 3 4 6 0 . 6 5 4 0 . 0 8 4 0 0 . 0 9 9 0 . 3 2 1 9 9 3 3 0 5 . 3 4 6 0 . 0 6 7 5 0 . 0 6 5 4 0 . 0 6 7 0 4 . 0 6 0 5 9 3 3 0 5 . 5 1 2 0 . 0 5 7 8 0 . 0 7 5 6 0 . 0 8 9 7 4 . 3 9 5 5 9 3 3 0 4 . 8 2 1 0 . 0 9 8 0 0 . 0 7 6 8 6 . 0 7 0 4 9 3 3 1 2 . 9 6 8 0 . 0 4 7 0 . 0 6 9 1 0 . 0 4 7 6 1 . 7 8 2 2 9 3 3 1 3 . 0 9 6 0 . 0 5 0 0 . 0 6 3 3 2 . 5 8 4 5 9 3 3 1 3 . 6 2 1 0 . 1 0 2 8 0 . 2 0 0 1 0 . 0 9 5 1 . 9 6 5 7 9 3 3 3 2 . 8 0 6 2 0 . 0 2 9 3 0 . 1 7 2 4 0 . 0 7 3 5 1 . 9 3 3 8 9 3 3 3 2 . 1 5 3 0 . 1 2 2 0 . 1 0 8 4 0 . 0 6 4 8 2 . 2 9 7 6 9 3 3 3 2 . 2 2 7 8 0 . 1 0 2 8 0 . 1 1 0 1 0 . 0 4 5 1 . 9 6 5 7 9 3 3 7 1 . 5 9 0 9 0 . 0 9 9 1 0 . 0 7 2 0 . 1 0 3 3 1 . 0 9 5 5 9 3 3 7 1 . 6 3 0 5 0 . 1 2 1 4 0 . 0 9 0 8 0 . 0 9 9 0 . 9 7 6 4 9 3 3 7 1 . 6 4 2 7 0 . 1 2 9 1 0 . 1 2 8 4 0 . 1 1 7 5 1 . 4 2 6 9 9 3 3 1 4 1 . 5 1 5 0 . 1 0 7 2 0 . 0 8 7 2 0 . 0 7 3 2 0 . 6 6 7 7 9 3 3 1 4 1 . 5 3 3 7 0 . 1 4 0 2 0 . 1 2 2 9 0 . 0 8 1 1 0 . 7 6 8 8 9 3 3 1 4 1 . 4 9 3 4 0 . 1 3 8 4 0 . 1 3 0 9 0 . 0 8 3 3 1 . 3 3 1 3 9 3 3 2 1 1 . 1 4 3 0 . 1 6 8 8 0 . 1 2 3 2 0 . 0 7 8 4 1 . 4 5 7 1 9 3 3 2 1 1 . 0 6 4 2 0 . 0 9 6 1 0 . 0 9 1 2 0 . 0 8 1 3 0 . 9 4 8 8 9 3 3 2 1 1 . 0 3 1 2 0 . 1 3 8 9 0 . 1 2 3 5 0 . 0 7 2 3 0 . 9 0 5 8 9 3 3 4 0 1 . 0 6 1 6 0 . 1 0 2 2 0 . 0 7 0 1 0 . 0 7 5 4 1 . 2 8 5 3 9 3 3 4 0 1 . 0 5 0 . 2 7 9 2 0 . 0 5 5 4 0 . 0 6 4 5 0 . 6 5 7 2 9 3 3 4 0 1 . 0 8 7 0 . 2 3 4 0 . 0 8 5 0 . 0 8 7 5 1 . 2 4 1 4 9 3 3 1 0 0 1 . 0 6 4 0 . 6 8 3 2 0 . 0 5 6 0 . 1 0 5 9 0 . 7 3 5 8 9 3 3 1 0 0 1 . 0 4 3 0 . 6 1 2 6 0 . 0 7 0 2 0 . 1 0 4 3 1 . 2 9 8 2 9 3 3 1 0 0 1 . 0 5 6 4 0 . 5 3 7 8 0 . 0 6 1 4 0 . 0 8 4 9 1 . 2 9 0 5 9 3 4 0 5 . 7 9 8 0 0 . 0 4 5 0 0 . 0 4 1 2 0 . 0 8 7 5 . 0 3 1 2 9 3 4 0 4 . 9 0 5 6 0 . 0 5 5 8 0 . 0 5 1 0 . 0 4 4 1 4 . 8 9 4 3 9 3 4 0 5 . 2 1 7 4 0 . 0 6 2 0 . 0 6 0 0 . 0 3 7 6 4 . 9 0 3 3 9 3 4 1 3 . 3 4 5 9 0 . 0 4 5 7 0 . 0 3 4 4 0 . 0 9 3 9 2 . 5 0 8 5 9 3 4 1 3 . 2 6 6 5 0 . 0 8 9 7 0 . 0 4 6 1 0 . 0 2 2 2 2 . 7 1 9 9 9 3 4 1 3 . 0 5 4 9 0 . 0 7 2 3 0 . 0 6 0 . 0 7 8 5 1 . 0 5 0 8 9 3 4 3 2 . 1 0 6 7 0 . 1 1 5 0 . 1 8 6 9 0 . 0 9 1 3 1 . 9 5 3 9 9 3 4 3 2 . 2 9 0 1 0 . 0 9 9 5 0 . 1 1 7 7 0 . 0 7 6 7 1 . 7 0 0 7 9 3 4 3 2 . 5 5 4 9 0 . 0 8 7 2 0 . 1 3 7 6 0 . 0 4 8 1 . 4 5 1 2 9 3 4 7 1 . 3 1 1 5 0 . 1 4 9 3 0 . 0 9 2 0 . 1 1 0 9 1 . 6 6 5 4 9 3 4 7 1 . 6 7 9 2 0 . 1 8 6 7 0 . 0 6 9 5 0 . 1 2 4 6 1 . 5 7 8 2 9 3 4 7 1 . 7 6 6 1 0 . 1 8 7 9 0 . 2 4 8 0 . 0 9 3 5 0 . 9 5 4 4 9 3 4 1 4 1 . 5 3 2 7 0 . 1 8 5 5 0 . 0 9 0 2 0 . 1 3 2 9 1 . 1 1 9 8 9 3 4 1 4 1 . 5 9 8 1 0 . 1 5 2 8 0 . 0 8 3 6 0 . 1 2 7 3 1 . 9 3 9 4 9 3 4 1 4 1 . 4 5 1 7 0 . 1 1 3 4 0 . 0 7 3 5 0 . 0 6 7 9 0 . 4 5 9 1 9 3 4 2 1 1 . 0 8 7 4 0 . 2 7 5 1 0 . 0 7 3 3 0 . 1 2 4 2 0 . 6 3 3 5 9 3 4 2 1 1 . 2 2 0 8 0 . 2 6 3 6 0 . 1 2 1 1 0 . 0 5 9 2 1 . 2 0 1 9 9 3 4 2 1 1 . 1 2 0 8 0 . 2 3 8 3 0 . 0 6 5 4 0 . 0 7 3 7 1 . 3 9 1 0 9 3 4 4 0 1 . 1 9 3 4 0 . 2 9 4 2 0 . 1 0 8 5 0 . 0 8 7 5 1 . 0 9 7 8 9 3 4 4 0 1 . 1 1 0 8 0 . 3 3 4 2 0 . 1 1 1 5 0 . 1 2 2 0 . 4 5 1 0 9 3 4 4 0 1 . 0 9 7 3 0 . 3 9 6 1 0 . 0 6 7 6 0 . 1 0 6 2 1 . 3 4 8 0 9 3 4 1 0 0 1 . 0 5 6 1 0 . 5 0 1 1 0 . 0 5 7 2 0 . 0 7 1 7 0 . 5 1 8 8 9 3 4 1 0 0 1 . 0 7 1 2 0 . 6 0 3 7 0 . 0 5 9 5 0 . 0 9 1 2 1 . 1 0 9 5 9 3 4 1 0 0 1 . 1 2 2 9 0 . 4 9 3 6 0 . 0 6 1 1 0 . 0 8 4 1 1 . 1 5 0 4 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I 2 6 7 T a b l e A - 5 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y N D F H e m i c e l l u l o s e A D F C e l l u l o s e 9 3 1 0 5 4 . 2 3 0 0 2 1 . 3 8 0 3 2 . 8 4 9 2 8 . 2 3 4 9 3 1 0 5 7 . 6 3 6 2 2 2 . 0 8 0 3 5 . 5 5 5 3 0 . 4 8 5 9 3 1 0 5 8 . 2 5 0 2 2 2 . 2 5 6 3 5 . 9 9 3 3 2 . 7 5 1 9 3 2 0 5 4 . 7 9 0 3 2 0 . 9 2 5 3 3 . 8 6 4 2 8 . 6 0 9 9 3 2 0 5 5 . 5 6 8 5 2 2 . 7 7 6 3 2 . 7 9 1 2 7 . 8 6 1 9 3 2 0 5 4 . 2 4 9 5 2 2 . 5 5 9 3 1 . 6 9 0 2 7 . 3 3 8 9 3 3 0 5 5 . 8 1 9 0 2 2 . 7 3 8 3 3 . 0 8 0 2 8 . 1 5 8 9 3 3 0 5 6 . 2 9 6 7 2 2 . 4 9 6 3 3 . 8 0 0 2 6 . 4 3 8 9 3 3 0 5 4 . 8 3 8 7 2 2 . 1 4 5 3 2 . 6 9 3 2 8 . 2 8 0 9 3 4 0 5 9 . 7 9 5 8 2 0 . 4 9 4 3 9 . 3 0 1 3 3 . 4 2 7 9 3 4 0 5 8 . 1 4 3 9 1 8 . 6 1 1 3 9 . 5 3 2 3 3 . 9 0 6 9 3 4 0 5 7 . 4 4 7 1 2 2 . 7 7 8 3 4 . 6 6 8 2 8 . 7 3 2 9 3 1 4 0 5 7 . 1 1 5 9 2 2 . 4 6 9 3 4 . 6 4 6 2 9 . 1 4 2 9 3 1 4 0 5 8 . 8 9 0 8 2 2 . 7 6 5 3 6 . 1 2 5 3 0 . 5 9 9 9 3 1 4 0 5 8 . 5 2 7 6 2 2 . 0 8 5 3 6 . 4 4 1 3 0 . 7 1 5 9 3 2 4 0 5 5 . 7 8 1 2 2 0 . 2 6 9 3 5 . 5 1 1 2 9 . 5 9 9 9 3 2 4 0 5 8 . 0 2 0 3 2 2 . 0 4 6 3 5 . 9 7 4 3 0 . 2 8 1 9 3 2 4 0 5 2 . 2 2 6 7 2 8 . 1 2 5 2 4 . 1 0 1 3 0 . 6 1 3 9 3 3 4 0 5 7 . 5 2 2 8 2 1 . 7 0 5 3 5 . 8 1 7 3 0 . 3 3 5 9 3 3 4 0 5 5 . 8 2 7 7 2 1 . 4 1 2 3 4 . 4 1 5 2 9 . 0 8 7 9 3 3 4 0 5 7 . 0 5 6 4 2 2 . 3 6 9 3 4 . 6 8 6 3 0 . 0 2 1 9 3 4 4 0 5 5 . 6 3 1 8 2 0 . 9 5 4 3 4 . 6 7 7 2 8 . 1 8 6 9 3 4 4 0 5 2 . 1 0 9 2 1 9 . 7 5 4 3 2 . 3 5 4 2 7 . 2 4 4 9 3 4 4 0 5 5 . 3 8 2 1 2 3 . 0 2 9 3 2 . 3 5 2 2 8 . 6 3 9 9 3 1 1 0 0 5 9 . 5 8 1 9 2 4 . 1 6 4 3 5 . 4 1 7 3 0 . 6 3 0 9 3 1 1 0 0 5 8 . 8 2 0 0 2 2 . 0 4 5 3 6 . 7 7 4 3 2 . 0 9 4 9 3 1 1 0 0 5 8 . 1 2 5 6 2 3 . 3 1 0 3 4 . 8 1 5 2 9 . 7 1 0 9 3 2 1 0 0 5 5 . 8 9 0 5 2 0 . 9 4 6 3 4 . 9 4 4 2 9 . 0 9 3 9 3 2 1 0 0 5 5 . 3 4 3 5 2 1 . 4 5 2 3 3 . 8 9 1 2 8 . 9 2 7 9 3 2 1 0 0 5 8 . 2 1 5 0 2 2 . 6 5 2 3 5 . 5 6 2 2 9 . 2 8 2 9 3 3 1 0 0 5 7 . 2 0 4 7 2 0 . 5 5 0 3 6 . 6 5 4 3 0 . 8 9 0 9 3 3 1 0 0 5 4 . 4 7 3 7 2 1 . 3 7 8 3 3 . 0 9 4 2 8 . 5 6 6 9 3 3 1 0 0 5 6 . 5 5 3 0 2 2 . 1 7 8 3 4 . 3 7 5 2 9 . 7 5 3 9 3 4 1 0 0 5 6 . 4 7 7 5 2 0 . 7 0 3 3 5 . 7 7 3 2 9 . 6 1 1 9 3 4 1 0 0 5 5 . 0 0 6 6 2 0 . 9 3 8 3 4 . 0 6 8 2 8 . 9 7 5 9 3 4 1 0 0 5 5 . 4 5 2 0 2 1 . 7 3 0 3 3 . 7 2 1 2 9 . 0 0 5 9 4 1 0 6 3 . 7 1 3 5 2 5 . 1 5 6 3 8 . 5 5 6 2 6 . 9 8 4 9 4 1 0 6 1 . 5 9 4 0 2 4 . 5 3 6 3 7 . 0 5 8 2 4 . 1 0 6 9 4 1 0 5 9 . 6 2 2 1 2 3 . 2 8 2 3 6 . 3 4 0 3 1 . 0 4 2 9 4 2 0 6 4 . 3 4 5 8 2 4 . 9 8 5 3 9 . 3 5 9 3 2 . 7 5 3 9 4 2 0 6 2 . 5 4 3 5 2 4 . 6 1 0 3 7 . 9 3 3 2 7 . 9 3 1 9 4 3 0 6 0 . 9 1 9 7 2 5 . 1 3 9 3 5 . 7 7 9 2 5 . 4 4 6 9 4 3 0 5 9 . 3 3 5 0 2 4 . 5 0 8 3 4 . 8 2 6 2 7 . 4 8 8 9 4 3 0 5 4 . 6 1 9 5 2 2 . 7 4 2 3 1 . 8 7 7 2 7 . 5 6 1 9 4 4 0 5 5 . 6 1 2 4 2 3 . 1 3 2 3 2 . 4 8 0 2 8 . 1 3 8 9 4 4 0 5 7 . 3 4 8 4 2 5 . 7 3 8 3 1 . 6 0 9 2 6 . 9 6 9 9 4 4 0 5 6 . 6 6 3 7 2 3 . 5 1 1 3 3 . 1 5 1 2 6 . 6 7 2 9 4 1 4 0 5 7 . 2 0 9 3 2 1 . 8 6 0 3 5 . 3 4 8 3 0 . 6 9 7 9 4 1 4 0 5 7 . 9 5 1 3 2 2 . 4 3 4 3 5 . 5 1 7 3 0 . 4 0 5 9 4 1 4 0 5 9 . 0 9 4 2 2 2 . 5 7 1 3 6 . 5 2 3 3 1 . 5 7 4 9 4 2 4 0 5 4 . 5 0 3 2 2 0 . 5 8 6 3 3 . 9 1 7 2 9 . 6 9 9 9 4 2 4 0 5 9 . 4 5 2 0 2 2 . 5 2 4 3 6 . 9 2 7 3 0 . 4 3 0 9 4 2 4 0 5 4 . 3 5 6 1 2 1 . 9 7 3 3 2 . 3 8 2 2 8 . 5 5 1 9 4 3 4 0 5 9 . 5 7 5 1 2 5 . 1 6 0 3 4 . 4 1 4 2 8 . 5 3 6 9 4 3 4 0 6 0 . 9 9 7 9 2 4 . 8 4 4 3 6 . 1 5 3 3 1 . 8 8 8 9 4 3 4 0 5 7 . 0 6 6 7 2 1 . 1 8 2 3 5 . 8 8 4 3 0 . 9 8 3 9 4 4 4 0 5 8 . 7 6 2 1 2 1 . 5 9 1 3 7 . 1 7 0 3 2 . 6 7 9 9 4 4 4 0 5 7 . 9 0 7 8 2 1 . 6 8 9 3 6 . 2 1 8 3 1 . 3 8 1 9 4 4 4 0 5 8 . 6 9 8 2 2 0 . 8 3 6 3 7 . 8 6 1 3 3 . 2 4 8 9 4 1 1 0 0 6 0 . 7 2 0 9 2 4 . 1 1 2 3 6 . 6 0 8 3 1 . 3 5 9 9 4 1 1 0 0 5 9 . 0 8 7 3 2 3 . 2 9 1 3 5 . 7 9 6 3 1 . 2 7 2 9 4 1 1 0 0 5 8 . 8 0 5 4 2 2 . 8 4 4 3 5 . 9 6 0 3 1 . 2 6 0 9 4 2 1 0 0 5 6 . 4 9 6 9 2 5 . 9 7 0 3 0 . 5 2 6 2 6 . 6 6 0 9 4 2 1 0 0 5 5 . 8 7 4 0 1 9 . 1 6 8 3 6 . 7 0 6 3 2 . 3 2 1 T a b l e A - 5 . C o n t . Y e a r T r t D a y N D F H e m i c e l l u l o s e A D F C e l l u l o s e 9 4 2 1 0 0 5 6 . 6 2 9 3 2 3 . 1 5 8 3 3 . 4 7 0 3 2 . 8 4 2 9 4 3 1 0 0 5 5 . 3 3 0 0 2 0 . 8 4 7 3 4 . 4 8 2 2 7 . 6 4 5 9 4 3 1 0 0 5 9 . 1 6 9 2 2 2 . 0 4 7 3 7 . 1 2 2 2 8 . 9 4 4 9 4 3 1 0 0 5 9 . 8 6 4 0 2 2 . 6 6 6 3 7 . 1 9 7 3 0 . 1 4 1 9 4 4 1 0 0 5 8 . 2 2 0 8 2 2 . 2 0 1 3 6 . 0 1 9 2 9 . 5 7 6 9 4 4 1 0 0 5 7 . 4 5 3 9 2 2 . 9 2 6 3 4 . 5 2 7 2 9 . 0 6 3 9 4 4 1 0 0 5 6 . 5 9 1 4 2 2 . 7 2 3 3 3 . 8 6 7 2 5 . 8 5 1 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I 2 6 9 T a b l e A - 6 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t s ( g / 1 0 0 g D M ) o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y C i t r i c M a l i c O x a l S u c c i n i c 9 4 1 0 0 . 8 7 5 4 . 2 7 7 1 . 0 7 6 4 . 4 1 6 9 4 1 0 0 . 7 4 2 4 . 9 1 8 1 . 1 5 0 2 . 2 1 2 9 4 1 0 0 . 9 6 8 4 . 4 9 1 1 . 1 4 7 2 . 0 0 6 9 4 1 1 0 . 2 6 5 2 . 8 0 5 1 . 2 7 5 3 . 5 1 3 9 4 1 1 0 . 3 2 1 3 . 6 9 7 1 . 3 0 1 3 . 1 0 9 9 4 1 1 0 . 2 8 5 2 . 4 0 7 1 . 1 2 2 2 . 5 3 7 9 4 1 3 0 . 2 8 2 . 9 8 1 . 1 7 1 3 . 2 3 6 9 4 1 3 0 . 1 8 8 3 . 6 6 3 1 . 1 3 5 1 . 8 3 3 9 4 1 3 0 . 2 7 9 1 . 3 5 3 1 . 7 4 1 2 . 0 0 6 9 4 1 7 0 . 2 0 4 2 . 7 5 5 1 . 4 7 1 2 . 8 8 0 9 4 1 7 0 . 4 1 2 2 . 3 1 5 0 . 2 5 4 2 . 2 1 7 9 4 1 7 0 . 3 3 6 3 . 0 0 7 1 . 2 2 4 3 . 3 5 9 9 4 1 1 4 0 . 4 1 7 2 . 7 9 9 0 . 3 8 8 2 . 0 5 9 9 4 1 1 4 0 . 5 9 7 1 . 9 6 8 1 . 5 2 5 3 . 7 1 9 4 1 1 4 0 . 6 4 3 1 . 8 9 7 0 . 6 3 6 3 . 7 9 8 9 4 1 2 1 0 . 5 0 9 3 . 7 5 3 1 . 0 4 7 3 . 1 3 8 9 4 1 2 1 0 . 2 8 7 2 . 9 2 2 1 . 0 7 4 2 . 6 3 0 9 4 1 2 1 0 . 3 7 9 2 . 2 2 5 1 . 1 6 3 1 . 8 6 7 9 4 1 4 0 0 . 4 3 3 3 . 1 0 8 2 . 0 5 1 2 . 6 5 3 9 4 1 4 0 0 . 5 1 5 2 . 1 6 2 2 . 1 3 3 2 . 8 7 3 9 4 1 4 0 0 . 3 5 6 2 . 8 5 6 1 . 0 0 8 1 . 8 1 8 9 4 1 1 0 0 0 . 1 2 5 1 . 0 3 3 0 . 9 1 4 1 . 0 7 8 9 4 1 1 0 0 0 . 1 0 8 1 . 1 6 7 0 . 4 7 9 0 . 8 3 1 9 4 1 1 0 0 0 . 1 7 3 1 . 3 6 9 0 . 5 2 7 1 . 1 9 8 9 4 2 0 0 . 7 9 8 4 . 7 0 0 1 . 6 7 8 3 . 4 3 1 9 4 2 0 0 . 6 1 2 4 . 7 7 3 1 . 0 8 5 3 . 7 2 4 9 4 2 0 0 . 7 4 4 5 . 6 1 2 1 . 1 6 0 2 . 8 4 4 9 4 2 1 0 . 3 5 9 2 . 8 3 8 1 . 8 3 1 4 . 2 8 9 9 4 2 1 0 . 7 8 5 2 . 1 6 3 1 . 4 8 6 4 . 4 1 9 9 4 2 1 0 . 4 0 7 2 . 3 8 6 0 . 4 2 4 2 . 8 2 4 9 4 2 3 0 . 2 3 7 2 . 0 9 1 1 . 1 3 8 3 . 2 7 5 9 4 2 3 0 . 1 6 9 3 . 9 8 8 1 . 1 1 1 2 . 5 6 0 9 4 2 3 0 . 4 0 3 1 . 9 3 7 1 . 1 4 8 2 . 9 1 0 9 4 2 7 0 . 3 9 3 1 . 8 4 9 1 . 5 8 0 3 . 7 6 1 9 4 2 7 0 . 5 0 7 2 . 2 8 2 1 . 7 0 1 3 . 3 6 6 9 4 2 7 0 . 3 5 4 2 . 1 0 1 1 . 0 7 2 2 . 0 9 7 9 4 2 1 4 0 . 5 8 6 3 . 0 9 5 1 . 4 6 7 1 . 2 3 2 9 4 2 1 4 0 . 2 5 8 2 . 2 2 3 1 . 6 6 7 3 . 1 0 9 9 4 2 1 4 0 . 5 3 1 3 . 5 4 4 1 . 0 8 2 2 . 6 3 2 9 4 2 2 1 0 . 4 5 6 1 . 1 0 2 1 . 0 7 4 2 . 5 0 9 9 4 2 2 1 0 . 3 8 7 2 . 4 1 4 1 . 2 5 0 1 . 0 0 5 9 4 2 2 1 0 . 3 0 8 1 . 0 5 2 0 . 7 5 5 1 . 8 5 8 9 4 2 4 0 0 . 4 5 6 1 . 3 5 9 1 . 3 0 3 2 . 0 2 7 9 4 2 4 0 0 . 3 6 4 1 . 5 3 6 0 . 7 9 7 1 . 7 8 0 9 4 2 4 0 0 . 2 9 7 2 . 0 6 0 0 . 5 4 5 1 . 4 5 7 9 4 2 1 0 0 0 . 3 4 7 1 . 3 4 4 1 . 0 6 5 1 . 0 4 5 9 4 2 1 0 0 0 . 1 8 4 1 . 3 9 6 0 . 5 2 9 1 . 1 3 4 9 4 2 1 0 0 0 . 2 3 7 2 . 0 4 7 0 . 5 0 7 1 . 2 5 1 9 4 3 0 0 . 5 1 1 4 . 5 6 0 1 . 1 9 3 . 6 0 7 9 4 3 0 0 . 8 0 2 4 . 3 4 5 1 . 3 8 0 3 . 5 5 3 9 4 3 0 0 . 3 7 1 3 . 9 9 8 1 . 1 2 3 2 . 6 8 5 9 4 3 1 0 . 1 6 3 2 . 5 4 8 1 . 3 6 6 3 . 3 2 2 9 4 3 1 0 . 8 2 4 3 . 6 1 1 1 . 2 3 5 2 . 4 7 4 9 4 3 1 0 . 7 9 7 2 . 3 9 3 1 . 0 1 0 3 . 2 5 8 9 4 3 3 0 . 7 9 9 2 . 5 9 2 1 . 4 1 0 2 . 4 8 4 9 4 3 3 0 . 7 2 8 2 . 7 2 4 0 . 9 9 5 2 . 5 3 6 9 4 3 3 0 . 7 3 0 2 . 5 8 3 1 . 2 6 6 2 . 4 8 8 9 4 3 7 0 . 6 3 8 3 . 6 8 5 1 . 1 2 3 2 . 7 4 0 9 4 3 7 0 . 7 7 3 3 . 0 8 1 1 . 2 2 4 2 . 0 4 3 9 4 3 7 0 . 2 4 9 2 . 8 2 9 1 . 1 6 9 0 . 9 3 0 9 4 3 1 4 0 . 3 0 9 4 . 2 4 9 0 . 9 9 6 2 . 6 7 0 9 4 3 1 4 0 . 2 7 4 3 . 4 7 6 0 . 8 5 0 2 . 1 6 1 9 4 3 1 4 0 . 2 6 2 2 . 7 4 7 1 . 0 6 3 1 . 8 0 6 9 4 3 2 1 0 . 1 7 7 2 . 2 4 7 1 . 2 2 5 1 . 7 3 4 2 7 0 T a b l e A - 6 . C o n t . Y e a r T r t D a y C i t r i c M a l i c O x a l S u c c i n i c 9 4 3 2 1 0 . 3 0 4 2 . 7 0 8 1 . 0 6 8 1 . 9 3 2 9 4 3 2 1 0 . 1 8 1 1 . 7 9 5 0 . 9 8 3 1 . 4 3 3 9 4 3 4 0 0 . 2 7 3 2 . 4 9 9 1 . 3 1 9 1 . 7 5 7 9 4 3 4 0 0 . 2 7 9 2 . 3 5 2 0 . 7 6 6 1 . 6 7 7 9 4 3 4 0 0 . 2 6 4 1 . 8 6 3 0 . 8 0 0 1 . 5 1 7 9 4 3 1 0 0 0 . 1 2 4 1 . 7 5 3 0 . 9 4 3 1 . 3 1 6 9 4 3 1 0 0 0 . 1 7 7 1 . 9 9 8 0 . 8 5 2 1 . 9 1 9 9 4 3 1 0 0 0 . 1 6 9 1 . 9 3 4 0 . 9 8 7 1 . 4 5 9 9 4 4 0 0 . 7 2 0 5 . 0 0 1 1 . 0 3 4 3 . 5 6 5 9 4 4 0 0 . 3 0 6 4 . 5 6 7 1 . 3 1 1 2 . 9 6 6 9 4 4 0 0 . 9 8 7 4 . 2 2 1 1 . 3 5 5 4 . 8 5 6 9 4 4 1 0 . 4 9 7 3 . 0 8 0 1 . 5 8 2 . 2 8 2 9 4 4 1 0 . 3 3 6 2 . 8 8 9 1 . 3 1 8 2 . 6 5 8 9 4 4 1 0 . 3 0 6 2 . 1 4 3 1 . 5 7 2 . 4 4 5 9 4 4 3 0 . 2 8 3 3 . 0 3 5 1 . 6 9 1 2 . 5 6 7 9 4 4 3 0 . 6 3 9 2 . 6 0 3 0 . 9 4 8 3 . 8 2 1 9 4 4 3 0 . 1 2 1 3 . 8 3 9 1 . 3 5 3 1 . 8 7 9 9 4 4 7 0 . 7 3 6 3 . 5 1 5 1 . 1 0 8 1 . 9 2 3 9 4 4 7 0 . 4 6 9 3 . 1 0 4 1 . 7 0 5 2 . 1 8 7 9 4 4 7 0 . 5 1 6 2 . 8 5 8 0 . 9 4 7 1 . 9 8 4 9 4 4 1 4 0 . 2 3 4 3 . 4 7 3 0 . 9 8 4 3 . 5 1 1 9 4 4 1 4 0 . 4 4 2 . 1 2 3 1 . 1 4 9 1 . 6 8 7 9 4 4 1 4 0 . 5 9 6 2 . 0 9 2 0 . 7 8 7 2 . 8 8 3 9 4 4 2 1 0 . 3 1 4 3 . 9 3 4 1 . 2 9 6 1 . 8 7 3 9 4 4 2 1 0 . 3 1 2 3 . 4 3 0 0 . 9 8 4 1 . 8 5 8 9 4 4 2 1 0 . 1 1 0 2 . 4 5 3 1 . 4 3 6 1 . 2 5 3 9 4 4 4 0 0 . 2 1 6 2 . 0 1 8 0 . 8 4 9 1 . 0 9 1 9 4 4 4 0 0 . 1 9 4 2 . 2 5 1 0 . 5 8 5 1 . 2 6 5 9 4 4 4 0 0 . 3 3 2 3 . 3 4 8 0 . 8 9 1 1 . 7 1 7 9 4 4 1 0 0 0 . 1 3 7 1 . 9 4 9 0 . 9 1 4 1 . 8 7 0 9 4 4 1 0 0 0 . 1 0 4 1 . 0 0 6 0 . 7 6 8 1 . 6 5 6 9 4 4 1 0 0 0 . 1 0 4 2 . 3 2 9 0 . 9 0 5 0 . 9 9 6 9 3 1 0 0 . 8 1 3 4 . 5 6 0 0 . 8 8 3 2 . 1 3 7 9 3 1 0 0 . 6 3 3 3 . 4 5 6 1 . 0 4 0 1 . 9 9 9 9 3 1 0 0 . 6 1 7 4 . 3 2 7 0 . 9 4 1 2 . 1 0 3 9 3 1 1 0 . 4 5 7 2 . 8 0 9 0 . 8 2 3 0 . 8 7 5 9 3 1 1 0 . 8 7 6 2 . 9 7 4 0 . 4 3 2 1 . 2 9 8 9 3 1 1 0 . 6 5 4 2 . 6 4 7 0 . 2 0 1 1 . 0 2 0 9 3 1 3 0 . 4 3 5 1 . 0 9 6 0 . 4 7 3 1 . 6 0 6 9 3 1 3 0 . 3 9 7 3 . 4 2 1 0 . 7 4 5 1 . 0 7 3 9 3 1 3 0 . 1 7 2 2 . 5 1 8 0 . 6 9 3 0 . 9 7 6 9 3 1 7 0 . 9 1 6 3 . 3 6 3 0 . 9 1 2 0 . 9 9 7 9 3 1 7 0 . 7 4 7 2 . 3 3 9 0 . 7 3 4 1 . 6 0 0 9 3 1 7 0 . 0 9 6 1 . 6 3 5 0 . 8 2 7 1 . 8 7 6 9 3 1 1 4 0 . 8 4 3 3 . 6 2 9 1 . 0 0 2 1 . 1 4 1 9 3 1 1 4 0 . 2 0 4 2 . 5 6 8 0 . 7 9 7 1 . 3 0 1 9 3 1 1 4 0 . 4 5 2 2 . 4 1 5 1 . 0 5 7 1 . 5 7 1 9 3 1 2 1 0 . 6 8 7 1 . 2 2 9 0 . 9 4 2 0 . 8 8 1 9 3 1 2 1 0 . 3 7 3 2 . 7 8 7 0 . 7 4 8 1 . 1 3 2 9 3 1 2 1 0 . 9 6 0 1 . 4 1 5 0 . 7 6 5 1 . 1 7 5 9 3 1 4 0 0 . 0 7 8 1 . 8 9 5 0 . 5 1 2 1 . 5 9 2 9 3 1 4 0 0 . 7 1 7 1 . 5 9 0 0 . 6 2 6 0 . 9 8 7 9 3 1 4 0 0 . 4 4 3 1 . 7 8 7 0 . 4 2 6 0 . 9 6 8 9 3 1 1 0 0 0 . 1 1 3 1 . 3 4 2 0 . 5 7 4 0 . 6 3 7 9 3 1 1 0 0 0 . 3 1 1 1 . 2 4 5 0 . 1 7 4 1 . 1 6 2 9 3 1 1 0 0 0 . 5 4 3 0 . 8 3 1 0 . 3 3 9 1 . 6 7 3 9 3 2 0 0 . 6 4 7 4 . 1 0 5 0 0 . 9 7 5 9 3 2 0 0 . 2 2 9 4 . 3 5 6 1 . 1 1 2 2 . 3 2 0 9 3 2 0 0 . 8 1 0 5 . 0 0 0 1 . 6 0 6 0 . 8 7 6 9 3 2 1 0 . 5 0 1 2 . 4 0 5 0 . 8 4 3 1 . 2 7 1 9 3 2 1 0 . 5 9 9 3 . 0 4 1 0 . 6 7 5 1 . 0 0 6 9 3 2 1 0 . 4 9 3 2 . 5 3 4 0 . 5 6 7 0 . 8 7 6 9 3 2 3 0 . 1 2 8 3 . 6 4 6 0 . 2 1 6 1 . 1 2 4 9 3 2 3 0 . 6 9 1 2 . 2 6 8 0 . 4 3 5 1 . 1 7 5 9 3 2 3 0 . 8 8 1 . 2 7 6 0 . 4 4 8 1 . 2 1 8 S 3 2 7 0 5 s z 2 7 1 T a b l e A - 6 . C o n t . y e a r t r t d a y c i t r i c m a l i c o x a l s u c c i n i c 9 3 2 7 0 . 0 9 9 3 . 5 8 1 0 . 6 8 5 1 . 1 5 9 9 3 2 7 0 . 5 6 0 1 . 2 4 3 0 . 5 2 4 1 . 0 8 7 9 3 2 1 4 0 . 1 2 2 1 . 9 6 6 1 . 0 7 0 1 . 5 8 2 9 3 2 1 4 0 . 1 8 3 2 . 7 4 5 0 . 9 7 8 1 . 1 4 8 9 3 2 1 4 0 . 3 1 2 1 . 8 5 2 0 . 4 5 9 2 . 8 5 9 9 3 2 2 1 0 . 5 9 7 1 . 8 5 0 0 . 6 9 8 1 . 8 4 0 9 3 2 2 1 0 . 5 2 1 1 . 9 0 6 0 . 9 9 7 1 . 1 9 9 9 3 2 2 1 0 . 4 7 9 2 . 9 9 6 1 . 6 9 1 2 . 4 0 7 9 3 2 4 0 0 . 7 0 3 2 . 5 7 5 0 . 9 4 7 1 . 9 3 6 9 3 2 4 0 0 . 1 3 6 2 . 0 2 4 0 . 7 4 7 1 . 0 9 6 9 3 2 4 0 0 . 4 0 0 2 . 0 0 4 0 1 . 0 8 2 9 3 2 1 0 0 0 . 3 4 4 1 . 2 4 3 0 . 0 8 5 0 . 5 3 1 9 3 2 1 0 0 0 . 4 0 7 1 . 0 9 2 0 . 0 7 7 0 . 4 8 2 9 3 2 1 0 0 0 . 5 6 3 1 . 1 0 6 0 . 2 0 6 1 . 0 4 0 9 3 3 0 0 . 7 4 4 5 . 3 1 0 0 . 5 1 2 2 . 6 3 8 9 3 3 0 0 . 5 2 9 4 . 6 5 0 0 . 9 0 3 1 . 2 3 7 9 3 3 0 0 . 9 4 7 4 . 3 1 6 0 . 7 3 8 1 . 2 4 4 9 3 3 1 0 . 5 2 2 1 . 9 3 7 0 . 6 4 5 0 . 8 5 6 9 3 3 1 0 . 5 3 6 2 . 6 8 6 0 . 9 4 3 0 . 8 6 1 9 3 3 1 0 . 3 8 7 3 . 1 7 2 0 . 4 3 2 1 . 3 3 1 9 3 3 3 0 . 3 9 5 2 . 2 2 3 0 . 7 2 4 1 . 1 7 5 9 3 3 3 0 . 3 4 5 2 . 0 4 2 0 . 6 2 0 . 9 1 2 9 3 3 3 0 . 4 6 7 1 . 8 3 6 0 . 7 3 5 1 . 4 5 9 9 3 3 7 0 . 7 7 8 1 . 7 1 3 0 . 4 9 8 1 . 8 3 7 9 3 3 7 0 . 4 0 0 2 . 3 4 0 0 . 6 4 1 1 . 4 0 5 9 3 3 7 0 . 6 9 9 2 . 0 0 7 0 . 6 7 8 1 . 0 4 5 9 3 3 1 4 0 . 4 3 9 2 . 2 8 6 0 . 3 3 7 1 . 1 6 8 9 3 3 1 4 0 . 6 7 7 1 . 8 0 5 0 . 2 5 3 0 . 7 5 1 9 3 3 1 4 0 . 6 9 3 2 . 0 5 4 1 . 2 2 0 1 . 2 9 9 9 3 3 2 1 0 . 5 9 6 2 . 0 6 7 0 . 6 0 5 1 . 2 6 1 9 3 3 2 1 0 . 8 3 8 1 . 5 6 9 0 . 7 6 0 1 . 1 2 4 9 3 3 2 1 0 . 2 8 1 2 . 0 2 6 0 . 7 8 7 1 . 3 9 1 9 3 3 4 0 0 . 9 4 6 1 . 3 2 8 0 . 3 7 2 1 . 0 2 2 9 3 3 4 0 0 . 7 4 1 1 . 5 2 1 0 . 2 6 1 0 . 9 1 0 9 3 3 4 0 0 . 4 6 3 2 . 0 5 4 0 . 5 1 9 1 . 3 4 7 9 3 3 1 0 0 0 . 1 8 4 1 . 7 4 8 0 . 2 3 1 0 . 7 1 0 9 3 3 1 0 0 0 . 2 3 1 1 . 7 5 0 0 . 1 5 5 0 . 6 8 6 9 3 3 1 0 0 0 . 2 5 0 1 . 4 4 0 0 . 2 0 3 1 . 1 4 4 9 3 4 0 0 . 6 5 0 5 . 5 8 8 1 . 0 2 0 2 . 5 8 0 9 3 4 0 0 . 5 0 1 4 . 9 4 6 0 . 9 9 7 1 . 7 1 6 9 3 4 0 0 . 6 5 3 3 . 2 7 1 0 . 4 0 9 1 . 0 8 3 9 3 4 1 0 . 7 6 5 3 . 3 5 4 0 . 8 4 2 0 . 8 7 8 9 3 4 1 0 . 6 0 2 2 . 1 9 6 0 . 6 3 5 0 . 6 9 5 9 3 4 1 0 . 8 7 6 3 . 3 4 5 0 . 5 2 3 0 . 9 7 9 9 3 4 3 0 . 9 5 2 1 . 9 1 5 0 . 6 4 3 0 . 9 9 4 9 3 4 3 0 . 3 5 5 2 . 9 5 6 0 . 2 4 3 1 . 1 4 2 9 3 4 3 0 . 4 2 5 2 . 5 1 7 0 . 6 4 5 1 . 2 0 8 9 3 4 7 0 . 2 5 3 1 . 9 5 4 0 . 3 9 7 1 . 0 0 3 9 3 4 7 0 . 3 6 9 2 . 3 4 1 0 . 4 6 6 1 . 0 1 2 9 3 4 7 0 . 8 8 2 3 . 0 7 8 0 . 2 5 5 1 . 8 7 5 9 3 4 1 4 0 . 4 1 5 2 . 0 1 7 0 . 4 8 7 1 . 9 7 8 9 3 4 1 4 0 . 2 0 9 2 . 1 7 2 0 . 5 8 7 1 . 6 0 2 9 3 4 1 4 0 . 1 8 8 2 . 8 5 6 0 . 3 0 9 2 . 8 1 6 9 3 4 2 1 0 . 3 8 1 2 . 0 9 9 0 . 2 9 9 0 . 8 6 7 9 3 4 2 1 0 . 2 4 7 1 . 3 3 9 0 . 2 2 3 1 . 2 7 9 9 3 4 2 1 0 . 4 8 6 1 . 9 4 2 0 . 3 9 1 2 . 1 3 0 9 3 4 4 0 0 . 2 9 2 2 . 5 9 6 0 . 5 1 4 0 . 8 7 6 9 3 4 4 0 0 . 6 8 7 1 . 7 3 1 0 . 4 1 8 1 . 0 5 6 9 3 4 4 0 0 . 5 7 6 1 . 0 1 9 0 . 1 6 4 0 . 6 9 5 9 3 4 1 0 0 0 . 4 8 9 1 . 7 6 2 0 . 8 7 8 0 . 9 7 5 9 3 4 1 0 0 0 . 3 7 8 1 . 4 3 8 0 . 1 9 9 1 . 4 3 2 9 3 4 1 0 0 0 . 4 5 3 1 . 8 3 6 0 . 7 9 1 0 . 8 9 1 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; O x a = O x a l o a c e t i c a c i d 2 7 2 T a b l e A - 7 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( g / 1 0 0 g D M ) o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y A c e L a c P r o p E t o h B u t 9 4 1 0 0 . 0 8 3 0 . 1 4 6 0 0 . 0 6 1 0 9 4 1 0 0 . 0 2 7 0 . 0 5 3 0 0 . 0 5 7 0 9 4 1 0 0 . 1 2 6 0 . 0 2 7 0 0 . 1 3 2 0 9 4 1 1 0 . 1 2 8 1 . 3 4 8 0 . 0 0 5 0 . 4 8 0 0 . 0 2 0 9 4 1 1 0 . 2 5 6 1 . 2 6 8 0 . 0 0 0 0 . 5 1 0 0 . 0 3 0 9 4 1 1 0 . 2 3 0 1 . 2 9 8 0 0 . 4 6 6 0 . 0 3 0 9 4 1 3 0 . 9 1 7 5 . 5 5 0 0 . 0 0 7 0 . 5 1 6 0 . 0 8 6 9 4 1 3 0 . 6 0 6 6 . 8 0 9 0 . 0 0 3 0 . 6 5 9 0 . 0 3 3 9 4 1 3 0 . 6 5 6 3 . 4 8 5 0 . 0 0 6 0 . 5 4 6 0 . 0 7 7 9 4 1 7 0 . 7 9 5 5 . 8 9 0 0 . 0 0 0 0 . 6 6 5 0 . 0 5 0 9 4 1 7 0 . 6 4 2 6 . 9 9 1 0 . 0 0 6 0 . 8 5 6 0 . 0 4 8 9 4 1 7 0 . 8 5 0 8 . 5 9 6 0 . 0 0 8 0 . 9 3 4 0 . 0 7 3 9 4 1 1 4 0 . 4 1 8 5 . 8 4 5 0 . 0 3 0 1 . 2 1 7 0 . 0 2 8 9 4 1 1 4 0 . 9 7 1 8 . 2 1 8 0 . 0 5 1 1 . 3 7 1 0 . 0 8 0 9 4 1 1 4 1 . 1 8 2 6 . 4 2 2 0 . 0 5 1 1 . 1 6 7 0 . 0 2 2 9 4 1 2 1 0 . 6 1 4 5 . 8 3 0 0 . 0 3 9 0 . 6 2 7 0 . 0 5 2 9 4 1 2 1 0 . 9 0 7 6 . 8 5 0 0 . 0 4 1 0 . 7 0 4 0 . 0 1 8 9 4 1 2 1 0 . 5 9 9 5 . 4 0 1 0 . 0 4 2 0 . 4 1 3 0 . 0 7 1 9 4 1 4 0 0 . 8 2 2 4 . 1 0 9 0 . 0 2 9 0 . 4 5 3 0 . 0 5 0 9 4 1 4 0 0 . 7 6 1 5 . 5 9 3 0 . 0 3 6 0 . 5 2 9 0 . 0 2 7 9 4 1 4 0 0 . 3 0 4 3 . 8 7 7 0 . 0 2 6 0 . 2 9 4 0 . 0 4 3 9 4 1 1 0 0 0 . 7 1 4 2 . 9 0 2 0 . 0 2 0 0 . 2 0 2 0 . 0 5 3 9 4 1 1 0 0 0 . 8 0 3 2 . 5 8 5 0 . 0 4 0 0 . 2 8 3 0 . 0 7 6 9 4 1 1 0 0 0 . 7 3 2 2 . 1 2 5 0 0 . 1 0 3 0 . 0 1 1 9 4 2 0 0 . 0 3 7 0 . 0 7 7 0 0 . 0 9 6 0 9 4 2 0 0 . 0 8 2 0 . 0 9 9 0 0 . 0 2 9 0 9 4 2 0 0 . 0 8 9 0 . 0 9 2 0 0 . 0 9 9 0 9 4 2 1 0 . 2 2 3 0 . 5 8 1 0 0 . 5 4 0 0 . 0 2 4 9 4 2 1 0 . 2 5 9 0 . 2 4 9 0 . 0 0 5 0 . 6 2 7 0 . 0 3 1 9 4 2 1 0 . 1 7 2 0 . 2 4 2 0 0 . 4 7 8 0 . 0 6 7 9 4 2 3 0 . 6 0 9 4 . 8 7 7 0 . 0 0 3 0 . 7 1 5 0 . 0 7 1 9 4 2 3 1 . 1 4 1 6 . 6 1 4 0 . 0 0 9 0 . 6 2 3 0 . 0 7 7 9 4 2 3 0 . 7 9 5 6 . 7 1 7 0 . 0 0 3 0 . 8 3 1 0 . 0 4 9 9 4 2 7 1 . 1 7 5 6 . 5 4 0 0 . 0 0 4 1 . 0 8 9 0 . 0 0 3 9 4 2 7 0 . 8 8 6 7 . 3 7 4 0 . 0 0 6 0 . 8 8 4 0 . 0 5 3 9 4 2 7 0 . 5 3 4 6 . 9 2 6 0 . 0 0 7 0 . 8 3 5 0 . 0 5 2 9 4 2 1 4 1 . 1 0 6 6 . 7 2 1 0 . 0 5 4 1 . 0 3 8 0 . 0 0 1 9 4 2 1 4 0 . 8 0 8 7 . 8 2 6 0 . 0 3 1 0 . 9 2 2 0 . 0 3 9 9 4 2 1 4 0 . 8 1 4 7 . 8 7 7 0 . 0 3 0 0 . 9 1 8 0 . 0 2 4 9 4 2 2 1 0 . 7 2 2 5 . 5 4 1 0 . 0 3 8 0 . 6 5 1 0 . 0 9 7 9 4 2 2 1 0 . 7 6 7 6 . 4 1 1 0 . 0 3 8 0 . 6 3 8 0 . 0 3 1 9 4 2 2 1 0 . 6 8 6 5 . 9 4 5 0 . 0 3 6 0 . 7 4 0 0 . 0 4 2 9 4 2 4 0 0 . 5 6 1 5 . 9 4 9 0 . 0 2 1 0 . 4 3 1 0 . 0 5 9 9 4 2 4 0 0 . 3 5 0 4 . 0 3 8 0 0 . 4 3 1 0 . 0 3 5 9 4 2 4 0 0 . 8 1 7 4 . 0 9 7 0 0 . 3 1 7 0 . 0 2 5 9 4 2 1 0 0 0 . 7 7 5 2 . 7 9 1 0 . 0 2 4 0 . 2 2 7 0 . 0 0 0 9 4 2 1 0 0 0 . 7 3 3 1 . 8 7 5 0 . 0 2 0 0 . 3 9 1 0 . 0 9 2 9 4 2 1 0 0 0 . 8 7 4 2 . 5 1 4 0 . 0 4 0 0 . 1 2 6 0 . 0 7 9 9 4 3 0 0 . 1 0 6 0 . 0 9 2 0 0 . 0 8 1 0 9 4 3 0 0 . 0 8 2 0 . 0 2 3 0 0 . 1 5 4 0 9 4 3 0 0 . 1 1 7 0 . 1 5 8 0 . 0 0 1 0 . 0 2 2 0 9 4 3 1 0 . 2 8 8 2 . 2 8 1 0 . 0 0 0 0 . 1 4 8 0 . 0 2 9 9 4 3 1 0 . 4 0 6 1 . 1 8 9 0 . 0 0 0 0 . 1 9 1 0 . 0 5 6 9 4 3 1 0 . 3 1 2 1 . 1 3 7 0 . 0 0 5 0 . 9 6 2 0 . 0 5 2 9 4 3 3 0 . 5 5 6 9 . 3 1 8 0 . 0 0 5 0 . 5 9 4 0 . 0 8 5 9 4 3 3 0 . 5 7 3 8 . 7 2 0 0 . 0 0 7 0 . 7 1 5 0 . 0 6 0 9 4 3 3 0 . 7 9 2 8 . 6 9 2 0 . 0 0 7 0 . 7 4 9 0 . 0 7 8 9 4 3 7 0 . 7 0 5 8 . 7 3 0 0 . 0 0 6 0 . 8 1 1 0 . 0 9 1 9 4 3 7 0 . 7 5 6 7 . 8 7 4 0 . 0 0 5 0 . 8 1 7 0 . 0 3 7 9 4 3 7 0 . 7 8 6 5 . 8 5 0 0 0 . 8 3 0 . 0 9 9 9 4 3 1 4 0 . 6 3 6 8 . 4 3 1 0 . 0 6 8 0 . 8 9 3 0 . 0 7 1 9 4 3 1 4 0 . 8 4 5 8 . 1 2 0 0 1 . 4 8 5 0 . 0 4 7 9 4 3 1 4 0 . 6 7 0 6 . 0 6 7 0 0 . 9 4 2 0 . 0 6 7 9 4 3 2 1 0 . 7 2 6 5 . 6 1 7 0 0 . 4 3 6 0 . 0 8 0 2 7 3 T a b l e A - 7 . C o n t . Y e a r T r t D a y A c e L a c P r o p E t o h B u t 9 4 3 2 1 0 . 4 6 9 7 . 2 8 2 0 . 0 6 1 0 . 5 8 8 0 . 0 4 7 9 4 3 2 1 0 . 6 2 8 6 . 2 0 1 0 0 . 5 9 5 0 . 0 3 8 9 4 3 4 0 0 . 2 3 5 5 . 1 8 0 0 . 2 5 5 0 . 4 0 6 0 . 0 2 4 9 4 3 4 0 0 . 7 0 1 4 . 8 2 3 0 0 . 3 2 7 0 . 0 9 6 9 4 3 4 0 0 . 4 1 6 4 . 6 2 1 0 0 . 4 6 2 0 . 0 8 3 9 4 3 1 0 0 0 . 3 1 9 3 . 2 8 7 0 . 0 3 9 0 . 2 9 6 0 . 0 1 9 9 4 3 1 0 0 0 . 7 9 5 5 . 1 0 2 0 . 0 2 0 0 . 3 3 1 0 . 0 1 4 9 4 3 1 0 0 0 . 7 6 9 3 . 4 6 0 0 0 . 2 5 0 0 . 0 7 1 9 4 4 0 0 . 0 2 3 0 . 1 5 8 0 0 . 0 5 5 0 9 4 4 0 0 . 1 0 5 0 . 1 4 9 0 0 . 1 3 9 0 9 4 4 0 0 . 1 2 7 0 . 0 4 1 0 . 0 0 7 0 . 0 7 2 0 9 4 4 1 0 . 2 0 5 2 . 2 5 5 0 . 0 0 0 0 . 9 3 6 0 . 0 6 0 9 4 4 1 0 . 2 1 5 1 . 3 2 9 0 . 0 0 9 0 . 0 0 9 0 . 0 5 0 9 4 4 1 0 . 3 4 2 0 . 5 1 9 0 0 . 4 0 2 0 . 0 3 4 9 4 4 3 0 . 7 7 0 9 . 4 6 3 0 . 0 0 2 0 . 8 2 2 0 . 0 0 7 9 4 4 3 0 . 7 5 9 8 . 5 1 7 0 . 0 0 4 0 . 6 6 9 0 . 0 0 8 9 4 4 3 0 . 3 5 4 8 . 1 6 1 0 . 0 0 7 0 . 5 5 3 0 . 0 9 7 9 4 4 7 0 . 5 5 7 7 . 6 4 2 0 . 0 0 9 0 . 6 3 9 0 . 0 9 8 9 4 4 7 0 . 4 4 7 7 . 8 7 7 0 0 . 8 5 9 0 . 0 5 7 9 4 4 7 0 . 8 4 4 6 . 5 0 9 0 . 0 0 7 0 . 5 7 1 0 . 0 1 5 9 4 4 1 4 0 . 6 0 6 9 . 7 9 9 0 . 0 3 7 0 . 9 8 7 0 . 0 6 6 9 4 4 1 4 0 . 5 7 3 7 . 3 3 4 0 . 0 3 0 1 . 4 4 8 0 . 0 0 6 9 4 4 1 4 0 . 9 2 3 8 . 2 2 5 0 . 0 4 5 0 . 8 5 2 0 . 0 7 7 9 4 4 2 1 0 . 6 7 2 6 . 9 2 3 0 . 0 2 8 0 . 6 6 6 0 . 0 6 4 9 4 4 2 1 0 . 7 7 6 6 . 2 6 9 0 . 0 6 0 0 . 6 9 4 0 . 0 9 7 9 4 4 2 1 0 . 7 5 5 4 . 3 3 5 0 0 . 0 9 0 0 . 0 8 9 9 4 4 4 0 1 . 3 5 4 3 . 4 2 1 0 0 . 2 3 5 0 . 0 0 1 9 4 4 4 0 0 . 8 8 1 3 . 8 3 4 0 . 0 9 3 0 . 3 4 6 0 . 0 6 5 9 4 4 4 0 0 . 8 4 0 5 . 6 4 9 0 . 0 8 3 0 . 5 9 2 0 . 0 9 4 9 4 4 1 0 0 0 . 7 8 2 4 . 2 6 3 0 . 0 2 1 0 . 4 0 1 0 . 0 6 5 9 4 4 1 0 0 0 . 7 9 3 4 . 2 2 4 0 . 0 2 0 . 3 2 8 0 . 0 3 6 9 4 4 1 0 0 0 . 6 3 7 3 . 2 7 4 0 0 . 1 4 9 0 . 0 3 2 9 3 1 0 0 . 0 4 0 . 2 2 2 0 0 . 0 3 3 0 9 3 1 0 0 . 0 3 0 . 2 3 2 0 0 . 0 2 5 0 9 3 1 0 0 . 0 2 6 0 . 0 8 4 0 0 . 0 0 9 0 9 3 1 1 0 . 1 9 2 0 . 9 3 7 0 0 . 1 7 2 0 . 0 3 8 9 3 1 1 0 . 2 3 2 1 . 7 6 4 0 . 0 0 6 0 . 1 4 3 0 . 0 4 1 9 3 1 1 0 . 2 0 4 1 . 6 3 4 0 . 0 0 6 0 . 0 7 6 0 . 0 4 9 9 3 1 3 0 . 0 8 8 0 . 6 9 5 0 0 . 0 8 9 0 9 3 1 3 0 . 3 2 7 2 . 3 0 0 . 3 1 4 0 . 0 7 5 9 3 1 3 0 . 2 6 1 2 . 1 4 2 0 0 . 3 2 7 0 . 0 6 2 9 3 1 7 0 . 2 7 1 . 9 0 9 0 0 . 3 7 2 0 . 0 8 3 9 3 1 7 0 . 2 2 8 1 . 9 5 7 0 0 . 5 3 0 . 0 0 7 9 3 1 7 0 . 4 6 6 4 . 1 8 9 0 0 . 6 6 7 0 . 0 8 1 9 3 1 1 4 0 . 4 8 9 2 . 7 6 5 0 . 4 3 0 0 . 7 7 2 0 . 0 8 3 9 3 1 1 4 0 . 2 1 8 2 . 1 1 7 0 . 0 5 2 1 . 5 8 5 0 . 0 6 4 9 3 1 1 4 0 . 3 1 7 3 . 6 0 7 0 . 0 5 6 0 . 8 7 2 0 . 0 5 1 9 3 1 2 1 0 . 2 9 7 1 . 0 6 4 0 . 0 5 9 0 . 3 1 3 0 . 0 8 4 9 3 1 2 1 0 . 4 9 7 2 . 9 9 9 0 . 0 5 3 1 . 0 7 9 0 . 0 7 8 9 3 1 2 1 0 . 3 9 7 3 . 4 4 6 0 . 0 5 4 0 . 8 4 6 0 . 0 8 4 9 3 1 4 0 0 . 3 5 2 1 . 4 8 4 0 . 0 8 4 0 . 3 3 7 0 . 1 0 7 9 3 1 4 0 0 . 2 9 8 1 . 3 9 0 0 . 7 9 0 . 0 3 2 9 3 1 4 0 0 . 2 9 1 1 . 6 1 3 0 0 . 4 1 0 . 0 1 2 9 3 1 1 0 0 0 . 7 2 4 1 . 7 6 7 0 . 0 3 9 0 . 4 6 3 0 . 0 4 7 9 3 1 1 0 0 0 . 4 5 9 1 . 1 6 5 0 . 0 6 0 0 . 4 7 0 0 . 0 3 9 9 3 1 1 0 0 0 . 3 9 8 1 . 3 8 4 0 . 1 1 1 0 . 9 2 1 0 . 0 3 0 9 3 2 0 0 . 0 1 5 0 . 1 0 9 0 0 . 0 0 9 0 9 3 2 0 0 . 0 5 5 0 . 2 6 0 0 . 0 2 8 0 9 3 2 0 0 . 0 3 3 0 . 1 5 5 0 0 . 0 0 9 0 9 3 2 1 0 . 3 2 6 1 . 8 1 0 0 . 0 4 8 0 . 0 3 3 9 3 2 1 0 . 3 0 8 1 . 5 5 1 0 0 . 0 9 2 0 . 0 7 1 9 3 2 1 0 . 1 5 4 0 . 9 9 4 0 0 . 2 2 8 0 . 0 5 5 9 3 2 3 0 . 2 3 6 1 . 5 1 1 0 0 . 2 2 4 0 . 0 5 6 9 3 2 3 0 . 2 9 3 2 . 1 7 2 0 0 . 2 8 6 0 . 0 5 4 9 3 2 3 0 . 2 2 7 1 . 3 6 2 0 0 . 1 3 9 0 . 0 7 8 9 3 2 7 0 . 3 7 3 2 . 2 1 5 0 0 . 5 4 3 0 . 0 5 2 7 4 T a b l e A - 7 . C o n t . Y e a r T r t D a y A c e L a c P r o p E t c h B u t 9 3 2 7 0 . 3 6 5 2 . 0 2 6 0 0 . 8 0 5 0 . 0 6 9 3 2 7 0 . 2 9 2 3 . 0 8 1 0 0 . 6 3 6 0 . 0 5 9 9 3 2 1 4 0 . 2 6 3 . 3 1 7 0 . 0 8 4 0 . 4 9 5 0 . 0 9 1 9 3 2 1 4 0 . 2 7 1 1 . 9 0 1 0 . 0 9 0 . 4 0 1 0 . 0 3 5 9 3 2 1 4 0 . 3 4 3 2 . 8 3 7 0 . 0 8 1 . 7 6 5 0 . 0 7 3 9 3 2 2 1 0 . 3 0 5 2 . 3 7 3 0 . 0 6 4 0 . 5 9 0 . 0 6 4 9 3 2 2 1 0 . 4 0 3 2 . 2 4 5 0 . 0 9 0 . 5 0 8 0 . 0 6 2 9 3 2 2 1 0 . 5 5 7 1 . 9 9 0 . 0 7 9 0 . 6 4 6 0 . 0 6 7 9 3 2 4 0 0 . 4 5 2 2 . 4 0 7 0 . 0 5 6 1 . 0 9 0 . 0 6 6 9 3 2 4 0 0 . 3 4 2 1 . 7 0 2 0 . 0 6 0 . 4 5 9 0 . 0 6 9 3 2 4 0 0 . 5 3 9 1 . 7 5 8 0 . 0 5 0 . 4 5 9 0 . 0 6 9 3 2 1 0 0 0 . 2 6 9 1 . 8 5 0 0 . 0 8 8 0 . 3 1 0 0 . 0 4 7 9 3 2 1 0 0 0 . 7 3 3 1 . 4 6 6 0 . 0 8 0 0 . 9 6 9 0 . 0 5 7 9 3 2 1 0 0 0 . 5 8 6 1 . 0 8 5 0 . 0 3 0 0 . 9 9 0 0 . 0 2 6 9 3 3 0 0 . 0 6 8 0 . 4 2 3 0 0 . 0 8 5 0 9 3 3 0 0 . 0 3 0 0 . 2 1 3 0 0 . 0 3 1 0 9 3 3 0 0 . 0 4 0 0 . 1 9 6 0 0 . 0 1 8 0 9 3 3 1 0 . 1 8 3 2 . 5 2 9 0 0 . 1 5 4 0 . 0 2 7 9 3 3 1 0 . 1 6 0 1 . 8 1 8 0 0 . 1 5 4 0 . 0 4 9 9 3 3 1 0 . 2 1 0 1 . 2 1 5 0 0 . 0 7 1 0 . 0 3 2 9 3 3 3 0 . 1 4 7 1 . 5 2 5 0 0 . 3 3 3 0 . 0 2 9 9 3 3 3 0 . 2 3 9 1 . 7 0 3 0 0 . 0 9 8 0 . 0 3 8 9 3 3 3 0 . 2 9 3 4 . 1 6 7 0 0 . 3 8 0 . 0 3 1 9 3 3 7 0 . 3 4 5 3 . 8 1 3 0 0 . 4 6 6 0 . 0 6 6 9 3 3 7 0 . 2 6 2 3 . 4 8 6 0 0 . 6 5 4 0 . 0 4 3 9 3 3 7 0 . 2 7 9 3 . 8 6 8 0 0 . 8 1 5 0 . 0 8 2 9 3 3 1 4 0 . 2 7 5 2 . 6 0 6 0 . 0 8 1 . 2 5 0 . 0 6 2 9 3 3 1 4 0 . 2 9 4 4 . 4 4 0 . 0 6 2 1 . 0 4 9 0 . 0 5 9 9 3 3 1 4 0 . 4 6 6 . 0 7 4 0 . 0 7 1 1 . 3 5 9 0 . 0 9 3 9 3 3 2 1 0 . 4 0 2 . 4 9 2 0 . 0 5 0 . 4 2 2 0 . 0 9 9 3 3 2 1 0 . 3 9 4 2 . 0 2 7 0 . 0 8 0 . 5 0 6 0 . 0 1 0 9 3 3 2 1 0 . 3 0 1 2 . 7 2 7 0 . 0 4 0 . 4 8 9 0 . 0 8 4 9 3 3 4 0 0 . 4 8 8 1 . 9 7 9 0 . 0 2 7 0 . 5 2 1 0 . 0 2 7 9 3 3 4 0 0 . 3 6 4 1 . 3 1 8 0 . 0 6 0 . 4 9 0 . 0 2 6 9 3 3 4 0 0 . 3 5 7 1 . 8 8 6 0 . 0 3 0 . 4 9 0 . 0 3 1 9 3 3 1 0 0 0 . 4 0 9 1 . 2 0 6 0 . 0 4 4 0 . 9 0 3 0 . 0 3 7 9 3 3 1 0 0 0 . 7 2 1 1 . 5 9 2 0 . 0 7 1 0 . 5 5 8 0 . 0 2 8 9 3 3 1 0 0 0 . 3 0 9 1 . 7 4 5 0 . 0 2 1 0 . 8 5 4 0 . 0 3 4 9 3 4 0 0 . 0 6 8 0 . 0 8 3 0 0 . 0 4 8 0 9 3 4 0 0 . 0 5 8 0 . 2 1 5 0 0 . 0 4 0 9 3 4 0 0 . 0 2 6 0 . 2 0 6 0 0 . 0 0 2 0 9 3 4 1 0 . 1 9 5 0 . 6 2 5 0 0 . 1 5 4 0 . 0 3 9 9 3 4 1 0 . 2 3 7 1 . 5 6 1 0 0 . 1 7 5 0 . 0 5 6 9 3 4 1 0 . 2 1 2 2 . 1 0 3 0 0 . 1 4 8 0 . 0 4 8 9 3 4 3 0 . 2 1 8 3 . 4 9 2 0 0 . 5 9 0 . 0 3 2 9 3 4 3 0 . 2 5 8 3 . 0 7 6 0 0 . 3 1 4 0 . 0 3 2 9 3 4 3 0 . 2 3 7 2 . 1 5 0 0 . 3 7 9 0 . 0 6 1 9 3 4 7 0 . 2 6 5 3 . 7 1 8 0 0 . 5 5 4 0 . 0 5 0 9 3 4 7 0 . 2 6 9 3 . 4 4 3 0 0 . 7 4 6 0 . 0 7 3 9 3 4 7 0 . 3 1 1 4 . 4 2 5 0 0 . 8 3 5 0 . 0 4 5 9 3 4 1 4 0 . 3 3 4 4 . 3 9 5 0 . 0 7 3 1 . 2 7 2 0 . 0 8 4 9 3 4 1 4 0 . 3 7 9 3 . 8 7 2 0 . 0 6 1 . 1 6 1 0 . 0 7 5 9 3 4 1 4 0 . 4 3 4 . 6 7 0 . 0 4 1 . 4 2 2 0 . 0 5 5 9 3 4 2 1 0 . 4 0 8 2 . 9 2 6 0 . 0 4 0 . 5 1 3 0 . 0 4 2 9 3 4 2 1 0 . 3 1 4 2 . 4 1 4 0 . 0 3 0 . 5 0 6 0 . 0 9 2 9 3 4 2 1 0 . 3 6 7 3 . 0 6 7 0 . 0 4 4 0 . 8 4 2 0 . 0 3 9 3 4 4 0 0 . 4 5 3 2 . 0 1 1 0 . 0 6 0 . 3 6 6 0 . 0 2 9 3 4 4 0 0 . 3 8 2 . 3 6 7 0 . 0 3 2 0 . 6 1 8 0 . 0 3 9 3 4 4 0 0 . 2 4 4 1 . 9 1 5 0 . 0 4 0 . 6 0 . 0 2 9 3 4 1 0 0 0 . 4 8 5 1 . 5 8 1 0 . 0 1 9 0 . 6 5 2 0 . 0 5 9 3 4 1 0 0 0 . 6 4 0 1 . 9 1 5 0 . 0 4 5 0 . 7 3 5 0 . 0 2 9 3 4 1 0 0 0 . 4 3 9 1 . 4 2 9 0 . 0 7 7 0 . 6 9 2 0 . 0 3 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; A c e L a c t i c a c i d ; P r o = P r o p i o n i c A c i d , E t c h = E t h a n o l , B u t = B u t y r i c a c i d . A c e t i c a c i d , L a c 2 7 5 T a b l e A - 8 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b h y d r a t e c o n t e n t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 4 1 0 2 . 9 0 6 4 0 . 6 8 1 5 0 . 2 4 7 6 2 0 . 0 8 6 0 9 4 . 0 7 0 2 9 4 1 0 2 . 8 0 2 4 0 . 7 7 2 4 0 . 2 5 8 5 1 0 . 0 7 6 1 5 3 . 0 2 4 9 9 4 1 0 2 . 6 9 3 3 0 . 6 9 1 0 . 1 6 6 9 1 0 . 0 7 5 9 8 3 . 3 1 6 4 9 4 1 1 0 . 6 0 6 2 0 . 7 4 5 3 0 . 0 7 2 2 4 0 . 0 6 3 7 9 0 . 2 6 6 3 9 4 1 1 0 . 5 8 1 4 0 . 6 3 3 1 0 . 0 6 5 0 7 0 . 0 6 4 6 5 0 . 4 3 7 3 9 4 1 1 0 . 7 6 1 5 0 . 8 1 9 1 0 . 0 7 3 0 7 0 . 0 6 4 4 8 0 . 6 0 0 3 9 4 1 3 0 . 8 5 1 5 0 . 0 7 8 3 0 . 0 4 7 4 8 0 . 0 6 0 0 7 0 . 1 6 7 1 9 4 1 3 0 . 6 8 8 9 0 . 5 5 1 5 0 . 0 2 7 3 7 0 . 0 4 6 6 8 0 . 2 0 8 2 9 4 1 3 0 . 2 3 1 5 0 . 7 0 7 6 0 . 0 1 8 4 3 0 . 0 5 8 7 8 0 . 4 6 8 3 9 4 1 7 0 . 4 1 4 6 0 . 7 3 7 5 1 . 0 4 5 1 1 0 . 1 4 9 0 2 0 . 0 6 9 4 1 7 0 . 5 2 7 5 0 . 8 6 7 3 0 . 1 6 0 4 9 0 . 0 7 9 9 5 0 . 3 9 9 4 1 7 0 . 6 4 0 6 0 . 5 5 3 7 0 . 1 8 4 1 3 0 . 0 6 9 1 5 0 . 4 3 6 8 9 4 1 1 4 0 . 5 5 4 1 0 . 8 0 . 1 3 4 6 1 0 . 0 5 9 0 4 0 . 2 6 6 3 9 4 1 1 4 0 . 5 3 2 1 0 . 9 1 9 0 . 2 7 9 6 4 0 . 1 0 1 7 4 0 . 3 0 7 9 9 4 1 1 4 0 . 4 8 5 8 0 . 9 1 8 7 0 . 3 2 7 4 9 0 . 1 3 1 7 3 0 . 4 8 6 4 9 4 1 2 1 0 . 4 4 6 6 0 . 7 7 5 4 0 . 1 0 5 7 5 0 . 1 4 9 5 3 0 . 3 0 7 8 9 4 1 2 1 0 . 5 0 0 3 0 . 5 3 9 1 0 . 3 1 3 0 6 0 . 1 2 2 2 2 0 . 2 9 4 8 9 4 1 2 1 0 . 3 6 2 2 0 . 6 1 5 0 . 0 8 5 7 3 0 . 0 8 7 3 0 . 1 4 5 5 9 4 1 4 0 0 . 5 0 2 2 0 . 3 0 2 2 0 . 2 1 8 3 9 0 . 1 0 6 9 2 0 . 2 8 2 4 9 4 1 4 0 0 . 0 5 2 8 0 . 4 2 6 7 0 . 2 1 8 2 0 . 1 3 4 2 4 0 . 3 3 6 6 9 4 1 4 0 0 . 4 9 6 2 0 . 2 4 5 1 0 . 1 5 8 2 5 0 . 0 9 4 3 9 0 . 1 5 0 2 9 4 1 1 0 0 0 . 2 8 9 6 0 . 1 7 0 4 0 . 0 8 6 1 1 0 . 0 4 2 7 9 0 . 0 1 9 9 4 1 1 0 0 0 . 4 2 1 1 0 . 2 4 3 2 0 . 2 2 6 4 9 0 . 0 9 8 4 9 0 . 1 0 1 2 9 4 1 1 0 0 0 . 1 3 8 2 0 . 1 2 6 2 0 . 0 8 8 1 6 0 . 1 6 3 1 8 0 . 0 7 1 8 9 4 2 0 2 . 8 6 6 4 0 . 8 1 1 5 0 . 2 3 7 0 . 0 8 6 1 8 3 . 6 7 8 9 4 2 0 2 . 9 5 1 9 0 . 6 7 3 1 0 . 2 4 7 9 9 0 . 1 5 8 7 3 . 1 0 0 8 9 4 2 0 2 . 7 9 2 2 0 . 6 3 4 5 0 . 2 4 7 0 6 0 . 0 7 7 5 3 2 . 9 2 2 8 9 4 2 1 0 . 5 4 8 4 0 . 8 1 9 9 0 . 0 8 7 9 7 0 . 0 6 3 5 3 0 . 5 3 5 7 9 4 2 1 0 . 8 9 7 7 0 . 4 2 7 5 0 . 3 7 7 0 1 0 . 0 6 5 5 2 0 . 4 5 8 8 9 4 2 1 0 . 5 5 7 1 0 . 7 3 3 6 0 . 1 0 3 4 2 0 . 1 1 3 8 4 0 . 3 2 0 6 9 4 2 3 0 . 4 5 4 5 0 . 8 1 0 3 0 . 0 8 3 8 7 0 . 0 8 4 4 5 0 . 2 9 9 7 9 4 2 3 0 . 6 4 0 8 0 . 6 6 9 8 0 . 1 2 1 3 9 0 . 0 8 6 8 7 0 . 2 0 9 2 9 4 2 3 0 . 7 0 8 6 0 . 7 9 9 3 0 . 0 9 1 1 3 0 . 0 7 7 5 3 0 . 3 5 6 8 9 4 2 7 0 . 5 2 5 8 0 . 9 8 1 2 0 . 1 6 7 4 7 0 . 0 5 6 1 0 . 6 4 2 9 9 4 2 7 0 . 4 8 2 7 0 . 8 7 4 2 0 . 2 3 2 0 7 0 . 0 4 4 7 7 0 . 1 7 5 9 4 2 7 0 . 4 1 9 4 0 . 1 5 7 9 0 . 1 3 4 5 1 0 . 0 6 6 5 6 0 . 2 7 6 9 9 4 2 1 4 0 . 4 2 8 2 0 . 8 9 6 5 0 . 2 7 4 1 5 0 . 1 6 7 6 0 . 2 9 9 4 9 4 2 1 4 0 . 8 6 1 2 0 . 9 3 8 3 3 . 2 1 7 0 6 0 . 1 5 4 7 2 0 . 5 5 9 9 9 4 2 1 4 0 . 3 9 9 4 0 . 5 6 8 0 . 2 0 5 1 7 0 . 1 3 8 3 0 . 3 0 4 9 9 4 2 2 1 0 . 3 4 9 1 0 . 5 4 6 9 0 . 2 3 5 8 9 0 . 0 5 3 6 0 . 2 7 2 9 9 4 2 2 1 0 . 3 7 9 3 0 . 3 0 9 2 0 . 2 0 3 0 3 0 . 0 8 2 1 0 . 2 8 4 2 9 4 2 2 1 0 . 4 1 6 9 0 . 5 8 8 8 0 . 1 6 6 0 7 0 . 0 9 4 3 9 0 . 3 4 4 7 9 4 2 4 0 0 . 2 7 5 7 0 . 2 1 9 5 0 . 1 8 5 7 1 0 . 1 2 4 9 0 . 1 3 7 1 9 4 2 4 0 0 . 4 9 5 7 0 . 2 1 6 7 0 . 2 1 0 4 7 0 . 1 1 2 5 4 0 . 1 9 3 2 9 4 2 4 0 0 . 3 0 . 1 8 7 8 0 . 3 0 9 8 9 0 . 1 3 8 1 3 0 . 2 4 6 5 9 4 2 1 0 0 0 . 2 1 2 1 0 . 1 6 2 8 0 . 1 2 7 5 3 0 . 0 8 6 2 6 0 . 0 7 6 8 9 4 2 1 0 0 0 . 3 3 2 7 0 . 1 9 7 9 0 . 1 4 8 6 6 0 . 1 4 4 1 9 0 . 0 6 8 6 9 4 2 1 0 0 0 . 2 7 3 9 0 . 2 8 7 2 0 . 2 0 6 5 6 0 . 1 1 3 1 4 0 . 0 7 8 9 4 3 0 3 . 1 9 7 8 0 . 5 7 8 5 0 . 2 2 8 8 1 0 . 0 8 8 2 5 3 . 2 1 1 9 9 4 3 0 2 . 6 9 2 8 0 . 6 6 3 7 0 . 2 2 6 3 0 . 1 1 1 3 3 3 . 0 6 5 7 9 4 3 0 2 . 9 9 3 2 0 . 6 2 9 5 0 . 1 6 6 5 4 0 . 0 8 1 3 4 3 . 0 6 1 1 9 4 3 1 0 . 9 7 4 2 0 . 8 0 4 4 0 . 0 9 3 1 8 0 . 0 8 0 7 3 0 . 3 5 9 9 4 3 1 0 . 3 5 3 8 0 . 6 2 3 3 0 . 0 9 1 6 0 . 0 7 1 8 3 0 . 4 7 9 1 9 4 3 1 0 . 6 4 2 1 0 . 6 6 4 5 0 . 0 5 2 2 2 0 . 0 7 7 2 7 0 . 9 8 4 4 9 4 3 3 0 . 4 3 7 8 0 . 1 2 7 5 0 . 1 1 6 8 3 0 . 0 5 8 2 6 0 . 2 8 7 9 9 4 3 3 0 . 3 5 2 3 0 . 6 4 3 4 0 . 0 7 9 3 1 0 . 0 3 0 4 3 0 . 2 4 1 6 9 4 3 3 0 . 4 3 6 0 . 7 1 0 5 0 . 0 7 0 6 5 0 . 0 4 7 1 9 0 . 5 2 5 2 9 4 3 7 0 . 4 2 3 8 0 . 7 9 5 4 0 . 1 2 5 7 6 0 . 0 9 8 3 6 0 . 3 2 0 1 9 4 3 7 0 . 3 8 4 2 0 . 5 3 6 8 0 . 1 3 5 9 1 0 . 0 4 8 1 4 0 . 6 4 2 9 4 3 7 0 . 4 1 6 9 0 . 7 8 8 8 0 . 1 6 6 0 7 0 . 0 9 4 3 9 0 . 4 4 4 7 9 4 3 1 4 0 . 4 5 7 0 . 7 1 4 2 0 . 2 0 5 1 7 0 . 1 4 9 7 1 0 . 3 1 4 8 9 4 3 1 4 0 . 4 4 8 6 0 . 1 8 1 8 0 . 1 7 1 8 4 0 . 1 3 0 6 1 0 . 3 4 0 4 9 4 3 1 4 0 . 4 1 6 4 0 . 3 5 2 3 0 . 1 5 1 5 5 0 . 1 1 4 9 6 0 . 2 8 5 2 9 4 3 2 1 0 . 3 6 5 8 0 . 1 1 3 7 0 . 1 0 2 3 0 . 0 9 3 4 4 0 . 4 7 4 2 7 6 T a b l e A - 8 . C o n t . Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 4 3 2 1 0 . 3 4 4 1 0 . 6 4 0 1 0 . 1 3 7 6 8 0 . 1 1 4 9 6 0 . 2 3 6 8 9 4 3 2 1 0 . 3 3 1 5 0 . 6 5 8 6 0 . 1 3 5 1 7 0 . 0 9 7 0 7 0 . 1 9 7 3 9 4 3 4 0 0 . 0 9 5 3 0 . 1 1 5 1 0 . 1 2 2 8 8 0 . 0 5 8 9 5 0 . 1 6 8 9 9 4 3 4 0 0 . 4 1 9 0 . 1 1 7 7 0 . 1 3 3 2 1 0 . 0 6 8 8 9 0 . 2 3 2 9 9 4 3 4 0 0 . 3 9 2 2 0 . 0 9 8 8 0 . 1 0 1 8 4 0 . 0 6 1 4 6 0 . 1 6 1 4 9 4 3 1 0 0 0 . 3 7 6 1 0 . 1 0 3 8 0 . 0 9 1 9 7 0 . 0 8 8 4 2 0 . 3 9 6 4 9 4 3 1 0 0 0 . 2 5 7 5 0 . 1 5 3 7 0 . 1 2 5 8 6 0 . 1 2 0 9 2 0 . 1 0 8 4 9 4 3 1 0 0 0 . 0 3 9 4 0 . 2 1 6 3 0 . 1 5 5 9 2 0 . 1 6 2 3 3 0 . 2 2 6 7 9 4 4 0 3 . 0 5 3 4 0 . 6 2 2 9 0 . 1 2 9 3 0 . 1 1 4 1 3 . 1 4 2 4 9 4 4 0 2 . 9 7 5 7 0 . 6 9 3 7 0 . 1 1 5 9 0 . 0 9 9 4 3 . 2 7 6 6 9 4 4 0 2 . 4 7 5 6 0 . 6 7 8 5 0 . 1 0 3 2 1 0 . 1 0 2 3 3 . 2 4 5 6 9 4 4 1 0 . 7 8 0 2 0 . 7 2 8 1 0 . 0 7 7 6 4 0 . 1 1 6 5 2 0 . 2 8 7 6 9 4 4 1 0 . 3 7 7 7 0 . 7 2 0 . 0 8 6 6 7 0 . 0 9 5 6 8 0 . 8 9 5 3 9 4 4 1 0 . 6 5 5 7 0 . 6 4 1 2 0 . 0 7 6 3 3 . 1 2 6 3 7 0 . 3 7 3 2 9 4 4 3 0 . 4 4 4 5 0 . 8 3 3 2 0 . 0 2 3 4 6 0 . 1 3 2 0 7 0 . 3 0 2 9 9 4 4 3 0 . 5 4 6 4 0 . 7 1 9 1 0 . 3 0 4 6 8 0 . 1 4 3 0 5 0 . 5 4 4 3 9 4 4 3 0 . 3 8 3 7 0 . 3 0 7 3 0 . 0 7 4 2 9 0 . 0 7 4 7 7 0 . 7 2 8 3 9 4 4 7 0 . 4 2 5 6 0 . 2 2 5 2 0 . 1 8 9 9 9 0 . 1 8 5 7 5 0 . 2 1 9 4 9 4 4 7 0 . 2 2 9 1 0 . 4 8 6 8 0 . 1 7 7 0 6 0 . 1 5 8 0 1 0 . 3 6 3 1 9 4 4 7 0 . 4 0 2 0 . 9 0 5 2 0 . 1 0 2 4 0 . 0 2 6 0 2 0 . 5 6 6 6 9 4 4 1 4 0 . 4 5 5 4 1 . 0 1 5 1 0 . 9 6 5 2 4 0 . 1 7 2 6 2 0 . 6 2 1 3 9 4 4 1 4 0 . 3 0 5 6 0 . 9 0 4 4 0 . 3 0 0 1 2 0 . 1 4 2 2 8 0 . 7 0 1 2 9 4 4 1 4 0 . 3 2 0 2 0 . 8 9 7 9 0 . 2 9 9 7 5 0 . 0 9 6 9 3 0 . 4 8 6 9 9 4 4 2 1 0 . 3 7 3 1 0 . 6 0 8 5 0 . 1 9 8 8 4 0 . 1 1 2 4 9 0 . 3 6 2 2 9 4 4 2 1 0 . 2 6 0 2 0 . 6 8 4 3 0 . 2 5 6 3 7 0 . 1 8 2 9 0 . 3 4 7 1 9 4 4 2 1 0 . 2 8 1 5 0 . 5 7 1 3 0 . 2 3 5 8 9 0 . 0 9 7 1 6 0 . 3 6 0 1 9 4 4 4 0 0 . 0 7 2 6 0 . 0 9 3 7 0 . 1 0 9 1 0 . 0 8 0 7 3 0 . 1 4 1 9 4 4 4 0 0 . 4 1 1 1 0 . 1 4 9 6 0 . 1 2 5 1 1 0 . 1 3 4 8 4 0 . 4 1 4 8 9 4 4 4 0 0 . 1 1 7 5 0 . 1 6 8 2 0 . 1 5 7 6 9 0 . 1 1 2 9 7 0 . 2 0 8 7 9 4 4 1 0 0 0 . 0 5 0 1 0 . 1 1 9 8 0 . 1 1 6 8 3 0 . 1 0 9 7 7 0 . 0 9 1 8 9 4 4 1 0 0 0 . 2 9 0 4 0 . 3 1 2 1 0 . 1 8 6 6 4 0 . 1 7 5 0 3 0 . 2 2 9 4 4 1 0 0 0 . 1 4 8 9 0 . 2 0 4 8 0 . 1 5 9 4 6 0 . 1 5 8 0 9 0 . 2 0 8 8 9 3 1 0 3 . 2 7 1 4 0 . 4 0 5 4 0 . 0 9 4 7 0 . 0 4 6 4 2 . 6 3 1 5 9 9 3 1 0 3 . 3 0 6 8 0 . 3 1 5 5 0 . 0 8 4 4 0 . 0 3 3 5 2 . 6 6 1 6 3 9 3 1 0 3 . 1 3 3 2 0 . 3 2 3 8 0 . 0 9 4 9 0 . 0 4 2 8 2 . 6 0 2 7 9 3 1 1 0 . 9 5 7 6 0 . 3 2 3 8 0 . 0 7 0 9 0 . 1 3 6 6 0 . 3 0 3 5 9 3 1 1 1 . 0 7 0 . 3 2 8 1 0 . 1 2 2 3 0 . 1 5 8 8 0 . 3 7 2 8 9 9 3 1 1 1 . 1 1 0 1 0 . 2 2 6 0 . 0 9 4 7 0 . 1 2 2 6 0 . 6 4 5 9 4 9 3 1 3 0 . 6 3 1 1 0 . 3 3 1 1 0 . 0 4 3 2 0 . 0 8 1 2 0 . 1 4 8 8 3 9 3 1 3 0 . 6 0 5 0 . 4 1 8 0 . 0 5 9 6 0 . 0 5 4 5 0 . 2 1 2 9 3 1 3 0 . 6 4 1 8 0 . 2 1 1 7 0 . 0 7 1 0 . 0 3 4 0 . 1 8 7 8 1 9 3 1 7 0 . 5 7 0 2 0 . 0 8 7 4 0 . 0 8 3 0 . 0 7 4 0 . 1 2 8 9 9 9 3 1 7 0 . 5 7 4 4 0 . 1 0 5 8 0 . 0 9 9 1 0 . 0 6 3 2 0 . 0 9 2 7 6 9 3 1 7 0 . 5 4 0 4 0 . 1 7 9 6 0 . 1 7 1 9 0 . 0 7 4 5 0 . 2 3 3 5 6 9 3 1 1 4 0 . 2 0 7 9 0 . 1 5 7 3 0 . 0 7 1 4 0 . 0 3 5 6 0 . 1 2 1 9 9 3 1 1 4 0 . 1 3 5 3 0 . 0 9 5 5 0 . 0 9 2 2 0 . 0 4 2 8 0 . 0 2 2 7 9 3 1 1 4 0 . 1 2 5 5 0 . 1 0 7 0 . 0 8 1 9 0 . 0 3 0 8 0 . 1 6 0 8 7 9 3 1 2 1 0 . 0 8 5 8 0 . 1 1 6 0 . 0 6 7 0 . 0 4 3 0 . 0 2 7 8 6 9 3 1 2 1 0 . 2 7 0 4 0 . 1 0 2 4 0 . 0 6 4 6 0 . 0 2 8 7 0 . 0 8 9 7 9 3 1 2 1 0 . 1 0 1 2 0 . 3 2 0 9 0 . 2 8 1 5 0 . 0 4 0 2 0 . 1 1 2 2 5 9 3 1 4 0 0 . 1 2 2 9 0 . 0 9 9 9 0 . 0 5 6 7 0 . 0 1 7 1 0 . 0 1 7 5 4 9 3 1 4 0 0 . 1 0 6 4 0 . 0 7 2 3 0 . 0 3 0 7 0 . 0 2 0 7 0 . 0 7 8 4 3 9 3 1 4 0 0 . 0 7 9 2 0 . 0 6 7 1 0 . 0 4 2 8 0 . 0 2 3 3 0 . 0 2 6 2 6 9 3 1 1 0 0 0 . 0 5 5 2 0 . 0 3 4 0 . 0 1 2 5 0 . 1 4 4 3 0 . 0 1 9 9 5 9 3 1 1 0 0 0 . 0 3 3 5 0 . 0 7 2 9 0 . 0 4 3 2 0 . 1 8 8 4 0 . 0 1 7 5 4 9 3 1 1 0 0 0 . 0 3 3 4 0 . 0 6 1 9 0 . 1 0 6 6 0 . 0 9 7 4 0 . 0 2 0 0 7 9 3 2 0 3 . 2 7 5 2 0 . 4 2 9 8 0 0 . 0 1 7 1 2 . 1 7 6 9 2 9 3 2 0 3 . 3 1 3 9 0 . 4 8 5 5 0 0 . 1 0 0 2 2 . 8 7 8 1 1 9 3 2 0 3 . 1 1 2 2 0 . 3 3 1 5 0 0 2 . 7 1 3 5 7 9 3 2 1 1 . 2 3 4 8 0 . 4 4 8 3 0 0 0 . 2 9 1 4 6 9 3 2 1 0 . 9 5 1 4 0 . 5 3 5 4 0 . 0 5 0 7 0 . 0 9 0 2 0 . 2 8 6 6 5 9 3 2 1 1 . 1 9 9 6 0 . 2 1 5 1 0 0 0 . 7 3 2 9 9 9 3 2 3 0 . 5 0 3 2 0 . 5 2 3 2 0 0 0 . 6 1 4 7 7 9 3 2 3 0 . 7 4 7 3 0 . 0 2 5 5 0 0 . 0 6 8 6 0 . 0 6 3 6 4 9 3 2 3 0 . 6 4 9 7 0 . 2 3 9 8 0 . 1 0 9 1 0 . 1 0 1 7 0 . 3 9 8 9 5 9 3 2 7 0 . 4 5 3 0 . 1 5 1 1 0 . 1 7 0 1 0 . 1 1 4 5 0 . 1 6 0 6 4 2 7 7 T a b l e A - 8 . C o n t . Y e a r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 3 2 7 0 . 4 6 0 6 0 . 1 2 2 4 0 . 2 1 3 6 0 0 . 1 4 4 9 3 9 3 2 7 0 . 4 6 4 0 . 1 4 2 8 0 . 2 0 6 4 0 . 1 1 1 2 0 . 1 3 1 6 3 9 3 2 1 4 0 . 1 0 0 7 0 . 1 5 9 8 0 . 1 1 6 5 0 . 0 5 1 8 0 . 0 9 4 5 9 9 3 2 1 4 0 . 3 4 5 6 0 . 2 8 0 4 0 . 2 0 2 0 . 0 7 3 0 . 4 6 8 6 1 9 3 2 1 4 0 . 2 9 2 8 0 . 1 3 0 4 0 . 1 5 6 1 0 . 0 6 0 4 0 . 2 8 1 0 3 9 3 2 2 1 0 . 3 1 8 5 0 . 2 3 0 8 0 . 1 7 3 1 0 . 0 9 1 2 0 . 0 6 6 5 9 3 2 2 1 0 . 1 3 8 3 0 . 1 9 3 4 0 . 0 8 2 7 0 . 0 9 7 7 0 . 0 5 0 5 6 9 3 2 2 1 0 . 1 0 5 9 0 . 0 3 9 2 0 . 1 9 5 3 0 . 1 0 1 0 . 1 3 0 0 7 9 3 2 4 0 0 . 1 7 3 5 0 . 1 0 6 6 0 . 1 7 9 5 0 . 1 4 4 2 0 . 0 7 6 0 2 9 3 2 4 0 0 . 1 1 4 5 0 . 2 0 3 2 0 . 0 6 9 9 0 . 1 1 9 8 0 . 1 1 5 1 3 9 3 2 4 0 0 . 1 1 4 1 0 . 0 4 2 1 0 . 0 4 4 8 0 0 . 0 9 9 0 3 9 3 2 1 0 0 0 . 0 4 1 7 0 . 0 5 7 7 0 . 0 6 9 0 . 0 8 7 5 0 . 0 9 9 2 9 9 3 2 1 0 0 0 . 0 6 0 6 0 . 0 5 3 1 0 . 0 6 6 9 0 . 0 5 8 9 0 . 1 3 0 3 7 9 3 2 1 0 0 0 . 0 8 0 8 0 . 0 3 9 2 0 . 0 7 9 4 0 . 1 0 8 3 2 . 4 6 6 3 2 9 3 2 0 2 . 9 8 6 2 0 . 2 3 6 4 0 . 0 6 3 7 0 . 1 1 3 0 2 . 7 4 6 5 3 9 3 3 0 3 . 3 2 6 8 0 . 3 4 1 2 0 . 0 6 8 4 0 . 0 9 8 0 . 9 1 4 1 6 9 3 3 0 3 . 2 9 7 4 0 . 2 9 5 6 0 . 0 5 6 7 0 . 0 7 6 4 2 . 6 6 8 1 9 3 3 1 1 . 2 1 6 8 0 . 4 3 4 3 0 0 . 0 6 0 7 0 . 6 0 8 9 3 3 1 1 . 2 2 5 0 . 4 6 4 3 0 0 . 0 7 2 7 0 . 6 5 4 7 9 3 3 1 1 . 0 3 3 1 0 . 1 3 6 1 0 0 . 0 4 0 4 0 . 7 0 1 2 9 3 3 3 0 . 3 2 5 1 0 . 6 5 2 3 0 0 . 0 5 6 0 . 5 4 3 0 9 3 3 3 0 . 3 9 1 9 0 . 2 0 1 5 0 0 . 0 5 2 8 0 . 5 2 1 0 9 3 3 3 0 . 4 9 6 9 0 . 1 1 2 3 0 . 1 6 6 6 0 . 0 8 0 1 0 . 4 9 5 6 9 3 3 7 0 . 3 7 4 0 . 1 4 5 5 0 . 1 4 0 8 0 . 0 6 1 8 0 . 4 2 3 5 9 3 3 7 0 . 2 6 5 9 0 . 1 3 2 9 0 . 1 7 2 9 0 . 0 6 2 5 0 . 3 2 1 4 9 3 3 7 0 . 4 5 8 8 0 . 1 3 4 7 0 . 1 6 6 2 0 . 0 6 7 8 0 . 2 5 9 5 9 9 3 3 1 4 0 . 0 8 9 0 . 1 5 9 4 0 . 1 3 2 7 0 . 0 6 3 8 0 . 2 6 1 3 1 9 3 3 1 4 0 . 1 6 0 4 0 . 1 5 1 1 0 . 1 4 3 0 . 1 2 2 1 0 . 3 3 0 6 7 9 3 3 1 4 0 . 0 5 4 3 0 . 0 9 1 2 0 . 1 4 9 0 0 0 . 2 8 5 1 6 9 3 3 2 1 0 . 0 8 4 6 0 . 0 7 3 3 0 . 0 6 8 5 0 . 0 5 1 0 . 2 6 8 0 7 9 3 3 2 1 0 . 1 2 4 5 0 . 0 5 6 4 0 . 0 3 7 0 . 0 1 8 3 0 . 2 6 5 2 1 9 3 3 2 1 0 . 0 6 3 1 0 . 0 5 9 5 0 . 1 0 6 3 0 . 0 5 2 3 0 . 2 5 0 4 1 9 3 3 4 0 0 . 0 8 2 6 0 . 1 2 8 2 0 . 0 5 8 5 0 . 0 8 1 3 0 . 2 6 6 5 8 9 3 3 4 0 0 . 0 9 0 2 0 . 1 1 0 9 0 . 0 9 0 1 0 . 0 3 4 2 0 . 2 5 3 7 4 9 3 3 4 0 0 . 0 6 5 9 0 . 0 6 3 6 0 . 0 2 7 6 0 . 0 3 4 3 0 . 2 4 8 5 8 9 3 3 1 0 0 0 . 0 2 6 7 0 . 0 3 2 5 0 0 . 1 2 7 9 0 . 0 6 6 2 7 9 3 3 1 0 0 0 . 0 1 6 8 0 . 0 6 6 4 0 . 0 3 6 0 . 0 6 3 3 0 . 0 1 9 4 9 9 3 3 1 0 0 0 . 0 6 8 6 0 . 2 1 9 3 0 0 . 1 2 8 3 0 . 1 0 1 4 7 9 3 4 0 3 . 2 5 6 8 0 . 2 9 6 1 0 . 0 6 6 1 0 . 0 8 4 9 2 . 4 4 1 3 1 9 3 4 0 3 . 3 8 3 6 0 . 5 9 8 8 0 . 0 6 8 6 0 . 0 7 4 8 2 . 9 1 1 3 4 9 3 4 0 3 . 3 9 2 3 0 . 1 0 7 0 . 0 5 6 1 0 . 0 4 1 6 2 . 5 9 2 4 3 9 3 4 1 1 . 0 8 3 0 . 4 6 7 0 . 0 4 2 6 0 . 0 6 8 1 0 . 5 0 9 8 9 9 3 4 1 1 . 2 4 5 6 0 . 3 2 6 1 0 . 0 5 6 1 0 . 0 6 7 9 0 . 9 0 2 7 8 9 3 4 1 1 . 1 8 6 6 0 . 1 0 1 2 0 . 0 6 0 3 0 . 0 4 8 2 0 . 4 8 5 1 2 9 3 4 3 0 . 4 2 3 4 0 . 4 5 2 7 0 . 0 2 4 1 0 0 . 2 4 5 7 1 9 3 4 3 0 . 3 8 7 6 0 . 3 8 7 0 . 0 3 2 4 0 . 2 4 1 5 0 . 2 2 4 8 9 3 4 3 0 . 3 6 7 0 0 . 3 7 0 5 0 . 0 3 3 1 0 . 0 8 3 1 0 . 4 8 7 2 2 9 3 4 7 0 . 2 8 3 6 0 . 1 3 5 7 0 0 . 0 9 9 1 0 . 2 7 0 7 1 9 3 4 7 0 . 3 8 4 6 0 . 0 1 9 8 0 0 . 0 4 2 0 . 2 5 6 4 9 9 3 4 7 0 . 1 3 4 9 0 . 1 1 2 3 0 . 0 6 4 0 . 0 3 3 2 0 . 3 1 9 2 1 9 3 4 1 4 0 . 0 3 6 6 0 . 2 8 8 9 0 . 2 7 0 8 0 . 2 7 4 5 0 . 2 6 3 0 3 9 3 4 1 4 0 . 1 2 3 4 0 . 1 6 2 1 0 0 . 0 6 0 4 0 . 2 6 9 9 1 9 3 4 1 4 0 . 0 9 9 7 0 . 0 8 6 4 0 . 0 8 7 3 0 . 0 3 7 9 0 . 2 5 0 0 7 9 3 4 2 1 0 . 1 0 4 2 0 . 1 2 2 7 0 0 . 0 6 4 3 0 . 2 4 4 9 1 9 3 4 2 1 0 . 0 4 6 5 0 . 0 2 1 2 0 0 . 0 2 2 0 . 2 5 8 2 1 9 3 4 2 1 0 . 0 4 7 8 0 . 2 1 3 0 . 2 2 2 8 0 . 1 9 5 2 0 . 2 7 8 8 5 9 3 4 4 0 0 . 0 4 8 7 0 . 1 6 6 3 0 . 0 6 7 1 0 . 0 9 8 0 . 1 3 0 2 5 9 3 4 4 0 0 . 0 3 0 9 0 . 1 2 2 1 0 . 0 7 8 2 0 . 0 6 1 7 0 . 1 6 5 1 2 9 3 4 4 0 0 . 0 4 1 7 0 . 1 0 5 1 0 . 0 6 9 0 . 0 6 8 6 0 . 2 1 6 0 3 9 3 4 1 0 0 0 . 0 4 5 6 0 . 1 4 1 1 0 . 0 4 3 7 0 . 1 3 8 4 0 . 0 5 1 8 3 9 3 4 1 0 0 0 . 0 2 3 4 0 . 0 5 1 8 0 . 1 5 1 3 0 . 0 2 6 0 . 0 3 4 1 9 9 3 4 1 0 0 0 . 0 5 2 3 0 . 0 2 3 4 0 0 . 1 1 8 4 0 . 0 9 6 2 1 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I T a b l e A - 9 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 2 ) Y e a r T r t D a y N D F H e m i c A D F C e l l u l o s e 9 3 1 0 6 5 . 5 8 7 0 2 8 . 8 2 2 3 6 . 7 6 4 2 9 . 4 3 8 9 9 3 1 0 6 7 . 7 0 0 1 2 9 . 1 2 7 3 8 . 5 7 2 3 0 . 3 1 2 0 9 3 1 0 6 4 . 3 5 8 5 2 8 . 5 2 3 3 5 . 8 3 4 2 8 . 3 4 7 9 9 3 2 0 6 4 . 7 4 3 8 2 7 . 7 0 0 3 7 . 0 4 3 3 5 . 7 9 2 9 9 3 2 0 6 8 . 8 8 8 4 2 9 . 7 6 3 3 9 . 1 2 4 3 1 . 2 4 0 7 9 3 2 0 6 3 . 7 2 7 2 2 7 . 6 9 4 3 6 . 0 3 2 2 7 . 9 1 4 4 9 3 3 0 6 6 . 1 6 9 4 2 9 . 0 0 0 3 7 . 1 6 9 2 9 . 3 8 7 8 9 3 3 0 6 6 . 9 6 6 7 2 9 . 2 0 3 3 7 . 7 6 3 2 9 . 2 6 2 0 9 3 3 0 6 6 . 6 2 5 1 3 0 . 2 4 0 3 6 . 3 8 4 2 9 . 1 8 2 2 9 3 4 0 6 6 . 7 8 8 8 2 9 . 6 5 9 3 7 . 1 2 9 3 0 . 5 5 6 1 9 3 4 0 6 7 . 3 5 2 7 2 8 . 9 9 2 3 8 . 3 6 0 3 0 . 6 1 5 4 9 3 4 0 6 3 . 9 9 3 0 2 7 . 4 0 9 3 6 . 5 8 3 2 9 . 3 5 1 7 9 3 1 4 0 6 6 . 6 0 3 4 2 6 . 6 2 6 3 9 . 9 7 6 3 2 . 9 2 5 2 9 3 1 4 0 6 5 . 3 1 4 7 2 5 . 7 4 9 3 9 . 5 6 4 3 2 . 6 5 4 2 9 3 1 4 0 6 1 . 9 1 7 5 2 6 . 5 9 5 3 5 . 3 2 2 2 9 . 9 2 9 2 9 3 2 4 0 6 2 . 5 6 5 1 2 3 . 5 4 8 3 9 . 0 1 6 3 2 . 6 9 5 3 9 3 2 4 0 6 0 . 0 7 5 2 2 3 . 3 8 2 3 6 . 6 9 2 3 0 . 8 0 0 2 9 3 2 4 0 6 2 . 4 1 0 5 2 3 . 8 2 6 3 8 . 5 8 3 3 1 . 7 8 2 0 9 3 3 4 0 6 4 . 3 3 6 8 2 5 . 5 5 4 3 8 . 7 8 1 3 2 . 8 5 6 3 9 3 3 4 0 6 2 . 8 7 4 2 2 5 . 2 0 7 3 7 . 6 6 6 3 1 . 2 9 2 2 9 3 3 4 0 6 1 . 9 0 0 3 2 6 . 1 4 6 3 5 . 7 5 3 2 9 . 7 0 6 2 9 3 4 4 0 6 2 . 1 6 5 6 2 5 . 2 7 4 3 6 . 8 9 1 3 1 . 0 6 9 3 9 3 4 4 0 6 2 . 4 1 0 1 2 5 . 1 0 9 3 7 . 3 0 1 3 1 . 3 4 3 2 9 3 4 4 0 6 3 . 7 2 5 1 2 4 . 8 8 4 3 8 . 8 4 0 3 1 . 1 6 3 4 9 3 1 1 0 0 6 5 . 5 9 5 9 2 3 . 5 8 4 4 2 . 0 1 1 3 4 . 3 1 9 5 9 3 1 1 0 0 6 8 . 9 3 6 3 2 4 . 4 4 6 4 4 . 4 9 0 3 3 . 3 9 6 1 9 3 1 1 0 0 6 5 . 0 1 8 3 2 4 . 2 4 5 4 0 . 7 7 2 3 4 . 1 4 6 6 9 3 2 1 0 0 6 1 . 9 0 7 8 2 2 . 5 8 6 3 9 . 3 2 1 3 3 . 0 1 1 4 9 3 2 1 0 0 6 2 . 3 4 2 1 2 3 . 3 4 5 4 1 . 2 3 4 3 4 . 2 3 6 9 3 2 1 0 0 6 3 . 6 1 1 9 2 3 . 9 5 3 3 9 . 6 5 8 3 3 . 4 5 7 6 9 3 3 1 0 0 6 4 . 8 9 4 8 2 4 . 6 9 2 4 0 . 2 0 2 3 3 . 8 7 3 8 9 3 3 1 0 0 6 3 . 9 2 8 5 2 4 . 6 2 7 3 9 . 3 0 1 3 1 . 6 5 0 2 9 3 3 1 0 0 6 3 . 6 1 4 8 2 4 . 4 0 0 3 9 . 2 1 3 3 1 . 4 2 2 4 9 3 4 1 0 0 6 3 . 1 3 8 3 2 4 . 1 8 1 3 8 . 9 5 6 3 3 . 1 8 3 9 9 3 4 1 0 0 6 2 . 5 7 4 6 2 4 . 3 8 9 3 8 . 1 8 5 3 2 . 3 2 9 5 9 3 4 1 0 0 6 3 . 8 6 0 6 2 5 . 0 2 5 3 8 . 8 3 4 3 2 . 0 7 5 4 9 4 1 0 6 6 . 5 7 3 4 2 6 . 4 3 7 4 0 . 1 3 5 3 2 . 1 4 8 5 9 4 1 0 6 6 . 3 6 9 2 2 6 . 3 7 7 3 9 . 9 9 2 3 1 . 6 7 1 8 9 4 1 0 7 2 . 8 4 4 2 2 7 . 4 5 7 4 5 . 3 8 6 3 7 . 5 4 7 7 9 4 2 0 6 4 . 5 3 3 3 2 6 . 4 7 9 3 8 . 0 5 4 2 8 . 9 8 0 5 9 4 2 0 6 4 . 8 9 4 8 2 6 . 1 2 0 3 8 . 7 7 4 3 2 . 0 3 0 9 9 4 2 0 6 5 . 7 1 6 1 2 6 . 8 7 8 3 8 . 8 3 8 3 1 . 8 5 7 8 9 4 3 0 6 3 . 1 8 7 3 2 5 . 8 5 4 3 7 . 3 3 2 2 9 . 7 7 4 0 9 4 3 0 6 5 . 0 4 5 8 2 6 . 1 6 4 3 8 . 8 8 1 3 1 . 4 3 8 1 9 4 3 0 6 6 . 8 6 7 8 2 7 . 9 9 2 3 8 . 8 7 4 3 1 . 7 1 1 1 9 4 4 0 6 6 . 9 3 4 9 2 6 . 9 7 6 3 9 . 9 5 8 3 2 . 9 7 7 6 9 4 4 0 6 6 . 1 4 0 8 2 5 . 1 8 2 4 0 . 9 5 8 3 3 . 5 1 2 8 9 4 4 0 6 9 . 5 5 3 5 2 5 . 2 8 5 4 4 . 2 6 7 3 6 . 4 1 0 7 9 4 1 4 0 6 6 . 4 8 1 3 2 6 . 5 7 7 3 9 . 9 0 3 3 2 . 8 6 4 9 9 4 1 4 0 6 5 . 1 9 1 7 2 5 . 7 0 1 3 9 . 4 9 0 3 2 . 5 9 2 7 9 4 1 4 0 6 2 . 0 3 6 1 2 6 . 6 4 6 3 5 . 3 8 9 2 9 . 9 8 6 5 9 4 2 4 0 6 1 . 4 4 8 9 2 3 . 1 2 8 3 8 . 3 2 0 3 2 . 1 1 2 0 9 4 2 4 0 5 9 . 9 5 4 4 2 3 . 3 3 5 3 6 . 6 1 9 3 0 . 7 3 8 2 9 4 2 4 0 6 2 . 5 3 4 8 2 3 . 8 7 4 3 8 . 6 6 0 3 1 . 8 4 5 3 9 4 3 4 0 6 4 . 2 1 9 0 2 5 . 5 0 8 3 8 . 7 1 0 3 2 . 7 9 6 1 9 4 3 4 0 6 2 . 9 9 5 9 2 5 . 2 5 6 3 7 . 7 3 9 3 1 . 3 5 2 8 9 4 3 4 0 6 1 . 7 8 6 2 2 6 . 0 9 8 3 5 . 6 8 7 2 9 . 6 5 1 4 9 4 4 4 0 6 2 . 0 4 0 2 2 5 . 2 2 3 3 6 . 8 1 6 3 1 . 0 0 6 6 9 4 4 4 0 6 2 . 2 9 5 3 2 5 . 0 6 2 3 7 . 2 3 2 3 1 . 2 8 5 6 9 4 4 4 0 6 3 . 5 9 9 2 2 4 . 8 3 5 3 8 . 7 6 3 3 1 . 1 0 1 8 9 4 1 1 0 0 6 5 . 7 6 2 7 2 3 . 6 4 4 4 2 . 1 1 8 3 4 . 4 0 6 7 9 4 1 1 0 0 6 8 . 8 5 1 3 2 4 . 4 1 5 4 4 . 4 3 5 3 3 . 3 5 4 9 9 4 1 1 0 0 6 5 . 0 8 8 1 2 4 . 2 7 1 4 0 . 8 1 6 3 4 . 1 8 3 2 9 4 2 1 0 0 6 1 . 7 9 2 6 2 2 . 5 4 4 3 9 . 2 4 7 3 2 . 9 4 9 9 T a b l e A - 9 . Y e a r T r t D a y N D F H e m i c A D F C e l l u l o s e 9 4 2 1 0 0 6 2 . 8 3 4 9 2 3 . 8 8 9 3 8 . 9 4 5 3 2 . 4 1 1 4 9 4 2 1 0 0 6 3 . 7 3 1 3 2 3 . 9 9 8 3 9 . 7 3 2 3 3 . 5 2 0 4 9 4 3 1 0 0 6 4 . 9 8 1 1 2 4 . 7 2 5 4 0 . 2 5 6 3 3 . 9 1 8 8 9 4 3 1 0 0 6 4 . 0 6 6 3 2 4 . 6 8 0 3 9 . 3 8 5 3 1 . 7 1 8 4 9 4 3 1 0 0 6 3 . 7 0 4 7 2 4 . 4 3 5 3 9 . 2 6 9 3 1 . 4 6 6 8 9 4 4 1 0 0 6 3 . 2 9 4 2 2 4 . 2 4 1 3 9 . 0 5 3 3 3 . 2 6 5 8 9 4 4 1 0 0 6 2 . 6 6 8 4 2 4 . 4 2 5 3 8 . 2 4 2 3 2 . 3 7 8 0 9 4 4 1 0 0 6 3 . 7 6 8 1 2 4 . 9 8 9 3 8 . 7 7 8 3 2 . 0 2 8 9 A b b r e v i a t i o n s : T r t = T r e a t m e n t s , 1 = = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; H e m i c = h e m i c e l l u l o s e 2 8 0 T a b l e A - 1 0 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H , t e m p e r a t u r e , a n d m i c r o b i a l p o p u l a t i o n s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s ( C h a p t e r 3 ) E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T e r n 1 9 3 1 1 0 1 3 . 6 0 4 . 8 7 7 . 8 4 2 2 . 7 7 1 9 3 1 1 0 2 3 . 6 0 4 . 6 0 7 . 7 3 2 1 . 1 1 1 9 3 1 1 0 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 1 1 3 . 8 5 4 . 2 4 7 . 5 7 2 3 . 8 8 1 9 3 1 1 1 2 3 . 7 5 6 . 6 9 7 . 8 6 3 6 . 1 1 1 9 3 1 1 1 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 2 1 N D N D N O 2 6 . 1 1 1 9 3 1 1 2 2 N D N D N O 2 7 . 7 7 1 9 3 1 1 2 3 N D N D N O 2 9 . 1 1 1 9 3 1 1 3 1 7 . 1 0 8 . 2 4 8 . 2 3 2 5 . 5 5 1 9 3 1 1 3 2 6 . 9 0 7 . 9 8 8 . 2 9 2 1 . 6 7 1 9 3 1 1 3 3 N D N D N O 2 6 . 1 1 1 9 3 1 1 4 1 N D N D N D 2 3 . 8 8 1 9 3 1 1 4 2 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 3 1 1 4 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 5 1 7 . 0 0 8 . 2 2 8 . 1 4 2 3 . 3 3 1 9 3 1 1 5 2 7 . 0 0 8 . 0 0 8 . 6 4 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 5 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 6 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 6 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 6 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 7 1 8 . 1 0 7 . 6 6 7 . 9 0 2 2 . 2 2 1 9 3 1 1 7 2 8 . 4 0 7 . 5 8 7 . 2 0 2 2 . 5 0 1 9 3 1 1 7 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 1 2 0 1 3 . 6 0 3 8 2 7 . 7 6 1 8 . 8 8 1 9 3 1 2 0 2 3 . 7 0 4 6 6 7 . 7 0 2 3 . 3 3 1 9 3 1 2 0 3 N D N D N O 1 6 . 6 6 1 9 3 1 2 1 1 3 . 7 0 4 . 3 6 7 . 4 9 2 1 . 1 1 1 9 3 1 2 1 2 3 . 8 5 4 . 1 6 7 . 2 2 3 5 . 5 5 1 9 3 1 2 1 3 N D N D N D 2 2 . 7 7 1 9 3 1 2 2 1 N D N D N O 2 8 . 6 6 1 9 3 1 2 2 2 N D N D N O 2 6 . 1 1 1 9 3 1 2 2 3 N D N D N O 2 3 . 8 8 1 9 3 1 2 3 1 6 . 5 0 8 . 4 0 9 . 2 0 2 1 . 1 1 1 9 3 1 2 3 2 7 . 2 0 8 . 6 1 9 . 0 1 2 5 . 5 5 1 9 3 1 2 3 3 N D N D N O 2 0 . 5 5 1 9 3 1 2 4 1 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 1 2 4 2 N D N D N O 2 3 . 8 8 1 9 3 1 2 4 3 N D N D N O 1 8 . 3 3 1 9 3 1 2 5 1 6 . 7 0 7 . 8 1 7 . 1 4 2 0 . 0 0 1 9 3 1 2 5 2 7 . 1 0 8 . 5 2 7 . 7 4 2 3 . 3 3 1 9 3 1 2 5 3 N D N D N O 1 7 . 7 7 1 9 3 1 2 6 1 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 1 2 6 2 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 3 1 2 6 3 N D N D N O 1 7 . 7 7 1 9 3 1 2 7 1 8 . 9 0 6 . 8 7 8 . 6 0 2 0 . 0 0 1 9 3 1 2 7 2 8 . 5 0 7 . 4 0 8 . 1 3 2 4 . 4 4 1 9 3 1 2 7 3 N D N D N O 1 8 . 3 3 1 9 3 1 3 0 1 3 . 6 0 4 . 4 1 7 . 3 8 2 0 . 5 5 1 9 3 1 3 0 2 3 . 5 8 4 5 1 6 . 6 7 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 0 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 1 1 3 . 7 8 6 . 2 9 7 . 6 4 2 1 . 3 8 1 9 3 1 3 1 2 4 . 4 0 6 . 5 7 6 . 8 5 2 3 . 3 3 1 9 3 1 3 1 3 N D N D N O 3 7 . 2 2 1 9 3 1 3 2 1 N D N D N D 3 0 . 0 0 1 9 3 1 3 2 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 1 9 3 1 3 2 3 N D N D N O 3 0 . 5 5 1 9 3 1 3 3 1 4 . 5 0 7 . 4 4 8 . 3 7 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 3 2 6 . 5 0 8 . 6 4 8 . 9 8 2 3 . 8 8 1 9 3 1 3 3 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 3 1 3 4 1 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 4 2 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 1 3 4 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 5 1 7 . 4 0 7 . 8 5 6 . 6 2 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 5 2 8 . 0 0 7 8 6 7 . 0 2 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 5 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 2 8 1 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 1 9 3 1 3 6 1 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 6 2 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 6 3 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 7 1 7 . 9 0 8 . 3 0 7 . 6 4 2 1 . 1 1 1 9 3 1 3 7 2 8 . 0 0 7 . 8 0 7 . 7 4 2 2 . 2 2 1 9 3 1 3 7 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 1 4 0 1 3 . 6 5 4 . 7 5 6 . 0 5 2 1 . 1 1 1 9 3 1 4 0 2 3 . 6 0 4 . 5 2 6 . 5 7 2 1 . 1 1 1 9 3 1 4 0 3 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 1 1 4 . 0 0 4 . 2 3 7 . 1 0 2 3 . 3 3 1 9 3 1 4 1 2 3 . 8 0 5 . 5 6 6 . 4 7 3 0 . 5 5 1 9 3 1 4 1 3 N D N D N O 2 5 . 5 5 1 9 3 1 4 2 1 N D N D N O 3 2 . 5 0 1 9 3 1 4 2 2 N D N D N O 2 7 . 2 2 1 9 3 1 4 2 3 N D N D N D 2 8 . 8 8 1 9 3 1 4 3 1 4 . 9 0 6 . 9 8 8 . 0 9 2 3 . 3 3 1 9 3 1 4 3 2 6 . 9 0 7 . 6 3 8 . 6 0 2 4 . 4 4 1 9 3 1 4 3 3 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 3 1 4 4 1 N D N D N D 2 1 . 6 6 1 9 3 1 4 4 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 4 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 5 1 7 . 6 0 8 . 4 3 6 . 9 5 2 1 . 1 1 1 9 3 1 4 5 2 7 . 6 0 8 . 0 2 6 . 9 0 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 5 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 6 1 N D N D N D 2 1 . 1 1 1 9 3 1 4 6 2 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 1 4 6 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 1 4 7 1 7 . 8 0 8 . 2 1 7 . 9 2 2 1 . 1 1 1 9 3 1 4 7 2 7 . 9 0 8 . 1 5 8 . 2 0 2 2 . 7 7 1 9 3 1 4 7 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 3 2 1 0 1 3 . 7 5 5 . 3 5 8 . 2 3 1 7 . 7 7 1 9 3 2 1 0 2 3 . 8 0 4 . 1 5 7 . 4 2 2 0 . 0 0 1 9 3 2 1 0 3 N D N D N D 1 8 . 8 8 1 9 3 2 1 1 1 3 . 6 0 5 . 3 5 6 . 4 6 1 8 . 8 8 1 9 3 2 1 1 2 3 . 6 0 5 . 3 9 6 . 3 5 2 1 . 1 1 1 9 3 2 1 1 3 N D N D N D 1 9 . 4 4 1 9 3 2 1 2 1 N D N D N D 2 0 . 5 5 1 9 3 2 1 2 2 N D N D N O 3 3 . 8 8 1 9 3 2 1 2 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 3 2 1 3 1 3 . 7 0 7 . 0 9 6 . 9 5 3 1 . 2 2 1 9 3 2 1 3 2 4 . 8 0 6 . 8 1 6 . 4 0 2 5 . 0 0 1 9 3 2 1 3 3 N D N D N O 2 5 . 5 5 1 9 3 2 1 4 1 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 4 2 N D N D N D 2 2 . 7 7 1 9 3 2 1 4 3 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 5 1 5 . 6 5 7 . 4 2 8 . 2 7 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 5 2 6 . 2 0 7 . 1 1 7 . 3 8 2 3 . 3 3 1 9 3 2 1 5 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 6 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 6 2 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 3 2 1 6 3 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 7 1 6 . 4 0 7 . 5 9 7 . 2 3 2 1 . 1 1 1 9 3 2 1 7 2 4 . 5 0 7 . 1 5 6 . 3 9 2 2 . 2 2 1 9 3 2 1 7 3 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 3 2 2 0 1 3 . 7 0 3 . 6 2 6 . 7 8 1 6 . 6 6 1 9 3 2 2 0 2 3 . 6 5 5 . 1 3 6 . 7 1 1 7 . 7 7 1 9 3 2 2 0 3 N D N D N O 1 8 . 8 8 1 9 3 2 2 1 1 3 . 6 0 5 . 3 2 6 . 0 3 1 7 . 7 7 1 9 3 2 2 1 2 3 . 6 0 5 . 1 2 6 . 2 2 1 9 . 4 4 1 9 3 2 2 1 3 N D N D N O 1 9 . 4 4 1 9 3 2 2 2 1 N D N D N O 1 7 . 7 7 1 9 3 2 2 2 2 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 2 2 2 3 N D N D N D 2 2 . 7 7 1 9 3 2 2 3 1 3 . 7 0 6 . 4 9 6 . 9 8 1 8 . 3 3 1 9 3 2 2 3 2 3 . 7 0 5 . 8 5 6 . 4 0 2 0 . 0 0 1 9 3 2 2 3 3 N D N D N O 2 3 . 8 8 T a b l e A - 1 0 C o n t . E v n Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T e r n 1 9 3 2 2 4 1 N D N D N D 2 0 . 5 5 1 9 3 2 2 4 2 N D N D N O 2 0 . 5 5 1 9 3 2 2 4 3 N D N D N O 3 7 . 2 2 1 9 3 2 2 5 1 3 . 7 5 6 . 2 0 7 . 0 0 2 5 . 5 5 1 9 3 2 2 5 2 4 . 2 5 4 . 7 7 6 . 9 5 2 3 . 3 3 1 9 3 2 2 5 3 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 3 2 2 6 1 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 3 2 2 6 2 N D N D N D 2 5 . 5 5 1 9 3 2 2 6 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 3 2 2 7 1 4 . 3 0 6 . 1 3 6 . 5 1 2 1 . 1 1 1 9 3 2 2 7 2 4 . 7 0 7 . 1 8 7 . 4 3 2 1 . 1 1 1 9 3 2 2 7 3 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 3 2 3 0 1 3 . 6 0 5 . 0 4 6 . 8 1 1 8 . 8 8 1 9 3 2 3 0 2 3 . 6 5 5 . 6 5 7 . 8 7 1 8 . 8 8 1 9 3 2 3 0 3 N D N D N D 1 5 . 5 5 1 9 3 2 3 1 1 3 . 7 0 5 . 1 9 5 . 4 6 1 8 . 3 3 1 9 3 2 3 1 2 3 . 7 0 4 . 0 0 5 . 9 5 1 5 . 0 0 1 9 3 2 3 1 3 N D N D N O 1 5 . 5 5 1 9 3 2 3 2 1 N D N D N D 2 0 . 0 0 1 9 3 2 3 2 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 3 2 3 N D N D N O 1 5 . 5 5 1 9 3 2 3 3 1 3 . 7 0 4 . 6 0 6 . 2 2 2 0 . 0 0 1 9 3 2 3 3 2 3 . 6 5 6 . 2 7 6 . 4 1 2 3 . 3 3 1 9 3 2 3 3 3 N D N D N O 1 7 . 2 2 1 9 3 2 3 4 1 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 2 3 4 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 3 4 3 N D N D N D 1 8 . 3 3 1 9 3 2 3 5 1 3 . 7 5 7 . 1 2 6 . 5 2 2 2 . 7 7 1 9 3 2 3 5 2 3 . 9 0 6 . 9 9 6 . 4 6 2 1 . 6 6 1 9 3 2 3 5 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 2 3 6 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 3 6 2 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 2 3 6 3 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 2 3 7 1 5 . 3 0 6 . 0 3 7 . 0 1 2 1 . 1 1 1 9 3 2 3 7 2 5 . 2 5 7 . 9 9 7 . 3 2 2 1 . 1 1 1 9 3 2 3 7 3 N D N D N O 1 7 . 7 7 1 9 3 2 4 0 1 3 . 6 5 5 . 2 5 7 . 1 4 2 0 . 0 0 1 9 3 2 4 0 2 3 . 6 0 4 . 1 6 6 . 7 8 1 7 . 7 7 1 9 3 2 4 0 3 N D N D N O 1 5 . 5 5 1 9 3 2 4 1 1 3 . 7 0 5 . 3 9 6 . 3 1 2 1 . 1 1 1 9 3 2 4 1 2 3 . 7 0 5 . 4 6 7 . 0 1 1 8 . 8 8 1 9 3 2 4 1 3 N D N D N O 1 6 . 6 6 1 9 3 2 4 2 1 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 3 2 4 2 2 N D N D N O 1 9 . 4 4 1 9 3 2 4 2 3 N D N D N D 1 7 . 7 7 1 9 3 2 4 3 1 3 . 6 0 6 . 9 8 6 . 3 1 2 2 . 2 2 1 9 3 2 4 3 2 3 . 6 0 6 . 4 1 6 . 5 5 2 2 . 7 7 1 9 3 2 4 3 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 3 2 4 4 1 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 3 2 4 4 2 N D N D N D 2 5 . 0 0 1 9 3 2 4 4 3 N D N D N O 2 5 . 0 0 1 9 3 2 4 5 1 4 . 0 0 6 . 6 0 7 . 0 8 2 2 . 2 2 1 9 3 2 4 5 2 3 . 7 5 6 . 1 7 6 . 9 7 2 1 . 1 1 1 9 3 2 4 5 3 N D N D N D 2 0 . 0 0 1 9 3 2 4 6 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 3 2 4 6 2 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 3 2 4 6 3 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 3 2 4 7 1 4 . 0 0 8 . 0 5 8 . 0 8 2 1 . 6 6 1 9 3 2 4 7 2 5 . 0 0 7 . 5 5 7 . 3 1 2 0 . 5 5 1 9 3 2 4 7 3 N D N D N O 1 8 . 8 8 1 9 4 1 1 0 1 3 . 5 0 4 . 5 6 7 . 4 0 2 1 . 1 1 1 9 4 1 1 0 2 3 . 5 0 4 . 3 0 7 . 2 7 2 2 . 2 2 1 9 4 1 1 0 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 1 1 1 3 . 5 0 5 . 6 1 7 . 2 3 2 3 . 8 8 1 9 4 1 1 1 2 3 . 5 0 4 . 9 9 7 . 1 6 2 5 . 5 5 1 9 4 1 1 1 3 N D N D N O 2 6 . 1 1 2 8 3 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 1 9 4 1 1 2 1 N D N D N O 2 8 . 8 8 1 9 4 1 1 2 2 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 1 2 3 N D N D N O 2 5 . 5 5 1 9 4 1 1 3 1 3 . 6 0 5 . 8 2 8 . 1 5 2 4 . 4 4 1 9 4 1 1 3 2 3 . 7 0 6 . 1 0 8 . 0 4 2 2 . 7 7 1 9 4 1 1 3 3 N D N D N O 2 8 . 3 3 1 9 4 1 1 4 1 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 1 1 4 2 N D N D N D 2 5 . 5 5 1 9 4 1 1 4 3 N D N D N D 2 3 . 8 8 1 9 4 1 1 5 1 5 . 8 0 8 . 8 1 8 . 7 3 2 2 . 2 2 1 9 4 1 1 5 2 4 . 0 0 7 . 4 7 8 . 5 1 2 5 . 5 5 1 9 4 1 1 5 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 1 6 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 1 6 2 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 4 1 1 6 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 1 7 1 6 . 5 0 8 . 6 0 8 . 7 8 2 2 . 2 2 1 9 4 1 1 7 2 6 . 8 0 8 . 7 2 8 . 6 6 2 1 . 1 1 1 9 4 1 1 7 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 2 0 1 3 . 5 0 5 . 0 1 7 . 3 1 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 0 2 3 . 5 0 4 . 4 6 7 . 5 3 2 1 . 1 1 1 9 4 1 2 0 3 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 1 1 3 . 5 0 6 . 2 5 7 . 5 1 2 5 . 0 0 1 9 4 1 2 1 2 3 . 6 0 6 . 1 3 7 . 5 3 2 3 . 3 3 1 9 4 1 2 1 3 N D N D N D 2 3 . 8 8 1 9 4 1 2 2 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 2 2 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 1 2 2 3 N D N D N O 2 3 . 8 8 1 9 4 1 2 3 1 5 . 2 0 6 . 3 8 8 . 2 4 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 3 2 3 . 7 0 6 . 3 3 8 . 1 1 2 2 . 7 7 1 9 4 1 2 3 3 N D N D N D 2 7 . 7 7 1 9 4 1 2 4 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 4 2 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 2 4 3 N D N D N O 2 3 . 8 8 1 9 4 1 2 5 1 6 . 3 0 8 . 8 4 8 . 2 2 2 2 . 7 7 1 9 4 1 2 5 2 5 . 2 0 8 . 7 4 8 . 4 3 2 3 . 3 3 1 9 4 1 2 5 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 6 1 N D N D N O 2 6 . 6 6 1 9 4 1 2 6 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 6 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 7 1 6 . 6 8 . 7 2 8 . 7 0 2 6 . 6 6 1 9 4 1 2 7 2 6 . 5 0 8 . 3 9 8 . 7 3 2 2 . 2 2 1 9 4 1 2 7 3 N D N D N D 2 1 . 1 1 1 9 4 1 3 0 1 3 . 5 0 4 . 2 2 7 . 3 6 2 2 . 2 2 1 9 4 1 3 0 2 3 . 5 5 4 . 4 9 7 . 0 1 2 2 . 2 2 1 9 4 1 3 0 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 3 1 1 3 . 5 0 6 . 0 9 8 . 0 3 3 8 . 3 3 1 9 4 1 3 1 2 3 . 7 0 6 . 0 8 8 . 1 6 3 2 . 7 7 1 9 4 1 3 1 3 N D N D N O 4 2 . 2 2 1 9 4 1 3 2 1 N D N D N D 2 6 . 6 6 1 9 4 1 3 2 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 1 9 4 1 3 2 3 N D N D N O 3 0 . 0 0 1 9 4 1 3 3 1 6 . 9 0 8 . 2 8 7 . 8 9 2 3 . 3 3 1 9 4 1 3 3 2 6 . 2 0 7 . 7 4 8 . 7 0 2 5 . 5 5 1 9 4 1 3 3 3 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 4 1 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 4 1 3 4 2 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 4 3 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 5 1 6 . 4 0 8 . 8 0 8 . 8 1 2 3 . 3 3 1 9 4 1 3 5 2 6 . 7 0 8 . 7 1 8 . 8 6 2 5 . 0 0 1 9 4 1 3 5 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 6 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 3 6 2 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 6 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 3 7 1 7 . 4 0 8 . 7 6 8 . 8 1 2 3 . 3 3 1 9 4 1 3 7 2 7 . 5 0 8 . 7 3 8 . 7 2 2 3 . 8 8 1 9 4 1 3 7 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t 0 R e p p H Y M T B T o m 1 9 4 1 4 0 1 3 . 5 0 4 . 6 6 7 . 4 9 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 0 2 3 . 5 0 4 . 5 5 7 . 9 4 2 1 . 1 1 1 9 4 1 4 0 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 1 1 3 . 5 0 6 . 2 3 8 . 1 9 4 2 . 2 2 1 9 4 1 4 1 2 3 . 6 0 6 . 1 7 8 . 2 0 3 0 . 0 0 1 9 4 1 4 1 3 N D N D N O 3 6 . 1 1 1 9 4 1 4 2 1 N D N D N O 2 5 . 5 5 1 9 4 1 4 2 2 N D N D N O 2 7 . 2 2 1 9 4 1 4 2 3 N D N D N O 2 6 . 1 1 1 9 4 1 4 3 1 6 . 2 0 8 . 1 0 9 . 1 3 2 2 . 7 7 1 9 4 1 4 3 2 6 . 9 0 7 . 8 1 7 . 8 0 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 3 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 4 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 4 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 4 4 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 4 5 1 7 . 0 0 8 . 6 0 8 . 8 1 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 5 2 7 . 3 0 8 . 8 1 8 . 7 2 2 2 . 2 2 1 9 4 1 4 5 3 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 6 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 1 4 6 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 1 4 6 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 1 4 7 1 8 . 0 0 8 . 7 2 8 . 6 9 2 4 . 5 5 1 9 4 1 4 7 2 7 . 8 0 8 . 8 2 8 . 7 2 2 4 . 4 4 1 9 4 1 4 7 3 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 2 1 0 1 3 . 5 0 4 . 6 0 7 . 3 0 2 0 . 0 0 1 9 4 2 1 0 2 3 . 6 0 4 . 5 0 7 . 4 0 2 1 . 1 1 1 9 4 2 1 0 3 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 4 2 1 1 1 3 . 5 0 8 . 1 2 7 . 4 2 2 1 . 1 1 1 9 4 2 1 1 2 3 . 5 0 7 . 9 2 7 . 5 0 2 1 . 6 6 1 9 4 2 1 1 3 N D N D N D 2 3 . 8 8 1 9 4 2 1 2 1 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 2 1 2 2 N D N D N D 2 2 . 7 7 1 9 4 2 1 2 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 1 9 4 2 1 3 1 3 . 5 0 7 . 4 6 7 . 8 2 2 5 . 5 5 1 9 4 2 1 3 2 3 . 5 0 7 . 3 7 7 . 6 6 2 5 . 5 5 1 9 4 2 1 3 3 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 1 4 1 N D N D N O 2 6 . 6 6 1 9 4 2 1 4 2 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 2 1 4 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 2 1 5 1 6 . 3 0 8 . 1 2 8 . 1 2 2 5 . 2 7 1 9 4 2 1 5 2 4 . 7 0 7 . 1 0 8 . 2 1 2 5 . 0 0 1 9 4 2 1 5 3 N D N D N O 2 3 . 8 8 1 9 4 2 1 6 1 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 2 1 6 2 N D N D N D 2 5 . 5 5 1 9 4 2 1 6 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 1 7 1 5 . 6 0 7 . 6 2 7 . 9 8 2 2 . 2 2 1 9 4 2 1 7 2 6 . 1 0 7 . 6 0 7 . 8 0 2 3 . 7 7 1 9 4 2 1 7 3 N D N D N O 2 3 . 6 6 1 9 4 2 2 0 1 3 . 7 0 4 . 8 0 7 . 2 0 2 0 . 0 0 1 9 4 2 2 0 2 3 . 6 0 4 . 6 5 7 . 4 0 2 0 . 0 0 1 9 4 2 2 0 3 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 4 2 2 1 1 3 . 5 0 7 . 9 5 7 . 5 5 2 1 . 1 1 1 9 4 2 2 1 2 3 . 5 0 8 . 1 5 7 . 3 8 2 1 . 1 1 1 9 4 2 2 1 3 N D N D N D 2 1 . 1 1 1 9 4 2 2 2 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 2 2 2 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 2 2 3 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 4 2 2 3 1 3 . 5 0 7 . 4 7 7 . 7 2 2 0 . 0 0 1 9 4 2 2 3 2 3 . 5 0 7 . 1 3 7 . 2 8 2 3 . 3 3 1 9 4 2 2 3 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 4 2 2 4 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 2 4 2 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 2 2 4 3 N D N D N O 2 6 . 6 6 1 9 4 2 2 5 1 3 . 6 0 7 . 7 4 8 . 2 0 2 2 . 2 2 1 9 4 2 2 5 2 3 . 7 0 7 . 1 8 7 . 6 4 2 2 . 2 2 1 9 4 2 2 5 3 N D N D N O 2 3 . 0 5 2 8 5 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 1 9 4 2 2 6 1 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 2 6 2 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 2 2 6 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 2 7 1 6 . 5 0 7 . 8 1 8 . 2 2 2 1 . 1 1 1 9 4 2 2 7 2 6 . 3 0 8 . 3 3 8 . 2 9 2 3 . 3 3 1 9 4 2 2 7 3 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 3 0 1 3 . 5 5 4 . 7 8 7 . 1 5 2 0 . 0 0 1 9 4 2 3 0 2 3 . 5 0 4 . 6 7 7 . 3 5 2 0 . 0 0 1 9 4 2 3 0 3 N D N D N O 2 2 . 2 2 1 9 4 2 3 1 1 3 . 8 0 8 . 2 7 7 . 5 9 2 5 . 0 0 1 9 4 2 3 1 2 3 . 5 0 8 . 3 7 7 . 3 0 2 1 . 1 1 1 9 4 2 3 1 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 4 2 3 2 1 N D N D N O 2 7 . 2 2 1 9 4 2 3 2 2 N D N D N O 3 3 . 3 3 1 9 4 2 3 2 3 N D N D N O 3 6 . 6 6 1 9 4 2 3 3 1 6 . 1 0 7 . 4 1 7 . 3 5 2 0 . 0 0 1 9 4 2 3 3 2 6 . 4 0 7 . 3 8 7 . 0 2 2 0 . 5 5 1 9 4 2 3 3 3 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 4 2 3 4 1 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 3 4 2 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 4 3 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 5 1 6 . 9 0 8 . 2 7 8 . 1 4 2 2 . 7 7 1 9 4 2 3 5 2 6 . 5 0 8 . 5 6 9 . 1 3 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 5 3 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 6 1 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 3 6 2 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 6 3 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 2 3 7 1 6 . 9 0 8 . 1 2 8 . 2 8 2 2 . 2 2 1 9 4 2 3 7 2 7 . 5 0 8 . 0 3 7 . 8 0 2 1 . 6 6 1 9 4 2 3 7 3 N D N D N O 2 2 . 7 7 1 9 4 2 4 0 1 3 . 5 5 4 . 6 7 7 . 2 3 2 0 . 0 0 1 9 4 2 4 0 2 3 . 5 0 4 . 6 4 7 . 3 5 1 8 . 8 8 1 9 4 2 4 0 3 N D N D N D 2 1 . 1 1 1 9 4 2 4 1 1 3 . 6 0 8 . 2 7 7 . 6 0 2 1 . 3 8 1 9 4 2 4 1 2 3 . 6 0 7 . 8 8 6 . 8 4 2 7 . 2 2 1 9 4 2 4 1 3 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 4 2 4 2 1 N D N D N O 3 2 . 7 7 1 9 4 2 4 2 2 N D N D N D 2 3 . 3 3 1 9 4 2 4 2 3 N D N D N D 3 0 . 0 0 1 9 4 2 4 3 1 6 . 4 0 7 . 4 3 7 . 8 6 2 0 . 5 5 1 9 4 2 4 3 2 6 . 4 0 7 . 5 8 7 . 1 3 1 8 . 3 3 1 9 4 2 4 3 3 N D N D N O 2 0 . 0 0 1 9 4 2 4 4 1 N D N D N O 2 3 . 3 3 1 9 4 2 4 4 2 N D N D N O 2 1 . 1 1 1 9 4 2 4 4 3 N D N D N O 2 4 . 4 4 1 9 4 2 4 5 1 6 . 2 0 8 . 5 0 8 . 2 9 2 3 . 0 5 1 9 4 2 4 5 2 6 . 9 0 8 . 3 9 8 . 4 6 2 1 . 6 6 1 9 4 2 4 5 3 N D N D N D 2 4 . 4 4 1 9 4 2 4 6 1 N D N D N D 2 2 . 2 2 1 9 4 2 4 6 2 N D N D N O 2 1 . 6 6 1 9 4 2 4 6 3 N D N D N D 2 3 . 8 8 1 9 4 2 4 7 1 7 . 0 0 8 . 4 6 8 . 5 8 2 1 . 6 6 1 9 4 2 4 7 2 7 . 6 0 7 . 7 9 8 . 5 7 2 0 . 5 5 1 9 4 2 4 7 3 N D N D N O 2 3 . 3 3 2 9 3 1 1 0 1 4 . 2 7 6 . 1 0 6 . 4 0 2 8 . 0 5 2 9 3 1 1 0 2 4 . 1 0 7 . 3 8 6 . 0 9 2 8 . 6 1 2 9 3 1 1 0 3 N D N D N O 2 9 . 7 2 2 9 3 1 1 1 1 4 . 0 5 7 . 8 4 7 . 4 5 2 9 . 4 4 2 9 3 1 1 1 2 6 . 1 7 8 . 2 0 7 . 5 8 3 7 . 2 2 2 9 3 1 1 1 3 N D N D N O 4 1 . 6 6 2 9 3 1 1 2 1 N D N D N O 3 4 . 4 4 2 9 3 1 1 2 2 N D N D N O 3 2 . 7 7 2 9 3 1 1 2 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 1 1 3 1 6 . 7 9 8 . 0 3 8 . 0 7 3 2 . 2 2 2 9 3 1 1 3 2 7 . 3 9 8 . 3 4 8 . 3 1 3 1 . 6 6 2 9 3 1 1 3 3 N D N D N O 3 2 . 7 7 2 8 6 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 3 1 1 4 1 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 1 4 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 1 4 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 1 1 5 1 6 . 8 0 8 . 2 4 8 . 2 3 3 0 . 5 5 2 9 3 1 1 5 2 7 . 2 5 8 . 3 3 8 . 4 4 3 0 . 5 5 2 9 3 1 1 5 3 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 1 1 6 1 N D N D N O 2 8 . 8 8 2 9 3 1 1 6 2 N D N D N O 2 8 . 3 3 2 9 3 1 1 6 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 1 7 1 6 . 9 7 8 . 3 8 8 . 0 6 2 7 . 7 7 2 9 3 1 1 7 2 7 . 3 7 8 . 4 1 8 . 5 6 2 7 . 5 0 2 9 3 1 1 7 3 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 1 2 0 1 4 . 2 1 5 . 4 1 6 . 4 4 2 8 . 8 8 2 9 3 1 2 0 2 4 . 2 5 7 . 7 0 6 . 1 2 2 8 . 0 5 2 9 3 1 2 0 3 N D N D N O 3 0 . 2 7 2 9 3 1 2 1 1 4 . 9 6 7 . 9 6 8 . 3 2 3 7 . 7 7 2 9 3 1 2 1 2 4 . 0 5 7 . 1 6 8 . 4 6 3 6 . 6 6 2 9 3 1 2 1 3 N D N D N O 4 0 . 0 0 2 9 3 1 2 2 1 N D N D N O 3 2 . 7 7 2 9 3 1 2 2 2 N D N D N O 3 3 . 8 8 2 9 3 1 2 2 3 N D N D N O 3 7 . 7 7 2 9 3 1 2 3 1 6 . 4 8 7 . 7 7 8 . 2 4 3 5 . 5 5 2 9 3 1 2 3 2 6 . 9 1 7 . 9 8 7 . 4 0 3 3 . 8 8 2 9 3 1 2 3 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 1 2 4 1 N D N D N O 3 4 . 4 4 2 9 3 1 2 4 2 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 1 2 4 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 1 2 5 1 6 . 7 0 7 . 8 1 8 . 3 1 3 3 . 3 3 2 9 3 1 2 5 2 7 . 1 0 8 . 0 0 8 . 0 2 3 2 . 7 7 2 9 3 1 2 5 3 N D N D N O 3 0 . 5 5 2 9 3 1 2 6 1 N D N D N O 2 9 . 4 4 2 9 3 1 2 6 2 N D N D N O 3 0 . 5 5 2 9 3 1 2 6 3 N D N D N O 2 9 . 4 4 2 9 3 1 2 7 1 7 . 4 1 8 . 0 9 8 . 6 5 2 9 . 4 4 2 9 3 1 2 7 2 7 . 5 9 8 . 2 2 8 . 5 7 3 0 . 0 0 2 9 3 1 2 7 3 N D N D N O 2 8 . 8 8 2 9 3 1 3 0 1 4 . 0 3 6 . 4 5 6 . 4 9 2 9 . 4 4 2 9 3 1 3 0 2 4 . 0 5 8 . 4 3 6 . 5 8 2 9 . 4 4 2 9 3 1 3 0 3 N D N D N O 2 8 . 3 3 2 9 3 1 3 1 1 3 . 9 4 7 . 6 4 7 . 4 7 3 3 . 8 8 2 9 3 1 3 1 2 4 . 2 2 7 . 5 5 7 . 4 6 4 0 . 5 5 2 9 3 1 3 1 3 N D N D N O 3 3 . 8 8 2 9 3 1 3 2 1 N D N D N O 3 6 . 6 6 2 9 3 1 3 2 2 N D N D N O 3 2 . 7 7 2 9 3 1 3 2 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 3 3 1 5 . 8 9 7 . 4 4 7 . 4 0 3 6 . 1 1 2 9 3 1 3 3 2 5 . 9 3 7 . 8 9 7 . 8 7 3 4 . 4 4 2 9 3 1 3 3 3 N D N D N O 3 0 . 5 5 2 9 3 1 3 4 1 N D N D N O 3 3 . 8 8 2 9 3 1 3 4 2 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 3 4 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 3 5 1 6 . 1 7 8 . 0 2 7 . 8 8 3 2 . 7 7 2 9 3 1 3 5 2 6 . 3 4 8 . 2 5 8 . 0 5 3 1 . 1 1 2 9 3 1 3 5 3 N D N D N D 3 0 . 8 3 2 9 3 1 3 6 1 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 1 3 6 2 N D N D N D 3 0 . 0 0 2 9 3 1 3 6 3 N D N D N O 3 0 . 0 0 2 9 3 1 3 7 1 7 . 5 9 8 . 4 8 8 . 4 3 3 1 . 6 6 2 9 3 1 3 7 2 7 . 5 9 8 . 0 7 7 . 9 2 2 8 . 8 8 2 9 3 1 3 7 3 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 3 1 4 0 1 4 . 0 1 5 . 2 1 5 . 4 5 2 8 . 8 8 2 9 3 1 4 0 2 3 . 9 6 6 . 9 4 5 . 2 9 2 9 . 4 4 2 9 3 1 4 0 3 N D N D N O 3 0 . 0 0 2 9 3 1 4 1 1 3 . 8 9 7 . 8 9 7 . 5 8 3 5 . 5 5 2 9 3 1 4 1 2 5 . 3 5 7 . 9 9 7 . 8 0 3 4 . 4 4 2 9 3 1 4 1 3 N D N D N O 3 8 . 8 8 2 8 7 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 3 1 4 2 1 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 4 2 2 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 4 2 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 3 1 6 . 2 0 8 . 0 3 8 . 1 1 3 1 . 6 6 2 9 3 1 4 3 2 6 . 0 8 8 . 1 0 8 . 2 1 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 3 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 4 1 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 4 4 2 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 4 4 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 1 4 5 1 6 . 4 6 8 . 3 4 8 . 2 1 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 5 2 6 . 6 4 8 . 2 1 8 . 1 7 3 1 . 6 6 2 9 3 1 4 5 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 6 1 N D N D N O 2 9 . 4 4 2 9 3 1 4 6 2 N D N D N D 2 9 . 4 4 2 9 3 1 4 6 3 N D N D N D 3 1 . 1 1 2 9 3 1 4 7 1 7 . 5 1 8 . 4 7 8 . 8 1 3 0 . 0 0 2 9 3 1 4 7 2 7 . 2 7 8 . 1 6 8 . 6 4 2 7 . 7 7 2 9 3 1 4 7 3 N D N D N D 3 0 . 0 0 2 9 3 2 1 0 1 4 . 1 9 5 . 5 8 6 . 1 2 3 0 . 0 0 2 9 3 2 1 0 2 4 . 1 6 5 . 3 1 5 . 7 7 2 9 . 4 4 2 9 3 2 1 0 3 N D N D N D 3 0 . 5 5 2 9 3 2 1 1 1 4 . 6 1 6 . 5 8 6 . 7 3 3 1 . 1 1 2 9 3 2 1 1 2 5 . 2 2 6 . 3 1 6 . 2 6 3 5 . 5 5 2 9 3 2 1 1 3 N D N D N O 3 4 . 4 4 2 9 3 2 1 2 1 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 1 2 2 N D N D N O 3 7 . 5 0 2 9 3 2 1 2 3 N D N D N O 3 5 . 0 0 2 9 3 2 1 3 1 5 . 2 6 6 . 3 5 7 . 0 8 3 1 . 1 1 2 9 3 2 1 3 2 5 . 9 3 5 . 8 5 7 . 0 6 3 6 . 1 1 2 9 3 2 1 3 3 N D N D N O 3 3 . 8 8 2 9 3 2 1 4 1 N D N D N O 3 7 . 7 7 2 9 3 2 1 4 2 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 2 1 4 3 N D N D N D 3 6 . 1 1 2 9 3 2 1 5 1 7 . 2 2 6 . 2 1 7 . 1 2 3 6 . 6 6 2 9 3 2 1 5 2 6 . 9 8 6 . 0 2 6 . 8 9 3 2 . 2 2 2 9 3 2 1 5 3 N D N D N O 3 4 . 4 4 2 9 3 2 1 6 1 N D N D N O 3 3 . 8 8 2 9 3 2 1 6 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 1 6 3 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 2 1 7 1 6 . 0 3 6 . 4 3 7 . 1 9 3 2 . 2 2 2 9 3 2 1 7 2 6 . 7 0 6 . 2 9 6 . 9 6 3 1 . 1 1 2 9 3 2 1 7 3 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 2 2 0 1 4 . 1 7 5 . 0 3 5 . 0 4 2 6 . 6 6 2 9 3 2 2 0 2 4 . 3 1 5 . 2 1 5 . 8 4 3 3 . 8 8 2 9 3 2 2 0 3 N D N D N O 3 0 . 5 5 2 9 3 2 2 1 1 4 . 9 0 6 . 0 0 6 . 7 2 2 7 . 7 7 2 9 3 2 2 1 2 4 . 8 4 6 . 0 0 6 . 1 8 4 1 . 3 8 2 9 3 2 2 1 3 N D N D N D 3 8 . 8 8 2 9 3 2 2 2 1 N D N D N D 3 5 . 0 0 2 9 3 2 2 2 2 N D N D N D 3 9 . 4 4 2 9 3 2 2 2 3 N D N D N O 3 6 . 1 1 2 9 3 2 2 3 1 5 . 5 9 6 . 2 1 7 . 3 5 3 6 . 6 6 2 9 3 2 2 3 2 5 . 9 8 5 . 7 3 7 . 2 2 3 7 . 2 2 2 9 3 2 2 3 3 N D N D N D 3 6 . 6 6 2 9 3 2 2 4 1 N D N D N O 3 6 . 6 6 2 9 3 2 2 4 2 N D N D N D 3 5 . 0 0 2 9 3 2 2 4 3 N D N D N D 3 5 . 5 5 2 9 3 2 2 5 1 7 . 0 5 6 . 3 0 7 . 0 4 3 3 . 3 3 2 9 3 2 2 5 2 6 . 8 7 6 . 0 9 6 . 9 2 3 2 . 2 2 2 9 3 2 2 5 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 2 6 1 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 2 6 2 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 2 6 3 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 2 2 7 1 7 . 1 4 6 . 5 0 7 . 2 5 3 1 . 1 1 2 9 3 2 2 7 2 7 . 0 0 6 . 5 2 6 . 8 4 3 2 . 2 2 2 9 3 2 2 7 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 3 2 3 0 1 4 . 1 5 5 . 5 0 5 . 9 3 3 0 . 5 5 2 9 3 2 3 0 2 4 . 2 1 5 . 8 9 6 . 0 1 3 0 . 0 0 2 9 3 2 3 0 3 N D N D N D 2 9 . 4 4 2 9 3 2 3 1 1 4 . 7 1 6 . 5 0 6 . 0 8 3 7 . 7 7 2 9 3 2 3 1 2 4 . 7 1 6 . 8 9 6 . 7 3 4 1 . 1 1 2 9 3 2 3 1 3 N D N D N O 4 0 . 0 0 2 9 3 2 3 2 1 N D N D N O 3 6 . 1 1 2 9 3 2 3 2 2 N D N D N D 3 2 . 7 7 2 9 3 2 3 2 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 3 1 5 . 8 7 5 . 9 0 7 . 5 9 3 4 . 4 4 2 9 3 2 3 3 2 5 . 9 3 6 . 2 0 7 . 3 7 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 3 3 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 4 1 N D N D N D 3 3 . 3 3 2 9 3 2 3 4 2 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 4 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 5 1 7 . 2 9 6 . 2 8 7 . 3 1 3 2 . 7 7 2 9 3 2 3 5 2 7 . 2 5 6 . 3 2 7 . 2 7 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 5 3 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 6 1 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 6 2 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 6 3 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 3 7 1 6 . 9 6 6 . 3 9 7 . 0 1 3 1 . 1 1 2 9 3 2 3 7 2 7 . 1 5 6 . 5 8 7 . 0 9 3 1 . 1 1 2 9 3 2 3 7 3 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 3 2 4 0 1 4 . 0 7 5 . 6 7 5 . 4 1 2 6 . 6 6 2 9 3 2 4 0 2 3 . 9 6 5 . 8 9 5 . 8 9 2 6 . 6 6 2 9 3 2 4 0 3 N D N D N O 2 6 . 6 6 2 9 3 2 4 1 1 4 . 8 2 6 . 6 7 6 . 8 3 2 6 . 6 6 2 9 3 2 4 1 2 4 . 5 1 6 . 8 9 6 . 7 1 3 5 . 5 5 2 9 3 2 4 1 3 N D N D N O 3 8 . 8 8 2 9 3 2 4 2 1 N D N D N D 3 1 . 6 6 2 9 3 2 4 2 2 N D N D N D 3 4 . 4 4 2 9 3 2 4 2 3 N D N D N O 3 3 . 3 3 2 9 3 2 4 3 1 6 . 7 1 6 . 9 5 7 . 9 2 3 3 . 3 3 2 9 3 2 4 3 2 6 . 7 6 7 . 0 4 7 . 0 1 3 1 . 6 6 2 9 3 2 4 3 3 N D N D N O 3 7 . 2 2 2 9 3 2 4 4 1 N D N D N O 3 4 . 4 4 2 9 3 2 4 4 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 4 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 5 1 7 . 0 7 6 . 7 0 7 . 4 2 3 1 . 6 6 2 9 3 2 4 5 2 7 . 1 0 6 . 7 9 7 . 0 0 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 5 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 6 1 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 3 2 4 6 2 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 6 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 7 1 7 . 2 3 6 . 5 0 7 . 1 0 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 7 2 7 . 2 4 6 . 4 2 7 . 0 4 3 1 . 1 1 2 9 3 2 4 7 3 N D N D N O 3 1 . 1 1 2 9 4 1 1 0 1 4 . 1 6 5 . 2 5 6 . 8 4 3 0 . 7 5 2 9 4 1 1 0 2 4 . 1 5 5 . 2 8 7 . 0 7 3 0 . 7 5 2 9 4 1 1 0 3 N D N D N D 3 0 . 7 5 2 9 4 1 1 1 1 4 . 2 0 5 . 2 8 6 . 5 7 3 1 . 0 0 2 9 4 1 1 1 2 4 . 2 0 5 . 0 2 6 . 5 7 3 1 . 0 0 2 9 4 1 1 1 3 N D N D N O 3 8 . 0 0 2 9 4 1 1 2 1 N D N D N O 3 0 . 5 0 2 9 4 1 1 2 2 N D N D N D 3 1 . 2 5 2 9 4 1 1 2 3 N D N D N O 3 2 . 7 5 2 9 4 1 1 3 1 4 . 2 0 4 . 1 7 6 . 3 2 3 0 . 3 1 2 9 4 1 1 3 2 4 . 4 0 4 . 0 6 6 . 2 5 3 8 . 0 0 2 9 4 1 1 3 3 N D N D N O 3 7 . 0 0 2 9 4 1 1 4 1 N D N D N D 3 1 . 0 0 2 9 4 1 1 4 2 N D N D N O 3 6 . 2 5 2 9 4 1 1 4 3 N D N D N D 3 4 . 7 5 2 9 4 1 1 5 1 4 . 2 0 4 . 5 0 5 . 9 6 3 0 . 5 0 2 9 4 1 1 5 2 4 . 2 0 4 . 6 6 6 . 2 9 3 3 . 0 0 2 9 4 1 1 5 3 N D N D N O 3 1 . 5 0 2 8 9 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 4 1 1 6 1 N D N D N O 3 5 . 2 5 2 9 4 1 1 6 2 N D N D N O 3 3 . 7 5 2 9 4 1 1 6 3 N D N D N O 3 2 . 5 0 2 9 4 1 1 7 1 4 . 2 0 4 . 4 7 5 . 9 1 3 6 . 0 0 2 9 4 1 1 7 2 4 . 4 0 4 . 1 7 5 . 5 0 3 2 . 0 0 2 9 4 1 1 7 3 N D N D N O 3 2 . 5 0 2 9 4 1 2 0 1 4 . 2 0 5 . 2 3 6 . 4 9 3 0 . 5 0 2 9 4 1 2 0 2 4 . 0 5 5 . 7 7 6 . 0 2 3 0 . 5 0 2 9 4 1 2 0 3 N D N D N D 3 0 . 7 5 2 9 4 1 2 1 1 4 . 2 0 4 . 8 8 6 . 7 0 3 1 . 0 0 2 9 4 1 2 1 2 4 . 2 0 5 . 5 0 6 . 8 4 3 2 . 2 5 2 9 4 1 2 1 3 N D N D N O 3 9 . 5 0 2 9 4 1 2 2 1 N D N D N O 3 8 . 5 0 2 9 4 1 2 2 2 N D N D N O 3 9 . 0 0 2 9 4 1 2 2 3 N D N D N O 3 6 . 0 0 2 9 4 1 2 3 1 4 . 2 5 4 . 3 0 6 . 2 6 3 8 . 0 0 2 9 4 1 2 3 2 4 . 3 0 4 . 5 6 5 . 3 9 3 7 . 2 5 2 9 4 1 2 3 3 N D N D N O 3 5 . 2 5 2 9 4 1 2 4 1 N D N D N D 3 4 . 7 5 2 9 4 1 2 4 2 N D N D N O 3 3 . 7 5 2 9 4 1 2 4 3 N D N D N O 3 3 . 2 5 2 9 4 1 2 5 1 4 . 2 5 4 . 6 9 6 . 3 0 3 1 . 7 5 2 9 4 1 2 5 2 4 . 3 0 4 . 6 0 6 . 8 8 3 2 . 2 5 2 9 4 1 2 5 3 N D N D N D 3 2 . 0 0 2 9 4 1 2 6 1 N D N D N D 3 2 . 5 0 2 9 4 1 2 6 2 N D N D N O 3 2 . 7 5 2 9 4 1 2 6 3 N D N D N D 3 3 . 0 0 2 9 4 1 2 7 1 4 . 3 0 4 . 5 7 6 . 2 0 3 0 . 5 0 2 9 4 1 2 7 2 4 . 4 0 4 . 8 2 5 . 5 5 3 0 . 7 5 2 9 4 1 2 7 3 N D N D N O 3 1 . 0 0 2 9 4 1 3 0 1 4 . 1 4 5 . 1 2 6 . 2 8 3 0 . 7 5 2 9 4 1 3 0 2 4 . 1 0 4 . 7 7 6 . 7 3 3 0 . 7 5 2 9 4 1 3 0 3 N D N D N O 3 0 . 7 5 2 9 4 1 3 1 1 4 . 2 0 5 . 6 2 6 . 0 4 3 7 . 0 0 2 9 4 1 3 1 2 4 . 2 0 5 . 6 9 6 . 0 0 4 7 . 0 0 2 9 4 1 3 1 3 N D N D N D 4 6 . 0 0 2 9 4 1 3 2 1 N D N D N O 3 5 . 0 0 2 9 4 1 3 2 2 N D N D N O 3 5 . 0 0 2 9 4 1 3 2 3 N D N D N O 3 5 . 0 0 2 9 4 1 3 3 1 4 . 4 5 5 . 6 4 6 . 4 1 3 5 . 0 0 2 9 4 1 3 3 2 4 . 4 0 5 . 2 1 6 . 1 9 3 4 . 7 5 2 9 4 1 3 3 3 N D N D N D 3 4 . 7 5 2 9 4 1 3 4 1 N D N D N D 3 2 . 5 0 2 9 4 1 3 4 2 N D N D N D 3 2 . 7 5 2 9 4 1 3 4 3 N D N D N O 3 3 . 0 0 2 9 4 1 3 5 1 4 . 4 5 5 . 3 5 5 . 6 9 3 0 . 5 0 2 9 4 1 3 5 2 4 . 6 0 5 . 0 9 5 . 7 0 3 0 . 7 5 2 9 4 1 3 5 3 N D N D N O 3 2 . 7 5 2 9 4 I 3 6 1 N D N D N O 3 2 . 0 0 2 9 4 1 3 6 2 N D N D N O 3 2 . 5 0 2 9 4 1 3 6 3 N D N D N D 3 3 . 7 5 2 9 4 1 3 7 1 4 . 4 2 4 . 6 6 5 . 5 5 3 0 . 0 0 2 9 4 1 3 7 2 4 . 5 0 4 . 7 2 5 . 4 3 3 0 . 7 5 2 9 4 1 3 7 3 N D N D N D 3 0 . 7 5 2 9 4 1 4 0 1 3 . 9 1 5 . 9 1 6 . 5 7 3 1 . 0 0 2 9 4 1 4 0 2 3 . 8 7 5 . 5 7 6 . 7 8 3 1 . 0 0 2 9 4 1 4 0 3 N D N D N D 3 0 . 5 0 2 9 4 1 4 1 1 4 . 2 0 4 . 8 8 6 . 4 7 3 4 . 0 0 2 9 4 1 4 1 2 4 . 2 0 4 . 8 7 6 . 2 4 4 4 . 0 0 2 9 4 1 4 1 3 N D N D N O 5 0 . 0 0 2 9 4 1 4 2 1 N D N D N O 3 9 . 0 0 2 9 4 1 4 2 2 N D N D N D 3 6 . 0 0 2 9 4 1 4 2 3 N D N D N D 3 7 . 5 0 2 9 4 1 4 3 1 4 . 4 0 4 . 7 0 5 . 5 0 3 8 . 7 5 2 9 4 1 4 3 2 4 . 3 0 5 . 0 2 6 . 0 0 3 4 . 7 5 2 9 4 1 4 3 3 N D N D N O 3 5 . 0 0 2 9 0 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 4 1 4 4 1 N D N D N O 3 5 . 7 5 2 9 4 1 4 4 2 N D N D N O 3 3 . 0 0 2 9 4 1 4 4 3 N D N D N O 3 3 . 0 0 2 9 4 1 4 5 1 4 . 3 5 5 . 1 5 6 . 1 6 3 2 . 5 0 2 9 4 1 4 5 2 4 . 4 5 5 . 2 5 5 . 8 8 3 3 . 0 0 2 9 4 1 4 5 3 N D N D N O 3 2 . 0 0 2 9 4 1 4 6 1 N D N D N O 3 3 . 0 0 2 9 4 1 4 6 2 N D N D N O 3 3 . 5 0 2 9 4 1 4 6 3 N D N D N D 3 2 . 5 0 2 9 4 1 4 7 1 4 . 5 0 4 . 4 9 5 . 5 0 3 0 . 7 5 2 9 4 1 4 7 2 4 . 2 5 5 . 2 1 5 . 6 2 3 0 . 7 5 2 9 4 1 4 7 3 N D N D N D 3 1 . 0 0 2 9 4 2 1 0 1 4 . 1 9 5 . 0 4 6 . 0 5 2 9 . 5 0 2 9 4 2 1 0 2 4 . 0 9 4 . 9 5 6 . 1 5 2 9 . 5 0 2 9 4 2 1 0 3 N D N D N D 3 0 . 0 0 2 9 4 2 1 1 1 4 . 3 0 5 . 0 2 6 . 1 8 2 9 . 0 0 2 9 4 2 1 1 2 4 . 2 5 5 . 3 7 6 . 6 2 3 0 . 0 0 2 9 4 2 1 1 3 N D N D N O 2 9 . 0 0 2 9 4 2 1 2 1 N D N D N O 3 0 . 4 4 2 9 4 2 1 2 2 N D N D N O 2 9 . 3 3 2 9 4 2 1 2 3 N D N D N O 3 2 . 9 4 2 9 4 2 1 3 1 4 . 3 0 5 . 2 7 6 . 1 8 2 9 . 4 4 2 9 4 2 1 3 2 4 . 3 5 5 . 4 0 6 . 4 3 2 8 . 6 1 2 9 4 2 1 3 3 N D N D N O 2 7 . 2 2 2 9 4 2 1 4 1 N D N D N O 2 9 . 4 4 2 9 4 2 1 4 2 N D N D N O 2 8 . 0 5 2 9 4 2 1 4 3 N D N D N O 2 7 . 5 0 2 9 4 2 1 5 1 4 . 5 0 5 . 7 1 6 . 0 0 3 0 . 0 0 2 9 4 2 1 5 2 5 . 5 0 5 . 1 7 6 . 4 6 2 8 . 8 8 2 9 4 2 1 5 3 N D N D N O 2 7 . 7 7 2 9 4 2 1 6 1 N D N D N D 3 1 . 1 1 2 9 4 2 1 6 2 N D N D N O 3 0 . 0 0 2 9 4 2 1 6 3 N D N D N O 2 9 . 1 6 2 9 4 2 1 7 1 4 . 2 8 5 . 7 0 6 . 2 9 3 1 . 3 8 2 9 4 2 1 7 2 4 . 3 3 5 . 5 4 6 . 4 6 2 9 . 7 2 2 9 4 2 1 7 3 N D N D N O 2 9 . 7 2 2 9 4 2 2 0 1 4 . 2 0 4 . 8 8 , 6 . 1 7 2 9 . 5 0 2 9 4 2 2 0 2 4 . 1 2 4 . 7 7 6 . 3 4 2 9 . 5 0 2 9 4 2 2 0 3 N D N D N D 2 9 . 5 0 2 9 4 2 2 1 1 4 . 2 5 5 . 3 9 6 . 1 0 3 7 . 5 0 2 9 4 2 2 1 | 2 4 . 1 5 5 . 4 0 6 . 1 1 3 2 . 0 0 2 9 4 2 2 1 3 N D N D N D 3 1 . 0 0 2 9 4 2 2 2 1 N D N D N O 3 1 . 9 4 2 9 4 2 2 2 2 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 4 2 2 2 3 N D N D N D 2 8 . 6 1 2 9 4 2 2 3 1 4 . 3 0 5 . 7 7 6 . 3 0 3 1 . 1 1 2 9 4 2 2 3 2 6 . 0 0 5 . 6 6 6 . 2 8 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 3 3 N D N D N O 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 4 1 N D N D N O 3 2 . 2 2 2 9 4 2 2 4 2 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 4 2 2 4 3 N D N D N O 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 5 1 6 . 5 0 5 . 3 7 6 . 0 9 3 2 . 2 2 2 9 4 2 2 5 2 4 . 3 0 5 . 5 8 6 . 2 4 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 5 2 4 . 3 0 5 . 5 8 6 . 2 4 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 5 2 4 . 3 0 5 . 5 8 6 . 2 4 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 5 3 N D N D N D 3 2 . 7 7 2 9 4 2 2 6 1 N D N D N D 3 3 . 3 3 2 9 4 2 2 6 2 N D N D N D 3 0 . 5 5 2 9 4 2 2 6 3 N D N D N O 2 9 . 1 6 2 9 4 2 2 7 1 4 . 3 0 5 . 4 8 6 . 1 3 3 2 . 5 0 2 9 4 2 2 7 2 4 . 8 0 5 . 6 9 6 . 3 3 3 0 . 8 3 2 9 4 2 2 7 3 N D N D N O 3 4 . 7 2 2 9 4 2 3 0 1 4 . 2 0 5 . 4 0 5 . 4 8 2 9 . 5 0 2 9 4 2 3 0 2 4 . 0 8 5 . 3 2 5 . 3 6 2 9 . 5 0 2 9 4 2 3 0 3 N D N D N O 2 9 . 5 0 2 9 4 2 3 1 1 4 . 1 5 5 . 2 7 6 . 1 9 3 3 . 0 0 2 9 1 T a b l e A - 1 0 C o n t . E n v Y r F e r T r t D R e p p H Y M T B T o m 2 9 4 2 3 1 2 4 . 2 5 5 . 3 4 6 . 1 7 3 3 . 0 0 2 9 4 2 3 1 3 N D N D N D 3 2 . 0 0 2 9 4 2 3 2 1 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 4 2 3 2 2 N D N D N D 3 0 . 5 5 2 9 4 2 3 2 3 N D N D N D 2 9 . 5 0 2 9 4 2 3 3 1 4 . 5 0 5 . 2 4 6 . 4 6 3 2 . 8 8 2 9 4 2 3 3 2 4 . 2 5 5 . 4 8 6 . 3 0 3 2 . 2 2 2 9 4 2 3 3 3 N D N D N D 3 1 . 0 5 2 9 4 2 3 4 1 N D N D N D 3 3 . 8 8 2 9 4 2 3 4 2 N D N D N D 3 3 . 6 1 2 9 4 2 3 4 3 N D N D N D 2 8 . 0 5 2 9 4 2 3 5 1 5 . 3 0 5 . 4 9 6 . 3 7 3 1 . 3 8 2 9 4 2 3 5 2 6 . 2 0 5 . 6 1 6 . 4 0 3 0 . 5 5 2 9 4 2 3 5 3 N D N D N D 2 8 . 0 5 2 9 4 2 3 6 1 N D N D N D 3 5 . 5 5 2 9 4 2 3 6 2 N D N D N D 3 1 . 9 4 2 9 4 2 3 6 3 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 4 2 3 7 1 5 . 8 0 5 . 4 6 6 . 2 6 3 5 . 0 0 2 9 4 2 3 7 2 4 . 2 0 5 . 3 0 6 . 1 3 3 1 . 3 8 2 9 4 2 3 7 3 N D N D N D 2 8 . 8 8 2 9 4 2 4 O 1 4 . 0 7 5 . 2 6 5 . 7 2 3 0 . 0 0 2 9 4 2 4 0 2 3 . 9 6 4 . 8 0 5 . 7 6 3 0 . 0 0 2 9 4 2 4 O 3 N D N D N D 3 0 . 0 0 2 9 4 2 4 1 1 4 . 2 0 5 . 2 2 6 . 1 8 3 3 . 0 0 2 9 4 2 4 1 2 4 . 2 0 5 . 5 7 6 . 3 1 3 8 . 0 0 2 9 4 2 4 1 3 N D N D N D 3 5 . 0 0 2 9 4 2 4 2 1 N D N D N D 3 3 . 8 8 2 9 4 2 4 2 2 N D N D N D 3 1 . 9 4 2 9 4 2 4 2 3 N D N D N D 3 3 . 0 5 2 9 4 2 4 3 1 6 . 8 0 5 . 3 1 6 . 4 6 3 1 . 9 4 2 9 4 2 4 3 2 4 . 4 0 5 . 4 1 6 . 4 5 2 9 . 7 2 2 9 4 2 4 3 3 N D N D N D 4 0 . 0 0 2 9 4 2 4 4 1 N D N D N D 3 2 . 2 2 2 9 4 2 4 4 2 N D N D N D 3 0 . 8 3 2 9 4 2 4 4 3 N D N D N D 3 3 . 3 3 2 9 4 2 4 5 1 6 . 5 0 5 . 3 4 6 . 3 9 3 0 . 8 3 2 9 4 2 4 5 2 4 . 8 0 5 . 4 8 6 . 4 8 3 1 . 1 1 2 9 4 2 4 5 3 N D N D N D 3 2 . 7 7 2 9 4 2 4 6 1 N D N D N D 3 1 . 3 8 2 9 4 2 4 6 2 N D N D N D 3 3 . 3 3 2 9 4 2 4 6 3 N D N D N D 3 4 . 1 6 2 9 4 2 4 7 1 5 . 5 0 5 . 4 9 6 . 2 2 3 1 . 3 8 2 9 4 2 4 7 2 5 . 5 0 5 . 5 2 6 . 3 6 3 2 . 5 0 2 9 4 2 4 7 3 N D N D N D 3 3 . 0 5 A b b r e v i a t i o n s : E n v = E n v i r o n m e n t ; 1 = T e m p e r a t e , 2 = T r o p i c a l Y r = Y e a r F e r = F e r m e n t a t i o n l e n g t h ; 1 = 4 0 d ; 2 = 1 0 0 d T r t = D = D a y o f a e r o b i c e x p o s u r e R e p = r e p l i c a t e Y M = Y e a s t a n d m o l d p o p u l a t i o n ( c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) T 8 = T o t a l b a c t e r i a p o p u l a t i o n ( c f u / g o f f r e s h m a t e r i a l ) T e m = T e m p e r a t u r e T r e a t m e t ; 1 = = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = l n o c u l a n t , 4 = E + I 2 9 2 T a b l e A - 1 1 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 4 1 1 0 8 . 7 4 5 1 . 6 3 2 0 . 0 0 8 0 . 3 7 4 0 . 0 1 5 9 4 1 1 0 7 . 9 4 2 1 . 5 9 2 0 . 0 0 9 0 . 4 8 5 0 . 0 0 9 9 4 1 1 1 3 . 5 4 0 0 . 5 5 8 0 . 0 0 7 0 . 1 9 5 0 . 0 2 5 9 4 1 1 1 2 . 9 4 2 0 . 4 0 0 0 . 0 0 6 0 . 1 3 6 0 . 0 2 7 9 4 1 1 3 2 . 2 9 1 0 . 4 2 9 0 . 0 0 3 0 . 2 2 5 0 . 0 3 0 9 4 1 1 3 1 . 4 3 2 0 . 0 7 7 0 0 . 0 6 4 0 . 0 1 9 9 4 1 1 5 1 . 2 5 8 0 . 1 9 8 0 . 0 0 5 0 . 2 9 3 0 . 0 1 8 9 4 1 1 5 1 . 2 7 9 0 . 0 6 0 0 . 0 0 5 0 . 3 2 5 0 . 0 3 2 9 4 1 1 7 0 . 9 4 8 0 . 2 9 2 0 . 0 0 6 0 . 5 9 0 0 . 0 1 5 9 4 1 1 7 0 . 9 7 1 0 . 2 9 9 0 0 . 5 6 8 0 . 0 2 1 9 4 1 2 0 8 . 4 7 1 1 . 7 4 1 0 . 0 0 1 0 . 3 7 4 0 . 0 1 1 9 4 1 2 0 7 . 5 4 1 1 . 6 5 2 0 . 0 0 0 0 . 3 5 9 0 . 0 0 9 9 4 1 2 1 1 . 5 4 6 0 . 8 3 6 0 . 0 0 4 1 . 2 9 9 0 . 0 5 3 9 4 1 2 1 3 . 4 5 7 0 . 9 7 0 0 . 0 0 3 1 . 3 3 9 0 . 0 4 1 9 4 1 2 3 2 . 6 1 7 0 . 6 0 2 0 . 0 0 6 0 . 8 6 1 0 . 0 4 9 9 4 1 2 3 1 . 8 6 5 0 . 5 9 7 0 . 0 0 1 0 . 5 2 5 0 . 0 5 4 9 4 1 2 5 0 . 7 9 1 0 . 1 4 3 0 . 0 0 6 0 . 4 5 1 0 . 0 4 2 9 4 1 2 5 1 . 8 5 3 0 . 1 3 7 0 . 0 0 4 0 . 5 3 0 0 . 0 5 1 9 4 1 2 7 0 . 8 0 1 0 . 6 0 4 0 0 . 5 6 0 0 . 0 4 4 9 4 1 2 7 1 . 1 0 7 0 . 2 5 8 0 . 0 0 2 0 . 3 6 5 0 . 0 3 1 9 4 1 3 0 8 . 4 8 9 1 . 4 5 6 0 . 0 0 7 0 . 4 1 5 0 . 0 0 9 9 4 1 3 0 8 . 8 7 4 1 . 5 4 7 0 . 0 0 6 0 . 4 0 8 0 . 0 0 7 9 4 1 3 1 7 . 0 6 6 0 . 9 5 5 0 . 0 0 3 0 . 8 3 9 0 . 0 7 2 9 4 1 3 1 4 . 2 4 1 0 . 8 2 0 0 . 0 0 5 0 . 5 4 2 0 . 0 4 4 9 4 1 3 3 0 . 6 6 4 0 . 4 0 3 0 . 0 1 0 0 . 5 2 4 0 . 0 4 3 9 4 1 3 3 0 . 7 9 8 0 . 6 0 7 0 . 0 2 8 0 . 5 1 6 0 . 0 3 1 9 4 1 3 5 0 . 4 0 4 0 . 2 8 2 0 . 0 0 5 0 . 4 4 0 0 . 0 8 4 9 4 1 3 5 0 . 4 0 4 0 . 2 7 3 0 0 . 4 5 9 0 9 4 1 3 7 0 . 2 6 0 0 . 3 0 1 0 0 . 4 3 7 0 . 0 4 5 9 4 1 3 7 0 . 1 1 5 0 . 2 8 2 0 0 . 1 7 2 0 . 0 4 1 9 4 1 4 0 8 . 2 4 6 1 . 4 2 0 0 . 0 0 5 0 . 4 2 5 0 . 0 1 7 9 4 1 4 0 8 . 0 4 9 1 . 3 5 0 0 . 0 0 3 0 . 4 1 9 0 . 0 0 9 9 4 1 4 1 8 . 2 8 5 0 . 1 7 5 0 . 0 0 5 0 . 8 7 7 0 . 0 1 0 9 4 1 4 1 3 . 5 1 8 0 . 1 0 6 0 . 0 0 5 0 . 7 8 7 0 . 0 3 7 9 4 1 4 3 0 . 5 5 3 0 . 8 7 4 0 . 0 1 0 0 . 4 3 0 0 . 0 1 8 9 4 1 4 3 0 . 6 0 3 0 . 4 3 0 0 . 0 0 8 0 . 3 3 1 0 . 0 1 2 9 4 1 4 5 0 . 3 9 4 0 . 2 9 2 0 . 0 0 8 0 . 2 7 2 0 . 0 2 2 9 4 1 4 5 0 . 2 2 1 0 . 3 7 2 0 . 0 0 9 0 . 5 3 0 0 . 0 8 4 9 4 1 4 7 0 . 0 5 6 0 . 3 3 7 0 . 0 0 5 0 . 3 6 2 0 . 0 7 0 9 4 1 4 7 0 . 0 7 7 0 . 3 2 6 0 . 0 0 5 0 . 3 8 6 0 . 0 5 5 9 4 2 1 0 3 . 9 5 3 1 . 3 2 8 0 0 . 5 1 0 0 . 0 0 1 9 4 2 1 0 7 . 8 6 4 0 . 8 0 9 0 . 0 0 3 0 . 4 4 9 0 . 0 1 5 9 4 2 1 1 1 . 7 2 0 0 . 2 6 2 0 . 0 1 2 0 . 2 5 2 0 . 0 0 3 9 4 2 1 1 6 . 8 4 5 0 . 8 9 1 0 . 0 0 8 0 . 4 1 6 0 . 0 7 1 9 4 2 1 3 5 . 7 1 5 0 . 6 1 3 0 . 0 0 6 0 . 4 7 4 0 . 0 7 3 9 4 2 1 3 6 . 8 2 4 0 . 5 9 4 0 . 0 0 9 0 . 6 9 4 0 . 0 7 1 9 4 2 1 5 0 . 8 6 7 0 . 1 5 7 0 . 0 0 8 0 . 2 7 4 0 . 0 2 8 9 4 2 1 5 1 . 9 0 4 0 . 1 4 1 0 . 0 1 1 0 . 1 5 1 0 . 0 8 4 9 4 2 1 7 5 . 6 1 5 0 . 6 0 6 0 . 0 0 6 0 . 2 2 1 0 . 0 7 9 9 4 2 1 7 1 . 3 5 7 0 . 2 4 8 0 . 0 0 7 0 . 1 1 3 0 . 0 4 8 9 4 2 2 0 6 . 4 3 8 1 . 7 4 7 0 . 0 1 1 0 . 5 8 0 0 . 0 0 4 9 4 2 2 O 7 . 6 5 1 1 . 8 0 5 0 . 0 1 2 0 . 6 1 1 0 . 0 1 3 9 4 2 2 1 5 . 1 5 8 1 . 0 6 5 0 . 0 1 1 0 . 9 1 8 0 . 0 2 1 9 4 2 2 1 6 . 2 8 1 1 . 0 4 7 0 . 0 1 2 1 . 0 0 1 0 . 0 9 8 9 4 2 2 3 5 . 5 0 2 0 . 9 8 3 0 . 0 1 0 0 . 7 1 7 0 . 0 1 1 9 4 2 2 3 4 . 3 4 9 1 . 1 2 7 0 . 0 0 9 0 . 6 2 1 0 . 0 8 8 9 4 2 g 5 6 . 7 1 6 0 . 8 4 1 0 . 0 0 8 0 . 0 6 3 0 . 0 8 4 2 9 3 T a b l e A - 1 1 . C o n t . Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 4 2 2 5 4 . 2 5 7 0 . 1 1 0 0 . 0 1 0 0 . 1 5 1 0 . 0 7 5 9 4 2 2 7 1 . 0 3 0 0 . 2 2 3 0 . 0 0 6 0 . 2 2 2 0 . 0 3 5 9 4 2 2 7 0 . 9 9 4 0 . 2 3 4 0 . 0 0 7 0 . 2 4 1 0 . 0 2 7 9 4 2 3 0 7 . 8 1 8 1 . 6 9 4 0 . 0 0 2 1 . 7 4 7 0 . 0 0 8 9 4 2 3 0 6 . 8 0 2 1 . 8 8 5 0 . 0 1 1 0 . 7 4 8 0 . 0 0 8 9 4 2 3 1 6 . 6 3 8 0 . 5 4 4 0 . 0 1 6 0 . 5 7 1 0 . 0 8 6 9 4 2 3 1 6 . 3 6 1 0 . 7 1 7 0 . 0 1 0 1 . 9 1 2 0 . 0 9 4 9 4 2 3 3 0 . 9 1 7 0 . 1 5 6 0 . 0 0 5 0 . 1 0 3 0 . 0 0 8 9 4 2 3 3 0 . 8 3 5 0 . 1 7 1 0 . 0 0 7 0 . 2 5 8 0 . 0 3 7 9 4 2 3 5 0 . 1 9 0 0 . 0 9 7 0 . 0 0 4 0 . 1 2 7 0 9 4 2 3 5 0 . 3 8 5 0 . 0 9 4 0 . 0 0 4 0 . 1 5 1 0 9 4 2 3 7 0 . 3 7 6 0 . 1 0 4 0 . 0 0 6 0 . 1 2 2 0 9 4 2 3 7 0 . 3 8 5 0 . 1 2 6 0 . 0 0 6 0 . 1 1 3 0 9 4 2 4 0 8 . 7 4 5 1 . 9 0 2 0 . 0 0 3 0 . 3 9 9 0 . 0 1 1 9 4 2 4 0 7 . 2 1 4 1 . 8 3 7 0 . 0 0 4 0 . 4 8 2 0 . 0 1 2 9 4 2 4 1 8 . 1 5 2 0 . 5 7 2 0 . 0 0 6 1 . 1 6 1 0 . 0 1 9 9 4 2 4 1 6 . 6 4 9 0 . 6 3 9 0 . 0 0 9 1 . 4 6 4 0 . 0 9 9 9 4 2 4 3 1 . 5 4 1 0 . 6 4 7 0 . 0 0 8 0 . 4 8 5 0 . 0 8 5 9 4 2 4 3 1 . 6 3 0 0 . 6 1 9 0 . 0 0 7 0 . 4 2 3 0 . 0 2 6 9 4 2 4 5 0 . 4 6 2 0 . 0 9 4 0 . 0 0 4 0 . 2 6 5 0 . 0 7 8 9 4 2 4 5 0 . 4 0 6 0 . 2 2 8 0 . 0 0 4 0 . 1 1 1 0 . 0 0 9 9 4 2 4 7 0 . 5 5 2 0 . 1 3 5 0 . 0 0 5 0 . 1 1 8 0 9 4 2 4 7 0 . 2 1 4 0 . 3 8 9 0 . 2 9 1 0 . 0 0 5 0 . 0 9 1 9 3 1 1 0 7 . 6 5 8 2 . 0 9 6 0 . 0 1 2 1 . 5 1 1 0 . 0 0 8 9 3 1 1 0 9 . 9 1 6 2 . 3 2 3 0 . 0 1 2 1 . 1 7 1 0 . 0 0 9 9 3 1 1 1 5 . 1 8 6 2 . 5 9 4 0 . 0 3 4 0 . 0 6 5 0 . 0 6 0 9 3 1 1 1 4 . 9 4 0 0 . 9 7 5 0 . 0 7 0 0 . 1 4 5 0 . 0 6 7 9 3 1 1 3 0 . 5 6 2 1 . 6 8 2 0 . 0 1 7 0 . 2 6 5 0 . 0 6 4 9 3 1 1 3 0 . 0 5 2 0 . 8 3 6 0 . 1 3 7 0 . 0 8 0 0 . 0 6 6 9 3 1 1 5 0 . 0 2 8 0 . 8 4 4 0 0 . 2 8 8 0 . 0 1 9 9 3 1 1 5 0 . 0 3 5 0 . 3 4 8 0 0 . 3 7 1 0 . 0 4 3 9 3 1 1 7 0 . 0 1 6 0 . 3 0 9 0 . 0 5 0 0 . 4 2 5 0 . 0 4 9 9 3 1 1 7 0 . 0 6 7 0 . 2 9 3 0 0 . 3 5 7 0 . 0 9 8 9 3 1 2 0 7 . 6 0 0 1 . 7 8 8 0 . 0 1 2 1 . 2 0 7 0 . 0 0 8 9 3 1 2 0 8 . 5 6 8 1 . 8 7 8 0 . 0 1 2 1 . 6 1 1 0 . 0 0 9 9 3 1 2 1 7 . 8 8 9 1 . 9 5 3 0 . 1 2 4 0 . 1 0 0 0 . 0 5 7 9 3 1 2 1 4 . 2 3 3 2 . 1 4 8 0 . 0 6 8 0 . 1 7 1 0 . 0 4 7 9 3 1 2 3 0 . 2 2 5 1 . 0 3 3 0 . 1 0 5 0 . 2 1 4 0 . 0 1 6 9 3 1 2 3 0 . 3 1 2 1 . 3 5 0 0 . 0 6 5 0 . 2 4 4 0 . 0 8 9 9 3 1 2 5 0 . 1 1 6 0 . 0 9 2 0 . 1 1 5 0 . 3 0 2 0 . 0 1 2 9 3 1 2 5 0 . 0 1 9 0 . 0 9 1 0 . 0 0 4 0 . 2 4 1 0 . 0 1 5 9 3 1 2 7 0 . 0 1 4 0 . 0 7 1 0 0 . 4 3 1 0 . 0 4 4 9 3 1 2 7 0 . 1 1 4 0 . 0 4 3 0 0 . 3 8 2 0 9 3 1 3 0 8 . 2 0 3 1 . 7 7 8 0 . 0 1 2 1 . 6 4 5 0 . 0 0 9 9 3 1 3 0 7 . 0 4 5 1 . 9 8 0 0 . 0 1 1 1 . 2 3 7 0 . 0 1 6 9 3 1 3 1 3 . 2 9 0 0 . 8 6 0 0 0 . 2 2 4 0 . 0 6 4 9 3 1 3 1 2 . 8 5 8 0 . 7 6 0 0 0 . 1 2 2 0 . 0 5 7 9 3 1 3 3 2 . 3 0 6 2 . 0 2 2 0 . 0 5 1 0 . 4 0 8 0 . 0 4 3 9 3 1 3 3 0 . 2 5 9 1 . 4 4 5 0 . 1 1 4 0 . 4 1 4 0 . 0 6 9 9 3 1 3 5 0 . 0 0 2 0 0 0 . 5 2 6 0 9 3 1 3 5 0 . 0 4 7 0 0 . 0 1 3 0 . 4 9 1 0 9 3 1 3 7 0 . 0 5 3 0 0 . 0 0 9 0 . 3 5 0 0 . 0 9 2 9 3 1 3 7 0 . 0 2 3 0 0 . 0 3 1 1 . 8 4 0 0 9 3 1 4 0 8 . 1 8 3 1 . 8 3 3 0 . 0 1 2 1 . 3 6 1 0 . 0 0 8 9 3 1 4 0 7 . 8 3 7 1 . 3 1 2 0 . 0 1 2 1 . 4 0 1 0 . 0 0 9 9 3 1 4 1 5 . 1 6 0 0 . 3 4 2 0 0 . 6 5 3 0 . 0 2 4 9 3 1 4 1 6 . 8 5 1 0 . 8 0 0 0 1 . 0 2 3 0 . 0 5 8 9 3 1 4 3 0 . 8 6 1 2 . 4 8 0 0 . 0 5 8 0 . 2 8 3 0 . 0 5 1 2 9 4 T a b l e A - 1 1 . C o n t . Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 3 1 4 3 0 . 2 8 6 1 . 0 0 2 0 . 0 5 0 0 . 1 8 7 0 . 0 2 2 9 3 1 4 5 0 . 0 0 6 0 . 0 2 0 0 . 0 3 6 0 0 . 0 5 3 9 3 1 4 5 0 . 0 3 0 0 0 . 0 2 4 0 . 0 2 0 0 . 0 1 2 9 3 1 4 7 0 . 0 1 4 0 0 . 0 3 6 0 0 . 0 2 0 9 3 1 4 7 0 . 0 2 3 0 0 0 . 0 0 6 0 . 0 2 3 9 3 2 1 0 5 . 4 8 0 2 . 1 5 2 0 . 0 1 5 1 . 0 7 4 0 . 0 1 3 9 3 2 1 0 6 . 3 8 8 2 . 0 5 0 0 . 0 1 6 1 . 0 3 8 0 . 0 0 8 9 3 2 1 1 8 . 9 3 2 2 . 8 9 2 0 . 0 4 5 1 . 5 2 2 0 . 0 7 0 9 3 2 1 1 8 . 8 8 4 2 . 5 3 4 0 . 0 2 0 1 . 6 8 7 0 . 0 6 4 9 3 2 1 3 7 . 0 3 8 1 . 5 1 9 0 . 0 4 1 0 . 5 6 8 0 . 0 5 6 9 3 2 1 3 3 . 6 0 5 0 . 2 1 8 0 . 0 6 8 0 . 4 6 8 0 . 0 9 0 9 3 2 1 5 1 . 8 8 3 0 . 0 9 4 0 . 0 3 1 0 . 4 9 5 0 . 0 1 0 9 3 2 1 5 1 . 2 3 0 0 . 0 7 4 0 0 . 2 8 6 0 . 0 6 9 9 3 2 1 7 0 . 0 5 7 0 . 0 5 8 0 . 0 1 1 0 . 2 6 9 0 . 0 1 5 9 3 2 1 7 0 . 5 6 1 0 . 0 6 2 0 . 0 4 0 0 . 2 3 4 0 . 0 1 4 9 3 2 2 0 6 . 3 8 3 1 . 8 5 0 0 . 0 1 5 1 . 1 0 3 0 . 0 1 3 9 3 2 2 0 5 . 6 0 6 2 . 0 7 2 0 . 0 1 6 1 . 2 0 3 0 . 0 0 8 9 3 2 2 1 7 . 7 8 3 3 . 2 7 1 0 . 0 4 3 1 . 4 5 7 0 . 0 0 4 9 3 2 2 1 5 . 6 2 2 2 . 6 8 2 0 . 0 2 4 1 . 1 9 9 0 . 0 1 8 9 3 2 2 3 6 . 5 6 2 2 . 6 7 8 0 . 0 5 7 1 . 2 1 7 0 . 0 0 6 9 3 2 2 3 4 . 5 0 4 0 . 6 6 2 0 . 0 7 0 0 . 3 0 4 0 . 0 6 8 9 3 2 2 5 3 . 2 1 8 0 . 9 7 4 0 . 1 0 5 0 . 4 0 0 0 . 0 6 1 9 3 2 2 5 2 . 3 5 7 0 . 2 3 0 0 . 0 1 1 0 . 0 9 2 0 9 3 2 2 7 1 . 2 3 0 0 . 9 2 4 0 . 0 9 0 1 . 0 8 0 0 . 0 3 5 9 3 2 2 7 1 . 1 1 5 0 . 9 1 4 0 . 0 1 6 0 0 9 3 2 3 0 6 . 2 2 3 1 . 8 4 5 0 . 0 1 5 1 . 0 0 3 0 . 0 1 3 9 3 2 3 0 7 . 7 2 1 1 . 6 6 3 0 . 0 1 6 1 . 0 4 5 0 . 0 0 8 9 3 2 3 1 8 . 6 6 3 1 . 9 6 6 0 . 1 1 2 1 . 1 2 3 0 9 3 2 3 1 8 . 3 6 0 1 . 8 8 0 0 . 1 4 1 1 . 1 4 3 0 9 3 2 3 3 4 . 6 2 0 2 . 1 2 3 0 . 0 7 2 0 . 6 4 1 0 9 3 2 3 3 4 . 6 3 0 2 . 0 9 5 0 . 1 0 0 0 . 9 8 8 0 9 3 2 3 5 3 . 2 9 7 0 . 9 6 7 0 . 1 0 3 0 . 1 4 6 0 9 3 2 3 5 2 . 9 2 1 0 . 5 2 3 0 . 1 3 3 0 . 6 2 5 0 9 3 2 3 7 2 . 9 7 5 0 . 0 3 0 0 . 1 2 1 0 . 6 9 6 0 9 3 2 3 7 1 . 0 9 7 0 . 3 2 5 0 . 0 8 2 0 . 6 4 0 0 9 3 2 4 0 7 . 2 0 1 1 . 6 1 8 0 . 0 1 5 1 . 0 4 8 0 . 0 1 3 9 3 2 4 0 6 . 8 2 8 1 . 9 1 8 0 . 0 1 6 1 . 1 9 0 0 . 0 0 8 9 3 2 4 1 4 . 4 5 0 1 . 9 7 5 0 . 0 9 2 1 . 4 6 6 0 . 0 1 4 9 3 2 4 1 6 . 6 0 1 1 . 8 7 3 0 . 1 4 4 1 . 3 8 1 0 . 0 8 5 9 3 2 4 3 3 . 1 8 0 1 . 0 7 0 0 . 1 3 9 0 . 9 7 3 0 . 0 1 9 9 3 2 4 3 3 . 4 1 4 1 . 6 6 3 0 . 0 6 8 0 . 5 1 5 0 . 0 8 5 9 3 2 4 5 2 . 3 8 4 0 . 0 1 9 0 . 0 4 0 0 0 . 0 3 3 9 3 2 4 5 1 . 7 2 9 0 . 3 7 0 0 . 0 6 9 0 . 1 4 1 0 . 0 4 3 9 3 2 4 7 2 . 1 8 6 0 . 3 6 8 0 . 0 7 5 0 . 1 6 3 0 . 0 1 5 9 3 2 4 7 1 . 6 9 4 0 . 0 8 7 0 . 0 8 8 0 0 . 0 3 2 A b b r e v i a t i o n s : F e r = F e r m e n t a t i o n l e n g t h ; 1 = 4 0 d , 2 = 1 0 0 d T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I D = = d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e L a c = l a c t i c a c i d ; A c e = a c e t i c a c i d ; P r o = p r o p i o n i c a c i d ; E t o h = e t h a n o l ; B u t = b u t y r i c a c i d 2 9 5 T a b l e A - 1 2 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e x p o s e d t o a i r i n a t e m p e a r a t e e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) Y e a r F e r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c . A r a F r u c t o s e 9 4 1 1 0 2 . 4 3 0 0 . 3 0 5 0 . 2 4 8 0 . 0 9 2 0 . 2 7 6 9 4 1 1 0 1 . 9 5 7 0 . 3 7 5 0 . 3 3 7 0 . 0 8 9 0 . 1 8 7 9 4 1 1 1 0 . 6 7 4 0 . 1 3 9 0 . 1 8 4 0 . 0 2 1 0 . 2 6 9 9 4 1 1 1 0 . 3 2 9 0 . 1 2 9 0 . 1 7 1 0 . 0 1 0 0 . 0 7 0 9 4 1 1 3 0 . 5 7 8 0 . 0 6 9 0 . 0 9 1 0 . 0 8 7 0 . 0 8 9 9 4 1 1 3 0 . 6 2 6 0 . 0 9 6 0 . 1 2 7 0 . 0 1 9 0 . 1 3 2 9 4 1 1 5 0 . 6 2 9 0 0 0 . 1 0 1 0 . 2 6 8 9 4 1 1 5 0 . 4 7 3 0 0 0 . 0 6 1 0 . 3 1 7 9 4 1 1 7 0 . 7 3 1 0 0 0 . 0 4 5 0 . 3 3 3 9 4 1 1 7 0 . 5 9 2 0 0 0 . 0 8 3 0 . 5 4 0 9 4 1 2 0 1 . 9 1 0 0 . 1 9 9 0 . 1 5 4 0 . 0 7 1 0 . 2 4 1 9 4 1 2 0 1 . 6 5 9 0 . 5 6 1 0 . 3 9 7 0 . 0 7 8 0 . 1 6 6 9 4 1 2 1 1 . 4 6 9 0 . 3 2 3 0 . 4 2 8 0 . 1 6 5 0 . 9 1 5 9 4 1 2 1 0 . 7 5 4 0 . 1 7 3 0 . 2 3 0 . 1 4 2 1 . 0 1 0 9 4 1 2 3 0 . 7 3 6 0 . 0 7 3 0 . 0 9 7 0 . 0 1 0 0 . 8 0 6 9 4 1 2 3 0 . 7 4 4 0 . 1 0 3 0 . 1 3 6 0 . 0 9 4 0 . 2 6 6 9 4 1 2 5 0 . 6 4 2 0 0 0 . 0 7 8 0 . 4 7 2 9 4 1 2 5 0 . 5 2 4 0 0 0 0 . 4 5 6 9 4 1 2 7 0 . 5 4 3 0 0 0 . 1 2 5 0 . 4 5 2 9 4 1 2 7 0 0 0 0 0 . 2 5 1 9 4 1 3 0 1 . 1 4 8 0 . 7 3 7 0 . 3 0 9 0 . 0 8 8 1 . 8 9 8 9 4 1 3 0 1 . 2 1 5 0 . 1 3 5 0 . 2 2 2 0 . 0 8 4 1 . 6 5 0 9 4 1 3 1 0 . 7 1 1 0 . 1 8 9 0 . 2 5 0 0 . 0 8 4 0 . 5 7 3 9 4 1 3 1 0 . 6 9 4 0 . 0 7 5 0 . 0 9 9 0 0 . 4 1 0 9 4 1 3 3 0 . 6 5 3 0 0 0 0 . 3 4 6 9 4 1 3 3 0 . 8 0 4 0 0 0 0 . 2 7 5 9 4 1 3 5 0 . 5 8 1 0 0 0 0 . 3 5 8 9 4 1 3 5 0 . 6 2 2 0 0 0 0 . 3 5 9 9 4 1 3 7 0 . 5 9 3 0 0 0 0 . 1 6 5 9 4 1 3 7 0 . 5 6 4 0 . 0 2 2 0 . 0 2 9 0 . 0 8 1 0 . 0 9 3 9 4 1 4 0 1 . 6 8 7 0 . 3 5 1 0 . 3 4 0 0 . 1 7 5 2 . 4 0 0 9 4 1 4 0 1 . 3 4 2 0 . 2 4 3 0 . 3 2 2 0 . 1 0 4 1 . 3 3 8 9 4 1 4 1 0 . 7 3 4 0 . 1 2 7 0 . 1 6 8 0 . 3 7 4 0 . 6 5 9 4 1 4 1 0 . 1 6 7 0 . 1 0 1 0 . 1 3 3 0 . 1 9 7 0 . 6 3 4 9 4 1 4 3 0 . 7 2 7 0 0 0 0 . 1 3 5 9 4 1 4 3 0 . 7 9 0 0 0 0 . 1 1 6 0 . 1 6 0 9 4 1 4 5 0 . 6 2 5 0 0 0 . 1 0 1 0 . 3 1 4 9 4 1 4 5 0 . 6 4 8 0 . 0 3 7 0 . 0 4 9 0 0 . 3 2 4 9 4 1 4 7 0 . 7 2 3 0 0 0 0 . 2 2 7 9 4 1 4 7 0 0 . 0 1 2 0 . 0 1 6 0 0 . 2 7 6 9 4 2 1 0 0 . 5 6 1 0 . 6 0 7 0 . 1 5 6 0 . 1 3 0 0 . 5 3 3 9 4 2 1 0 1 . 6 0 9 0 . 7 7 5 0 . 3 6 9 0 . 1 8 2 0 . 4 5 7 9 4 2 1 1 0 . 6 8 8 0 . 1 6 7 0 . 2 2 2 0 . 0 5 0 0 . 3 2 6 9 4 2 1 1 2 . 3 8 6 0 . 1 5 9 0 . 2 1 0 0 . 0 8 0 0 . 1 6 6 9 4 2 1 3 0 . 6 0 1 0 . 1 2 4 0 . 1 6 4 0 . 0 6 2 0 . 4 8 3 9 4 2 1 3 0 . 5 6 2 0 . 0 5 3 0 . 0 7 1 0 . 0 3 2 0 . 3 0 0 9 4 2 1 5 1 . 1 2 9 0 0 0 0 . 2 0 9 9 4 2 1 5 0 . 4 1 2 0 . 0 7 1 0 . 0 9 4 0 0 . 1 5 1 9 4 2 1 7 0 . 8 9 1 0 . 1 3 1 0 . 1 7 4 0 . 0 7 3 0 . 1 3 6 9 4 2 1 7 0 . 8 9 8 0 0 0 . 0 5 4 0 . 1 2 1 9 4 2 2 0 1 . 0 8 3 0 . 7 9 6 0 . 2 4 3 0 . 1 9 0 0 . 5 3 7 9 4 2 2 0 1 . 0 1 6 0 . 5 0 4 0 . 2 3 0 0 . 0 9 7 0 . 3 7 9 9 4 2 2 1 1 . 1 7 8 0 . 3 7 3 0 . 4 9 4 0 . 1 8 3 0 . 6 1 7 9 4 2 2 1 1 . 4 4 3 0 . 2 2 0 . 2 9 1 0 . 0 5 9 0 . 6 6 2 9 4 2 2 3 0 . 8 9 0 0 . 2 4 3 0 . 3 2 2 0 . 0 9 0 0 . 4 6 6 9 4 2 2 3 0 . 6 5 2 0 . 1 1 4 0 . 1 5 2 0 . 1 4 6 0 . 5 1 5 9 4 2 2 5 0 . 6 5 6 0 . 1 1 9 0 . 1 5 7 0 . 1 0 9 0 . 1 6 9 9 4 2 2 5 0 . 7 4 6 0 . 0 8 2 0 . 1 0 8 0 . 0 6 1 0 . 1 0 8 9 4 2 2 7 1 . 4 0 6 0 0 0 0 . 2 7 4 9 4 2 2 7 1 . 3 9 0 0 . 1 7 0 0 . 2 2 5 0 . 1 3 9 0 . 1 5 6 9 4 2 3 0 1 . 5 1 7 0 . 6 4 4 0 . 2 3 6 0 . 1 4 2 1 . 9 0 7 9 4 2 3 0 0 . 7 3 7 0 . 6 9 7 0 . 1 3 6 0 . 1 8 7 0 . 9 2 9 9 4 2 3 1 0 . 8 9 3 0 . 1 2 7 0 . 1 6 9 0 . 1 7 2 1 . 2 2 1 9 4 2 3 1 2 . 0 8 6 0 . 2 1 2 0 . 2 8 1 0 . 1 9 3 2 . 2 6 9 9 4 2 3 3 1 . 1 2 9 0 . 1 5 0 0 . 1 9 8 0 . 1 9 7 0 . 1 8 3 T a b l e A - 1 2 . C o n t . 2 9 6 Y e a r F e r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c . A r a F r u c t o s e 9 4 2 3 3 0 . 7 8 5 0 0 0 . 1 2 8 0 . 2 3 7 9 4 2 3 5 0 . 7 7 8 0 0 0 0 . 0 8 6 9 4 2 3 5 1 . 0 4 4 0 . 0 6 3 0 . 0 8 3 0 . 1 2 7 0 . 1 0 3 9 4 2 3 7 0 . 7 9 3 0 . 0 6 7 0 . 0 8 9 0 . 0 8 5 0 . 0 6 2 9 4 2 3 7 0 0 0 0 . 0 1 6 0 . 0 4 3 9 4 2 4 0 0 . 8 5 3 0 . 8 9 3 0 . 2 1 9 0 . 2 2 5 1 . 0 4 3 9 4 2 4 0 1 . 2 2 9 0 . 3 9 5 0 . 2 0 2 1 . 7 5 4 1 . 1 0 4 9 4 2 4 1 1 . 3 2 5 0 . 1 6 7 0 . 2 2 2 0 . 2 8 2 1 . 2 8 3 9 4 2 4 1 1 . 0 2 3 0 . 2 6 8 0 . 3 5 5 0 . 3 6 2 1 . 3 7 8 9 4 2 4 3 0 0 . 0 8 4 0 . 1 1 2 0 . 2 9 2 0 . 3 3 7 9 4 2 4 3 0 0 . 0 4 3 0 . 0 5 7 0 . 2 5 2 0 . 3 5 6 9 4 2 4 5 1 . 0 1 3 0 . 0 5 4 0 . 0 7 2 0 . 2 9 1 0 . 2 5 6 9 4 2 4 5 0 . 6 4 3 0 . 0 3 9 0 . 0 5 2 0 . 0 4 3 0 . 0 7 2 9 4 2 4 7 0 . 8 6 6 0 0 0 . 0 2 5 0 . 0 7 2 9 4 2 4 7 0 0 . 0 4 6 0 . 0 6 1 0 0 . 0 9 9 9 3 1 1 0 1 . 1 4 5 0 . 2 1 3 0 . 0 6 3 0 . 0 9 0 0 . 3 9 6 9 3 1 1 0 1 . 0 1 7 0 . 3 4 3 0 . 0 8 5 0 . 0 3 3 0 . 4 5 2 9 3 1 1 1 0 . 0 5 0 0 . 0 3 0 0 . 0 4 0 0 0 . 5 7 1 9 3 1 1 1 0 . 0 3 8 0 0 0 . 0 3 4 0 . 1 4 1 9 3 1 1 3 0 . 0 5 2 0 0 0 . 0 2 6 0 . 0 2 4 9 3 1 1 3 0 . 0 3 7 0 0 0 0 9 3 1 1 5 0 . 0 1 9 0 . 0 0 3 0 . 0 0 5 0 0 9 3 1 1 5 0 . 0 3 1 0 0 0 0 . 0 1 8 9 3 1 1 7 0 . 0 4 3 0 0 0 0 . 0 2 1 9 3 1 1 7 0 . 0 4 1 0 0 0 0 . 0 2 8 9 3 1 2 0 1 . 0 7 1 0 . 2 7 9 0 . 0 9 7 0 . 1 2 4 0 . 3 5 7 9 3 1 2 0 1 . 0 8 7 0 . 3 1 6 0 . 0 9 4 0 . 0 2 3 0 . 3 0 7 9 3 1 2 1 0 . 1 2 2 0 . 0 6 2 0 . 0 8 2 0 . 0 3 7 0 . 1 9 8 9 3 1 2 1 0 . 0 7 0 0 . 0 2 5 0 . 0 3 3 0 . 0 3 4 0 . 2 1 6 9 3 1 2 3 0 . 0 3 2 0 0 0 0 9 3 1 2 3 0 . 0 5 9 0 O 0 . 0 1 5 0 9 3 1 2 5 0 0 0 0 . 0 2 9 0 9 3 1 2 5 0 . 0 2 1 0 . 0 0 7 0 . 0 1 0 0 0 . 0 1 7 9 3 1 2 7 0 . 0 5 2 0 0 0 0 9 3 1 2 7 0 . 0 3 7 0 0 0 0 9 3 1 3 0 1 . 0 6 1 0 . 1 0 2 0 . 0 7 0 0 . 0 7 5 1 . 2 8 5 9 3 1 3 0 1 . 0 5 0 0 . 2 7 9 0 . 0 5 4 0 . 0 6 4 0 . 6 5 7 9 3 1 3 1 0 . 1 7 2 0 . 0 1 5 0 . 0 1 9 0 0 . 0 5 8 9 3 1 3 1 0 0 0 0 0 . 0 8 0 9 3 1 3 3 0 0 0 0 0 . 0 5 3 9 3 1 3 3 0 0 0 0 0 9 3 1 3 5 0 O 0 0 . 3 7 0 0 9 3 1 3 5 0 0 0 0 0 0 8 6 9 3 1 3 7 0 0 0 0 0 9 3 1 3 7 0 0 0 0 0 9 3 1 4 0 1 . 1 9 3 0 . 2 9 4 0 . 1 0 8 0 . 0 8 7 1 . 0 9 7 9 3 1 4 0 1 . 1 1 8 0 . 3 3 4 0 . 1 1 1 0 . 1 2 2 0 . 4 5 1 9 3 1 4 1 0 0 0 0 0 . 3 4 8 9 3 1 4 1 0 0 0 0 0 . 1 6 1 9 3 1 4 3 0 0 0 0 O 2 1 3 9 3 1 4 3 O 0 0 0 0 9 3 1 4 5 0 0 . 1 5 2 0 . 2 0 2 0 0 9 3 1 4 5 0 0 0 0 0 1 6 3 9 3 1 4 7 0 0 0 0 0 9 3 1 4 7 0 0 0 0 0 9 3 2 1 0 1 . 0 6 9 0 . 5 0 3 0 . 0 6 5 0 . 1 2 5 0 . 5 5 9 9 3 2 1 0 1 . 0 8 1 0 . 5 2 6 0 . 0 5 8 0 . 1 0 8 0 . 2 0 3 9 3 2 1 1 0 . 0 4 9 0 0 0 . 0 7 4 0 . 0 7 9 9 3 2 1 1 0 . 0 4 6 0 0 0 . 1 0 0 0 . 0 9 9 9 3 2 1 3 0 . 0 3 7 0 0 0 . 0 9 8 0 . 0 4 1 9 3 2 1 3 0 . 0 3 7 0 0 0 0 . 1 2 5 9 3 2 1 5 0 0 0 0 . 0 4 3 0 . 0 3 2 9 3 2 1 5 0 . 0 4 1 0 . 0 2 7 0 . 0 3 6 0 0 9 3 2 1 7 0 0 0 0 0 9 3 2 1 7 0 0 0 0 0 9 3 2 2 0 1 . 0 3 7 0 . 7 2 0 0 . 0 4 5 0 . 0 9 1 0 . 3 9 9 2 9 7 T a b l e A - 1 2 . C o n t . Y e a r F e r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c . A r a F r u c t o s e 9 3 2 2 0 1 . 0 5 6 0 . 4 0 2 0 . 0 5 4 0 . 0 9 4 0 . 4 8 0 9 3 2 2 1 0 0 0 0 . 1 4 1 0 . 5 6 4 9 3 2 2 1 0 0 0 0 . 0 4 9 0 . 1 2 2 9 3 2 2 3 0 . 0 5 7 0 . 0 3 1 0 . 0 4 2 0 . 0 2 4 0 . 0 9 3 9 3 2 2 3 0 . 0 2 4 0 . 0 3 0 0 . 0 4 0 0 . 1 0 2 0 . 1 3 5 9 3 2 2 5 0 . 0 7 1 0 0 0 . 0 6 6 0 . 0 4 0 9 3 2 2 5 0 . 0 1 1 0 0 0 . 0 3 9 0 . 0 7 7 9 3 2 2 7 0 0 . 0 1 7 0 . 0 2 3 0 . 0 5 8 0 . 1 8 4 9 3 2 2 7 0 0 . 0 1 7 0 . 0 2 3 0 . 0 5 8 0 . 0 9 0 9 3 2 3 0 1 . 0 6 4 0 . 6 8 3 0 . 0 5 6 0 . 1 0 5 0 . 7 3 5 9 3 2 3 0 1 . 0 4 3 0 . 6 1 2 0 . 0 7 2 0 . 1 0 4 1 . 2 9 8 9 3 2 3 1 0 0 . 0 3 7 0 . 0 4 9 0 . 0 7 0 0 . 1 0 5 9 3 2 3 1 0 0 0 0 . 0 6 2 0 . 0 5 3 9 3 2 3 3 0 0 0 0 . 1 2 2 0 9 3 2 3 3 0 0 0 0 . 0 6 7 0 9 3 2 3 5 0 0 0 0 9 3 2 3 5 0 0 0 0 . 0 4 8 0 9 3 2 3 7 0 0 0 0 . 0 4 4 0 . 0 5 5 9 3 2 3 7 0 0 0 0 . 0 7 0 . 0 6 8 9 3 2 4 0 1 . 0 5 6 0 . 5 0 1 0 . 0 5 7 0 . 0 7 1 0 . 5 1 8 9 3 2 4 0 1 . 0 7 1 0 . 6 0 3 0 . 0 5 9 0 . 0 9 1 1 . 1 0 9 9 3 2 4 1 0 0 0 0 . 0 5 1 0 . 3 3 3 9 3 2 4 1 0 . 0 2 5 0 0 0 . 1 5 6 0 . 1 5 7 9 3 2 4 3 0 . 0 1 8 0 0 0 . 0 8 6 0 . 1 1 5 9 3 2 4 3 0 0 0 0 . 0 6 5 0 . 0 4 3 9 3 2 4 5 0 0 0 0 . 0 0 5 0 9 3 2 4 5 0 . 0 0 9 0 0 0 0 9 3 2 4 7 0 0 0 0 . 1 0 2 0 9 3 2 4 7 0 0 0 0 . 0 1 9 0 0 2 0 A b b r e v i a t i o n s : Y = Y e a r ; F e r = l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n , 1 = 4 0 d , 2 = 1 0 0 d ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + l ; G a l a c = g a l a c t o s e ; A r a = a r a b i n o s e 2 9 8 T a b l e A - 1 3 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m s i l a g e e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 3 ) Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 4 1 1 0 4 . 1 0 9 0 . 8 2 2 0 . 0 2 9 0 . 4 5 3 0 . 0 5 0 9 4 1 1 0 5 . 5 9 3 0 . 7 6 1 0 . 0 3 6 0 . 5 2 9 0 . 0 2 7 9 4 1 1 1 3 . 8 8 1 0 . 5 6 6 0 . 0 0 3 1 . 1 3 2 0 . 1 1 2 9 4 1 1 1 2 . 8 4 1 0 . 4 7 1 0 . 0 0 2 0 . 4 5 3 0 . 1 0 6 9 4 1 1 3 2 . 9 4 9 0 . 4 5 2 0 . 0 0 3 0 . 8 1 6 0 . 1 2 3 9 4 1 1 3 2 . 4 3 4 0 . 3 0 5 0 . 0 0 2 0 . 6 3 2 0 . 1 0 6 9 4 1 1 5 2 . 5 0 1 0 . 3 1 8 0 . 0 0 3 0 . 6 2 4 0 . 0 7 8 9 4 1 1 5 2 . 2 6 2 0 . 2 0 6 0 . 0 0 7 0 . 3 6 5 0 . 0 9 6 9 4 1 1 7 1 . 2 9 4 0 . 4 3 1 0 . 0 0 0 0 . 4 3 9 0 . 1 1 8 9 4 1 1 7 1 . 1 8 9 0 . 7 3 0 0 . 0 0 6 1 . 2 9 8 0 . 1 2 5 9 4 1 2 0 5 . 9 4 4 0 . 5 6 1 0 . 0 2 1 0 . 4 3 1 0 . 0 5 9 9 4 1 2 0 4 . 0 3 8 0 . 3 5 0 0 . 0 0 0 0 . 4 3 1 0 . 0 3 5 9 4 1 2 1 3 . 5 4 4 0 . 4 7 2 0 . 0 0 5 0 . 5 2 6 0 . 1 3 3 9 4 1 2 1 3 . 0 1 0 0 . 3 7 9 0 . 0 0 2 0 . 3 9 7 0 . 0 9 5 9 4 1 2 3 2 . 5 9 6 0 . 3 7 7 0 . 0 0 1 0 . 5 5 6 0 . 1 1 1 9 4 1 2 3 1 . 2 0 9 0 . 2 9 0 0 . 0 0 2 0 . 4 6 6 0 . 1 1 6 9 4 1 2 5 2 . 7 3 9 0 . 3 9 3 0 . 0 0 1 0 . 5 6 5 0 . 1 3 6 9 4 1 2 5 2 . 3 6 3 0 . 2 3 7 0 . 0 0 4 0 . 3 7 2 0 . 0 6 1 9 4 1 2 7 1 . 3 8 1 0 . 6 2 3 0 . 0 0 5 0 . 7 2 7 0 . 0 1 8 9 4 1 2 7 1 . 3 9 4 0 . 3 2 8 0 . 0 0 9 0 . 5 1 1 0 . 1 2 6 9 4 1 3 0 5 . 1 8 0 0 . 8 3 5 0 . 2 5 5 0 . 4 0 6 0 . 0 2 4 9 4 1 3 0 4 . 8 2 3 0 . 7 0 1 0 . 0 0 0 0 . 3 2 7 0 . 0 9 6 9 4 1 3 1 3 . 1 3 0 0 . 6 3 0 0 . 0 0 2 0 . 3 9 2 0 . 0 4 6 9 4 1 3 1 3 . 0 3 2 0 . 5 1 3 0 . 0 0 4 1 . 0 0 1 0 . 0 5 3 9 4 1 3 3 2 . 9 6 1 0 . 4 8 7 0 . 0 0 1 0 . 6 1 2 0 . 1 3 8 9 4 1 3 3 2 . 0 1 3 0 . 4 5 6 0 . 0 0 2 0 . 4 3 9 0 . 0 3 4 9 4 1 3 5 2 . 4 7 5 0 . 2 2 0 0 . 0 0 2 0 . 9 5 1 0 . 0 4 6 9 4 1 3 5 2 . 5 4 8 0 . 3 6 8 0 . 0 0 2 0 . 6 4 3 0 . 0 5 8 9 4 1 3 7 1 . 5 2 1 0 . 1 3 6 0 . 0 0 2 0 . 5 6 4 0 . 0 2 7 9 4 1 3 7 1 . 2 6 1 0 . 1 9 3 0 . 0 0 3 0 . 5 9 4 0 . 0 5 2 9 4 1 4 0 3 . 4 2 1 1 . 3 5 4 0 . 0 0 0 0 . 2 3 5 0 . 0 0 1 9 4 1 4 0 3 . 8 3 4 0 . 8 8 1 0 . 0 9 3 0 . 3 4 6 0 . 0 6 5 9 4 1 4 1 3 . 5 7 9 0 . 9 5 9 0 . 0 0 1 0 . 6 7 7 0 . 0 5 9 9 4 1 4 1 2 . 2 6 8 0 . 3 0 8 0 . 0 0 1 1 . 9 1 4 0 . 0 4 0 9 4 1 4 3 2 . 1 4 6 0 . 7 6 7 0 . 0 0 2 0 . 8 6 6 0 . 0 5 9 9 4 1 4 3 3 . 3 1 1 0 . 1 2 5 0 . 0 0 2 0 . 7 5 5 0 . 0 3 1 9 4 1 4 5 1 . 2 1 5 0 . 2 2 2 0 . 0 0 2 0 . 7 5 5 0 . 0 6 9 9 4 1 4 5 2 . 1 1 4 0 . 1 7 7 0 . 0 0 2 0 . 3 5 4 0 . 0 3 9 9 4 1 4 7 2 . 2 4 0 0 . 4 3 7 0 . 0 0 4 1 . 6 7 9 0 . 1 3 4 9 4 1 4 7 1 . 6 5 2 0 . 2 4 1 0 . 0 0 1 1 . 1 5 7 0 . 0 6 1 9 4 2 1 0 2 . 9 0 2 0 . 7 1 4 0 . 0 2 0 0 . 2 0 2 0 . 0 5 3 9 4 2 1 0 2 . 5 8 8 0 . 8 0 3 0 . 0 4 0 0 . 2 8 3 0 . 0 7 6 9 4 2 1 1 1 . 4 6 0 0 . 8 6 6 0 . 0 0 4 0 . 4 1 8 0 . 1 2 2 9 4 2 1 1 1 . 0 4 4 0 . 5 5 5 0 . 0 0 4 0 . 6 6 1 0 . 0 7 1 9 4 2 1 3 2 . 8 9 9 0 . 4 3 3 0 . 0 0 3 0 . 4 0 7 0 . 0 9 7 9 4 2 1 3 1 . 2 4 2 0 . 4 6 8 0 . 0 0 4 0 . 4 4 8 0 . 0 8 0 9 4 2 1 5 1 . 7 9 4 0 . 5 3 0 0 . 0 0 6 0 . 3 4 5 0 . 0 1 5 9 4 2 1 5 1 . 6 4 3 0 . 4 9 3 0 . 0 0 5 0 . 3 5 0 0 . 0 6 0 9 4 2 1 7 1 . 4 2 4 0 . 4 8 9 0 . 0 0 4 0 . 4 0 5 0 . 0 6 5 9 4 2 1 7 0 . 9 6 4 0 . 4 5 8 0 . 0 0 8 0 . 3 2 2 0 . 0 2 8 9 4 2 2 0 2 . 7 9 1 0 . 7 7 5 0 . 0 2 4 0 . 2 2 7 0 . 0 1 0 9 4 2 2 0 1 . 8 7 5 0 . 7 3 3 0 . 0 2 0 0 . 3 9 6 0 . 0 9 2 9 4 2 2 1 1 . 8 2 7 0 . 4 0 2 0 . 0 0 4 0 . 4 2 1 0 . 0 6 3 9 4 2 2 1 1 . 9 1 8 0 . 5 6 4 0 . 0 0 4 0 . 7 2 8 0 . 0 7 0 9 4 2 2 3 2 . 7 0 6 0 . 4 9 1 0 . 0 0 2 0 . 3 4 5 0 . 0 6 4 9 4 2 2 3 2 . 9 4 5 0 . 6 2 1 0 . 0 0 2 0 . 3 2 4 0 . 1 9 0 9 4 2 2 5 2 . 5 6 2 0 . 3 1 3 0 . 0 0 2 0 . 2 6 8 0 . 1 0 2 2 9 9 T a b l e A - 1 3 . C o n t . Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 4 2 2 5 2 . 0 5 2 0 . 4 9 7 0 . 0 0 2 0 . 2 3 2 0 . 0 8 4 9 4 2 2 7 1 . 1 8 3 0 . 2 9 5 0 . 0 0 2 0 . 2 3 7 0 . 0 8 4 9 4 2 2 7 1 . 2 7 9 0 . 3 7 0 0 . 0 0 3 0 . 2 5 1 0 . 0 6 0 9 4 2 3 0 3 . 2 8 7 0 . 8 1 9 0 . 0 3 9 0 . 2 9 6 0 . 0 1 9 9 4 2 3 O 5 . 1 0 2 0 . 7 9 5 0 . 0 2 0 0 . 3 3 1 0 . 0 1 4 9 4 2 3 1 2 . 5 8 9 0 . 3 6 4 0 . 0 0 2 0 . 7 5 9 0 . 1 1 9 9 4 2 3 1 3 . 9 4 9 0 . 6 2 3 0 . 0 0 2 0 . 4 4 2 0 . 0 6 5 9 4 2 3 3 1 . 7 0 7 0 . 2 9 3 0 . 0 0 2 0 . 2 0 2 0 . 1 1 1 9 4 2 3 3 1 7 2 8 0 . 4 4 9 0 . 0 0 1 0 . 1 9 8 0 . 1 1 5 9 4 2 3 5 1 5 4 8 0 . 2 4 2 0 . 0 0 5 0 . 1 2 4 0 . 0 6 0 9 4 2 3 5 1 4 0 0 0 . 1 6 2 0 . 0 0 1 0 . 0 3 2 0 . 0 5 6 9 4 2 3 7 1 . 4 3 9 0 . 2 5 9 0 . 0 0 3 0 . 0 4 5 0 . 0 3 7 9 4 2 3 7 0 . 9 3 8 0 . 2 7 6 0 . 0 0 2 0 . 0 5 2 0 . 1 3 6 9 4 2 4 0 4 . 2 6 3 0 . 7 8 2 0 . 0 2 1 0 . 4 0 1 0 . 0 6 5 9 4 2 4 0 4 . 2 2 4 0 . 7 9 3 0 . 0 2 0 0 . 3 2 8 0 . 0 3 6 9 4 2 4 1 2 . 6 3 4 0 . 6 2 0 0 . 0 0 2 0 . 6 9 2 0 . 0 4 9 9 4 2 4 1 2 . 8 9 6 0 . 4 1 3 0 . 0 0 3 0 . 7 1 4 0 . 0 7 0 9 4 2 4 3 1 7 0 2 0 . 1 4 7 0 . 0 0 1 0 . 2 3 4 0 . 0 4 1 9 4 2 4 3 1 5 6 8 0 . 3 5 6 0 . 0 0 1 0 . 1 9 6 0 . 0 5 7 9 4 2 4 5 1 7 6 7 0 . 1 7 5 0 . 0 0 4 0 . 1 4 5 0 . 0 9 8 9 4 2 4 5 1 . 8 7 0 0 . 2 4 7 0 . 0 0 2 0 . 1 4 3 0 . 1 4 4 9 4 2 4 7 0 . 7 0 9 0 . 1 9 0 0 . 0 0 1 0 . 0 4 1 0 . 1 0 0 9 4 2 4 7 0 . 9 7 2 0 . 4 4 6 0 . 0 0 1 0 . 0 4 5 0 . 0 6 7 9 3 1 1 0 1 4 8 4 0 . 3 5 2 0 . 0 8 4 0 . 9 3 7 0 . 1 0 7 9 3 1 1 0 1 . 3 9 0 0 . 2 9 8 0 . 0 0 0 0 . 0 9 0 0 . 1 3 2 9 3 1 1 1 0 . 8 6 0 0 . 0 9 8 0 . 0 0 3 1 . 2 9 0 0 . 0 9 9 9 3 1 1 1 0 . 9 0 8 0 . 0 8 0 0 . 0 0 2 0 . 4 0 0 0 . 1 1 7 9 3 1 1 3 0 . 3 6 1 0 . 2 9 0 0 . 0 0 1 0 . 5 3 0 0 . 0 7 3 9 3 1 1 3 0 . 3 0 6 0 . 4 6 3 0 . 0 0 1 0 . 2 1 1 0 . 0 6 6 9 3 1 1 5 0 . 2 5 5 0 . 0 1 9 0 0 . 2 3 4 0 . 0 1 5 9 3 1 1 5 0 . 2 4 3 0 . 0 1 8 0 0 . 2 2 2 0 . 0 1 5 9 3 1 1 7 0 . 1 2 1 0 . 0 1 8 0 0 . 1 9 0 0 . 0 3 6 9 3 1 1 7 0 . 1 2 0 0 . 0 1 9 0 0 . 1 9 3 0 . 0 1 2 9 3 1 2 0 1 . 7 0 2 0 . 3 4 2 0 . 0 6 0 0 . 4 5 9 0 . 0 6 0 9 3 1 2 0 2 . 4 0 7 0 . 4 5 2 0 . 0 5 6 1 . 0 9 0 0 . 0 6 6 9 3 1 2 1 1 . 2 8 1 0 . 0 3 1 0 . 0 0 2 1 . 2 8 5 0 . 0 5 7 9 3 1 2 1 1 . 8 4 7 0 . 0 4 2 0 . 0 0 1 1 . 2 1 3 0 . 0 8 9 9 3 1 2 3 1 . 0 0 6 0 . 2 6 7 0 0 . 1 3 9 0 . 0 3 9 9 3 1 2 3 1 . 3 3 6 0 . 2 2 3 0 . 0 0 0 0 . 1 3 6 0 . 0 6 4 9 3 1 2 5 0 . 7 7 7 0 . 1 1 7 0 . 0 0 3 0 . 0 7 7 0 . 0 9 5 9 3 1 2 5 0 . 9 3 8 0 . 1 8 6 0 . 0 0 2 0 . 0 1 6 0 . 0 6 6 9 3 1 2 7 0 . 2 4 7 0 . 1 3 5 0 . 0 0 0 0 . 0 1 4 0 . 0 5 2 9 3 1 2 7 0 . 0 4 5 0 . 0 7 0 0 . 0 0 0 0 . 0 1 2 0 . 0 1 3 9 3 1 3 0 1 9 7 9 0 . 4 8 8 0 . 0 2 7 0 . 5 2 1 0 . 0 7 7 9 3 1 3 0 1 . 3 1 8 0 . 6 3 4 0 . 0 6 0 0 . 4 9 0 0 . 0 8 6 9 3 1 3 1 0 . 8 8 2 0 . 0 4 3 0 0 . 8 4 6 0 . 0 9 4 9 3 1 3 1 0 . 4 6 2 0 . 0 6 3 0 0 . 9 8 9 0 . 0 2 0 9 3 1 3 3 1 2 8 3 0 . 2 8 9 0 . 0 0 2 0 . 7 4 5 0 . 0 3 8 9 3 1 3 3 1 . 0 3 0 0 . 2 9 9 0 . 0 0 2 0 . 6 9 2 0 . 0 5 1 9 3 1 3 5 0 . 6 8 3 0 . 1 3 3 0 . 0 0 1 0 . 1 6 4 0 . 0 1 3 9 3 1 3 5 2 . 2 2 4 0 . 1 0 3 0 . 0 0 2 0 . 1 4 2 0 . 0 1 7 9 3 1 3 7 0 . 1 2 9 0 . 2 8 1 0 . 0 0 1 0 . 0 1 2 0 . 0 3 2 9 3 1 3 7 0 . 1 5 4 0 . 1 1 0 0 . 0 0 1 0 . 0 0 8 0 . 0 0 8 9 3 1 4 0 1 . 0 1 1 0 . 4 5 3 0 . 0 6 0 0 . 3 6 6 0 . 0 7 2 9 3 1 4 0 1 . 3 6 7 0 . 3 8 0 0 . 0 3 2 0 . 6 1 8 0 . 0 5 0 9 3 1 4 1 0 . 7 8 4 0 . 4 2 5 0 . 0 1 6 0 . 9 8 7 0 . 0 9 0 9 3 1 4 1 0 . 6 4 7 0 . 2 1 6 0 . 0 2 6 1 . 9 4 1 0 . 0 8 6 9 3 1 4 3 0 . 9 6 2 0 . 1 2 2 0 . 0 0 6 0 . 7 8 4 0 . 0 1 8 3 0 0 T a b l e A - 1 3 . C o n t . Y e a r F e r T r t D a y L a c A c e P r o E t o h B u t 9 3 1 4 3 1 . 1 4 9 0 . 2 2 4 0 . 0 0 2 0 . 4 3 2 0 . 0 7 3 9 3 1 4 5 0 . 2 9 9 0 . 1 6 4 0 . 0 0 1 0 . 2 3 1 0 . 0 6 1 9 3 1 4 5 0 . 1 3 5 0 . 1 8 6 0 . 0 0 2 0 . 3 4 0 0 . 0 8 2 9 3 1 4 7 0 . 1 2 7 0 . 2 3 2 0 . 0 0 2 0 . 3 1 1 0 . 0 7 3 9 3 1 4 7 0 . 1 4 1 0 . 1 1 5 0 . 0 0 2 0 . 1 7 2 0 . 0 8 6 9 3 2 1 0 1 . 7 6 7 0 . 7 2 4 0 . 0 3 9 0 . 4 6 3 0 . 0 4 7 9 3 2 1 0 1 . 1 6 5 0 . 4 5 9 0 . 0 6 0 0 . 4 7 0 0 . 0 3 9 9 3 2 1 1 1 . 4 7 2 1 . 4 8 4 0 . 0 0 4 1 . 0 6 9 0 . 1 7 0 9 3 2 1 1 1 . 0 8 3 0 . 9 6 7 0 . 0 0 4 0 . 8 2 6 0 . 1 0 9 9 3 2 1 3 1 . 0 2 2 1 . 5 1 0 0 . 0 0 5 0 . 0 5 6 0 . 0 8 7 9 3 2 1 3 0 . 9 2 5 1 . 2 5 4 0 . 0 0 1 0 . 1 3 4 0 . 1 2 5 9 3 2 1 5 0 . 6 1 9 0 . 4 6 6 0 . 0 0 1 0 . 1 6 1 0 . 1 1 1 9 3 2 1 5 0 . 8 2 0 0 . 7 6 7 0 . 0 0 2 0 . 2 0 9 0 . 1 4 3 9 3 2 1 7 0 . 1 1 4 0 . 6 7 0 0 . 0 0 1 0 . 0 5 4 0 . 1 0 7 9 3 2 1 7 0 . 1 1 2 0 . 3 6 5 0 . 0 0 1 0 . 0 4 5 0 . 0 5 7 9 3 2 2 0 1 . 8 5 0 0 . 2 6 9 0 . 0 8 8 0 . 3 1 3 0 . 0 4 7 9 3 2 2 0 1 . 4 6 6 0 . 7 3 3 0 . 0 8 0 0 . 9 6 9 0 . 0 5 7 9 3 2 2 1 2 . 8 6 2 1 . 5 8 0 0 . 0 0 2 1 . 0 7 6 0 . 0 8 8 9 3 2 2 1 0 . 1 1 3 1 . 3 2 2 0 . 0 0 2 0 . 9 9 0 0 . 0 9 7 9 3 2 2 3 1 . 3 9 7 1 . 6 2 7 0 . 0 0 1 0 . 7 6 6 0 . 0 8 9 9 3 2 2 3 1 . 1 2 1 1 . 1 2 9 0 . 0 0 2 0 . 9 3 9 0 . 0 7 3 9 3 2 2 5 0 . 5 3 4 1 . 0 8 0 0 . 0 0 2 0 . 0 6 1 0 . 0 2 8 9 3 2 2 5 0 . 4 2 3 1 . 3 7 9 0 . 0 0 3 0 . 0 4 7 0 . 0 3 9 9 3 2 2 7 0 . 1 2 1 0 . 7 0 4 0 . 0 0 1 0 . 1 0 0 0 . 0 3 0 9 3 2 2 7 0 . 1 1 2 0 . 2 6 5 0 . 0 0 1 0 . 0 3 9 0 . 0 1 6 9 3 2 3 0 1 . 2 0 6 0 . 4 0 9 0 . 0 4 4 0 . 9 0 3 0 . 0 3 7 9 3 2 3 0 1 . 5 9 2 0 . 7 2 1 0 . 0 7 1 0 . 5 5 8 0 . 0 2 8 9 3 2 3 1 0 . 7 7 0 1 . 3 5 2 0 . 0 0 2 0 . 6 2 2 0 . 0 2 9 9 3 2 3 1 1 . 4 7 4 1 . 1 9 5 0 . 0 0 5 0 . 9 5 8 0 . 0 6 7 9 3 2 3 3 1 . 1 3 9 1 . 3 6 0 0 . 0 0 1 0 . 2 4 3 0 . 1 5 3 9 3 2 3 3 0 . 6 8 6 1 . 4 5 6 0 . 0 0 2 0 . 0 5 4 0 . 0 8 7 9 3 2 3 5 0 . 4 1 7 0 . 6 4 8 0 . 0 0 2 0 . 0 2 4 0 . 1 0 6 9 3 2 3 5 0 . 2 1 6 0 . 9 0 2 0 . 0 0 4 0 . 0 1 5 0 . 1 1 5 9 3 2 3 7 0 . 1 0 6 0 . 8 2 2 0 . 0 0 1 0 . 0 1 1 0 . 0 6 0 9 3 2 3 7 0 . 1 0 2 0 . 9 0 4 0 . 0 0 2 0 . 0 5 8 0 . 0 8 8 9 3 2 4 0 1 . 5 8 1 0 . 4 8 5 0 . 0 1 9 0 . 6 5 2 0 . 0 5 0 9 3 2 4 0 1 . 9 1 5 0 . 6 4 1 0 . 0 4 5 0 . 7 3 5 0 . 0 2 0 9 3 2 4 1 0 . 2 5 1 0 . 3 5 3 0 . 0 0 1 1 . 3 6 5 0 . 1 5 0 9 3 2 4 1 1 . 2 0 9 2 . 2 4 1 0 . 0 0 2 0 . 5 9 6 0 . 0 8 7 9 3 2 4 3 0 . 8 3 5 1 . 5 0 6 0 . 0 0 3 0 . 0 9 0 0 . 0 8 0 9 3 2 4 3 0 . 4 6 5 1 . 2 8 1 0 . 0 0 3 0 . 0 7 9 0 . 0 4 0 9 3 2 4 5 0 . 3 2 3 0 . 9 6 9 0 . 0 0 3 0 . 0 4 0 0 . 0 7 7 9 3 2 4 5 0 . 1 2 5 0 . 6 0 3 0 . 0 0 2 0 . 0 6 1 0 . 1 0 1 9 3 2 4 7 0 . 3 1 6 0 . 2 3 1 0 . 0 0 2 0 . 0 4 9 0 . 1 6 3 9 3 2 4 7 0 . 2 4 7 1 . 0 9 2 0 . 0 0 2 0 . 0 7 0 0 . 0 8 7 A b b r e v i a t i o n s : F e r = F e r m e n t a t i o n l e n g t h , 1 = 4 0 d , 2 = 1 0 0 d ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; D = d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e ; L a c = l a c t i c a c i d ; A c e = a c e t i c a c i d ; P r o = p r o p i o n i c a c i d . E t o h = e t h a n o l , B u t = b u t y r i c a c i d . a t a u s D r F e ' T a b l e a - a a Y 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 . 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 e T 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 d f o r a n a l y s i s o f w a t e r r t D a y 1 1 1 1 0 0 0 0 3 3 5 5 7 7 3 3 5 5 7 7 1 1 3 3 0 0 5 5 7 7 1 1 3 3 1 1 3 3 0 0 5 5 7 7 0 0 5 5 0 0 7 7 1 1 1 1 3 3 5 5 7 7 0 0 G 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 l u c o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 5 4 4 5 2 3 2 2 5 1 2 4 4 3 5 5 3 2 1 4 3 6 2 5 3 1 2 2 1 5 6 4 3 0 6 2 2 3 1 2 3 3 3 2 4 0 2 1 2 1 3 4 4 6 5 2 4 4 2 2 3 0 9 5 4 1 4 8 1 9 4 7 9 3 8 0 3 5 3 0 4 2 1 9 2 6 0 5 8 2 2 1 2 1 1 4 7 1 8 3 6 5 5 2 8 8 6 7 1 4 5 3 9 9 6 8 4 5 4 8 9 3 2 9 4 9 8 9 2 1 1 1 4 5 2 2 8 2 6 3 6 3 0 8 7 7 7 6 4 5 9 2 8 8 0 4 7 4 2 7 3 7 0 2 3 0 2 8 9 5 7 8 0 9 2 5 3 8 9 6 0 0 9 6 7 9 6 s s o e 2 7 2 2 2 9 7 2 7 4 9 8 9 1 7 7 2 8 8 7 3 5 7 5 3 7 2 5 5 3 5 9 6 6 6 3 7 8 3 5 7 3 3 7 5 5 5 2 5 4 6 1 1 1 1 1 1 l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s i n a X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 y l o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 1 1 3 2 1 1 1 0 1 2 1 2 0 1 0 2 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 2 4 1 3 2 2 1 1 1 1 2 2 1 2 0 3 1 1 1 1 1 0 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b i l i t y s t u d o s e 1 1 1 1 2 2 8 7 4 7 4 9 3 7 4 2 2 3 6 4 8 8 2 7 8 4 2 3 3 6 9 6 2 8 2 8 6 4 5 5 3 4 8 2 5 2 8 8 8 6 4 9 6 2 8 5 A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 . . . i r . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . e s f 1 1 1 a 0 1 0 0 1 0 0 1 1 0 1 1 2 0 0 1 1 1 1 0 1 1 2 1 1 1 1 1 1 4 2 1 1 3 2 0 0 1 0 1 1 1 1 0 0 1 1 2 0 0 0 0 1 1 1 b 8 0 9 8 6 8 7 5 3 5 4 7 1 4 1 0 5 6 4 4 4 1 3 6 4 9 4 5 3 1 5 4 4 8 4 7 5 2 4 9 9 1 0 5 6 4 4 1 8 2 4 6 2 8 8 2 2 1 1 6 4 4 4 2 6 8 8 9 7 0 4 0 0 1 9 7 2 5 7 2 8 3 4 8 8 8 5 5 9 4 0 6 0 9 4 2 8 5 8 2 1 9 2 4 1 3 6 7 5 7 7 1 8 0 4 5 1 1 1 1 r 9 3 3 5 5 8 6 9 6 8 7 2 4 9 6 6 8 9 3 4 2 8 9 2 5 7 9 3 5 2 6 5 9 2 2 6 7 5 6 4 6 9 4 o m C F h r a u 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 . . . . . . . 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4 8 3 9 6 1 9 7 8 2 5 4 6 2 2 1 5 7 6 6 3 7 3 1 0 7 2 9 7 7 6 7 8 4 6 4 e 6 4 6 3 7 0 4 8 7 6 4 6 1 5 4 2 1 6 8 0 2 5 2 1 3 5 7 6 8 7 3 9 5 9 6 3 3 3 2 4 T a b l a a - a a . C o n t . 3 0 2 T a b l e a - a a . C o n t . 3 0 3 Y F e r T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a F r u c t o s e 9 3 2 1 7 0 0 . 0 5 6 7 0 . 0 6 2 8 0 . 0 5 8 9 0 . 1 3 0 3 9 3 2 2 0 0 . 0 8 0 8 0 . 0 3 9 2 0 . 0 6 3 9 0 . 1 3 4 2 0 . 1 0 8 3 9 3 2 2 1 0 . 0 8 8 1 0 . 1 5 7 1 0 . 1 7 4 0 . 0 7 4 2 0 . 1 0 3 9 9 3 2 2 1 0 . 0 1 4 3 0 . 0 7 4 1 0 . 0 8 2 1 0 . 4 2 0 1 0 . 5 8 8 2 9 3 2 2 3 0 . 0 1 5 8 0 . 0 1 7 8 0 . 0 1 9 7 0 . 0 1 9 7 0 . 0 2 7 7 9 3 2 2 3 0 . 0 4 2 4 0 . 0 2 7 8 0 . 0 3 0 8 0 . 0 3 0 1 0 . 0 4 2 1 9 3 2 2 5 0 . 0 9 7 8 0 . 0 3 6 3 0 . 0 4 0 1 0 . 0 1 8 2 0 . 0 2 5 4 9 3 2 2 5 0 . 0 7 4 1 0 . 0 4 7 9 0 . 0 5 3 0 . 0 1 5 9 0 . 0 2 2 3 9 3 2 2 7 0 . 0 0 1 6 0 . 0 3 6 3 0 . 0 4 0 2 0 . 0 1 2 6 0 . 0 1 7 7 9 3 2 2 7 0 . 0 0 1 9 0 . 0 3 1 6 0 . 0 3 5 0 . 0 1 1 4 0 . 0 1 6 9 3 2 3 0 0 . 0 2 6 7 0 . 0 3 2 5 0 . 0 3 0 6 0 . 1 2 7 9 0 . 0 6 2 7 9 3 2 3 0 0 . 0 6 8 6 0 . 2 1 9 3 0 . 0 3 0 6 0 . 1 2 8 3 0 . 1 0 1 4 9 3 2 3 1 0 . 0 6 8 7 0 . 0 4 6 6 0 . 0 5 1 6 0 . 0 9 0 . 1 2 6 9 3 2 3 1 0 . 0 4 5 9 0 . 1 4 3 4 0 . 1 5 8 8 0 . 1 3 5 0 . 1 8 9 9 3 2 3 3 0 . 0 9 8 9 0 . 0 2 0 . 0 2 2 1 0 . 1 8 6 0 . 2 6 0 5 9 3 2 3 3 0 . 0 9 9 5 0 . 0 2 6 6 0 . 0 2 9 5 0 . 0 8 7 7 0 . 1 2 2 8 9 3 2 3 5 0 . 0 3 2 4 0 . 0 3 7 4 0 . 0 4 1 5 0 . 0 1 7 3 0 . 0 2 4 3 9 3 2 3 5 0 . 0 3 0 1 0 . 0 3 7 3 0 . 0 4 1 3 0 . 0 1 6 1 0 . 0 2 2 5 9 3 2 3 7 0 . 0 8 5 6 0 0 0 . 0 2 0 8 0 . 0 2 9 1 9 3 2 3 7 0 . 0 3 3 2 0 . 0 7 1 9 0 . 1 3 5 0 . 0 2 2 6 0 . 0 3 1 7 9 3 2 4 0 0 . 0 4 5 6 0 . 1 4 1 1 0 . 0 4 3 7 0 . 1 3 8 4 0 . 0 5 1 8 9 3 2 4 0 0 . 0 2 3 4 0 . 0 5 1 1 0 . 1 5 1 3 0 . 0 2 6 0 0 . 0 3 4 9 3 2 4 1 0 . 0 1 2 4 0 . 0 9 7 2 0 . 1 0 7 7 0 . 3 4 4 4 0 . 4 8 2 3 9 3 2 4 1 0 . 0 2 0 0 0 . 0 5 5 2 0 . 0 6 1 1 0 . 1 0 9 9 0 . 1 5 3 9 9 3 2 4 3 0 . 0 6 2 4 0 . 0 1 8 8 0 . 0 2 0 8 0 . 1 7 4 7 0 . 2 4 4 6 9 3 2 4 3 0 . 0 7 9 4 0 . 0 3 7 1 0 . 0 4 1 1 0 0 9 3 2 4 5 0 . 0 5 4 4 0 . 0 3 1 3 0 . 0 3 4 7 0 . 0 1 3 4 0 . 0 1 8 7 9 3 2 4 5 0 . 0 1 6 3 0 . 0 4 3 0 . 0 4 7 6 0 0 9 3 2 4 7 0 . 0 1 6 6 0 0 0 0 9 3 2 4 7 0 . 0 0 7 7 0 0 0 . 0 2 1 9 0 . 0 3 0 7 A b b r e v i a t i n s : Y - y e a r . F e r - l e n g t h o f f e r m e n t a t i o n ; 1 - 4 0 d ; 2 - 1 0 0 d ; t r t - t r e a t m e n t ; 1 - c o n t r o l , 2 = e n z y m e . 3 : i n o c u l a n t . 4 - E + I ; A r a b 3 a r a b i n a s e 3 0 4 T a b l e A - 1 5 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f o r g a n i c a c i d c o n t e n t s ( g / 1 0 0 g D M ) o f f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) M a t T r t D a y C i t r i c M a l i c O x a l S u c c i n i c 9 0 1 0 0 . 8 7 5 4 . 2 7 7 1 . 0 7 6 4 . 4 1 6 9 0 1 0 0 . 7 4 2 4 . 9 1 8 1 . 1 5 0 2 . 2 1 2 9 0 1 0 0 . 9 6 8 4 . 4 9 1 1 . 1 4 7 2 . 0 0 6 9 0 1 1 0 . 2 6 5 2 . 8 0 5 1 . 2 7 5 3 . 5 1 3 9 0 1 1 0 . 3 2 1 3 . 6 9 7 1 . 3 0 1 3 . 1 0 9 9 0 1 1 0 . 2 8 5 2 . 4 0 7 1 . 1 2 2 2 . 5 3 7 9 0 1 3 0 . 2 8 2 . 9 8 1 . 1 7 1 3 . 2 3 6 9 0 1 3 0 . 1 8 8 3 . 6 6 3 1 . 1 3 5 1 . 8 3 3 9 0 1 3 0 . 2 7 9 1 . 3 5 3 1 . 7 4 1 2 . 0 0 6 9 0 1 7 0 . 2 0 4 2 . 7 5 5 1 . 4 7 1 2 . 8 8 0 9 0 1 7 0 . 4 1 2 2 . 3 1 5 0 . 2 5 4 2 . 2 1 7 9 0 1 7 0 . 3 3 6 3 . 0 0 7 1 . 2 2 4 3 . 3 5 9 9 0 1 2 1 0 . 5 0 9 3 . 7 5 3 1 . 0 4 7 3 . 1 3 8 9 0 1 2 1 0 . 2 8 7 2 . 9 2 2 1 . 0 7 4 2 . 6 3 0 9 0 1 2 1 0 . 3 7 9 2 . 2 2 5 1 . 1 6 3 1 . 8 6 7 9 0 1 1 0 0 0 . 1 2 5 1 . 0 3 3 0 . 9 1 4 1 . 0 7 8 9 0 1 1 0 0 0 . 1 0 8 1 . 1 6 7 0 . 4 7 9 0 . 8 3 1 9 0 1 1 0 0 0 . 1 7 3 1 . 3 6 9 0 . 5 2 7 1 . 1 9 8 9 0 2 0 0 . 7 9 8 4 . 7 0 0 1 . 6 7 8 3 . 4 3 1 9 0 2 0 0 . 6 1 2 4 . 7 7 3 1 . 0 8 5 3 . 7 2 4 9 0 2 O 0 . 7 4 4 5 . 6 1 2 1 . 1 6 0 2 . 8 4 4 9 0 2 1 0 . 3 5 9 2 . 8 3 8 1 . 8 3 1 4 . 2 8 9 9 0 2 1 0 . 7 8 5 2 . 1 6 3 1 . 4 8 6 4 . 4 1 9 9 0 2 1 0 . 4 0 7 2 . 3 8 6 0 . 4 2 4 2 . 8 2 4 9 0 2 3 0 . 2 3 7 2 . 0 9 1 1 . 1 3 8 3 . 2 7 5 9 0 2 3 0 . 1 6 9 3 . 9 8 8 1 . 1 1 1 2 . 5 6 0 9 0 2 3 0 . 4 0 3 1 . 9 3 7 1 . 1 4 8 2 . 9 1 0 9 0 2 7 0 . 3 9 3 1 . 8 4 9 1 . 5 8 0 3 . 7 6 1 9 0 2 7 0 . 5 0 7 2 . 2 8 2 1 . 7 0 1 3 . 3 6 6 9 0 2 7 0 . 3 5 4 2 . 1 0 1 1 . 0 7 2 2 . 0 9 7 9 0 2 2 1 0 . 4 5 6 1 . 1 0 2 1 . 0 7 4 2 . 5 0 9 9 0 2 2 1 0 . 3 8 7 2 . 4 1 4 1 . 2 5 0 1 . 0 0 5 9 0 2 2 1 0 . 3 0 8 1 . 0 5 2 0 . 7 5 5 1 . 8 5 8 9 0 2 1 0 0 0 . 3 4 7 1 . 3 4 4 1 . 0 6 5 1 . 0 4 5 9 0 2 1 0 0 0 . 1 8 4 1 . 3 9 6 0 . 5 2 9 1 . 1 3 4 9 0 2 1 0 0 0 . 2 3 7 2 . 0 4 7 0 . 5 0 7 1 . 2 5 1 9 0 3 0 0 . 5 1 1 4 . 5 6 0 1 . 1 9 3 . 6 0 7 9 0 3 0 . 8 0 2 4 . 3 4 5 1 . 3 8 0 3 . 5 5 3 9 0 3 0 0 . 3 7 1 3 . 9 9 8 1 . 1 2 3 2 . 6 8 5 9 0 3 1 0 . 1 6 3 2 . 5 4 8 1 . 3 6 6 3 . 3 2 2 9 0 3 1 0 . 8 2 4 3 . 6 1 1 1 . 2 3 5 2 . 4 7 4 9 0 3 1 0 . 7 9 7 2 . 3 9 3 1 . 0 1 0 3 . 2 5 8 9 0 3 3 0 . 7 9 9 2 . 5 9 2 1 . 4 1 0 2 . 4 8 4 9 0 3 3 0 . 7 2 8 2 . 7 2 4 0 . 9 9 5 2 . 5 3 6 9 0 3 3 0 . 7 3 0 2 . 5 8 3 1 . 2 6 6 2 . 4 8 8 9 0 3 7 0 . 6 3 8 3 . 6 8 5 1 . 1 2 3 2 . 7 4 0 9 0 3 7 0 . 7 7 3 3 . 0 8 1 1 . 2 2 4 2 . 0 4 3 9 0 3 7 0 . 2 4 9 2 . 8 2 9 1 . 1 6 9 0 . 9 3 0 9 0 3 2 1 0 . 1 7 7 2 . 2 4 7 1 . 2 2 5 1 . 7 3 4 9 0 3 2 1 0 . 3 0 4 2 . 7 0 8 1 . 0 6 8 1 . 9 3 2 9 0 3 2 1 0 . 1 8 1 1 . 7 9 5 0 . 9 8 3 1 . 4 3 3 9 0 3 1 0 0 0 . 1 2 4 1 . 7 5 3 0 . 9 4 3 1 . 3 1 6 9 0 3 1 0 0 0 . 1 7 7 1 . 9 9 8 0 . 8 5 2 1 . 9 1 9 9 0 3 1 0 0 0 . 1 6 9 1 . 9 3 4 0 . 9 8 7 1 . 4 5 9 9 0 4 0 0 . 7 2 0 5 . 0 0 1 1 . 0 3 4 3 . 5 6 5 9 0 4 0 0 . 3 0 6 4 . 5 6 7 1 . 3 1 1 2 . 9 6 6 9 0 4 0 0 . 9 8 7 4 . 2 2 1 1 . 3 5 5 4 . 8 5 6 9 0 4 1 0 . 4 9 7 3 . 0 8 0 1 . 5 8 2 . 2 8 2 9 0 4 1 0 . 3 3 6 2 . 8 8 9 1 . 3 1 8 2 . 6 5 8 9 0 4 1 0 . 3 0 6 2 . 1 4 3 1 . 5 7 2 . 4 4 5 9 0 4 3 0 . 2 8 3 3 . 0 3 5 1 . 6 9 1 2 . 5 6 7 9 0 4 3 0 . 6 3 9 2 . 6 0 3 0 . 9 4 8 3 . 8 2 1 9 0 4 3 0 . 1 2 1 3 . 8 3 9 1 . 3 5 3 1 . 8 7 9 9 0 4 7 0 . 7 3 6 3 . 5 1 5 1 . 1 0 8 1 . 9 2 3 3 0 5 T a b l e A - 1 5 . C o n t . M a t T r t D a y C i t r i c M a l i c O x a l S u c c i n i c 9 0 4 7 0 . 4 6 9 3 . 1 0 4 1 . 7 0 5 2 . 1 8 7 9 0 4 7 0 . 5 1 6 2 . 8 5 8 0 . 9 4 7 1 . 9 8 4 9 0 4 2 1 0 . 3 1 4 3 . 9 3 4 1 . 2 9 6 1 . 8 7 3 9 0 4 2 1 0 . 3 1 2 3 . 4 3 0 0 . 9 8 4 1 . 8 5 8 9 0 4 2 1 0 . 1 1 0 2 . 4 5 3 1 . 4 3 6 1 . 2 5 3 9 0 4 1 0 0 0 . 1 3 7 1 . 9 4 9 0 . 9 1 4 1 . 8 7 0 9 0 4 1 0 0 0 . 1 0 4 1 . 0 0 6 0 . 7 6 8 1 . 6 5 6 9 0 4 1 0 0 0 . 1 0 4 2 . 3 2 9 0 . 9 0 5 0 . 9 9 6 1 1 0 1 0 2 . 4 2 4 4 . 8 1 0 0 . 1 4 1 3 . 1 1 4 1 1 0 1 0 1 . 6 4 0 5 . 1 3 4 0 . 1 4 8 4 . 8 3 3 1 1 0 1 0 1 . 1 9 8 4 . 8 6 3 0 . 1 4 7 2 . 7 3 9 1 1 0 1 1 1 . 2 9 7 4 . 9 1 7 0 . 2 3 7 2 . 7 6 4 1 1 0 1 1 1 . 9 4 7 4 . 7 6 3 0 . 2 3 5 2 . 6 8 8 1 1 0 1 1 0 . 9 7 3 4 . 8 9 2 0 . 2 4 7 1 . 7 2 3 1 1 0 1 3 1 . 6 5 6 4 . 8 7 6 0 . 3 3 6 1 . 5 3 4 1 1 0 1 3 1 . 1 0 8 4 . 1 5 1 0 . 2 5 7 1 . 1 9 9 1 1 0 1 3 1 . 0 7 7 4 . 9 0 5 0 . 2 9 7 1 . 1 7 4 1 1 0 1 7 1 . 2 1 0 4 . 8 6 7 0 . 3 4 2 1 . 0 1 5 1 1 0 1 7 0 . 8 1 6 4 . 6 0 0 0 . 2 9 2 1 . 8 2 8 1 1 0 1 7 0 . 8 4 4 3 . 9 8 4 0 . 2 6 0 1 . 9 5 5 1 1 0 1 2 1 0 . 8 3 6 4 . 1 4 4 0 . 1 9 3 1 . 7 5 7 1 1 0 1 2 1 0 . 7 4 5 3 . 5 5 9 0 . 1 9 4 1 . 2 2 2 1 1 0 1 2 1 0 . 6 7 3 4 . 4 0 7 0 . 2 7 2 1 . 0 6 1 1 1 0 1 1 0 0 0 . 7 9 0 4 . 2 9 3 0 . 4 0 0 1 . 3 1 9 1 1 0 1 1 0 0 0 . 3 7 4 . 3 3 3 0 . 0 9 4 1 . 4 8 9 1 1 0 1 1 0 0 0 . 9 9 6 3 . 0 3 1 0 . 1 2 8 1 . 0 6 4 1 1 0 2 0 1 . 3 7 0 4 . 9 5 3 0 . 1 4 5 2 . 2 2 4 1 1 0 2 0 1 . 5 8 2 4 . 7 7 0 0 . 1 5 7 4 . 7 2 6 1 1 0 2 0 1 . 3 6 3 4 . 9 5 1 0 . 1 8 7 4 . 9 6 2 1 1 0 2 1 1 . 8 3 4 4 . 9 8 0 0 . 0 5 4 . 9 2 5 1 1 0 2 1 1 . 2 2 0 4 . 0 4 1 0 . 1 6 9 3 . 5 4 3 1 1 0 2 1 1 . 8 8 5 . 1 2 1 0 . 0 9 7 1 . 9 3 1 1 1 0 2 3 1 . 4 7 4 . 7 3 5 0 . 3 5 7 1 . 7 9 9 1 1 0 2 3 0 . 9 6 8 4 . 8 2 4 0 . 3 7 3 1 . 3 9 2 1 1 0 2 3 1 . 4 8 4 . 7 5 5 0 . 3 2 1 1 . 2 1 3 1 1 0 2 7 1 . 0 7 9 4 . 5 6 2 0 . 5 2 6 1 . 4 0 6 1 1 0 2 7 0 . 8 8 6 4 . 7 6 2 0 . 2 5 3 1 . 2 5 5 1 1 0 2 7 0 . 7 1 0 4 . 7 6 4 0 . 2 2 8 1 . 1 1 4 1 1 0 2 2 1 0 . 3 6 5 4 . 5 2 9 0 . 2 2 8 1 . 6 9 0 1 1 0 2 2 1 0 . 1 5 8 4 . 4 3 6 0 . 4 5 2 1 . 5 9 0 1 1 0 2 2 1 0 . 6 2 9 4 . 3 2 8 0 . 2 3 2 0 . 9 0 8 1 1 0 2 1 0 0 1 . 0 5 6 2 . 1 2 7 0 . 1 0 4 1 . 4 5 0 1 1 0 2 1 0 0 0 . 4 0 0 3 . 3 6 0 0 . 0 5 6 1 . 6 3 1 1 1 0 2 1 0 0 0 . 7 2 4 3 . 7 1 1 0 . 2 9 8 1 . 6 1 1 1 1 0 3 0 1 . 4 3 1 5 . 0 1 8 0 . 1 7 1 4 . 0 9 0 1 1 0 3 0 1 . 3 8 7 4 . 8 1 4 0 . 1 2 8 3 . 7 6 4 1 1 0 3 0 1 . 0 5 3 4 . 6 8 0 0 . 1 4 5 4 . 0 7 4 1 1 0 3 1 1 . 1 6 7 4 . 7 6 6 0 . 1 1 2 3 . 8 6 5 1 1 0 3 1 1 . 8 2 5 4 . 9 3 0 0 . 1 2 3 3 . 4 8 4 1 1 0 3 1 0 . 9 8 9 5 . 5 5 6 0 . 1 3 5 2 . 6 4 1 1 1 0 3 3 1 . 0 3 2 5 . 2 2 0 0 . 2 8 1 1 . 9 9 5 1 1 0 3 3 0 . 8 5 6 4 . 2 6 9 0 . 2 1 9 1 . 9 0 2 1 1 0 3 3 1 . 3 9 0 5 . 1 2 6 0 . 3 4 6 1 . 3 2 7 1 1 0 3 7 1 . 1 0 2 3 . 4 4 2 0 . 3 1 6 1 . 7 8 0 1 1 0 3 7 1 . 6 4 9 4 . 7 0 1 0 . 1 8 9 1 . 2 3 2 1 1 0 3 7 1 . 4 9 6 4 . 0 1 3 0 . 2 5 2 0 . 9 4 1 1 1 0 3 2 1 0 . 9 0 0 3 . 3 3 0 0 . 3 2 8 1 . 3 4 7 1 1 0 3 2 1 1 . 2 1 8 3 . 8 8 1 0 . 3 9 1 . 7 6 8 1 1 0 3 2 1 1 . 1 5 5 4 . 1 4 2 0 . 1 9 9 1 . 2 4 8 1 1 0 3 1 0 0 0 . 6 8 1 4 . 2 9 0 . 1 1 9 0 . 8 5 5 1 1 0 3 1 0 0 0 . 8 6 3 3 . 3 4 2 0 . 1 4 4 0 . 9 3 3 1 1 0 3 1 0 0 0 . 8 6 8 3 . 3 4 4 0 . 1 4 4 0 . 9 3 3 1 1 0 4 0 0 . 6 3 0 4 . 8 6 8 0 . 1 1 5 3 . 1 5 4 1 1 0 4 0 1 . 9 1 1 5 . 0 4 8 0 . 1 2 6 2 . 5 6 3 1 1 0 4 0 1 1 . 3 2 3 3 . 3 9 8 9 , 1 9 5 3 . 4 5 4 3 0 6 T a b l e A - 1 5 . C o n t . M a t T r t D a y C i t r i c M a l i c O x a l S u c c i n i c 1 1 0 4 1 1 . 6 8 8 4 . 7 1 4 0 . 1 2 0 4 . 2 0 6 1 1 0 4 1 1 . 5 5 4 5 . 4 3 7 0 . 1 9 4 3 . 9 5 0 1 1 0 4 1 1 . 5 5 4 5 . 4 7 3 0 . 1 9 4 3 . 9 5 0 1 1 0 4 3 0 . 7 0 7 4 . 7 2 1 0 . 0 7 9 1 . 0 5 7 1 1 0 4 3 1 . 0 0 3 4 . 5 4 7 0 . 0 9 8 1 . 4 2 1 1 1 0 4 3 1 . 4 6 7 5 . 0 5 1 0 . 0 5 3 1 . 0 2 8 1 1 0 4 7 1 . 0 8 3 4 . 6 6 4 0 . 2 3 9 1 . 7 6 8 1 1 0 4 7 1 . 1 4 6 4 . 1 8 3 0 . 2 1 3 1 . 4 7 5 9 0 4 7 1 . 0 0 9 4 . 2 5 6 0 . 0 8 7 1 . 2 0 1 9 0 4 2 1 0 . 8 3 8 4 . 9 0 9 0 . 2 5 3 1 . 4 2 9 9 0 4 2 1 1 . 4 0 9 3 . 5 7 3 0 . 2 4 1 1 . 4 0 9 9 0 4 2 1 0 . 6 8 1 3 . 8 9 1 0 . 2 7 2 1 . 5 5 5 9 0 4 1 0 0 0 . 9 1 8 3 . 8 5 9 0 . 2 2 3 0 . 8 9 4 9 0 4 1 0 0 0 . 8 9 0 3 . 7 3 0 0 . 2 1 1 0 . 8 1 4 9 0 4 1 0 0 1 . 0 9 3 2 . 1 5 0 0 . 2 1 9 0 . 7 7 8 A b b r e v i a t i o n s : . M a t = m a t u r i t y ( d a y s ) ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l . 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; O x a l = O x a l o a c e t i c a c i d 1 3 6 9 1 7 0 3 1 4 1 2 9 1 7 2 3 3 1 7 3 2 3 1 1 2 7 1 1 3 2 5 5 1 0 0 1 4 1 4 4 2 5 1 1 2 6 5 1 1 4 8 8 1 4 3 2 1 3 5 1 1 6 1 9 6 1 5 4 1 9 1 5 4 9 2 1 2 6 4 1 3 6 8 5 2 9 9 2 9 8 2 1 6 2 4 3 4 9 6 2 4 5 2 2 1 6 7 2 2 5 8 2 2 0 2 5 2 2 3 1 2 4 5 2 0 3 0 4 4 5 3 4 2 0 9 7 2 2 6 2 7 2 2 9 2 2 9 8 2 1 5 2 7 7 7 9 2 2 0 5 6 9 1 2 4 7 2 6 3 3 3 8 2 3 7 1 4 6 9 6 9 2 7 0 4 3 1 8 3 3 1 2 3 0 7 3 1 6 3 1 9 3 7 5 5 2 1 4 9 7 4 2 7 5 3 8 5 3 3 4 1 3 5 5 3 7 7 3 4 7 3 3 6 3 9 2 3 8 8 3 2 0 4 4 5 4 2 4 3 3 2 2 3 0 2 9 7 6 6 3 3 6 6 4 4 4 4 4 4 4 4 4 6 9 8 5 9 4 0 9 9 4 7 1 1 3 0 9 0 1 4 9 0 4 5 5 . n 3 u . 1 ~ l 9 . 5 4 2 3 0 7 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d m i c r o b i a l s u c c e s s i o n i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) T a b l e A - 1 6 . L A B E n t Y M L A Y p H T r t M a t a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a 5 9 3 3 5 7 9 2 7 8 5 2 7 8 5 9 8 6 4 3 5 1 4 7 9 5 9 4 3 8 9 9 6 5 9 4 5 7 7 7 4 6 8 7 6 9 3 0 5 9 5 8 4 3 3 7 3 7 1 1 7 6 9 3 9 9 7 1 5 3 8 7 6 5 5 5 1 7 9 0 7 8 5 6 3 2 1 8 0 9 7 7 4 3 8 3 0 9 3 J 2 a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a 9 4 7 1 5 2 3 5 4 5 2 8 1 2 9 2 7 9 1 2 2 7 8 7 8 5 4 9 1 9 9 5 9 4 9 8 8 1 2 6 3 9 2 4 1 6 1 8 5 4 3 6 6 6 6 3 2 8 0 7 3 9 4 0 2 1 2 7 7 6 1 4 9 8 0 8 9 0 7 6 5 2 2 1 8 3 0 0 3 3 0 3 5 0 0 9 4 9 6 6 e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e 7 6 9 4 4 2 4 8 3 2 8 3 8 9 9 6 5 5 6 7 3 5 2 4 5 2 9 3 4 7 2 7 6 5 8 5 5 5 5 5 3 2 8 2 4 5 2 9 5 5 £ J £ 2 J £ J J 5 J J £ 5 5 3 0 J J £ 3 J £ £ J J J J J 3 J 5 6 £ 2 J J 2 2 8 6 5 5 3 A 2 J 1 A 2 3 3 2 M J A 3 3 5 J 6 3 2 2 2 2 5 5 5 5 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 6 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 4 4 4 4 4 4 4 4 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 9 0 4 5 2 9 0 4 9 0 4 9 0 4 9 0 4 6 2 . 4 5 3 3 9 0 4 6 5 9 0 4 5 9 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 2 1 1 2 2 9 8 1 5 1 5 3 6 4 3 8 6 7 7 8 5 1 3 9 4 4 1 6 6 4 1 5 3 5 1 8 4 8 4 5 5 0 2 9 1 1 0 2 5 4 1 1 0 2 1 2 1 1 0 2 2 5 1 1 0 2 4 . 1 0 2 0 8 1 1 0 2 1 1 1 1 0 2 0 8 1 1 0 2 3 8 1 1 0 2 2 7 1 1 0 2 3 9 1 1 0 2 4 8 1 1 0 2 8 7 1 1 0 2 0 7 1 1 0 2 5 1 0 0 1 1 0 2 4 1 0 0 3 1 1 0 2 0 0 6 1 1 1 8 0 3 9 1 1 0 1 a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a 0 3 0 1 1 0 5 a 0 3 9 0 2 a 1 1 0 3 1 1 0 3 1 1 0 3 1 1 0 3 1 1 1 1 1 3 1 2 8 5 0 2 6 5 1 1 3 0 3 1 9 a a a a a 0 3 1 1 3 a 0 3 1 1 7 a 7 2 1 1 0 3 7 a 5 9 1 1 0 3 7 a 3 2 1 1 0 3 2 a 1 3 2 1 1 0 3 2 a 1 9 4 1 1 0 3 2 1 1 4 1 1 0 3 1 0 1 2 0 1 1 0 3 1 0 0 1 . 0 3 1 0 0 1 1 0 4 1 1 0 4 1 1 0 4 4 7 9 4 1 5 0 9 5 5 1 3 a a a a a a a 1 0 4 1 2 1 a 3 0 8 C o n n T a b l e A - 1 6 . L A B E n t Y M L A Y p H T r t M a t r . . 1 2 7 4 7 7 7 5 5 3 9 7 3 7 9 6 7 6 4 4 9 5 1 7 3 8 3 4 9 8 8 9 7 8 9 6 7 1 5 8 1 1 3 6 5 9 8 3 9 5 2 4 8 2 4 0 4 0 4 7 8 5 3 3 6 2 4 7 6 2 8 8 6 2 9 2 5 8 8 1 4 3 0 9 9 3 6 3 0 0 5 5 3 3 6 5 3 4 3 4 2 1 0 9 9 9 9 2 3 3 3 8 8 2 3 4 3 7 6 5 5 4 4 4 3 3 3 6 6 6 6 6 6 6 6 6 5 5 6 5 5 5 3 3 3 3 4 4 7 6 7 7 7 7 5 6 6 5 5 5 3 3 3 6 6 6 7 6 6 6 6 6 6 6 6 5 5 5 3 3 3 7 6 2 7 1 6 7 9 5 5 6 1 9 6 3 3 5 5 2 7 6 7 7 5 4 8 4 6 9 4 6 7 8 8 7 5 7 3 3 6 1 4 2 9 2 2 2 6 3 7 7 1 6 2 3 6 8 6 8 4 2 0 7 2 8 4 1 9 1 5 9 2 4 1 8 8 9 1 6 9 1 6 9 9 4 3 7 0 6 7 1 1 2 2 9 2 5 3 5 6 8 8 5 1 8 7 5 0 2 8 2 9 9 8 6 6 4 9 9 4 7 0 3 0 7 6 6 5 5 4 4 4 4 5 6 5 6 7 7 6 6 6 6 5 5 6 5 5 5 4 4 3 6 5 5 7 7 7 7 6 7 5 6 6 5 5 5 4 4 3 6 6 6 7 6 7 6 6 6 6 6 6 5 5 5 4 5 5 7 5 2 9 3 6 5 4 5 7 5 5 9 6 3 3 8 5 5 5 4 6 1 4 4 2 9 3 9 3 2 2 5 7 7 5 3 4 3 2 2 1 3 8 2 9 9 7 8 3 7 4 4 2 4 9 5 5 4 1 2 1 6 6 8 9 4 4 8 8 1 3 3 3 7 5 3 1 2 3 3 2 3 7 0 5 2 6 5 5 2 5 5 6 1 1 1 1 7 7 7 7 2 8 8 5 4 5 9 7 5 3 1 6 6 3 . 3 4 4 3 6 6 6 7 7 7 5 6 5 5 5 4 3 3 4 3 3 3 6 6 6 7 7 7 5 5 4 5 6 5 4 4 3 3 3 3 6 6 6 7 7 7 4 3 4 5 5 5 3 3 3 3 3 2 6 6 6 7 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I 5 7 6 8 7 5 8 1 7 6 6 1 6 8 9 4 4 2 3 1 4 3 8 4 5 6 3 4 7 3 4 1 9 1 9 9 9 2 2 4 4 2 2 8 8 7 4 3 0 9 1 4 4 4 8 0 8 3 3 3 3 2 2 3 3 3 1 1 1 4 4 4 9 9 9 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 0 1 5 5 4 5 4 5 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 4 3 4 4 a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a 1 1 1 0 0 0 1 1 1 3 3 3 7 7 7 2 2 2 0 0 0 1 3 0 9 T a b l e A - 1 6 . C o n t . M a t T r t D p H L A B E n t Y M L A Y 1 1 0 4 1 4 . 4 5 8 . 9 4 7 . 1 6 . 7 8 6 . 8 4 1 1 0 4 1 4 . 4 9 9 . 0 3 7 . 0 7 6 . 8 9 6 . 9 1 1 1 0 4 3 4 . 1 1 9 . 2 4 . 9 2 7 . 0 1 7 . 2 1 1 0 4 3 4 . 0 7 9 . 0 9 5 . 7 7 6 . 4 5 6 . 1 3 1 1 0 4 3 4 . 1 9 . 9 5 3 . 1 9 7 . 2 3 6 . 6 4 1 1 0 4 7 4 . 0 7 8 . 0 3 4 7 . 1 5 7 . 1 8 1 1 0 4 7 4 . 0 6 8 . 4 6 5 . 5 3 6 . 8 8 7 . 1 2 1 1 0 4 7 4 . 0 9 8 . 2 9 5 . 0 9 7 . 3 7 6 . 9 5 1 1 0 4 2 1 4 . 1 4 5 . 9 5 3 . 0 7 5 . 6 9 5 . 1 7 1 1 0 4 2 1 4 . 1 4 6 . 8 9 3 . 2 7 6 . 3 2 6 . 1 6 1 1 0 4 2 1 4 . 1 7 . 1 2 3 . 3 2 6 . 2 3 6 . 3 1 1 0 4 1 0 0 4 . 1 4 6 . 5 5 3 . 5 9 5 . 5 2 5 . 4 8 1 1 0 4 1 0 0 4 . 0 6 6 . 4 5 3 . 4 1 5 . 9 5 . 6 9 1 1 0 4 1 0 0 4 . 1 8 6 . 7 9 3 . 3 1 5 . 9 8 5 . 6 9 A b b r e v i a t i o n s : M a t = m a t u r i t y ( d a y s ) ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + I ; L A B = L a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a . E n t = E n t e r o b a c t e r i a c e a e , Y M = y e a s t s a n d m o l d s , L A Y = l a c t a t e a s s i m i l a t i n g y e a s t . T a b l e A - 1 7 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) M T D A c e L a c P r o E t h a n o l B u t 1 1 O 0 . 0 8 3 0 . 1 4 6 0 0 . 0 6 1 O 1 1 O 0 . 0 2 7 0 . 0 5 3 O 0 . 0 5 7 0 1 1 0 0 . 1 2 6 0 . 0 2 7 O 0 . 1 3 2 0 1 1 1 0 . 1 2 8 1 . 3 4 8 0 . 0 0 5 0 . 4 8 0 0 . 0 2 0 1 1 1 0 . 2 5 6 1 . 2 6 8 0 . 0 0 0 0 . 5 1 0 0 . 0 3 0 1 1 1 0 . 2 3 0 1 . 2 9 8 O 0 . 4 6 6 0 . 0 3 0 1 1 3 0 . 9 1 7 5 . 5 5 0 0 . 0 0 7 0 . 5 1 6 0 . 0 8 6 1 1 3 0 . 6 0 6 6 . 8 0 9 0 . 0 0 3 0 . 6 5 9 0 . 0 3 3 1 1 3 0 . 6 5 6 3 . 4 8 5 0 . 0 0 6 0 . 5 4 6 0 . 0 7 7 1 1 7 0 . 7 9 5 5 . 8 9 0 0 . 0 0 0 0 . 6 6 5 0 . 0 5 0 1 1 7 0 . 6 4 2 8 . 9 9 1 0 . 0 0 6 0 . 8 5 6 0 . 0 4 8 1 1 7 0 . 8 5 0 6 . 5 9 6 0 . 0 0 8 0 . 9 3 4 0 . 0 7 3 1 1 2 1 0 . 6 1 4 5 . 8 3 0 0 . 0 3 9 0 . 6 2 7 0 . 0 5 2 1 1 2 1 0 . 9 0 7 6 . 8 5 0 0 . 0 4 1 0 . 7 0 4 0 . 0 1 8 1 1 2 1 0 . 5 9 9 5 . 4 0 1 0 . 0 4 2 0 . 4 1 3 0 . 0 7 1 1 1 1 0 0 0 . 7 1 4 2 . 9 0 2 0 . 0 2 0 0 . 2 0 2 0 . 0 5 3 1 1 1 0 0 0 . 8 0 3 2 . 5 8 5 0 . 0 4 0 0 . 2 8 3 0 . 0 7 6 1 1 1 0 0 0 . 7 3 2 2 . 1 2 5 O 0 . 1 0 3 0 . 0 1 1 1 2 O 0 . 0 3 7 0 . 0 7 7 O 0 . 0 9 6 O 1 2 O 0 . 0 8 2 0 . 0 9 9 O 0 . 0 2 9 O 1 2 O 0 . 0 8 9 0 . 0 9 2 O 0 . 0 9 9 O 1 2 1 0 . 2 2 3 1 . 0 8 1 O 0 . 5 4 0 0 . 0 2 4 1 2 1 0 . 2 5 9 1 . 2 4 9 0 . 0 0 5 0 . 6 2 7 0 . 0 3 1 1 2 1 0 . 1 7 2 1 . 2 4 2 O 0 . 4 7 8 0 . 0 6 7 1 2 3 0 . 6 0 9 4 . 8 7 7 0 . 0 0 3 0 . 7 1 5 0 . 0 7 1 1 2 3 1 . 1 4 1 6 . 6 1 4 0 . 0 0 9 0 . 6 2 3 0 . 0 7 7 1 2 3 0 . 7 9 5 6 . 7 1 7 0 . 0 0 3 0 . 8 3 1 0 . 0 4 9 1 2 7 1 . 1 7 5 6 . 5 4 0 . 0 0 4 1 . 0 8 9 0 . 0 0 3 1 2 7 0 . 8 8 6 7 . 3 7 4 0 . 0 0 6 0 . 8 8 4 0 . 0 5 3 1 2 7 0 . 5 3 4 6 . 9 2 6 0 . 0 0 7 0 . 8 3 5 0 . 0 5 2 1 2 2 1 0 . 7 2 2 5 . 5 4 1 0 . 0 3 8 0 . 8 5 1 0 . 0 9 7 1 2 2 1 0 . 7 6 7 6 . 4 1 1 0 . 0 3 8 0 . 6 3 8 0 . 0 3 1 1 2 2 1 0 . 6 8 6 5 . 9 4 5 0 . 0 3 6 0 . 7 4 0 0 . 0 4 2 1 2 1 0 0 0 . 7 7 5 2 . 7 9 1 0 . 0 2 4 0 . 2 2 7 0 . 0 0 0 1 2 1 0 0 0 . 7 3 3 1 . 8 7 5 0 . 0 2 0 0 . 3 9 1 0 . 0 9 2 1 2 1 0 0 0 . 8 7 4 2 . 5 1 4 0 . 0 4 0 0 . 1 2 6 0 . 0 7 9 1 3 O 0 . 1 0 6 0 . 0 9 2 O 0 . 0 8 1 O 1 3 O 0 . 0 8 2 0 . 0 2 3 O 0 . 1 5 4 O 1 3 O 0 . 1 1 7 0 . 1 5 8 0 . 0 0 1 0 . 0 2 2 O 1 3 1 0 . 2 8 8 2 . 2 8 1 0 . 0 0 0 0 . 1 4 8 0 . 0 2 9 1 3 1 0 . 4 0 6 1 . 2 8 9 0 . 0 0 0 0 . 1 9 1 0 . 0 5 6 1 3 1 0 . 3 1 2 1 . 2 3 7 0 . 0 0 5 0 . 9 6 2 0 . 0 5 2 1 3 3 0 . 5 5 6 9 . 3 1 8 0 . 0 0 5 0 . 5 9 4 0 . 0 8 5 1 3 3 0 . 5 7 3 8 . 7 2 0 0 . 0 0 7 0 . 7 1 5 0 . 0 6 0 1 3 3 0 . 7 9 2 8 . 6 9 2 0 . 0 0 7 0 . 7 4 9 0 . 0 7 8 1 3 7 0 . 7 0 5 8 . 7 3 0 0 . 0 0 6 0 . 8 1 1 0 . 0 9 1 1 3 7 0 . 7 5 6 7 . 8 7 4 0 . 0 0 5 0 . 8 1 7 0 . 0 3 7 1 3 7 0 . 7 8 6 5 . 8 5 0 O 0 . 8 3 0 . 0 9 9 1 3 2 1 0 . 7 2 6 5 . 6 1 7 O 0 . 4 3 6 0 . 0 8 0 1 3 2 1 0 . 4 6 9 7 . 2 8 2 0 . 0 6 1 0 . 5 8 8 0 . 0 4 7 1 3 2 1 0 . 6 2 8 6 . 2 0 1 O 0 . 5 9 5 0 . 0 3 8 1 3 1 0 0 0 . 3 1 9 3 . 2 8 7 0 . 0 3 9 0 . 2 9 6 0 . 0 1 9 1 3 1 0 0 0 . 7 9 5 5 . 1 0 2 0 . 0 2 0 0 . 3 3 1 0 . 0 1 4 1 3 1 0 0 0 . 7 6 9 3 . 4 6 0 O 0 . 2 5 0 0 . 0 7 1 1 4 O 0 . 0 2 3 0 . 1 5 8 O 0 . 0 5 5 O 1 4 O 0 . 1 0 5 0 . 1 4 9 0 0 . 1 3 9 0 1 4 0 0 . 1 2 7 0 . 0 4 1 0 . 0 0 7 0 . 0 7 2 O 1 4 1 0 . 2 0 5 2 . 2 5 5 0 . 0 0 0 0 . 9 3 6 0 . 0 6 0 1 4 1 0 . 2 1 5 1 . 3 2 9 0 . 0 0 9 0 . 0 0 9 0 . 0 5 0 1 4 1 0 . 3 4 2 1 . 5 1 9 O 0 . 4 0 2 0 . 0 3 4 1 4 3 0 . 7 7 4 9 . 4 6 3 0 . 0 0 2 0 . 8 2 2 0 . 0 0 7 1 4 3 0 . 7 5 9 8 . 5 1 7 0 . 0 0 4 0 . 6 6 9 0 . 0 0 8 1 4 3 0 . 3 5 4 8 . 1 6 1 0 . 0 0 7 0 . 5 5 3 0 . 0 9 7 1 4 7 0 . 5 5 7 7 . 6 4 2 0 . 0 0 9 0 . 6 3 9 0 . 0 9 8 T a b l e A - 1 7 . C o n t . 3 1 1 M T 0 A c e L a c P r o E t h a n o l B u t 1 4 7 0 . 4 4 7 7 . 8 7 7 0 0 . 8 5 9 0 . 0 5 7 1 4 7 0 . 8 4 4 6 . 5 0 9 0 . 0 0 7 0 . 5 7 1 0 . 0 1 5 1 4 2 1 0 . 6 7 2 6 . 9 2 3 0 . 0 2 8 0 . 6 6 6 0 . 0 6 4 1 4 2 1 0 . 7 7 6 6 . 2 6 9 0 . 0 6 0 0 . 6 9 4 0 . 0 9 7 1 4 2 1 0 . 7 5 5 4 . 3 3 5 0 0 . 0 9 0 0 . 0 8 9 1 4 1 0 0 0 . 7 8 2 4 . 2 6 3 0 . 0 2 1 0 . 4 0 1 0 . 0 6 5 1 4 1 0 0 0 . 7 9 3 4 . 2 2 4 0 . 0 2 0 . 3 2 8 0 . 0 3 6 1 4 1 0 0 0 . 6 3 7 3 . 2 7 4 0 0 . 1 4 9 0 . 0 3 2 2 1 0 0 . 0 4 0 0 . 0 7 3 0 0 . 0 3 3 0 2 1 0 0 . 0 1 2 0 . 0 7 2 0 0 . 1 1 4 0 2 1 0 0 . 0 7 3 0 . 1 0 4 0 0 . 3 4 1 0 2 1 1 0 . 2 9 1 0 . 1 6 0 0 . 0 0 6 0 . 2 6 9 0 . 0 6 7 2 1 1 0 . 3 7 8 0 . 2 1 3 0 . 0 0 8 0 . 3 2 1 0 . 0 7 8 2 1 1 0 . 2 6 1 0 . 2 3 2 0 . 0 0 9 0 . 4 1 3 0 . 0 4 4 2 1 3 0 . 4 4 0 5 . 2 7 1 0 . 0 0 1 1 . 4 6 5 0 . 0 1 2 2 1 3 0 . 4 9 1 6 . 4 2 2 0 . 0 0 4 1 . 4 4 0 0 . 0 1 2 2 1 3 0 . 5 7 2 6 . 3 7 4 0 . 0 0 1 1 . 5 5 8 0 . 0 1 2 2 1 7 0 . 2 8 1 3 . 8 1 4 0 . 0 0 8 1 . 0 9 9 0 . 0 5 3 2 1 7 0 . 3 2 7 3 . 4 8 4 0 1 . 4 0 0 0 . 0 7 0 2 1 7 0 . 4 5 1 4 . 1 7 0 0 . 0 0 0 2 . 0 0 9 0 . 0 1 2 2 1 2 1 0 . 3 4 5 4 . 9 4 7 0 1 . 2 6 0 0 . 0 8 2 2 1 2 1 0 . 3 3 3 4 . 9 5 4 0 1 . 3 4 9 0 . 0 8 0 2 1 2 1 0 . 3 4 1 4 . 8 3 5 0 . 0 3 3 1 . 6 2 6 0 . 0 7 7 2 1 1 0 0 0 . 1 4 9 3 . 0 5 7 0 . 0 2 2 0 . 6 2 2 0 . 0 9 2 2 1 1 0 0 0 . 2 4 3 3 . 4 3 1 0 . 0 3 2 0 . 9 5 5 0 . 0 5 4 2 1 1 0 0 0 . 2 1 3 3 . 2 9 9 0 . 0 3 0 0 . 8 5 3 0 . 0 9 3 2 2 0 0 . 0 7 3 0 . 1 0 5 0 0 . 0 6 1 0 2 2 0 0 . 0 3 1 0 . 0 9 2 0 0 . 1 5 5 0 2 2 0 0 . 0 5 6 0 . 0 5 6 0 0 . 0 2 0 0 2 2 1 0 . 2 9 0 0 . 4 0 7 0 . 0 0 6 0 . 3 9 9 0 . 0 4 0 2 2 1 0 . 2 5 6 0 . 3 2 1 0 . 0 0 5 0 . 4 5 4 0 . 0 2 7 2 2 1 0 . 1 2 1 0 . 9 5 3 0 . 0 0 5 0 . 5 8 6 0 . 0 3 8 2 2 3 0 . 5 7 3 5 . 8 8 6 0 . 0 0 4 1 . 2 8 5 0 . 0 8 8 2 2 3 0 . 4 4 8 5 . 8 1 8 0 . 0 0 3 1 . 6 6 3 0 . 0 7 0 2 2 3 0 . 2 5 3 6 . 4 8 6 0 . 0 0 3 1 . 5 1 8 0 . 0 8 6 2 2 7 0 . 3 2 8 4 . 1 7 8 0 . 0 0 9 2 . 9 0 4 0 . 0 0 1 2 2 7 0 . 2 2 4 3 . 3 2 3 0 1 . 1 8 1 0 . 0 6 6 2 2 7 0 . 2 4 5 4 . 8 5 7 0 1 . 6 6 8 0 . 0 8 6 2 2 2 1 0 . 2 4 6 4 . 4 0 0 0 . 0 1 6 1 . 7 5 7 0 . 0 8 2 2 2 2 1 0 . 2 7 5 3 . 7 3 2 0 . 0 2 1 2 . 1 8 0 0 . 0 6 1 2 2 2 1 0 . 1 4 9 4 . 0 1 1 0 1 . 6 3 6 0 . 0 4 1 2 2 1 0 0 0 . 3 6 6 3 . 3 4 8 0 . 0 3 5 0 . 7 2 7 0 . 0 3 0 2 2 1 0 0 0 . 2 3 6 3 . 7 1 6 0 . 0 2 6 0 . 7 2 7 0 . 0 2 2 2 2 1 0 0 0 . 2 5 5 3 . 7 7 9 0 . 0 2 3 0 . 7 5 2 0 . 0 4 9 2 3 0 0 . 0 4 9 0 . 0 8 1 0 0 . 0 5 3 0 . 0 0 0 2 3 0 0 . 0 3 2 0 . 0 6 4 0 0 . 0 4 0 0 . 0 0 5 2 3 0 0 . 0 4 2 0 . 0 2 6 0 . 0 0 6 0 . 1 4 0 0 . 0 0 2 2 3 1 0 . 2 3 1 1 . 6 7 9 0 . 0 0 4 0 . 4 4 6 0 . 0 3 2 2 3 1 0 . 2 3 1 1 . 6 9 1 0 . 0 0 8 0 . 9 8 4 0 . 0 4 2 2 3 1 0 . 2 1 6 1 . 7 5 0 0 . 0 0 6 0 . 8 0 4 0 . 0 2 8 2 3 3 0 . 6 5 9 5 . 9 5 4 0 . 0 0 3 1 . 0 6 7 0 . 0 4 3 2 3 3 0 . 5 4 0 4 . 7 0 5 0 . 0 0 4 1 . 1 5 8 0 . 0 2 6 2 3 3 0 . 5 6 9 4 . 8 4 1 0 . 0 0 3 1 . 9 9 5 0 . 0 4 9 2 3 7 0 . 3 0 0 5 . 3 8 6 0 3 . 1 4 9 0 . 0 5 4 2 3 7 0 . 2 0 0 4 . 8 8 3 0 1 . 0 0 6 0 . 0 4 5 2 3 7 0 . 3 5 7 5 . 6 1 5 0 1 . 2 7 0 0 . 0 3 9 2 3 2 1 0 . 3 1 7 3 . 7 5 1 0 1 . 1 3 0 0 . 0 2 2 2 3 2 1 0 . 2 3 4 3 . 6 6 1 0 . 0 2 4 1 . 9 1 4 0 . 0 4 9 2 3 2 1 0 . 3 7 7 4 . 5 5 4 0 . 0 0 8 1 . 7 9 7 0 . 0 4 9 2 3 1 0 0 0 . 2 0 2 2 . 7 1 9 0 . 0 1 5 0 . 3 1 2 0 . 0 1 7 2 3 1 0 0 0 . 2 1 7 3 . 0 4 4 0 . 0 2 0 0 . 2 7 5 0 . 0 5 1 2 3 1 0 0 0 . 2 6 3 3 . 4 3 4 0 . 0 6 9 0 . 9 5 6 0 . 0 5 1 2 4 0 0 . 0 4 2 0 . 0 4 4 0 0 0 . 0 0 1 2 4 0 0 . 0 5 0 0 . 2 7 8 0 0 . 0 8 7 0 . 0 0 5 2 4 0 0 . 0 8 7 0 . 3 0 5 0 0 . 0 8 8 0 . 0 0 6 2 4 1 0 . 2 1 7 1 . 6 7 5 0 . 0 0 4 0 . 4 1 9 0 . 0 0 4 T a b l e A — 1 7 C o n t . 3 1 2 M T D A c e L a c P r o E t h a n o l B u t 2 4 1 0 . 2 5 7 2 . 2 4 6 0 . 0 0 8 0 . 6 0 5 0 . 0 6 4 2 4 1 0 . 3 2 6 2 . 5 9 1 0 . 0 0 6 0 . 9 4 2 0 . 0 6 6 2 4 3 0 . 4 2 8 5 . 2 9 6 0 1 . 2 5 6 0 . 0 4 8 2 4 3 0 . 5 5 0 6 . 0 4 6 0 . 0 0 5 1 . 2 5 6 0 . 0 5 7 2 4 3 0 . 5 9 1 5 . 6 7 4 0 . 0 0 2 1 . 3 1 9 0 . 0 4 7 2 4 7 0 . 3 0 0 4 . 7 1 6 0 1 . 7 7 7 0 . 0 7 7 2 4 7 0 . 4 5 1 4 . 8 2 8 0 2 . 5 0 7 0 . 0 5 0 2 4 7 0 . 3 3 4 5 . 0 2 3 0 2 . 3 1 6 0 . 0 7 3 2 4 2 1 0 . 3 7 5 4 . 7 7 8 0 2 . 1 7 6 0 . 0 5 7 2 4 2 1 0 . 2 4 0 3 . 8 2 5 0 . 0 3 2 2 . 0 4 9 0 . 0 6 4 2 4 2 1 0 . 2 3 4 4 . 1 1 8 0 . 0 5 6 2 . 7 4 2 0 . 0 5 5 2 4 1 0 0 0 . 2 4 3 3 . 4 8 9 0 . 0 4 7 0 . 2 5 8 0 . 0 6 0 2 4 1 0 0 0 . 2 6 0 3 . 3 5 5 0 . 0 1 2 0 . 4 4 5 0 . 0 7 0 2 4 1 0 0 0 . 2 7 9 3 . 5 9 2 0 . 0 4 6 0 . 5 8 9 0 . 0 6 8 A b b r e v i a t i o n s : M = s t a g e o f m a t u r i t y ( 1 = 9 0 d ; 2 = 1 1 0 d ) , T = t r e a t m e n t ( 1 , c o n t r o l ; 2 , e n z y m e . 3 , i n o c u l a n t . 4 E + I ) , A c e a c e t i c a c i d , L a c = l a c t i c a c i d , P r o = p r o p i o n i c a c i d . B u t = b u t y r i c a c i d 3 1 3 T a b l e A - 1 8 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t 1 1 0 d i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 4 ) T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l . A r a b . F r u c t o s e 1 0 7 . 8 2 6 1 0 0 . 0 8 6 9 5 0 4 . 0 1 5 9 1 0 6 . 0 5 5 8 0 . 0 8 7 1 8 0 . 0 9 3 1 1 0 3 . 7 3 4 1 1 0 7 . 6 6 6 1 0 . 0 8 8 5 3 0 . 1 0 3 5 0 3 . 5 7 8 4 1 1 1 . 0 6 1 3 0 . 1 1 3 9 3 0 . 7 0 9 5 7 0 1 . 3 9 0 9 1 1 2 . 0 9 3 3 0 . 1 2 2 9 8 0 . 4 3 6 5 5 0 1 . 1 7 1 2 1 1 0 . 8 4 5 9 0 . 0 7 8 8 8 0 0 1 . 2 9 1 3 0 . 4 9 6 9 0 . 1 3 9 5 9 0 0 0 . 6 5 3 6 1 3 0 . 3 5 8 2 0 . 0 4 0 0 5 0 0 0 . 5 9 5 4 1 3 0 . 5 1 3 6 0 . 1 5 4 0 4 0 0 . 0 3 6 8 0 . 5 4 0 4 1 7 0 . 6 0 2 9 0 . 0 9 0 2 2 0 . 8 3 2 3 3 0 0 . 8 2 2 2 1 7 0 . 2 0 9 0 . 1 3 3 5 1 0 0 0 . 5 3 0 4 1 7 0 . 4 1 1 1 0 . 1 5 2 4 9 0 0 0 . 6 9 1 6 1 2 1 0 . 9 8 7 7 0 . 2 1 5 8 3 1 . 0 6 1 4 7 0 0 . 2 3 0 8 1 2 1 0 . 6 3 2 2 0 . 2 6 9 1 2 2 . 6 9 3 2 7 0 1 6 7 2 0 . 0 4 4 6 1 2 1 1 . 1 6 3 6 0 . 2 4 7 9 1 1 . 3 5 5 4 3 0 0 . 4 2 4 3 1 1 0 0 0 . 9 3 9 4 0 . 2 5 0 8 8 1 . 4 4 6 4 4 0 1 7 1 7 0 . 6 9 8 5 1 1 0 0 1 . 0 4 6 2 0 . 3 7 4 2 0 0 . 1 6 5 2 0 . 7 9 7 1 1 1 0 0 0 . 9 7 4 3 0 . 3 0 4 7 1 0 . 7 5 0 6 7 0 . 1 7 0 4 0 . 7 1 5 7 2 0 6 . 1 4 1 7 0 . 0 8 2 6 6 0 . 1 3 1 4 4 0 3 . 3 3 2 2 2 0 7 . 9 5 7 9 0 . 1 2 0 6 8 0 . 1 8 0 3 3 0 3 . 6 9 5 4 2 0 7 . 6 1 0 8 0 . 0 7 5 1 0 . 1 2 7 1 5 0 3 . 4 0 7 7 2 1 1 . 1 9 1 0 . 0 7 9 4 2 0 . 5 3 7 4 6 0 0 . 9 5 9 8 2 1 0 . 6 8 6 1 0 . 1 0 7 9 8 1 . 1 3 3 5 8 0 1 . 6 8 5 6 2 1 0 . 8 6 0 9 0 . 1 4 1 4 8 0 0 2 . 3 6 7 2 3 0 . 6 1 5 0 . 0 7 1 7 9 0 0 0 . 7 2 8 7 2 3 0 . 5 8 7 2 0 . 1 0 6 0 9 0 . 9 0 6 8 0 0 . 6 3 1 5 2 3 0 . 4 9 2 8 0 . 1 0 1 2 3 0 . 7 7 2 4 2 0 0 . 5 7 3 9 2 7 0 . 4 9 3 5 0 . 1 1 6 7 1 . 4 5 7 8 0 0 5 4 8 0 . 8 9 8 2 2 7 0 . 4 4 2 8 0 . 1 0 6 3 1 . 5 2 0 0 4 0 . 0 5 4 6 0 . 6 8 3 7 2 7 0 . 7 3 6 2 0 . 1 1 9 4 0 0 0 . 5 6 0 4 2 2 1 0 . 2 9 2 6 0 . 0 7 2 1 9 1 . 5 0 0 4 1 0 . 0 5 1 2 0 . 5 4 9 2 2 1 0 . 6 0 4 0 . 0 9 9 9 5 1 . 1 1 4 2 4 0 . 0 7 5 6 0 . 7 9 7 3 2 2 1 0 . 4 9 1 8 0 . 0 8 4 0 8 1 . 1 4 6 5 2 0 . 0 6 2 2 0 . 6 7 4 6 2 1 0 0 1 . 3 1 3 9 0 . 3 4 1 5 8 2 . 1 6 8 5 9 0 2 0 7 6 0 . 2 4 9 2 1 0 0 0 . 2 7 1 3 0 . 3 5 9 1 4 2 . 4 5 1 2 0 2 3 3 2 0 . 5 7 6 2 1 0 0 0 . 9 3 0 2 0 . 3 2 1 3 2 1 . 9 2 7 8 1 0 . 1 4 2 8 0 . 3 0 2 3 0 7 . 9 4 1 5 0 . 0 5 9 9 0 . 0 7 1 1 0 3 . 1 2 5 8 3 0 7 . 8 9 3 5 0 . 0 4 0 2 5 0 . 0 3 3 6 3 0 3 . 1 3 2 1 3 0 6 . 0 5 8 0 . 0 2 4 1 8 0 0 3 . 8 6 1 6 3 1 0 . 6 9 8 1 0 . 0 9 1 7 1 0 0 1 . 9 7 6 8 3 1 0 . 7 0 2 7 0 . 1 3 4 4 6 1 . 3 2 9 8 4 0 1 . 1 0 4 3 3 1 0 . 6 9 8 9 0 . 1 4 0 2 0 0 1 . 3 8 9 7 3 3 0 . 4 5 1 5 0 . 1 3 2 0 9 0 0 1 . 9 5 5 6 3 3 0 . 5 1 6 6 0 . 1 4 4 8 6 0 0 0 . 9 6 5 1 3 3 0 . 5 0 0 3 0 . 1 8 0 3 8 0 0 1 0 5 5 1 . 1 1 7 3 7 0 . 5 9 7 8 0 . 1 9 5 1 0 0 . 0 9 8 9 0 . 9 7 4 6 3 7 0 . 4 2 3 0 . 1 2 6 6 9 0 0 0 . 8 1 2 4 3 7 0 . 5 9 1 8 0 . 1 4 4 3 8 1 . 6 7 2 9 9 0 . 0 6 0 2 1 . 0 6 6 6 3 2 1 0 . 4 1 4 6 0 . 1 2 0 6 8 1 . 3 6 9 1 1 0 . 0 6 8 2 0 . 7 3 4 8 3 2 1 0 . 7 1 5 3 0 . 1 2 8 3 1 1 . 6 3 4 9 0 . 0 6 1 6 0 . 6 3 8 7 3 2 1 0 . 4 4 0 . 0 6 9 4 2 0 . 6 7 6 3 7 0 0 . 7 8 5 4 3 1 0 0 0 . 4 6 5 5 0 . 1 9 4 9 2 . 0 5 8 1 1 0 1 0 7 2 0 . 2 2 1 8 3 1 0 0 0 . 4 7 7 1 0 . 1 9 4 7 6 1 . 8 2 9 2 4 0 1 2 0 7 0 . 2 6 5 6 3 1 0 0 0 . 4 1 6 5 0 . 1 4 6 8 1 0 0 . 1 3 5 9 0 . 4 9 0 6 4 0 6 . 3 1 4 0 0 . 1 1 3 4 0 5 . 8 2 8 9 4 0 7 . 8 3 7 5 0 . 0 7 4 4 2 0 . 1 1 1 3 5 0 4 . 5 1 5 6 4 0 7 . 7 8 6 4 0 . 0 5 7 4 7 0 . 0 7 7 0 3 0 1 . 1 7 9 9 4 1 0 . 8 9 5 0 . 0 8 7 4 5 0 . 9 4 9 0 5 0 2 . 0 9 0 4 3 1 4 T a b l e A - 1 8 . C o n t . T r t D a y G l u c o s e X y l o s e G a l . A r a b . F r u c t o s e 4 1 0 . 9 0 3 1 0 . 0 7 2 5 3 0 . 3 6 3 7 4 0 1 . 2 1 4 8 4 1 0 . 6 5 1 0 . 1 1 2 9 1 1 . 3 6 6 3 8 0 . 0 7 8 8 1 . 4 6 6 4 4 3 0 . 2 5 2 0 . 0 4 5 7 9 0 0 1 . 5 5 1 6 4 3 0 . 3 1 4 4 0 . 0 9 8 3 9 0 0 1 . 4 8 4 4 3 0 . 5 6 6 4 0 . 0 9 3 8 0 . 8 8 7 3 2 0 . 0 6 1 9 1 . 5 8 5 8 4 7 0 . 9 2 4 7 0 . 0 9 7 0 4 0 . 5 0 8 6 9 0 . 1 0 4 1 1 . 3 5 3 3 4 7 0 . 8 4 5 8 0 . 0 9 6 4 4 0 . 3 5 0 1 1 0 . 0 7 8 4 0 . 9 6 5 5 4 7 0 . 4 8 6 9 0 . 1 1 4 6 7 1 . 4 0 6 8 3 0 . 0 8 7 9 0 . 8 0 2 3 4 2 1 1 . 0 5 2 1 0 . 1 0 5 6 9 0 . 4 8 0 7 9 0 . 1 0 7 9 0 . 9 6 7 4 2 1 0 . 8 0 1 6 0 . 1 2 6 7 6 0 . 7 5 1 0 9 0 . 0 9 8 8 1 . 1 7 6 4 4 2 1 0 . 2 0 7 3 0 . 0 9 6 1 0 . 8 3 3 2 0 . 1 1 3 7 0 . 9 3 3 7 4 1 0 0 0 . 4 3 1 7 0 . 1 5 0 1 2 1 . 7 2 0 0 3 0 . 1 3 1 4 0 . 1 8 4 9 4 1 0 0 0 . 5 4 0 . 1 7 5 3 8 1 . 4 6 7 9 0 . 1 5 2 4 0 . 1 3 9 5 4 1 0 0 0 . 3 3 6 4 0 . 1 8 8 8 9 1 . 4 9 1 2 5 0 . 1 6 4 4 0 . 1 4 4 8 A b b r e v i a t i o n s : D a y = D a y o f e n s i l i n g T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = a r a b i n o s e i n o c u l a n t , 4 = E + I ; G a l = g a l a c t o s e , A r a b = 3 1 5 T a b l e A - 1 9 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t ( g / 1 0 0 g D M ) i n f o r g a e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) M a t u r i t y T r t D a y N D F A D F H e m i C e l l u l o s e 9 0 1 0 6 6 . 5 7 3 4 0 . 1 3 6 2 6 . 4 3 8 3 2 . 1 4 8 9 0 1 0 6 5 . 3 6 9 3 9 . 9 9 2 2 6 . 3 7 7 3 1 . 6 7 1 9 0 1 0 6 7 . 3 4 4 4 1 . 3 8 7 2 5 . 4 5 7 3 4 . 5 4 7 9 0 2 0 6 4 . 5 3 3 3 8 . 0 5 4 2 6 . 4 7 9 2 8 . 9 8 0 9 0 2 0 6 4 . 8 9 4 3 8 . 7 7 4 2 6 . 1 2 1 3 2 . 0 3 0 9 0 2 0 6 5 . 7 1 6 3 8 . 8 3 8 2 6 . 8 7 8 3 1 . 8 5 7 9 0 3 0 6 3 . 1 8 7 3 7 . 3 3 3 2 5 . 8 5 5 2 9 . 7 7 4 9 0 3 0 6 5 . 0 4 5 3 8 . 8 8 2 2 6 . 1 6 4 3 1 . 4 3 8 9 0 3 0 6 6 . 8 6 7 3 8 . 8 7 5 2 7 . 9 9 3 3 1 . 7 1 1 9 0 4 0 6 6 . 9 3 4 3 9 . 9 5 8 2 6 . 9 7 7 3 2 . 9 7 7 9 0 4 0 6 6 . 1 4 0 4 0 . 9 5 8 2 5 . 1 8 3 3 3 . 5 1 2 9 0 4 0 6 7 . 5 5 3 4 2 . 2 6 8 2 5 . 2 8 6 3 6 . 4 1 0 9 0 1 1 0 0 6 4 . 7 6 2 4 2 . 1 1 9 2 3 . 6 4 4 3 4 . 4 0 6 9 0 1 1 0 0 5 7 . 8 5 1 4 3 . 4 3 5 2 4 . 4 1 6 3 3 . 3 5 5 9 0 1 1 0 0 6 3 . 0 8 8 4 0 . 8 1 7 2 4 . 2 7 1 3 4 . 1 8 3 9 0 2 1 0 0 6 1 . 7 9 2 3 9 . 2 4 8 2 2 . 5 4 5 3 2 . 9 5 0 9 0 2 1 0 0 6 2 . 8 3 4 3 8 . 9 4 6 2 3 . 8 8 9 3 2 . 4 1 1 9 0 2 1 0 0 6 3 . 7 3 1 3 9 . 7 3 3 2 3 . 9 9 8 3 3 . 5 2 0 9 0 3 1 0 0 6 4 . 9 8 1 4 0 . 2 5 6 2 4 . 7 2 5 3 3 . 9 1 8 9 0 3 1 0 0 6 4 . 0 6 6 3 9 . 3 8 6 2 4 . 6 8 1 3 1 . 7 1 8 9 0 3 1 0 0 6 3 . 7 0 4 3 9 . 2 6 9 2 4 . 4 3 5 3 1 . 4 6 6 9 0 4 1 0 0 6 3 . 2 9 4 3 9 . 0 5 3 2 4 . 2 4 1 3 3 . 2 6 5 9 0 4 1 0 0 6 2 . 6 6 8 3 8 . 2 4 3 2 4 . 4 2 6 3 2 . 3 7 8 9 0 4 1 0 0 6 3 . 7 6 8 3 8 . 7 7 8 2 4 . 9 9 0 3 2 . 0 2 9 1 1 0 1 0 6 4 . 4 7 3 5 . 9 5 2 8 . 5 2 3 1 . 2 2 1 1 0 1 0 6 7 . 3 9 3 8 . 6 2 2 8 . 7 7 3 8 . 6 2 1 1 0 1 0 6 6 . 5 4 3 7 . 8 5 2 8 . 6 9 3 7 . 8 5 1 1 0 2 0 7 1 . 0 9 4 2 . 2 2 2 8 . 8 9 4 2 . 2 1 1 0 2 0 6 9 . 8 1 4 1 . 0 5 2 8 . 7 6 4 1 . 0 5 1 1 0 2 0 6 6 . 6 6 3 8 . 3 4 2 8 . 3 2 3 8 . 3 4 1 1 0 3 0 6 6 . 7 4 3 8 . 3 6 2 8 . 3 7 3 8 . 3 6 1 1 0 3 0 6 6 . 1 4 3 7 . 7 4 2 8 . 4 1 3 7 . 7 4 1 1 0 3 0 6 9 . 0 7 3 8 . 2 0 3 0 . 8 8 3 8 . 2 1 1 0 4 0 6 9 . 2 4 3 8 . 0 4 3 1 . 2 3 8 . 0 4 1 1 0 4 0 6 6 . 7 7 3 7 . 9 2 2 8 . 8 5 3 7 . 9 2 1 1 0 4 0 7 2 . 4 3 4 5 . 2 9 2 7 . 1 4 4 5 . 2 9 1 1 0 1 1 0 0 6 4 . 2 3 9 . 4 6 2 4 . 7 5 3 9 . 4 6 1 1 0 1 1 0 0 6 9 . 6 2 4 4 . 2 1 2 5 . 4 1 4 4 . 2 1 1 1 0 1 1 0 0 6 4 . 7 2 3 9 . 8 2 2 4 . 9 3 9 . 8 2 1 1 0 2 1 0 0 6 1 . 8 2 3 8 . 0 7 2 3 . 7 5 3 8 . 0 7 1 1 0 2 1 0 0 6 0 . 1 3 5 . 9 6 2 4 . 1 4 3 5 . 9 6 1 1 0 2 1 0 0 6 5 . 5 4 4 3 . 4 8 2 2 . 0 6 4 3 . 4 8 1 1 0 3 1 0 0 6 4 . 1 4 2 . 8 2 2 1 . 2 8 4 2 . 8 2 1 1 0 3 1 0 0 6 2 . 1 5 3 7 . 4 3 2 4 . 7 2 3 7 . 4 3 1 1 0 3 1 0 0 6 5 . 9 1 4 0 . 5 2 2 5 . 3 9 3 0 . 5 2 1 1 0 4 1 0 0 6 1 . 7 9 3 7 . 2 2 2 4 . 5 7 3 7 . 2 2 1 1 0 4 1 0 0 6 2 . 4 6 3 4 . 7 7 2 7 . 6 9 3 4 . 7 7 1 1 0 4 1 0 0 6 3 . 1 5 3 3 . 9 6 2 9 . 1 9 3 3 . 9 6 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t ; 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t . 4 = E + I , D a y = d a y o f e n s i l i n g H e m i = h e m i c e l l u l a s e a a a d O O ‘ - d d N d d d d N w w h # d m a d a d m m m fl fl d O a N ~ N O ‘ - l - N N ~ N N - N w w 9 4 N b N N N N m m m O N N V N O w w w w O ‘ - d N w N w w w w 1 w 5 # 0 N h 0 V w m w m w w w m m fl a e e e fl o w O w O w b h a ' - ' - e m m d k o G N o h N h h a a w w ¢ $ 1 b 0 a h h # 1 U ) 0 3 # 0 3 1 6 T a b l e A - 2 0 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d t e m p e r a t u r e i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 4 ) . q 3 D a y p H T e m 4 . 1 9 3 0 4 . 1 4 2 8 . 8 8 8 . 2 9 . 4 4 4 2 8 . 8 8 8 2 8 . 8 8 8 3 0 4 . 3 3 1 . 1 1 1 4 . 2 5 3 0 . 5 5 5 3 0 2 8 . 8 8 8 3 0 2 9 . 4 4 4 2 8 . 8 8 8 2 8 . 8 8 8 2 8 . 8 8 8 2 8 . 8 8 8 2 9 . 4 4 4 2 9 . 4 4 4 2 8 . 8 8 8 3 0 3 1 . 1 1 1 3 0 3 3 2 . 2 2 2 . 2 5 3 1 . 1 1 1 . 3 1 . 1 1 1 3 0 2 9 . 4 4 4 2 9 . 4 4 4 2 8 . 8 8 8 2 8 . 8 8 8 4 . 4 5 2 9 . 4 4 4 4 . 6 5 2 8 . 8 8 8 4 . 1 4 2 8 . 8 8 8 4 . 1 2 2 8 . 8 8 8 3 1 . 1 1 1 3 4 . 4 4 4 3 5 . 5 5 5 3 4 . 4 4 4 3 5 . 5 5 5 3 3 . 3 3 3 3 1 . 1 1 1 3 2 . 2 2 2 3 1 . 1 1 1 3 1 . 1 1 1 3 0 3 1 . 1 1 1 3 0 2 8 . 8 8 8 2 9 . 4 4 4 2 9 . 4 4 4 3 0 . 5 5 5 3 1 . 1 1 1 3 6 . 6 6 6 . 3 4 . 4 4 4 5 . 6 3 5 . 5 5 5 5 . 9 5 3 4 . 4 4 4 . 3 4 . 4 4 4 3 4 . 4 4 4 3 3 . 3 3 3 3 2 . 2 2 2 3 1 . 1 1 1 3 0 . 5 5 5 0 1 a ? ? ? o o d # # e o e u e e m — l a s + 9 3 1 7 T a b l e A - 2 0 . C o n t . T r t D a y p H T o m 4 7 5 . 9 3 1 . 1 1 1 4 7 6 . 0 5 3 0 A b b r e v i a t i o n s : T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e , 3 = i n o c u l a n t , 4 = E + l ( . ) N o d e t e r m i n e d T e m = t e m p e r a t u r e 3 1 8 T a b l e A - 2 1 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t ( C h a p t e r 4 ) M T D L a c A c e P r o p E t h a n o l B u t s o 1 0 2 . 9 0 2 0 . 7 1 4 0 . 0 2 0 0 . 0 2 0 0 . 0 5 3 9 0 1 o 2 . 5 8 8 0 . 8 0 3 0 . 0 4 0 0 . 2 8 3 0 . 0 7 6 s o 1 3 2 . 2 9 1 0 . 4 2 9 0 . 0 0 3 0 . 2 2 5 0 . 0 3 0 9 0 1 3 1 . 4 3 2 0 . 0 7 7 0 0 . 0 6 4 0 . 0 1 9 s o 1 7 0 . 9 4 8 0 . 2 9 2 0 . 0 0 6 0 . 5 9 0 0 . 0 1 5 s o 1 7 0 . 9 7 1 0 . 2 9 9 0 0 . 5 6 8 0 . 0 2 1 9 0 2 0 2 . 7 9 1 0 . 7 7 5 0 . 0 2 4 0 . 2 2 7 0 . 0 0 0 s o 2 0 1 . 8 7 5 0 . 7 3 3 0 . 0 2 0 0 . 3 9 6 0 . 0 9 2 s o 2 3 2 . 6 1 7 0 . 6 0 2 0 . 0 0 6 0 . 8 6 1 0 . 0 4 9 s o 2 3 2 . 2 6 5 0 . 5 9 7 0 . 0 0 1 0 . 5 2 5 0 . 0 5 4 s o 2 7 1 . 6 1 1 0 . 6 0 4 0 0 . 5 6 0 0 . 0 4 4 s o 2 7 1 . 4 0 7 0 . 2 5 8 0 . 0 0 2 0 . 3 6 5 0 . 0 3 1 9 0 3 0 3 . 2 8 7 0 . 3 1 9 0 . 0 3 9 0 . 2 9 6 0 . 0 1 9 s o 3 o 5 . 1 0 2 0 . 7 9 5 0 . 0 2 0 0 . 3 3 1 0 . 0 1 4 s o 3 3 0 . 6 6 4 0 . 4 0 3 0 . 0 1 0 0 . 5 2 4 0 . 0 4 3 s o 3 3 0 . 9 0 7 0 . 2 8 1 0 . 0 0 9 0 . 5 1 6 0 . 0 3 1 9 0 3 7 0 . 2 6 0 0 . 3 0 1 0 0 . 4 3 7 0 . 0 4 5 s o 3 7 0 . 1 1 5 0 . 2 8 2 0 0 . 1 7 2 0 . 0 4 1 s o 4 0 4 . 2 6 3 0 . 7 8 2 0 . 0 2 1 0 . 4 0 1 0 . 0 6 5 s o 4 0 4 . 2 2 4 0 . 7 9 3 0 . 0 2 0 0 . 3 2 8 0 . 0 3 6 s o 4 3 0 . 5 5 3 0 . 3 7 4 0 . 0 1 0 0 . 4 3 0 0 . 1 8 9 s o 4 3 0 . 6 0 3 0 . 4 3 0 0 . 0 0 8 0 . 3 3 1 0 . 1 2 1 s o 4 7 0 . 0 5 6 0 . 3 3 7 0 . 0 0 5 0 . 3 6 2 0 . 1 7 0 9 0 4 7 1 . 3 7 5 0 . 2 8 4 0 . 0 0 1 1 . 1 5 7 0 . 0 6 1 1 1 0 1 0 3 . 0 5 7 0 . 1 4 9 0 . 0 2 2 0 . 6 2 2 0 . 0 9 2 1 1 0 1 0 3 . 4 3 1 0 . 2 4 3 0 . 0 3 2 0 . 9 5 5 0 . 0 5 4 1 1 0 1 3 2 . 1 4 0 0 . 0 8 6 0 . 0 0 1 0 . 1 6 8 0 . 0 9 4 1 1 0 1 3 2 . 0 4 8 0 . 1 6 5 0 . 0 0 1 0 . 2 5 1 0 . 0 3 4 1 1 0 1 7 1 . 1 4 3 0 . 0 7 2 0 . 0 0 1 0 . 1 6 4 0 . 0 4 8 1 1 0 1 7 2 . 2 6 7 0 . 1 6 5 0 . 0 0 1 0 . 2 3 9 0 . 0 6 7 1 1 0 2 0 3 . 3 4 6 0 . 3 6 6 0 . 0 3 5 0 . 7 2 7 0 . 0 3 0 1 1 0 2 0 3 . 7 1 6 0 . 2 3 6 0 . 0 2 6 0 . 7 2 7 0 . 0 2 2 1 1 0 2 3 1 . 8 7 2 0 . 0 6 9 0 . 0 0 2 0 . 2 1 5 0 . 0 6 1 1 1 0 2 3 2 . 2 0 2 0 . 0 9 5 0 . 0 0 1 0 . 0 8 3 0 . 1 0 7 1 1 0 2 7 2 . 5 0 3 0 . 1 4 4 0 . 0 0 1 0 . 1 8 5 0 . 0 2 5 1 1 0 2 7 0 . 3 2 5 0 . 0 3 3 0 . 0 0 3 0 . 1 5 6 0 . 0 2 8 1 1 0 3 o 2 . 7 1 9 0 . 2 0 2 0 . 0 1 5 0 . 3 1 2 0 . 0 1 7 1 1 0 3 0 3 . 0 4 4 0 . 2 1 7 0 . 0 2 0 0 . 2 7 5 0 . 0 5 1 1 1 0 3 3 0 . 4 8 7 0 . 1 3 6 0 . 0 0 2 0 . 4 2 2 0 . 0 4 8 1 1 0 3 3 0 . 0 9 2 0 . 1 6 3 0 . 0 0 4 0 . 0 9 0 0 . 0 4 1 1 1 0 3 7 3 . 1 2 1 0 . 1 2 2 0 . 0 0 2 0 . 1 4 1 0 . 0 6 3 1 1 0 3 7 0 . 0 7 6 0 . 1 0 2 0 . 0 0 2 0 . 1 8 4 0 . 0 6 5 1 1 0 4 0 3 . 4 8 9 0 . 2 4 3 0 . 0 4 7 0 . 2 5 8 0 . 0 6 0 1 1 0 4 0 3 . 5 5 5 0 . 2 6 0 0 . 0 1 2 0 . 4 4 5 0 . 0 7 0 1 1 0 4 3 2 . 9 2 1 0 . 1 1 4 0 . 0 0 1 0 . 0 7 2 0 . 0 8 7 1 1 0 4 3 0 . 2 0 7 0 . 1 4 7 0 . 0 0 1 0 . 0 6 8 0 . 0 2 7 1 1 0 4 7 0 . 3 2 1 0 . 0 4 4 0 . 0 0 7 0 . 1 3 4 0 . 0 8 2 1 1 0 4 7 0 . 0 6 4 0 . 1 0 5 0 . 0 0 1 0 . 1 4 1 0 . 0 6 0 A b b r e v i a t i o n s : M = s t a g e o f m a t u r i t y , T = t r e a t m e n t , D = d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e , L a c = l a c t i c a c i d , A c e = a c e t i c a c i d , P r o = p r o p i o n i c . B u t = b u t u r y c a c i d . 3 1 9 T a b l e A - 2 2 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ( g l 1 0 0 g D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d a t t w o s t a g e s o f m a t u r i t y a n d e x p o s e d t o a i r i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 4 ) M T D G l u c o s e X y l o s e G a l a c t o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 9 0 1 0 0 . 2 8 9 6 0 . 1 7 0 4 0 . 0 8 6 0 . 0 4 2 7 0 . 1 0 1 2 9 0 1 0 0 . 4 2 1 1 0 . 2 4 3 2 0 . 2 2 6 4 0 . 0 9 8 0 . 0 7 1 8 9 0 1 3 0 . 6 6 7 7 0 . 1 1 0 2 0 . 1 2 2 0 . 1 0 8 5 0 . 1 5 1 9 9 0 1 3 0 . 8 7 8 8 0 . 3 4 5 3 0 . 3 8 2 4 0 . 1 5 5 2 0 . 2 1 7 3 9 0 1 7 0 . 7 1 0 3 0 . 2 9 3 7 0 . 3 2 5 2 0 . 1 4 9 5 0 . 2 0 9 3 9 0 1 7 0 . 5 4 9 5 0 . 1 3 7 4 0 . 1 5 2 2 0 . 0 1 3 9 0 . 0 1 9 4 9 0 2 0 0 . 2 1 2 1 0 . 1 6 2 8 0 . 1 2 7 5 0 . 0 8 6 2 0 . 0 7 6 8 9 0 2 0 0 . 3 3 2 7 0 . 1 9 7 9 0 . 1 4 8 6 0 . 1 4 4 1 0 . 0 6 8 6 9 0 2 3 0 . 5 9 0 5 0 . 1 7 4 1 0 . 1 9 2 8 0 . 0 6 7 4 0 . 0 9 4 4 9 0 2 3 0 . 0 6 3 3 0 . 1 7 2 3 0 . 1 9 0 8 0 . 0 2 7 7 0 . 0 3 8 7 9 0 2 7 0 . 6 4 9 1 0 . 0 9 9 4 0 . 1 1 0 . 0 8 1 6 0 . 1 1 4 2 9 0 2 7 0 . 1 9 0 2 0 . 3 2 4 5 0 . 3 5 9 4 0 0 9 0 3 0 0 . 3 7 6 1 0 . 1 0 3 8 0 . 0 9 1 9 0 . 0 8 8 4 0 . 3 9 6 4 9 0 3 0 0 . 2 5 7 5 0 . 1 5 3 7 0 . 1 2 5 8 0 . 1 2 0 9 0 . 1 0 8 4 9 0 3 3 0 . 2 5 3 2 0 . 1 7 3 1 0 . 1 9 1 7 0 . 2 3 3 9 0 . 3 2 7 6 9 0 3 3 0 . 2 2 2 0 . 1 7 0 8 0 . 1 8 9 2 0 . 0 9 3 8 0 . 1 3 1 4 9 0 3 7 0 . 1 1 2 0 0 0 . 0 9 3 3 0 . 1 3 0 7 9 0 3 7 0 . 2 0 8 7 0 . 1 0 9 8 0 . 1 2 1 6 0 0 9 0 4 0 0 . 2 9 0 4 0 . 3 1 2 1 0 . 1 8 6 6 0 . 1 7 5 0 0 . 2 2 0 0 9 0 4 0 0 . 1 4 8 9 0 . 2 0 4 8 0 . 1 5 9 4 0 . 1 5 8 0 0 . 2 0 8 8 9 0 4 3 0 . 6 7 4 4 0 . 1 3 3 9 0 . 1 4 8 2 0 . 0 8 8 3 0 . 1 2 3 6 9 0 4 3 0 0 . 2 8 6 8 0 . 0 9 2 8 0 0 9 0 4 7 0 . 2 9 5 4 0 . 0 1 0 0 0 0 . 0 4 0 4 0 . 0 5 6 6 9 0 4 7 0 . 1 2 1 1 0 . 0 9 2 5 0 . 1 0 2 4 0 . 0 2 7 9 0 . 0 3 9 1 1 1 0 1 0 0 . 9 3 9 1 0 . 2 5 0 8 0 . 0 0 0 0 . 1 6 7 0 . 7 9 7 1 1 1 0 1 0 0 . 9 7 4 3 0 . 3 7 0 0 0 . 7 5 0 6 0 . 1 7 0 4 0 . 7 1 5 7 1 1 0 1 3 0 . 5 5 6 1 0 . 0 6 5 2 0 . 0 7 2 2 0 . 1 0 0 9 0 . 3 4 3 3 1 1 0 1 3 0 . 5 8 4 4 0 . 0 3 5 0 . 0 3 8 8 0 . 1 0 5 7 0 . 3 4 6 5 1 1 0 1 7 0 . 5 4 0 3 0 0 0 . 1 0 3 2 0 . 2 1 2 2 1 1 0 1 7 0 . 6 2 3 6 0 . 0 5 3 6 0 . 0 5 9 4 0 . 1 3 2 6 0 . 3 1 3 9 1 1 0 2 0 1 . 3 1 3 9 0 . 3 4 1 5 1 . 9 2 7 0 0 . 2 0 7 6 0 . 2 4 9 1 1 0 2 0 0 . 2 7 1 3 0 . 3 5 9 1 2 1 6 8 0 0 . 2 3 3 2 0 . 5 7 6 1 1 0 2 3 0 . 8 2 1 9 0 . 0 7 0 6 0 . 0 7 8 2 0 . 1 4 1 1 0 . 1 7 8 1 1 0 2 3 0 . 7 5 2 1 0 . 0 8 0 8 0 . 0 8 9 4 0 . 1 3 6 7 0 . 1 0 5 5 1 1 0 2 7 0 . 8 0 1 8 0 0 0 . 1 8 5 9 0 . 0 6 5 8 1 1 0 2 7 0 . 6 5 5 7 0 0 0 . 0 7 4 7 0 1 1 0 3 0 0 . 4 6 5 0 . 1 9 4 9 1 . 0 5 8 0 . 1 0 7 2 0 . 2 2 1 8 1 1 0 3 0 0 . 4 7 7 1 0 . 1 9 4 7 1 . 2 2 9 0 . 1 2 0 7 0 . 2 6 5 0 1 1 0 3 3 0 . 4 6 3 4 0 0 0 0 . 1 0 0 8 1 1 0 3 3 0 . 4 4 9 1 0 0 0 . 0 7 5 8 0 . 0 4 7 5 1 1 0 3 7 0 . 5 1 1 3 0 0 0 0 1 1 0 3 7 0 . 7 7 2 6 0 . 0 7 5 0 . 0 8 3 1 0 . 1 1 4 9 0 . 1 0 6 1 1 0 4 0 0 . 4 3 1 7 0 . 1 5 0 2 1 . 0 2 0 0 . 1 5 2 4 0 . 1 3 9 5 1 1 0 4 0 0 . 5 4 0 0 0 . 1 7 5 4 1 . 4 6 7 0 . 1 6 4 4 0 . 1 4 4 8 1 1 0 4 3 0 . 4 8 7 0 0 0 . 0 2 3 2 0 . 0 1 3 3 1 1 0 4 3 0 . 4 7 8 4 0 0 0 0 1 1 0 4 7 0 . 5 0 6 6 0 0 0 . 0 5 6 1 0 1 1 0 4 7 0 . 5 6 5 3 0 . 0 6 3 1 0 . 0 6 9 8 0 . 1 1 2 4 0 . 0 8 6 9 A b b r e v i a t i o n s : M = s t a g e o f m a t u r i t y , T = t r e a t m e n t , d = d a y o f a e r o b i c e x p o s u r e 3 2 0 T a b l e A - 2 3 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f p H a n d l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s . ( C h a p t e r 5 ) . R T r t D p H L A B 1 1 0 5 . 8 5 4 . 2 5 1 1 0 5 . 6 6 3 . 7 3 1 1 0 5 . 6 6 5 1 1 1 4 . 7 2 6 . 8 2 1 1 1 4 . 7 9 7 . 2 5 1 1 1 4 . 9 7 7 . 6 1 1 1 3 5 . 0 3 7 . 5 8 1 1 3 4 . 7 7 7 . 5 1 1 1 3 5 . 1 7 . 8 1 1 1 7 5 . 1 7 7 . 0 6 1 1 7 4 . 7 9 7 . 1 3 1 1 7 4 . 8 6 . 9 3 1 1 1 4 4 . 8 6 7 . 1 4 1 1 1 4 4 . 9 1 7 . 0 5 1 1 1 4 4 . 8 5 6 . 9 1 1 1 2 1 4 . 5 7 7 . 1 2 1 1 2 1 4 . 7 1 6 . 9 4 1 1 2 1 4 . 7 7 . 2 8 1 1 1 0 0 4 . 8 1 7 . 0 2 1 1 1 0 0 4 . 9 2 6 . 6 9 1 1 1 0 0 4 . 7 3 7 . 3 6 1 2 0 5 . 7 4 . 6 5 1 2 0 5 . 6 3 5 . 6 6 1 2 0 5 . 6 9 5 . 1 5 1 2 1 4 . 8 3 8 . 7 3 1 2 1 4 . 5 2 9 . 0 9 1 2 1 4 . 4 6 9 . 0 1 1 2 3 4 . 4 2 8 . 3 3 1 2 3 4 . 4 5 8 . 3 5 1 2 3 4 . 4 7 8 . 5 9 1 2 7 4 . 4 1 7 . 4 4 1 2 7 4 . 4 7 . 4 3 1 2 7 4 . 2 9 7 . 4 9 1 2 1 4 4 . 6 5 7 . 0 7 1 2 1 4 4 . 6 8 7 . 2 1 1 2 1 4 4 . 7 1 7 . 0 1 1 2 2 1 4 . 7 5 7 . 4 9 1 2 2 1 4 . 6 6 7 . 4 3 1 2 2 1 4 . 6 6 7 . 1 9 1 2 1 0 0 3 . 8 5 6 . 5 7 1 2 1 0 0 4 . 8 6 . 5 8 1 2 1 0 0 4 . 7 8 6 . 6 9 2 1 0 5 . 6 7 3 . 8 2 2 1 0 5 . 9 7 3 . 3 8 2 1 0 5 . 9 4 . 6 6 2 1 1 5 . 2 2 7 . 0 4 2 1 1 5 . 5 7 6 . 9 1 2 1 1 5 . 5 4 6 . 8 2 2 1 3 5 . 6 7 . 0 3 2 1 3 5 . 6 6 7 . 1 1 2 1 3 5 . 4 9 7 . 0 7 2 1 7 5 . 4 6 7 . 0 9 2 1 7 5 . 1 5 8 . 0 8 2 1 7 5 . 4 1 7 . 8 1 2 1 1 4 5 . 2 8 7 . 3 1 2 1 1 4 5 . 2 5 6 . 9 4 2 1 1 4 5 . 2 4 7 . 3 1 3 2 1 T a b l e A — 2 3 . C o n t . R T r t D p H L A B 2 1 2 1 5 . 7 2 7 . 2 1 2 1 2 1 4 . 7 1 7 . 4 1 2 1 2 1 4 . 8 2 7 . 6 2 1 1 0 0 5 . 0 3 6 . 5 3 2 1 1 0 0 4 . 9 7 6 . 3 8 2 1 1 0 0 4 . 9 3 6 . 3 6 2 2 0 5 . 8 8 5 . 4 4 2 2 0 5 . 8 5 5 . 2 1 2 2 0 5 . 8 4 5 . 4 9 2 2 1 4 . 5 5 8 . 6 4 2 2 1 4 . 3 3 8 . 6 6 2 2 1 4 . 7 1 8 . 7 6 2 2 3 4 . 6 4 7 . 4 7 2 2 3 4 . 4 8 7 . 5 3 2 2 3 5 7 . 4 3 2 2 7 4 . 7 6 7 . 9 7 2 2 7 4 . 4 7 . 9 8 2 2 7 4 . 4 2 7 . 9 2 2 1 4 4 . 4 3 6 . 1 2 2 1 4 4 . 3 6 5 . 9 2 2 1 4 4 . 4 2 6 . 2 6 2 2 2 1 4 . 1 4 6 . 7 1 2 2 2 1 3 . 9 3 5 . 6 4 2 2 2 1 3 . 9 8 6 . 3 6 2 2 1 0 0 5 . 0 6 6 . 4 2 2 2 1 0 0 5 . 1 5 6 . 4 2 2 2 1 0 0 4 . 9 9 6 . 2 2 A b b r e v i a t i o n s : R = r e g r o w t h p e r i o d , 1 = 4 5 d , 2 = 1 1 0 d ; T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = E + I , L A B = l a c t i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a 3 2 2 T a b l e A — 2 4 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n e n d - p r o d u c t s ( g / 1 0 0 g D M ) i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s ( C h a p t e r 5 ) . R T D L a c A c e E t o h B u t 4 5 1 0 0 0 . 0 1 5 0 9 0 0 4 5 1 0 0 0 0 0 4 5 1 0 0 0 0 . 0 0 5 7 2 0 4 5 1 1 0 . 6 1 3 0 . 0 4 2 6 7 0 0 . 0 0 4 4 5 1 1 0 . 9 2 2 3 0 . 1 8 4 8 1 0 . 0 2 7 2 6 0 . 0 6 0 8 4 5 1 1 0 . 3 1 1 8 0 . 1 9 5 3 1 0 . 0 6 7 6 2 0 . 0 6 4 1 4 5 1 3 0 . 1 4 9 9 0 0 0 . 0 0 5 8 4 5 1 3 0 . 3 5 3 7 0 . 1 2 7 7 2 0 . 0 1 8 3 8 0 4 5 1 3 0 . 2 3 8 3 0 0 . 0 7 0 8 8 0 4 5 1 7 0 . 1 9 5 1 0 . 7 7 7 3 3 0 . 1 2 1 5 3 0 . 5 0 5 1 4 5 1 7 0 . 2 4 2 1 0 0 . 0 3 0 4 3 0 . 2 0 2 4 5 1 7 0 0 0 . 0 4 6 4 3 0 4 5 1 1 4 0 . 1 0 4 5 0 . 8 2 2 7 4 0 . 0 7 7 6 5 0 . 9 3 3 9 4 5 1 1 4 0 . 0 5 6 4 0 . 5 1 1 6 1 0 . 0 5 5 1 4 0 . 5 0 9 9 4 5 1 1 4 0 . 2 7 4 5 0 . 5 4 1 2 2 0 . 0 4 5 7 1 0 . 6 1 3 4 5 1 2 1 0 . 0 7 2 8 0 . 7 0 2 1 2 0 . 0 4 7 4 8 0 . 6 9 0 6 4 5 1 2 1 0 0 0 . 0 3 5 3 5 0 4 5 1 2 1 0 . 0 6 2 2 0 . 6 6 3 4 4 0 . 0 6 7 1 8 0 . 1 0 9 5 4 5 1 1 0 0 0 . 0 5 1 9 0 . 6 0 1 7 6 0 . 0 6 5 6 0 . 0 8 4 5 1 1 0 0 0 . 0 5 4 3 0 . 6 3 8 2 9 0 . 0 6 5 0 7 0 . 1 7 2 7 4 5 1 1 0 0 0 . 0 4 8 2 0 . 6 1 0 5 6 0 . 0 5 0 5 6 0 4 5 2 0 0 0 . 0 1 6 4 9 0 0 4 5 2 0 0 0 0 0 4 5 2 0 0 0 0 0 4 5 2 1 0 . 3 8 0 3 0 . 1 2 9 7 9 0 . 0 6 4 3 7 0 4 5 2 1 0 . 9 9 9 2 0 . 1 2 2 9 1 0 . 0 4 0 2 7 0 . 0 1 7 4 4 5 2 1 0 0 0 0 4 5 2 3 1 . 7 7 8 8 0 . 2 7 0 6 7 0 . 0 5 0 1 2 0 . 0 4 5 4 5 2 3 1 . 4 2 1 2 0 2 7 4 8 1 0 . 0 5 7 9 5 0 . 0 4 0 8 4 5 2 3 1 . 4 8 0 9 0 2 5 0 8 5 0 . 0 4 9 1 6 0 . 0 3 6 1 4 5 2 7 0 . 7 9 1 6 0 . 2 8 4 9 4 0 . 0 5 7 8 6 0 . 0 4 5 9 4 5 2 7 0 . 7 6 6 8 0 . 2 7 5 3 3 0 . 0 6 0 6 7 0 . 0 4 5 3 4 5 2 7 0 . 8 0 7 3 0 . 2 9 8 2 6 0 . 0 3 9 8 3 0 . 0 3 4 1 4 5 2 1 4 0 . 7 6 4 9 0 . 3 2 3 6 2 0 . 0 4 9 2 4 0 . 0 2 2 3 4 5 2 1 4 0 . 7 6 7 6 0 . 3 0 4 9 1 0 . 0 5 8 1 2 0 . 0 2 4 5 2 1 4 0 . 9 6 8 0 . 3 4 4 0 3 0 . 0 6 8 7 6 0 . 0 4 2 7 4 5 2 2 1 0 . 7 2 6 5 0 . 4 9 8 8 2 0 . 3 5 1 7 4 0 . 0 4 6 2 4 5 2 2 1 0 . 6 4 2 1 0 . 5 2 1 7 4 0 . 1 1 3 9 6 0 . 0 3 1 4 5 2 2 1 0 . 6 8 0 2 0 . 4 6 9 4 6 0 . 0 4 2 9 1 0 . 0 4 2 7 4 5 2 1 0 0 0 . 2 7 0 4 0 . 5 4 1 7 1 0 . 0 3 5 0 9 0 . 0 2 9 9 4 5 2 1 0 0 0 . 3 0 7 2 0 . 4 8 7 5 8 0 . 0 3 7 6 4 0 . 0 2 2 7 4 5 2 1 0 0 0 . 2 8 4 6 0 . 4 8 3 5 1 0 . 0 4 0 1 9 0 . 0 2 0 8 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 . 1 0 1 4 0 0 1 1 0 1 0 0 . 3 8 9 6 0 . 0 3 3 6 0 0 1 1 0 1 1 0 . 6 8 8 8 0 . 2 3 8 3 0 . 0 4 6 6 4 0 1 1 0 1 1 0 . 5 0 2 2 0 . 2 0 2 1 0 . 1 2 5 8 8 0 1 1 0 1 1 0 . 4 0 1 2 0 . 0 8 7 2 0 . 0 8 7 6 8 0 . 0 6 0 9 1 1 0 1 3 0 . 0 2 5 1 0 . 0 4 3 3 0 . 0 2 1 5 6 0 . 0 2 2 3 1 1 0 1 3 0 . 3 0 4 5 0 . 1 3 4 6 0 . 1 7 7 1 2 0 . 1 2 2 7 1 1 0 1 3 0 . 3 2 7 9 0 . 0 2 7 9 0 . 1 9 6 8 4 0 . 0 5 0 1 1 1 0 1 7 0 . 2 0 6 0 . 0 4 4 8 0 . 1 5 5 4 7 0 . 0 3 0 5 1 1 0 1 7 0 . 2 3 9 1 0 . 0 7 3 4 0 . 0 3 8 2 8 0 1 1 0 1 7 0 . 2 6 2 3 0 . 0 8 1 9 0 . 0 9 2 8 6 0 1 1 0 1 1 4 0 . 9 0 2 0 . 1 4 6 7 0 . 0 9 5 2 9 0 . 1 7 5 1 1 0 1 1 4 0 . 8 2 3 1 0 . 1 5 5 2 0 . 0 8 3 6 7 0 . 1 4 1 4 1 1 0 1 1 4 0 . 8 2 1 0 . 1 5 0 4 0 . 0 9 1 3 6 0 . 1 4 2 7 1 1 0 1 2 1 0 . 2 7 1 0 . 0 7 4 6 0 . 0 7 2 1 3 0 . 0 2 3 2 1 1 0 1 2 1 0 . 2 3 8 6 0 . 0 3 8 1 0 . 0 5 2 9 9 0 . 0 2 2 1 1 1 0 1 2 1 0 . 2 2 5 9 0 . 0 4 7 3 0 . 0 6 5 1 1 0 . 0 2 1 6 1 1 0 1 1 0 0 0 . 1 5 7 0 . 0 3 6 6 0 . 0 2 2 4 0 . 0 1 1 4 1 1 0 1 1 0 0 0 . 1 3 3 1 0 . 0 1 6 2 0 . 0 2 7 7 5 0 . 0 2 2 3 1 1 0 1 1 0 0 0 . 1 0 8 6 0 . 0 2 4 9 0 . 0 2 6 0 8 0 . 0 2 1 3 T a b l e A - 2 4 . C o n t . 3 2 3 R T D L a c A c e E t o h B u t 1 1 0 2 0 0 . 0 2 4 3 0 0 0 1 1 0 2 0 0 . 0 1 7 7 0 . 0 1 8 7 0 0 1 1 0 2 0 0 . 0 3 9 5 0 . 0 1 5 4 0 0 1 1 0 2 1 0 . 3 9 1 9 0 . 0 9 2 0 0 1 1 0 2 1 0 . 9 7 8 3 0 . 1 0 . 0 1 8 9 7 0 1 1 0 2 1 0 . 8 5 8 9 0 . 1 0 2 8 0 . 0 5 9 8 5 0 . 0 5 1 5 1 1 0 2 3 1 . 1 4 2 5 0 . 1 6 5 7 0 . 0 8 1 3 3 0 . 0 8 0 8 1 1 0 2 3 1 . 4 1 4 9 0 . 1 2 6 1 0 . 0 7 1 0 5 0 . 0 7 2 2 1 1 0 2 3 1 . 1 5 9 8 0 . 1 2 9 5 0 . 0 7 1 0 5 0 . 0 6 7 8 1 1 0 2 7 0 . 3 5 3 0 0 0 . 0 1 1 2 1 1 0 2 7 0 . 8 9 3 9 0 . 1 1 7 9 0 . 0 7 9 8 2 0 . 0 3 2 5 1 1 0 2 7 1 . 3 5 7 0 . 1 6 4 5 0 . 0 7 0 4 6 0 . 0 4 3 2 1 1 0 2 1 4 1 . 3 9 2 8 0 . 1 1 6 3 0 . 0 4 3 1 3 0 . 0 4 3 1 1 1 0 2 1 4 0 . 9 6 8 1 0 . 0 8 9 0 . 0 7 3 4 7 0 . 0 3 2 1 1 1 0 2 1 4 1 . 1 3 7 9 0 . 0 6 6 6 0 . 0 5 7 9 2 0 . 0 2 6 9 1 1 0 2 2 1 0 . 6 9 1 5 0 . 0 6 8 6 0 . 0 3 3 1 8 0 . 0 0 6 6 1 1 0 2 2 1 0 . 6 3 7 4 0 . 0 6 7 5 0 . 0 4 6 5 6 0 1 1 0 2 2 1 0 . 4 0 8 9 0 . 0 4 3 3 0 . 0 4 8 9 0 . 0 1 9 3 1 1 0 2 1 0 0 0 . 2 0 7 9 0 . 0 3 7 4 0 . 0 3 1 4 3 0 . 0 1 4 1 1 1 0 2 1 0 0 0 . 1 5 7 0 . 0 5 4 9 0 . 0 3 9 1 2 0 . 0 1 3 1 1 1 0 2 1 0 0 0 . 0 9 6 7 0 . 0 2 4 3 0 . 0 5 2 7 4 0 . 0 1 3 5 A b b r e v i a t i o n s : R = r e g r o w t h p e r i o d , T = t r e a t m e n t ( 1 = c o n t r o l ; 2 = e n x y m e p l u s i n o c u l a n t ) , D = d a y o f e n s i l i n g , L a c = l a c t i c a c i d , A c e = a c e t i c a c i d . E t o h = e t h a n o l , B u t = b u t i r y c a c i d . 3 2 4 T a b l e A - 2 5 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f w a t e r s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 5 ) R T D G l u c o s e X y l o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 4 5 1 0 0 . 6 7 9 0 . 8 5 4 8 9 0 . 0 3 7 0 5 0 . 0 1 0 4 4 4 5 1 0 0 . 7 4 5 3 0 . 9 2 3 2 8 0 . 0 5 2 3 8 0 . 0 2 0 5 7 4 5 1 0 0 . 7 8 6 5 0 . 7 2 8 1 2 0 0 . 0 3 9 3 6 4 5 1 1 0 . 2 1 3 0 . 6 6 9 1 5 0 0 4 5 1 1 0 . 1 1 1 6 0 . 3 1 3 7 8 0 0 . 0 3 5 9 3 4 5 1 1 0 . 0 2 2 6 0 . 3 1 3 7 8 0 0 . 0 6 6 3 4 4 5 1 3 0 . 0 8 2 6 0 . 0 9 7 7 3 0 0 . 1 0 1 8 2 4 5 1 3 0 . 0 1 5 9 0 0 0 . 0 8 6 9 1 4 5 1 3 0 . 0 7 2 8 0 . 0 9 9 9 7 0 0 . 0 3 5 1 8 4 5 1 7 0 . 6 7 4 0 0 0 . 0 9 1 2 3 4 5 1 7 0 . 1 9 7 4 0 0 0 . 0 4 0 8 5 4 5 1 7 0 0 . 1 0 8 8 6 0 0 . 0 2 6 6 8 4 5 1 1 4 0 . 1 3 2 4 0 . 1 4 4 5 9 0 0 . 0 9 2 8 7 4 5 1 1 4 0 . 1 7 7 6 0 . 1 4 3 7 1 0 0 . 0 5 5 3 1 4 5 1 1 4 0 . 5 1 9 9 0 . 1 5 3 9 6 0 0 . 0 1 9 5 3 4 5 1 2 1 0 . 2 0 3 0 0 0 . 0 3 6 8 2 4 5 1 2 1 0 0 0 . 1 2 2 2 1 0 . 0 9 3 4 7 4 5 1 2 1 0 . 0 2 3 4 0 0 0 . 0 2 9 6 7 4 5 1 1 0 0 0 . 0 4 6 8 0 0 . 1 0 0 6 0 . 0 1 9 2 3 4 5 1 1 0 0 0 . 0 3 9 5 0 . 0 0 4 3 9 0 . 0 4 8 5 5 0 . 0 3 1 3 1 4 5 1 1 0 0 0 . 0 2 1 2 0 . 0 1 2 1 1 0 . 0 5 0 8 9 0 . 0 1 6 1 4 5 2 0 0 . 8 3 8 8 0 . 9 5 6 6 0 0 . 1 4 5 9 5 4 5 2 0 0 . 6 9 2 5 0 8 7 3 5 9 0 0 . 0 5 0 2 4 4 5 2 0 0 . 5 9 1 4 0 . 7 5 6 4 0 o 4 5 2 1 0 . 1 3 3 5 0 . 1 6 5 9 7 0 0 . 0 5 8 5 9 4 5 2 1 0 . 1 2 7 6 0 . 1 4 7 9 1 0 0 . 0 4 6 3 6 4 5 2 1 0 . 1 5 7 8 0 . 1 5 7 9 6 0 0 . 0 8 9 4 5 2 3 0 . 1 2 4 8 0 . 1 4 1 7 6 0 0 . 1 1 4 3 4 4 5 2 3 0 . 1 2 0 2 0 . 1 5 2 3 0 0 . 0 4 4 7 2 4 5 2 3 0 . 1 5 2 0 0 0 . 0 6 3 5 1 4 5 2 7 0 0 . 1 2 2 8 2 0 0 4 5 2 7 0 . 1 2 9 3 0 . 1 5 1 9 1 0 0 . 0 8 0 0 5 4 5 2 7 0 . 0 1 4 4 0 0 0 . 0 8 5 2 7 4 5 2 1 4 0 . 1 3 5 0 . 1 5 6 9 9 0 0 . 1 1 8 5 2 4 5 2 1 4 0 . 1 7 0 6 0 . 1 8 3 2 5 0 0 . 0 6 6 7 9 4 5 2 1 4 0 0 . 1 3 8 2 4 0 0 . 0 6 9 1 7 4 5 2 2 1 0 . 1 6 0 4 0 . 1 6 2 6 5 0 0 . 1 1 9 1 1 4 5 2 2 1 0 . 1 9 6 8 0 . 1 4 7 8 1 0 0 . 0 8 5 1 2 4 5 2 2 1 0 . 0 8 1 8 0 . 1 2 1 5 5 0 . 0 4 8 5 5 0 . 0 4 7 8 5 4 5 2 1 0 0 0 . 0 8 7 6 0 . 1 4 2 1 5 0 . 0 5 4 5 1 0 . 0 4 2 9 3 4 5 2 1 0 0 0 . 0 8 9 2 0 . 1 2 8 8 7 0 . 0 7 3 1 4 0 . 0 3 3 3 9 4 5 2 1 0 0 0 . 0 8 4 6 0 . 1 0 7 7 8 0 . 0 5 8 2 3 0 . 0 4 6 5 1 1 1 0 1 0 0 . 0 8 6 0 . 0 9 8 3 7 0 0 . 1 7 8 9 9 1 1 0 1 0 0 . 1 8 9 7 0 . 1 1 5 1 0 0 . 0 7 9 7 6 1 1 0 1 0 0 . 1 9 0 0 . 1 0 2 4 0 0 . 0 7 5 2 9 1 1 0 1 1 0 . 1 2 2 9 0 0 0 . 0 9 4 7 7 1 1 0 1 1 0 . 1 0 4 8 0 . 1 1 3 5 9 0 0 . 0 9 0 6 1 1 1 0 1 1 0 . 0 8 0 7 0 . 0 8 0 4 2 0 0 . 1 1 8 4 8 1 1 0 1 3 0 . 1 0 0 5 0 . 1 0 3 7 6 0 . 0 7 0 3 2 0 . 0 7 9 6 8 1 1 0 1 3 0 0 . 1 0 3 8 6 0 0 . 0 4 3 4 2 1 1 o 1 3 0 . 1 0 9 3 0 . 0 8 3 9 5 0 0 . 0 4 4 0 4 1 1 0 1 7 0 . 0 6 9 5 0 . 0 7 4 0 1 0 . 0 4 7 2 8 0 . 0 4 5 4 2 1 1 0 1 7 0 . 0 4 3 4 0 0 0 . 0 2 1 4 1 1 0 1 7 0 . 0 2 1 1 0 0 . 0 5 0 5 8 0 . 0 2 6 9 5 1 1 0 1 1 4 0 . 0 0 9 7 0 0 . 0 6 9 3 8 0 . 0 4 3 0 4 1 1 0 1 1 4 0 0 . 1 4 4 2 5 0 0 . 0 7 3 4 4 1 1 0 1 1 4 0 . 0 9 3 1 0 . 1 2 7 6 6 0 0 . 0 2 2 1 7 1 1 0 1 2 1 0 0 . 1 7 0 1 1 0 . 0 4 5 6 9 0 . 0 6 9 9 8 1 1 0 1 2 1 0 0 . 0 8 8 0 3 0 0 . 0 3 9 8 1 1 0 1 2 1 0 . 0 0 8 5 0 0 0 . 0 4 5 4 2 1 1 o 1 1 0 0 0 . 0 0 6 3 0 0 0 . 0 4 2 1 9 1 1 0 1 1 0 0 0 . 0 0 7 1 0 0 0 . 0 3 5 2 6 1 1 0 1 1 0 0 0 . 0 0 7 3 0 0 0 . 0 4 7 1 2 1 1 0 2 0 0 . 2 1 2 0 0 0 . 1 9 8 5 5 T a b l e A - 2 5 . C o n t . 3 2 5 R T D G l u c o s e X y l o s e A r a b i n o s e F r u c t o s e 1 1 0 2 0 0 . 1 8 3 1 0 0 0 . 0 7 4 2 1 1 1 0 2 0 0 . 0 3 1 0 . 1 1 8 0 3 0 . 0 6 3 4 4 0 . 0 7 9 9 9 1 1 0 2 1 0 . 0 7 2 5 0 . 0 8 5 0 6 0 0 . 0 6 7 5 9 1 1 0 2 1 0 . 0 8 1 6 0 . 1 0 0 4 3 0 0 . 0 8 3 4 5 1 1 0 2 1 0 . 0 2 7 3 0 . 0 9 3 7 3 0 0 . 0 9 1 9 2 1 1 0 2 3 0 . 0 9 6 1 0 . 1 3 0 4 3 0 0 . 0 5 5 8 1 1 1 0 2 3 0 0 . 0 6 3 9 8 0 0 . 0 8 8 8 4 1 1 0 2 3 0 . 0 9 7 6 0 . 0 7 8 3 5 0 0 . 0 5 1 1 2 1 1 0 2 7 0 . 0 1 5 6 0 . 0 9 8 1 1 0 0 . 0 3 5 3 4 1 1 0 2 7 0 . 0 2 9 6 0 . 0 7 1 4 9 0 0 . 0 6 5 8 2 1 1 0 2 7 0 . 1 4 7 9 0 . 1 6 4 8 7 0 0 . 0 8 3 9 9 1 1 0 2 1 4 0 . 0 7 9 3 0 . 1 2 4 9 9 0 0 . 0 7 1 1 4 1 1 o 2 1 4 0 . 1 0 4 2 0 . 0 8 0 7 2 0 0 . 0 7 3 6 8 1 1 0 2 1 4 0 . 1 1 1 3 0 . 1 5 4 1 8 0 . 0 7 3 0 1 0 . 0 8 2 9 1 1 1 0 2 2 1 0 . 0 8 0 6 0 . 0 9 8 1 6 0 0 . 0 6 4 7 5 1 1 0 2 2 1 0 . 0 8 5 1 0 . 1 0 0 1 3 0 0 . 0 6 8 9 1 1 0 2 2 1 0 . 1 6 8 1 0 . 1 5 8 3 1 0 . 0 7 9 6 1 0 . 0 8 3 4 5 1 1 0 2 1 0 0 0 . 0 8 5 4 0 . 1 8 0 1 3 0 1 1 7 1 0 . 1 6 3 9 8 1 1 0 2 1 0 0 0 . 0 8 7 7 0 . 1 3 1 3 1 0 . 1 0 5 0 7 0 . 1 4 7 1 4 1 1 0 2 1 0 0 0 . 0 8 7 6 0 . 1 4 2 3 4 0 . 0 8 9 9 6 0 . 1 4 0 8 8 A b b r e v i a t i o n s ; r e g r o w t h p e r i o d , T = t r e a t m e n t ( 1 = c o n t r o l , 2 = e n z y m e p l u s i n o c u l a n t ) , D = d a y o f e n s i l i n g 3 2 6 T a b l e A - 2 6 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t r u c t u r a l c a r b o h y d r a t e s i n J o h n s o n g r a s s e n s i l e d a t t w o r e g r o w t h p e r i o d s i n a t r o p i c a l e n v i r o n m e n t . ( C h a p t e r 5 ) R T r t D N D F H e m i . A D F C e l l u l o s e 4 5 1 0 7 0 . 1 1 0 3 2 . 9 0 9 3 7 . 2 0 0 9 1 3 3 . 1 3 7 4 5 1 0 6 8 . 6 2 6 3 1 . 2 6 2 3 7 . 3 6 4 0 5 3 2 . 9 7 6 4 5 1 0 6 8 . 8 1 2 2 9 . 8 1 8 3 8 . 9 9 3 8 3 3 2 . 5 1 7 4 5 2 0 6 6 . 4 1 5 2 7 . 8 2 3 3 8 . 5 9 2 0 8 3 3 . 4 7 9 4 5 2 0 6 6 . 7 1 3 2 8 . 6 6 9 3 8 . 0 4 4 1 3 3 3 . 6 9 1 4 5 2 0 6 8 . 2 8 1 2 8 . 6 2 1 3 9 . 6 5 9 1 1 3 4 . 6 0 8 4 5 1 1 0 0 6 5 . 0 6 5 2 4 . 5 1 4 4 0 . 5 5 1 0 4 3 2 . 2 1 4 4 5 1 1 0 0 6 8 . 1 0 1 2 5 . 1 9 2 4 2 . 9 0 9 3 0 3 6 . 2 4 1 4 5 1 1 0 0 6 7 . 0 2 3 2 4 . 4 6 4 4 2 . 5 5 8 8 8 3 6 . 1 7 0 4 5 2 1 0 0 6 6 . 1 2 4 2 6 . 1 9 0 3 9 . 9 3 4 1 8 3 2 . 7 5 2 4 5 2 1 0 0 6 6 . 7 0 0 2 5 . 6 2 9 4 1 . 0 7 1 4 2 3 5 . 1 2 5 4 5 2 1 0 0 6 6 . 0 5 8 2 6 . 0 8 9 3 9 . 9 6 8 5 9 2 9 . 3 6 7 1 1 0 1 0 7 2 . 0 5 5 3 3 . 6 2 5 3 8 . 4 2 9 3 4 3 2 . 7 8 8 1 1 0 1 0 7 0 . 6 7 5 2 9 . 3 6 1 4 1 . 3 1 3 1 6 3 5 . 2 6 3 1 1 0 1 0 7 0 . 5 5 2 3 1 . 0 4 9 3 9 . 5 0 2 5 2 3 3 . 3 0 5 1 1 0 2 0 6 9 . 5 9 5 2 7 . 6 1 6 4 1 . 9 7 8 8 3 3 5 . 5 7 8 1 1 0 2 0 6 8 . 5 7 5 2 7 . 0 8 9 4 1 . 4 8 6 0 1 3 5 . 1 6 7 1 1 0 2 0 6 9 . 9 6 7 2 7 . 2 4 5 4 2 . 7 2 1 1 3 3 3 . 9 9 6 1 1 0 1 1 0 0 7 0 . 6 7 6 2 7 . 0 1 5 4 3 . 6 6 0 9 5 3 1 . 0 7 3 1 1 0 1 1 0 0 6 9 . 6 0 9 2 5 . 3 7 4 4 4 . 2 3 4 8 8 3 4 . 8 4 3 1 1 0 1 1 0 0 7 1 . 4 2 5 2 6 . 4 0 0 4 5 . 0 2 4 9 2 3 7 . 4 2 7 1 1 0 2 1 0 0 6 2 . 4 0 8 2 3 . 1 5 4 3 9 . 2 5 4 3 8 2 8 . 4 9 0 1 1 0 2 1 0 0 7 6 . 9 9 8 2 8 . 9 2 0 4 8 . 0 7 8 0 9 3 7 . 7 8 7 1 1 0 2 1 0 0 7 0 . 4 2 2 2 7 . 1 2 1 4 3 . 3 0 0 8 3 3 5 . 9 1 5 A b b r e v i a t i o n s : R = r e g r o w t h p e r i o d ( d a y s ) , T r t = t r e a t m e n t , 1 = c o n t r o l , 2 = E + I ; D = d a y o f e n s i l i n g ; H e m i . = h e m i c e l l u l a s e 3 2 7 T a b l e A - 2 7 . D a t a u s e d f o r s t a t i s t i c s a n a l y s i s i n C h a p t e r 6 . F 8 E a p R e p N D F D A D F D H C D C E L D J 4 5 0 1 6 . 0 0 4 0 . 3 8 1 6 . 3 8 6 . 5 0 1 2 J 4 5 0 2 7 . 5 5 3 0 . 0 8 6 7 . 4 6 5 1 . 2 3 4 J 4 5 0 3 6 . 1 7 9 0 . 4 3 8 6 . 6 1 8 . 2 4 7 9 J 4 5 1 1 8 . 3 7 4 0 . 7 8 3 7 . 5 9 0 1 . 2 2 4 J 4 5 1 2 5 . 8 0 5 4 . 4 3 3 6 . 4 3 0 3 . 9 7 1 J 4 5 1 3 7 . 8 6 1 5 . 7 9 5 6 . 0 6 0 6 . 8 3 6 J 4 5 4 1 7 . 5 8 0 4 . 8 7 1 4 . 4 5 2 5 . 5 0 4 J 4 5 4 2 7 . 2 1 6 4 . 4 8 7 6 . 7 2 9 2 . 6 0 7 J 4 5 4 3 1 1 . 7 6 3 . 1 7 4 8 . 5 9 3 4 . 5 2 5 J 4 5 8 1 1 1 . 5 9 3 . 5 7 4 8 . 0 1 8 4 . 4 9 5 J 4 5 8 2 1 6 . 5 2 6 . 7 9 1 9 . 7 3 2 7 . 7 9 5 J 4 5 8 3 1 7 . 1 8 6 . 9 9 8 1 0 . 1 9 8 . 0 2 2 J 1 1 0 0 1 3 . 6 2 3 0 . 4 4 1 4 . 0 6 4 . 0 0 0 3 J 1 1 0 0 2 4 . 0 8 2 0 . 0 3 8 4 . 1 2 1 . 0 0 0 4 J 1 1 0 0 3 4 . 2 6 3 0 . 4 5 9 4 . 7 1 4 . 1 1 7 3 J 1 1 0 1 1 4 . 3 0 9 0 . 9 6 5 5 . 2 7 5 . 3 1 1 6 J 1 1 0 1 2 4 . 7 2 1 0 . 2 8 0 5 . 0 0 2 1 . 0 7 4 J 1 1 0 1 3 4 . 7 7 9 0 . 7 1 9 5 . 4 9 8 . 3 6 6 6 J 1 1 0 4 1 8 . 4 4 0 0 . 4 4 3 7 . 9 9 7 1 . 3 6 3 J 1 1 0 4 2 5 . 4 3 5 1 . 5 5 7 7 . 0 1 0 . 1 3 2 5 J 1 1 0 4 3 6 . 7 6 4 0 . 7 1 0 7 . 4 7 4 . 3 7 6 9 J 1 1 0 8 1 1 1 . 1 2 1 . 9 2 9 9 . 1 9 1 2 . 3 6 0 J 1 1 0 8 2 8 . 3 7 5 0 . 2 4 2 8 . 1 3 2 . 6 6 1 0 J 1 1 0 8 3 7 . 9 9 3 0 . 2 4 5 8 . 2 3 8 . 6 4 4 4 F 8 9 0 0 1 3 . 8 3 3 0 . 8 7 2 4 . 7 0 6 . 0 0 0 5 F 8 9 0 0 2 3 . 6 7 9 0 . 3 0 5 4 . 9 7 7 . 0 0 0 4 F 8 9 0 0 3 3 . 7 5 7 0 . 2 3 2 4 . 9 8 9 . 0 0 0 3 F 8 9 0 1 1 7 . 4 9 9 1 . 1 1 8 6 . 3 8 1 . 7 4 5 9 F 8 9 0 1 2 6 . 7 2 9 0 . 4 9 4 6 . 2 3 5 . 5 1 1 2 F 8 9 0 1 3 7 . 1 7 2 0 . 8 1 7 6 . 3 5 4 . 6 8 6 0 F 8 9 0 4 1 9 . 1 2 7 2 . 1 9 1 6 . 9 3 6 2 . 1 9 7 F 8 9 0 4 2 8 . 0 7 5 1 . 9 8 8 6 . 0 8 6 1 . 4 7 6 F 8 9 0 4 3 7 . 3 9 5 2 . 0 8 5 5 . 3 0 9 1 . 9 4 1 F 8 9 0 8 1 1 0 . 7 6 3 . 4 3 8 7 . 3 3 0 3 . 4 0 1 F 8 9 0 8 2 1 1 . 7 8 4 . 5 1 8 7 . 2 6 4 4 . 3 0 4 F 8 9 0 8 3 1 0 . 2 0 3 . 7 6 1 6 . 4 4 7 3 . 8 6 7 A b b r e v i a t i o n s : f o r a g e S p e c i e ; J 4 5 - J o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 4 5 d o f r e g r o w t h , J 1 1 0 - j o h n s o n g r a s s h a r v e s t e d a t 1 1 0 d o f r e g r o w t h , F 8 9 0 - f o r a g e s o r g h u m h a r v e s t e d a t 9 0 d o f g r o w t h . E a r = e n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e . M u l t i p l e s o f r a t e r e c o m m e n d e d b y m a n u f a c t u r e r F 8 = R e p = N D F D A D F D H C D R e p l i c a t e = N D F d i s a p p e a r a n c e = A D F d i s a p p e a r a n c e h e m i c e l l u l a s e d i s a p p e a r a n c e C E L D = c e l l u l o s e d i s a p p e a r a n c e o o o h h h a a a ¢ ¢ ¢ o o o h h h u a a c a a o o o o o o o o o o o n ' m n ' n ' n ' n ' n ' n ' m m n ' n ' n ' 3 2 8 T a b l e A - 2 8 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n c h a p t e r 7 ( E x p . 1 ) E n z y m e a p p l i c a t i o n r a t e F o r a g e p r e p a r a t i o n N D F - D i s a p p e a r a n c e ‘ 6 . 6 4 5 . 1 7 6 . 9 1 8 . 4 5 7 . 6 9 7 . 0 8 9 . 1 0 1 0 . 3 9 1 0 . 8 5 1 1 . 6 6 1 1 . 0 6 1 0 . 2 9 3 . 2 7 4 . 5 0 2 . 7 3 3 . 5 5 5 . 3 0 4 . 0 8 4 . 1 8 5 . 5 0 4 . 5 0 4 . 7 0 4 . 8 3 8 . 1 9 A b b r e v i a t i o n s : F r e e z e - d r i e d 0 F a g / 1 0 0 9 D M 3 2 9 T a b l e A - 2 9 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 2 ) p H E n z y m e A p l i c a t i o n R a t e ' N D F D ” 3 . 5 0 3 . 6 0 1 3 . 5 0 4 . 2 0 2 3 . 5 0 3 . 0 1 8 3 . 5 1 8 . 8 4 3 3 . 5 1 8 . 9 1 4 3 . 5 1 9 . 4 8 6 3 . 5 2 9 . 3 4 9 3 . 5 2 1 0 . 3 8 3 . 5 2 1 1 . 2 4 3 . 5 4 1 0 . 1 1 3 . 5 4 1 0 . 5 4 3 . 5 4 1 0 . 7 0 3 . 5 8 1 1 . 6 0 3 . 5 8 1 3 . 2 6 3 . 5 8 9 . 5 7 2 4 . 5 0 6 . 7 3 5 4 . 5 0 5 . 3 8 6 4 . 5 0 8 . 4 3 3 4 . 5 1 1 0 . 9 4 4 . 5 1 1 0 . 7 8 4 . 5 1 1 3 . 3 4 4 . 5 2 1 1 . 1 6 4 . 5 2 1 2 . 5 2 4 . 5 2 1 1 . 5 1 4 . 5 4 1 0 . 2 3 4 . 5 4 5 . 4 0 7 4 . 5 4 1 1 . 5 3 4 . 5 8 1 0 . 7 4 4 . 5 8 1 1 . 1 3 4 . 5 8 1 0 . 9 3 5 . 5 0 6 . 7 2 6 5 . 5 0 6 . 1 8 1 5 . 5 0 6 . 3 5 0 5 . 5 1 1 1 . 6 4 5 . 5 1 1 0 . 7 0 5 . 5 1 1 2 . 3 1 5 . 5 2 1 1 . 9 2 5 . 5 2 1 1 . 1 3 5 . 5 2 1 0 . 4 9 5 . 5 4 1 1 . 5 4 5 . 5 4 1 1 . 4 5 5 . 5 4 1 1 . 7 0 5 . 5 8 1 1 . 3 0 5 . 5 8 1 1 . 3 5 5 . 5 8 1 0 . 9 4 N D F D = N D F d i s a p p e a r a n c e a = m u l t i p l e s o f r a t e r e c o m m e n d e d b y m a n u f a c t u r e r b = N D F d i s a p p e a r a n c e ( g / 1 0 0 g D M ) 3 3 0 T a b l e A - 3 0 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 3 ) R a t i o E n z y m e A p l i c a t i o n r a t e ( g / t o n D M ) N D F D 2 : 1 0 4 . 7 7 2 2 : 1 0 3 . 7 2 8 2 : 1 0 5 . 7 4 1 2 2 1 2 7 . 6 3 3 2 : 1 2 6 . 7 1 1 2 : 1 2 5 . 8 1 8 2 : 1 5 6 . 7 2 0 2 : 1 5 6 . 2 7 5 2 : 1 5 6 . 0 7 2 2 : 1 1 0 7 . 0 8 4 2 : 1 1 0 6 . 2 8 5 2 : 1 1 0 6 . 6 7 0 4 : 1 0 4 . 7 2 8 4 : 1 0 3 . 7 2 8 4 : 1 0 5 . 7 4 1 4 : 1 2 6 . 2 6 5 4 : 1 2 9 . 6 8 8 4 : 1 2 6 . 7 5 7 4 : 1 5 6 . 3 4 4 4 : 1 5 6 . 4 0 1 4 : 1 5 6 . 6 8 6 4 : 1 1 0 5 . 8 8 5 4 : 1 1 0 5 . 8 4 5 4 : 1 1 0 7 . 1 3 4 6 : 1 0 4 . 7 7 2 6 : 1 0 3 . 7 2 8 6 : 1 0 5 . 7 4 1 6 : 1 2 6 . 5 2 6 6 : 1 2 8 . 1 6 7 6 2 1 2 5 . 4 6 7 6 : 1 5 6 . 8 0 8 6 : 1 5 8 . 5 2 9 6 : 1 5 7 . 2 3 4 6 : 1 1 0 5 . 7 6 1 6 : 1 1 0 7 . 1 3 3 6 : 1 1 0 6 . 8 7 5 A b b r e v i a t i o n : N D F D = N e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r d i s a p p e a r a n c e 3 3 1 T a b l e A - 3 1 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 4 ) E n z y m e A p l i c a t i o n R a t e N D F D ' 0 6 . 0 3 5 0 6 . 9 1 6 0 5 . 8 1 8 . 0 8 6 . 7 2 0 . 0 8 6 . 2 7 5 . 0 8 6 . 0 7 2 . 1 6 7 . 0 8 4 . 1 6 6 . 2 8 5 . 1 6 6 . 6 7 0 a = N D F d i s a p p e a r a n c e ( g / 1 0 0 g D M ) T a b l e A - 3 2 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s i n C h a p t e r 7 ( E x p . 5 ) E n z y m e A p p l i c a t i o n R a t e N D F D ' 0 6 . 0 3 5 0 6 . 0 0 6 0 6 . 3 1 5 . 2 5 1 3 . 0 6 . 2 5 1 2 . 5 6 . 2 5 1 3 . 6 0 . 5 0 1 2 . 3 4 . 5 0 1 3 . 4 0 . 5 0 1 3 . 1 9 a = N D F d i s a p p e a r a n c e ( g / 1 0 0 g D M ) T a b l e A - 3 3 . 3 3 2 D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f e n z y m e c o m p a r i s o n i n C h a p t e r 7 E n z y m e P r e p a r a t i o n N D F D ' V i s c o z y m e 2 . 2 1 3 V i s c o z y m e 2 . 2 8 4 V i s c o z y m e 2 . 8 5 6 V i s c o z y m e 2 . 7 1 9 V i s c o z y m e 3 . 7 5 8 V i s c o z y m e 4 . 6 1 5 V i s c o z y m e 3 . 4 8 2 V i s c o z y m e 3 . 9 1 2 V i s c o z y m e 4 . 0 7 4 V i s c o z y m e 4 . 9 7 1 V i s c o z y m e 6 . 6 3 2 V i s c o z y m e 2 . 9 4 2 V i s c o z y m e 4 . 3 1 2 V i s c o z y m e 4 . 1 5 7 V i s c o z y m e 6 . 7 1 2 V i s c o z y m e 4 . 5 3 8 V i s c o z y m e 5 . 8 9 1 V i s c o z y m e 4 . 8 8 8 V i s c o z y m e 3 . 6 0 8 V i s c o z y m e 4 . 9 0 7 V i s c o z y m e 4 . 1 1 4 V i s c o z y m e 4 . 5 0 2 V i s c o z y m e 4 . 3 0 4 V i s c o z y m e 5 . 0 1 8 V i s c o z y m e 4 . 0 7 0 V i s c o z y m e 5 . 6 8 5 V i s c o z y m e 5 . 2 9 3 V i s c o z y m e 4 . 5 0 0 V i s c o z y m e 3 . 8 6 3 V i s c o z y m e 4 . 9 1 3 V i s c o z y m e 4 . 8 2 9 V i s c o z y m e 5 . 0 7 7 V i s c o z y m e 4 . 9 1 3 V i s c o z y m e 4 . 8 2 9 V i s c o z y m e 5 . 0 7 7 V i s c o z y m e 4 . 6 7 4 V i s c o z y m e 4 . 7 2 2 V i s c o z y m e 4 . 3 1 4 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 8 9 3 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 9 7 1 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 0 7 8 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 9 8 0 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 5 3 5 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 3 3 2 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 3 4 4 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 5 4 5 T a b l e A - 3 3 . C o n t . 3 3 3 E n z y m e P r e p a r a t i o n N D F D B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 9 3 0 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 5 2 5 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 4 . 9 4 8 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 0 1 7 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 6 0 4 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 6 6 1 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 9 4 6 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 1 4 5 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 1 0 5 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 3 9 4 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 7 8 6 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 3 . 4 2 7 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 0 . 7 2 7 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 0 6 8 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 3 . 7 8 9 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 4 9 4 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 0 2 1 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 3 9 3 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 2 . 1 3 5 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 0 . 0 3 2 B i o c e l l u l a s e A : B i o x y l a n a s e A 1 . 0 0 1 E c o g r a n 0 . 4 7 0 E c o g r a n 0 . 0 2 5 E c o g r a n 0 . 8 3 4 E c o g r a n 0 . 0 3 5 E c o g r a n 0 . 4 2 0 E c o g r a n 0 . 6 1 6 C e l l u l o s e G 7 . 9 5 6 C e l l u l o s e G 6 . 4 5 5 C e l l u l o s e G 7 . 4 9 8 C e l l u l o s e G 6 . 2 3 0 C e l l u l o s e G 7 . 0 3 5 C e l l u l o s e G 7 . 0 8 3 a = N D F d i s a p p e a r a n c e 3 3 4 T a b l e A - 3 4 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f f e r m e n t a t i o n - e n d p r o d u c t s ( g / 1 0 0 g D M ) a n d p H i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s ( C h a p t e r 8 ) E n z D a y A c e L a c P r o E t o h B u t p H 1 0 0 . 1 4 8 0 . 3 3 6 0 . 0 0 2 0 . 0 7 5 0 . 0 0 6 5 . 3 1 0 0 . 3 8 5 1 . 0 8 4 0 . 0 0 2 0 . 1 8 3 0 . 0 0 8 5 . 1 1 0 0 . 2 3 4 0 . 9 1 6 0 . 0 0 3 0 . 1 3 5 0 . 0 0 6 5 . 3 2 0 0 . 1 8 2 0 . 6 0 8 0 . 0 0 2 0 . 3 7 7 0 . 0 0 0 5 . 3 2 0 0 . 2 6 6 0 . 5 4 0 0 . 0 0 1 0 . 1 7 3 0 . 0 0 0 5 . 4 2 0 0 . 1 8 0 0 . 6 7 2 0 . 0 0 1 0 . 1 5 0 0 . 0 0 0 5 . 4 3 0 0 . 1 4 7 0 . 7 2 7 0 . 0 0 3 0 . 0 6 9 0 5 . 4 3 0 0 . 1 2 4 0 . 5 3 0 0 . 0 0 2 0 . 0 5 9 0 . 0 0 7 5 . 1 3 0 0 . 1 1 3 0 . 4 0 9 0 . 0 0 7 0 . 0 7 1 0 5 . 2 4 0 0 . 0 8 4 0 . 4 7 5 0 . 0 0 1 0 . 0 4 8 0 . 0 0 4 5 . 2 4 0 0 . 1 1 6 0 . 6 7 3 0 . 0 0 2 0 . 0 7 1 0 5 . 3 4 0 0 . 1 2 8 0 . 4 2 3 0 . 0 0 2 1 . 1 8 4 0 . 0 0 4 5 . 4 5 0 0 . 2 3 6 0 . 9 0 9 0 . 0 0 3 0 . 0 9 4 0 5 . 2 5 0 0 . 1 4 0 0 . 6 0 7 0 . 0 0 1 0 . 0 5 4 0 . 0 0 5 5 . 1 5 0 0 . 1 9 4 0 . 6 1 2 0 . 0 0 2 0 . 0 5 6 0 . 0 0 7 5 . 2 6 0 0 . 1 2 7 0 . 4 9 8 0 . 0 0 7 0 . 0 6 5 0 . 0 0 4 5 . 2 6 0 0 . 2 1 3 0 . 8 3 5 0 . 0 0 3 0 . 0 7 8 0 . 0 0 4 5 . 3 6 0 0 . 1 4 4 0 . 2 7 4 0 . 0 0 3 0 . 0 6 9 0 . 0 0 9 5 . 2 1 4 0 1 . 6 3 2 8 . 7 4 5 0 . 0 0 4 0 . 3 7 4 0 . 0 1 5 3 . 5 1 4 0 1 . 5 9 2 7 . 9 4 0 0 . 0 0 5 0 . 9 8 5 0 . 0 0 9 3 . 5 1 4 0 1 . 6 0 1 8 . 1 2 0 0 . 0 0 6 0 . 8 5 4 0 . 0 1 4 3 . 6 2 4 0 1 . 7 8 8 7 . 6 0 0 0 . 0 0 2 1 . 2 0 7 0 . 0 0 8 3 . 5 5 2 4 0 1 . 6 7 8 8 . 5 6 8 0 . 0 0 2 1 . 1 6 1 0 . 0 0 9 3 . 6 2 4 0 1 . 5 8 8 7 . 3 6 4 0 . 0 0 1 1 . 2 5 3 0 . 0 1 6 3 . 5 5 3 4 0 1 . 3 7 8 8 . 6 1 2 0 . 0 0 4 0 . 6 4 4 0 . 0 4 7 3 . 5 3 4 0 1 . 7 8 8 6 . 1 2 2 0 . 0 0 5 0 . 8 5 2 0 . 0 2 5 3 . 6 3 4 0 1 . 6 4 3 5 . 3 9 5 0 . 0 0 6 0 . 8 2 9 0 3 . 5 4 4 0 1 . 5 8 3 9 . 9 8 6 0 . 0 0 5 1 . 7 0 1 0 . 0 0 5 3 . 6 4 4 0 1 . 8 2 3 9 . 9 0 8 0 . 0 0 4 0 . 6 5 6 0 . 0 2 0 3 . 5 4 4 0 1 . 3 6 2 8 . 7 3 4 0 . 0 0 3 0 . 8 3 1 0 . 0 0 3 3 . 5 5 4 0 1 . 2 9 8 8 . 3 8 0 0 . 0 0 3 0 . 6 8 6 0 . 0 0 2 3 . 6 5 4 0 1 . 7 1 4 8 . 6 1 0 0 . 0 0 4 0 . 5 6 1 0 . 0 0 8 3 . 5 5 4 0 1 . 7 8 2 8 . 0 1 2 0 . 0 0 0 0 . 4 4 8 0 . 0 0 5 3 . 5 5 6 4 0 1 . 5 7 7 7 . 3 7 1 0 . 0 0 2 0 . 7 5 2 0 . 0 0 2 3 . 5 6 4 0 1 . 6 5 8 5 . 5 2 9 0 . 0 0 5 0 . 8 4 2 0 . 0 0 4 3 . 6 6 4 0 1 . 3 2 4 8 . 0 8 4 0 . 0 0 6 0 . 9 3 2 0 . 0 0 2 3 . 6 1 1 0 0 1 . 3 2 8 2 . 9 3 5 0 0 . 9 1 0 0 . 0 0 1 3 . 7 0 1 1 0 0 1 . 8 0 9 7 . 8 6 4 0 . 0 0 3 0 . 3 4 9 0 . 0 1 5 3 . 6 1 1 0 0 1 . 9 3 1 8 . 0 6 2 0 . 0 0 4 0 . 5 7 3 0 . 0 0 4 3 . 7 5 2 1 0 0 1 . 8 5 0 6 . 3 8 3 0 . 0 0 5 1 . 1 0 3 0 . 0 1 3 3 . 7 2 1 0 0 1 . 6 7 2 5 . 6 0 6 0 . 0 0 6 1 . 0 0 3 0 . 0 0 8 3 . 6 5 2 1 0 0 1 . 8 1 7 6 . 0 3 3 0 . 0 0 5 0 . 8 4 1 0 . 0 0 6 3 . 6 5 3 1 0 0 1 . 5 8 1 8 . 3 9 4 0 . 0 0 5 0 . 6 9 8 0 . 0 3 1 3 . 6 5 3 1 0 0 1 . 2 8 1 7 . 4 5 7 0 . 0 0 2 0 . 4 3 5 0 . 0 5 0 3 . 5 3 1 0 0 1 . 3 8 7 7 . 6 1 4 0 . 0 0 7 0 . 5 9 7 0 . 0 2 1 3 . 5 4 1 0 0 1 . 2 6 8 7 . 1 9 8 0 . 0 0 2 0 . 4 7 5 0 . 0 0 7 3 . 5 4 1 0 0 1 . 4 0 2 6 . 7 3 3 0 . 0 0 6 0 . 7 3 6 0 . 0 0 7 3 . 5 4 1 0 0 1 . 3 2 9 8 . 8 6 0 0 . 0 0 5 1 . 6 7 8 0 . 0 0 9 3 . 4 5 5 1 0 0 1 . 2 8 4 7 . 9 7 9 0 . 0 0 0 0 . 6 0 3 0 . 0 0 7 3 . 6 5 1 0 0 1 . 2 3 9 7 . 7 6 3 0 . 0 0 8 0 . 9 4 9 0 . 0 1 0 3 . 6 5 5 1 0 0 1 . 1 3 5 6 . 3 2 2 0 . 0 0 7 0 . 5 4 5 0 . 0 1 8 3 . 5 6 1 0 0 1 . 4 1 6 3 . 2 1 8 0 . 0 0 4 0 . 4 8 4 0 . 0 0 6 3 . 6 5 6 1 0 0 1 . 9 9 8 6 . 8 8 9 0 . 0 0 3 0 . 5 0 5 0 . 0 0 3 3 . 5 6 1 0 0 1 . 1 6 5 7 . 3 0 5 0 . 0 0 5 0 . 8 0 8 0 . 0 1 5 3 . 5 5 A b b r e v i a t i o n s : E n z = e n z y m e , 1 = n o e n z y m e , 2 = V i s c o z y m e , 3 = E c o g r a m ( 1 X ) , 4 : E c o g r a m ( 2 X ) , 5 : C e l l u l a s e G ( 1 X ) , 6 = C e l l u l a s e G ( 2 X ) : L a c = l a c t i c a c i d , A c e = a c e t i c a c i d , P r o = p r o p i o n i c a c i d , E t o h = e t h a n o l , B u t = b u t y r i c a c i d . 3 3 5 3 3 6 T a b l e A - 3 6 . D a t a u s e d f o r a n a l y s i s o f s t u c t u r a l c a r b o h y d r a t e c o n t e n t s ( 9 / 1 0 0 9 D M ) i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d w i t h c o m m e r c i a l e n z y m e m i x t u r e s ( C h a p t e r 8 ) E n z D a y N D F H e m i A D F C e l l u l o s e 1 0 6 3 . 7 1 3 5 5 2 5 . 1 5 6 9 3 8 . 5 5 6 7 3 3 . 0 9 3 3 9 1 0 6 1 . 5 9 4 0 6 2 4 . 5 3 6 3 7 . 0 5 8 3 2 . 6 6 2 6 3 1 0 5 9 . 6 2 2 1 5 2 3 . 2 8 2 1 3 6 . 3 4 0 1 3 1 . 7 4 6 6 2 2 0 6 2 . 2 4 7 3 9 2 3 . 2 0 5 6 3 9 . 0 4 1 8 3 3 . 3 1 0 1 2 0 6 4 . 3 4 5 8 7 2 4 . 9 8 6 3 9 . 3 5 9 9 3 5 . 2 0 4 9 4 2 0 6 2 . 5 4 3 5 9 2 4 . 6 1 3 7 . 9 3 3 6 3 4 . 4 8 3 3 9 3 0 6 0 . 9 1 9 7 5 2 5 . 1 3 9 8 3 5 . 7 8 3 0 . 0 9 9 1 9 3 0 5 9 . 3 3 5 0 9 2 4 . 5 0 8 4 3 4 . 8 2 6 7 3 0 . 3 8 7 1 9 3 0 5 4 . 6 1 9 5 2 2 2 . 7 4 2 2 3 1 . 8 7 7 3 2 8 . 5 6 6 4 8 4 0 5 5 . 6 1 2 4 4 2 3 . 1 3 2 3 3 2 . 4 8 0 1 2 9 . 3 7 0 5 4 0 5 7 . 3 4 8 4 8 2 5 . 7 3 8 6 3 1 . 6 0 9 8 2 7 . 9 7 3 4 8 4 0 5 6 . 6 6 3 7 4 2 3 . 5 1 1 9 3 3 . 1 5 1 9 2 7 . 6 5 5 8 4 5 0 5 4 . 2 3 0 0 5 2 1 . 3 8 1 3 2 . 8 4 9 1 2 8 . 7 8 1 4 5 0 5 7 . 6 3 6 2 5 2 2 . 0 8 0 3 3 5 . 5 5 6 3 1 . 5 2 3 2 6 5 0 5 8 . 2 5 0 2 1 2 2 . 2 5 6 9 3 5 . 9 9 3 3 3 1 . 2 9 6 7 6 6 0 5 4 . 7 9 0 3 6 2 0 . 9 2 5 8 3 3 . 8 8 4 5 2 9 . 4 0 6 1 8 6 0 5 9 . 5 6 8 5 1 2 7 . 7 7 6 6 3 2 . 7 9 1 9 2 8 . 6 2 6 0 3 6 0 5 4 . 2 4 9 5 8 2 2 . 5 5 9 3 1 . 6 9 0 5 2 7 . 9 5 2 3 9 1 4 0 5 7 . 2 0 9 3 2 1 . 8 6 0 5 3 5 . 3 4 8 8 3 1 . 4 8 6 3 5 1 4 0 5 7 . 9 5 1 3 2 2 2 . 4 3 4 1 3 5 . 5 1 7 2 3 1 . 1 7 6 4 7 1 4 0 5 9 . 0 9 4 2 3 2 2 . 5 7 1 2 3 6 . 5 2 3 3 2 . 4 6 8 9 6 2 4 0 5 4 . 5 0 3 2 2 2 0 . 5 8 6 1 3 3 . 9 1 7 1 2 8 . 2 9 5 2 1 2 4 0 5 9 . 4 5 2 0 5 2 2 . 5 2 4 5 3 6 . 9 2 7 6 3 3 . 4 2 4 6 6 2 4 0 5 4 . 3 5 6 1 9 2 1 . 9 7 3 4 3 2 . 3 8 2 8 2 9 . 3 7 3 6 9 3 4 0 5 9 . 5 7 5 1 7 2 5 . 1 6 0 5 3 4 . 4 1 4 6 2 9 . 4 7 4 7 2 3 4 0 5 7 . 4 3 5 2 2 1 . 2 8 1 9 3 6 . 1 5 3 3 3 2 . 6 1 3 9 5 3 4 0 5 5 . 3 2 4 5 1 9 . 4 4 0 3 3 5 . 8 8 4 2 3 1 . 9 2 4 7 2 4 4 0 5 8 . 7 6 2 1 6 2 1 . 5 9 1 5 3 7 . 1 7 0 6 3 3 . 3 5 1 0 2 4 4 0 5 7 . 9 0 7 8 7 2 1 . 6 8 9 1 3 6 . 2 1 8 8 3 2 . 0 9 2 1 3 4 4 0 5 6 . 7 8 6 5 1 8 . 9 2 4 9 3 7 . 8 6 1 6 3 4 . 1 6 7 3 2 5 4 0 5 7 . 1 1 5 9 3 2 2 . 4 6 9 4 3 4 . 6 4 6 6 3 0 . 0 0 9 4 3 5 4 0 5 8 . 8 9 0 8 3 2 2 . 7 6 5 2 3 6 . 1 2 5 7 3 1 . 3 9 4 2 2 5 4 0 5 8 . 5 2 7 6 1 2 2 . 0 8 5 9 3 6 . 4 4 1 7 3 2 . 4 9 4 8 9 6 4 0 5 5 . 7 8 1 2 2 2 0 . 2 6 9 5 3 5 . 5 1 1 8 3 1 . 4 0 9 6 1 6 4 0 5 8 . 0 2 0 3 4 2 2 . 0 4 6 2 3 5 . 9 7 4 2 3 1 . 6 7 0 5 8 6 4 0 5 8 . 2 2 6 8 3 2 . 1 2 5 2 6 . 1 0 1 8 2 0 . 4 9 0 2 7 1 1 0 0 6 0 . 7 2 0 9 6 2 4 . 1 1 2 8 3 6 . 6 0 8 1 3 2 . 3 1 2 2 9 1 1 0 0 5 9 . 0 8 7 3 2 2 3 . 2 9 1 2 3 5 . 7 9 6 1 3 2 . 2 7 9 7 3 1 1 0 0 5 8 . 8 0 5 4 2 2 2 . 8 4 4 8 3 5 . 9 6 0 6 3 0 . 9 7 2 9 1 2 1 0 0 5 6 . 4 9 6 9 8 2 5 . 9 7 0 7 3 0 . 5 2 6 3 2 7 . 5 2 3 7 3 2 1 0 0 5 5 . 8 7 4 0 9 1 9 . 1 6 8 1 3 6 . 7 0 6 3 3 . 3 7 0 8 1 2 1 0 0 5 6 . 6 2 9 3 5 2 3 . 1 5 8 5 3 3 . 4 7 0 8 2 8 . 8 7 4 4 8 3 1 0 0 5 5 . 3 3 0 0 5 2 0 . 8 4 7 3 3 4 . 4 8 2 8 2 9 . 3 3 9 9 3 1 0 0 5 9 . 1 6 9 2 9 2 2 . 1 6 8 3 3 7 . 0 0 1 3 2 . 6 2 4 9 6 3 1 0 0 5 9 . 8 6 4 0 8 2 4 . 7 7 5 1 3 5 . 0 8 9 3 0 . 6 1 1 6 9 4 1 0 0 5 8 . 2 2 0 8 7 2 2 . 2 0 1 1 3 6 . 0 1 9 8 3 1 . 1 1 5 7 6 4 1 0 0 5 7 . 4 5 3 9 7 2 2 . 9 2 6 2 3 4 . 5 2 7 8 3 0 . 4 0 9 8 2 4 1 0 0 5 6 . 5 9 1 4 5 2 2 . 7 2 3 7 3 3 . 8 6 7 8 2 9 . 3 7 4 5 1 5 1 0 0 5 9 . 5 8 1 9 5 2 4 . 1 6 4 9 3 5 . 4 1 7 1 3 1 . 0 9 9 8 2 5 1 0 0 5 8 . 8 2 0 0 6 2 3 . 0 4 5 1 3 5 . 7 7 5 3 1 . 8 8 1 1 9 5 1 0 0 5 8 . 1 2 5 6 2 2 3 . 3 1 0 1 3 4 . 6 1 5 6 3 0 . 4 6 8 5 9 6 1 0 0 5 5 . 8 9 0 5 8 2 1 . 9 4 6 6 3 3 . 9 4 4 2 9 . 7 1 0 7 7 6 1 0 0 5 6 . 3 4 3 5 9 2 1 . 4 5 2 2 3 3 . 8 9 1 4 2 9 . 6 2 8 1 9 6 1 0 0 5 8 . 2 1 5 0 5 2 2 . 6 5 2 1 3 5 . 5 6 2 9 3 0 . 1 5 7 5 A b b r e v i a t i o n s : E n z = e n z y m e , 1 = n o e n z y m e , 2 ( 1 X ) , 6 = C e l l u l a s e G ( 2 X ) , H e m i . = h e m i c e l l u l a s e V i s c o z y m e , 3 = E c o g r a m ( 1 X ) , 4 = E c o g r a m ( 2 X ) , 5 = C e l l u l a s e G A P P E N D I X - B L I T E R A T U R E C I T E D A g u i l e r a , G R . 1 9 7 5 . D y n a m i c s o f t h e f e r m e n t a t i o n o f t r o p i c a l g r a s s s i l a g e - l . E l e p h a n t g r a s s ( P . p u r p u r e u m ) w i t h o u t a d d i t i v e s . C u b a n J . o f A g r i c . S c i . 9 : 2 2 7 . A O A C . 1 9 9 0 . O f f i c i a l M e t h o d s o f A n a l y s i s . 1 5 ‘ “ . E d . A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l A n a l y t i c a l C h e m i s t s , A r l i n g t o n , V A . B e c k e r , R . B . , J . M . W i n g , P . T . D . A r n o l d , J . T . M c C a l l , a n d C . J . W i l c o x . 1 9 7 0 . S i l a g e i n v e s t i g a t i o n i n F l o r i d a . B u l l . 7 3 4 . F l o r i d a A g r i c . E x p . S t a . , G a i n s v i l l e . B a r n n e t t , A . J . 1 9 5 4 . S i l a g e F e r m e n t a t i o n . A c a d e m i c P r e s s , N Y . B r a d y , C . J . 1 9 6 6 . O n t h e n i t r o g e n n u t r i t i o n o f s i l a g e s t r a i n s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a . A u s t . J . B i o l . S c i . 1 9 : 1 0 5 . B a t h u r s t , N D . a n d M i t c h e l l , K . J . 1 9 5 8 . T h e e f f e c t o f l i g h t a n d t e m p e r a t u r e o n t h e c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f p a s t u r e p l a n t s . N e w Z e a l a n d J . A g r i c . R e s . 1 : 5 4 0 . B e c k , T . 1 9 7 8 . F e r m e n t a t i o n o f S i l a g e - a r e v i e w . M . C . M c C u l l o u g h , E d . N a t i o n a l F e e d I n g r e d i e n t s A s s o c i a t i o n , I o w a . B e r t i n , G . , P . H e l l i n g s , a n d M . V a n b e l l e . 1 9 8 5 . T h e e f f e c t o f c e l l u l o l y t i c e n z y m e p r e p a r a t i o n s a s i n v i t r o i m p r o v e m e n t f o r f o r a g e d i g e s t i b i l i t y . P r o c . 1 5 t h I n t . G r a s s l a n d C o n g r e s s , K y o t o . p p . 9 3 9 . B l a c k , J . R . , L . 0 . E l y , M . E . M c C u l l o u g h , a n d E M . S u d w e e k s . 1 9 8 0 . E f f e c t o f s t a g e o f m a t u r i t y a n d s i l a g e a d d i t i v e s u p o n t h e y i e l d o f g r o s s a n d d i g e s t i b l e e n e r g y i n s o r g h u m s i l a g e . J . A n i m . S c i . 5 0 : 6 1 7 . B o l s e n , K . K . , C . L i n , B . E . B r e n t , A . M . F e y e r h e r m , J . E . U r b a n , a n d W . R . A i m u t i s . 1 9 9 2 . E f f e c t s o f s i l a g e a d d i t i v e s o n t h e m i c r o b i a l s u c c e s s i o n a n d f e r m e n t a t i o n p r o c e s s o f a l f a l f a a n d c o r n s i l a g e s . J . D a i r y S c i . 7 5 : 3 0 3 6 . P i o n e e r H i - B r e d I n t e r n a t i o n a l , I n c . B u c h a n a n , R . E . a n d N E . G i b b o n s . ( E d s . ) . 1 9 7 4 . B e r g e y ' s M a n u a l o f D e t e r m i n a t i v e B a c t e r i o l o g y . W i l l i a m s a n d W i l k i n s , 8 t h e d . , B a l t i m o r e . 3 3 7 3 3 8 B u x t o n , D . R . a n d S . L . F a l e s . 1 9 9 4 . P l a n t e n v i r o n m e n t a n d q u a l i t y . I n : F o r a g e Q u a l i t y , E v a l u a t i o n , a n d U t i l i z a t i o n . G . C . F a h e y , J r . , M . C o l l i n s , D . R . M e r t e n s , a n d L E . M o s e r ( E d s ) . N a t i o n a l C o n f e r e n c e o n F o r a g e Q u a l i t y , E v a l u a t i o n , a n d U t i l i z a t i o n . U n i v e r s i t y o f N e b r a s k a , L i n c o l n . C a n a l e , A . , M . E . V a l e n t e , a n d A . C i o t t i . 1 9 8 4 . D e t e r m i n a t i o n o f v o l a t i l e c a r b o x y l i c a c i d s ( C 1 - C 5 i ) a n d l a c t i c a c i d i n a q u e o u s e x t r a c t s o f s i l a g e b y h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y . J . S c i . F o o d A g r i c . 3 5 : 1 1 7 8 . C a p i e l , M . a n d R . J . C a l v e s b e r t . 1 9 7 6 . O n t h e c l i m a t e o f P u e r t o R i c o a n d i t s A g r i c u l t u r a l W a t e r B a l a n c e . J . U n i v . P R . 6 0 ( 2 ) : 1 3 9 . C a s t l e , M E . a n d J . N . W a t s o n . 1 9 8 5 . S i l a g e a n d m i l k p r o d u c t i o n s t u d i e s w i t h m o l a s s e s a n d f o r m i c a c i d a s a d d i t i v e s f o r g r a s s s i l a g e s . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 0 : 8 5 . C a t c h p o o l e , V . R . 1 9 7 0 . L a b o r a t o r y e n s i l a g e o f t h r e e t r o p i c a l p a s t u r e l e g u m e - P h a s e o l u s a t r o p u r p u r e u s , D e s m o d i u m i n t o r t u m , a n d L o t o n o n i s b a i n e s i i . A u s t . J . E x p . A g r i c . a n d A n i m . H u s b . 1 0 : 5 6 8 . C a t c h p o o l e , V . R . a n d E . F . H e n z e l l . 1 9 7 1 . S i l a g e a n d s i l a g e m a k i n g f r o m t r o p i c a l h e r b a g e s p e c i e s . H e r b a g e A b s t r a c t s 4 1 : 3 C a t c h p o o l e , V . R . 1 9 7 2 . L a b o r a t o r y e n s i l a g e o f S e t a r i a s p h a c e l a t a c v . N a n d i a n d C h l o r i s g a y a n a c v . p i o n e e r a t a r a n g e o f d r y m a t t e r c o n t e n t s . A u s t . J . E x p . A g r i c . a n d A n i m H u s b . 1 2 : 2 6 9 . C h e n , J . , M . R . S t o k e s , a n d G R . W a l l a c e . 1 9 9 4 . E f f e c t s o f e n z y m e - i n o c u l a n t s y s t e m o n p r e s e r v a t i o n a n d n u t r i t i v e v a l u e o f h a y c r o p a n d c r o p s i l a g e . J . D a i r y S c i . 7 7 : 5 0 1 . C l e a r e , I V . , R . M . , J . L . F i r k i n s , F . V a n D e r B e e k , J . H . C l a r k , E . H . J a s t e r , G . C . M c C o y , a n d T . H . K l u s m e y e r . 1 9 9 0 . E f f e c t o f i n o c u l a t i o n o f w h o l e p l a n t c o r n w i t h P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i a n d L a c t o b a c i l / u s x y l o s u s o n p r e s e r v a t i o n o f s i l a g e a n d h e i f e r g r o w t h . J . D a i r y S i c . 7 3 : 7 1 1 . C o u r t i n , M . G . a n d S F . S p o e l t r a . 1 9 9 0 . A s i m u l a t i o n m o d e l o f t h e m i c r o b i o l o g i c a l a n d c h e m i c a l c h a n g e s a c c o m p a n y i n g t h e i n i t i a l s t a g e o f a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f s i l a g e . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 5 : 1 5 3 . C r o w d e r , L . V . a n d H . R . C h h e d a . 1 9 8 2 . T r o p i c a l G r a s s l a n d H u s b a n d r y . 1 " t e d . L o n g m a n I n c . N e w Y o r k , N . Y . 3 3 9 D a w s o n , T . E . 1 9 8 9 . E f f e c t s o f m i c r o b i a l i n o c u l a t i o n o n t h e s i l a g e q u a l i t y o f r o u n d b a l e b e r m u d a g r a s s s i l a g e . T h e s i s , M S . U n i v e r s i t y o f F l o r i d a . D a w s o n , T . E . 1 9 9 4 . P r o p i o n i c a c i d - p r o d u c i n g b a c t e r i a a s b i o i n o c u l a n t f o r t h e p r e s e r v a t i o n o f e n s i l e d h i g h - m o i s t u r e c o r n . D i s s e r t a t i o n , P h . D . M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y . D e i n u m , B . 1 9 8 4 . C h e m i c a l c o m p o s i t i o n a n d n u t r i t i v e v a l u e o f h e r b a g e i n r e l a t i o n t o c l i m a t e . I n : H . R i l e y a n d A . S k j e l v a g , E d s . T h e I m p a c t o f C l i m a t e o n G r a s s P r o d u c t i o n a n d Q u a l i t y . P r o c . 1 0 t h G e n e r a l M t g . E u r o p e a n G r a s s l . F e d e r a t i o n . N o r w a y . D e n n i s , S M . a n d C . Z i m m e r m a n . 1 9 8 9 . S e l e c t i o n o f s p e c i f i c s t r a i n s o f s i l a g e b a c t e r i a f o r d i f f e r e n t e n v i r o n m e n t a l n i c h e s . P r o c . S e c o n d F o r a g e S y m p o s i u m b y M i c r o b i a l G e n e t i c s . A D i v i s i o n o f P i o n e e r H i - B r e d l n t ' l , I n c . p p . 2 7 . E d w a r d s , R A . a n d P . M c D o n a l d . 1 9 7 8 . T h e c h e m i s t r y o f s i l a g e f e r m e n t a t i o n . I n : M . E . M c C u l l o u g h ( E d ) . F e r m e n t a t i o n o f S i l a g e a R e v i e w . N a t i o n a l F e e d I n g r e d i e n t s A s s o c i a t i o n . W e s t D e s M o i n e s , I A . p p 2 7 - 6 0 . E l y , L . 0 . , N . J . M o o n , a n d E M . S u d w e e k s . 1 9 8 2 . C h e m i c a l e v a l u a t i o n o f L a c t o b a c i l l u s a d d i t i o n t o a l f a l f a , c o r n , s o r g h u m , a n d w h e a t f o r a g e a t e n s i l i n g . J . d a i r y S c i . 6 5 : 1 0 4 1 . F i g u e r e i d o , M . a n d J . P . M a r a i s . 1 9 9 4 . T h e e f f e c t o f b a c t e r i a l i n o c u l a n t o n k i k u y o g r a s s q u a l i t y . J . A g r i c . S c i . , C a m b r . 1 2 2 : 5 3 . F e n t o n , M P . 1 9 8 7 . A n i n v e s t i g a t i o n i n t o s o u r c e s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a i n g r a s s s i l a g e . J . A p p l . B a c t . 6 2 : 1 8 1 . F i t z s i m o n s , A . a n d M . O ' C o n n e l l . 1 9 9 4 . C o m p a r a t i v e a n a l y s i s o f a m y l o l y t i c l a c t o b a c i l l i a n d L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a s p o t e n t i a l s i l a g e i n o c u l a n t s . F E M S M i c r o b . L e t t e r s 1 1 6 : 1 3 7 . F r e d e e n , A . H . a n d R . E . M c Q u e e n . 1 9 9 3 . E f f e c t o f e n z y m e a d d i t i v e o n q u a l i t y o f a l f a l f a / g r a s s s i l a g e a n d d a i r y c o w p e r f o r m a n c e . C a n . J . A n i m . S c i . 7 3 : 5 8 1 . G r a n t , M . A . , J . H . H a r r i s o n , S . R . R i n k , a n d K . A . L o n e y . 1 9 9 4 . N o v e l u s e o f b a c t e r i a f r o m p i c k l e f e r m e n t a t i o n a s a s i l a g e a d d i t i v e . 1 . p H a n d m i c r o b i a l a n a l y s i s . J . D a i r y S c i . 7 7 : 3 3 8 8 . 3 4 0 G r a y , M L . a n d A . H . K i l l i n g e r . 1 9 6 6 . L i s t e r i a m o n o c y t o g e n e s a n d I i s t e r i c i n f e c t i o n s . B a c t e r i o l o g i c a l R e v i e w . 3 0 : 3 0 9 . G i b s o n , T . , A . C . S t i r l i n g , R . M . K e d d i e , a n d R . F . R o s e n b e r g e r . 1 9 5 8 . B a c t e r i o l o g i c a l c h a n g e s i n s i l a g e m a d e a t c o n t r o l l e d t e m p e r a t u r e . J . G e n . M i c r o . 1 9 : 1 1 2 . G o e r i n g , H . K . a n d P . J . V a n S o e s t . 1 9 7 0 . F o r a g e f i b e r a n a l y s e s . A g r i c . H a n s b o o k 3 7 9 . A R S . U S D A , W a s h i n g t o n , D C . H a m i l t o n , R . J . , V . R . C a t c h p o o l e , L . J . L a m b o u r n e , a n d J D . K e r r . 1 9 7 8 . T h e p r e s e r v a t i o n o f a N a n d i S e r a t i a s i l a g e a n d i t s f e e d i n g v a l u e f o r d a i r y c o w s . A u s t . J . E x p . A g r i c . A n i m . H u s . 1 8 : 1 6 . H a r r i s o n , J . H . , S . D . S o d e r l u n d , a n d K . A . L o n e y . 1 9 8 9 . E f f e c t o f i n o c u l a t i o n r a t e o f s e l e c t e d s t r a i n s o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a a n d i n v i t r o d i g e s t i b i l i t y o f g r a s s - l e g u m e f o r a g e . J D a i r y S c i 7 2 : 2 4 2 1 . H a t f i e l d , R D . 1 9 8 9 . S t r u c t u r a l p o l y s a c c h a r i d e i n f o r a g e s a n d t h e i r d e g r a d a b i l i t y . A g r o n . J . 8 1 : 3 9 . H e n d e r s o n , A . R . , P . M c D o n a l d , a n d M K . W o o l f o r d . 1 9 7 2 . C h e m i c a l c h a n g e s a n d l o s s e s d u r i n g t h e e n s i l i n g o f w i l t e d g r a s s t r e a t e d w i t h f o r m i c a c i d . J . S c i . F o o d . A g r i c . 2 3 : 1 0 7 9 . H e n d e r s o n , A R . a n d P . M c D o n a l d . 1 9 7 7 . T h e e f f e c t o f c e l l u l a s e p r e p a r a t i o n s o n t h e c h e m i c a l c h a n g e s d u r i n g e n s i l a g e o f g r a s s i n l a b o r a t o r y s i l o s . J . S c i . F o o d a n d A g r i c . 2 6 : 6 5 3 . H e n d e r s o n , A . R . , J . M . E w a r t , a n d G M . R o b e r t s o n . 1 9 7 9 . S t u d i e s o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f c o m m e r c i a l s i l a g e s . J . S c i . F o o d A g r i c . 3 0 : 2 2 3 . H e n d e r s o n , M . S . a n d D . L . R o b i n s o n . 1 9 8 2 . E n v i r o n m e n t a l i n f l u e n c e s o n f i b e r c o m p o n e n t s c o n c e n t r a t i o n s o f w a r m - s e a s o n p e r e n n i a l g r a s s e s . A g r o n . J . 7 4 : 5 7 3 . H e n d e r s o n , A . R . , P . M c D o n a l d , a n d D . A n d e r s o n . 1 9 8 2 . T h e e f f e c t o f a c e l l u l a s e p r e p a r a t i o n d e r i v e d f r o m T r i c h o d e r m a v i r i d e o n t h e c h e m i c a l c h a n g e s d u r i n g e n s i l a g e o f g r a s s , l u c e r n e , a n d c l o v e r . J . S c i . F o o d A g r i c . 3 3 : 1 6 H e r o n , S . J . E . , R . A . E d w a r d s a n d P . M c D o n a l d . 1 9 8 8 . T h e e f f e c t s o f i n o c u l a t i o n , a d d i t i o n o f g l u c o s e a n d m i n c i n g o n f e r m e n t a t i o n a n d p r o t e o l y s i s 3 4 1 i n r y e g r a s s e n s i l e d i n l a b o r a t o r y s i l o s . A n i m . F e e d S c i a n d T e c h . 1 9 : 8 5 . H i l l , H . A . 1 9 8 9 . M i c r o b i a l e c o l o g y o f l a c t o b a c i l l i i n s i l a g e . I n : F o o d f o r T h o u g h t . P r o c . 2 " d F o r a g e S y m p . P i o n e e r H i - B r e d l n t ' l I n c . J o h n s t o n , I A . p p . 4 7 . H o f f m a n , P . C . , D . A . W e l c h , N . M . B r e h m , a n d T R . D r e n d e l . 1 9 9 5 . P o t e n t i a l o f c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s t o i m p r o v e d s i l a g e q u a l i t y . J . D a i r y S c i . 7 8 ( S u p p l . 1 ) : 2 7 0 . H o n n i n g , H a n d M K . W o o l f o r d . 1 9 7 9 . C h a n g e s i n s i l a g e o n e x p o s u r e t o a i r . I n : C . T h o m a s . ( E d ) . F o r a g e C o n s e r v a t i o n i n t h e 8 0 ' s . B r . G r a s s . S o c . O c c a s i o n a l S y m p . N o 1 1 , B r i g h t o n , U K . H o p k i n g , J R . a n d R N . B a s s . 1 9 8 7 . E n z y m e s - T h e i r c o n t r i b u t i o n a s a s i l a g e a d d i t i v e . P r o c . 8 t h S i l a g e C o n f e r e n c e . H u r l e y , E n g l . p p . 2 3 . H u n t , C . W . , P . F e n g , R . T r e a c h e r , a n d G . T . P r i t c h a r d . 1 9 9 5 . E f f e c t o f f i b r i l y t i c e n z y m e a d d i t i v e s o n i n v i t r o d e g r a d a b i l i t y o f a l f a l f a a n d t a l l f e s c u e . J . A n i m . S c i . 7 3 : 3 4 1 . ( A b s t r . ) . J a a k k o l a , 8 . , P . H u n t a n e n , a n d K . H i s s a . 1 9 9 1 . T h e e f f e c t s o f c e l l w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s o r f o r m i c a c i d o n f e r m e n t a t i o n q u a l i t y a n d o n d i g e s t i o n o n g r a s s s i l a g e b y c a t t l e . G r a s s F o r a g e S c i . 4 6 : 7 5 . J a s t e r , E . H . a n d K . J . M o o r e . 1 9 8 8 . F e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d f e e d i n g v a l u e o f e n z y m e t r e a t e d a l f a l f a h a y l a g e . J . D a i r y S c i . 7 1 : 7 0 5 . J a s t e r , E . H . a n d K . J . M o o r e . 1 9 9 0 . Q u a l i t y a n d f e r m e n t a t i o n o f e n z y m e - t r e a t e d a l f a l f a s i l a g e s a t t h r e e m o i s t u r e c o n c e n t r a t i o n s . A n i m . F e e d S c i . T e c h n o l . 3 1 : 2 6 1 . J e r g e n s , M . H . 1 9 9 3 . A n i m a l F e e d i n g a n d N u t r i t i o n . 7 " ‘ e d . K e n d a l l - H u n t P u b l . C o . J o n e s , G . M . , D . M . M o w a t t , J . | . E l l i o t , a n d E T . E l l i o t , a n d E T . M o r a n . 1 9 7 4 . O r g a n i c a c i d p r e s e r v a t i o n o f h i g h - m o i s t u r e c o r n a n d o t h e r g r a i n s a n d t h e n u t r i t i o n a l v a l u e : a r e v i e w . C a n . J . A n i m . S c i . 5 4 : 4 9 9 . J o n e s , B . A . , R . E . M u c k , a n d S C . R i c k e . 1 9 9 1 . S e l e c t i o n a n d a p p l i c a t i o n o f S t r e p t o c o c c u s b o v i s a s a s i l a g e i n o c u l a n t . A p p l . E n v . M i c r o b i o l . 5 7 : 3 0 0 0 . K o h n , R . A . a n d M S . A l l e n . 1 9 9 2 . S t o r a g e o f f r e s h a n d e n s i l e d f o r a g e s b y 3 4 2 f r e e z i n g a f f e c t s f i b r e a n d c r u d e p r o t e i n f r a c t i o n s . J . S c i . F o o d A g r i c . 5 8 : 2 1 5 K u n g , L . J r . a n d R . W . S t a n l e y . 1 9 8 2 . E f f e c t o f s t a g e o f m a t u r i t y o n t h e n u t r i t i v e v a l u e o f w h o l e - p l a n t s u g a r c a n e p r e s e r v e d a s s i l a g e . J . A n i m . S c i . 5 4 : 6 8 9 . K u n g , L . J r . , D . B . G r i e v e , J . W . T h o m a s , a n d J . T . H u b e r . 1 9 8 4 . A d d e d a m m o n i a o r m i c r o b i a l i n o c u l a n t f o r f e r m e n t a t i o n a n d n i t r o g e n o u s c o m p o u n d s o f a l f a l f a e n s i l e d a t v a r i o u s p e r c e n t s o f d r y m a t t e r . J . D a i r y S c i . 6 7 : 2 9 9 . K u n g , L . J r . , B . R . C a r m e a n , a n d R 8 . T u n g . 1 9 9 0 . M i c r o b i a l i n o c u l a n t o r c e l l u l a s e e n z y m e t r e a t m e n t o f b a r l e y a n d v e t c h s i l a g e h a r v e s t e d a t t h r e e m a t u r i t i e s . J . D a i r y S c i . 7 3 : 1 3 0 4 . K u n g , L . J r . , R . S . T u n g , K . G . M a c i o r o w s k i , K . B u f f u m , K . K n u t s e n , a n d W . R . A i m u t i s . 1 9 9 1 . E f f e c t s o f p l a n t c e l l - w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d c o m p o s i t i o n . J . D a i r y S c i . 7 4 : 4 2 8 4 . K u n g , J . R . , J . H . C h e n , E . M . K r e c k , a n d K . K n u t s e n . 1 9 9 3 . E f f e c t s o f m i c r o b i a l i n o c u l a n t o n t h e n u t r i t i v e v a l u e o f c o r n s i l a g e f o r l a c t a t i n g d a i r y c o w s . J . D a i r y S c i . 7 6 : 3 7 6 3 . L a n i g a n , G . W . 1 9 6 1 . S t u d i e s o n e n s i l a g e . I . A c o m p a r a t i v e l a b o r a t o r y s t u d y o f m o l a s s e s a n d s o d i u m m e t a b i s u l p h i t e a s a i d s t o t h e c o n s e r v a t i o n o f l u c e r n e . A u s t r . J . o f A g r i c . R e s . 1 2 : 1 0 2 3 . L e a t h e r w o o d , J . M . , R . D . M o c h i e , a n d W E . T h o m a s . 1 9 5 9 . C h e m i c a l c h a n g e s p r o d u c e d b y a c e l l u l a s e p r e p a r a t i o n a d d e d t o s i l a g e s . J . A n i m S c i . 1 8 : 1 5 3 9 . L i n , C . , K . K . B o l s e n , B . E . B r e n t , a n d D . Y . C . F u n g . 1 9 9 2 8 . E p i p h y t i c l a c t i c a c i d b a c t e r i a s u c c e s s i o n d u r i n g t h e p r e - e n s i l i n g a n d e n s i l i n g p e r i o d s o f a l f a l f a a n d m a i z e . J . A p p l . B a c t . 7 3 : 3 7 5 . L i n , C . , K . K . B o l s e n , B . E . B r e n t , R . A . H a r t , a n d J . T . D i c k e n s o n . 1 9 9 2 0 . E p i p h y t i c m i c r o f l o r a o n a l f a l f a a n d w h o l e - p l a n t c o r n . J . D a i r y S c i . 7 5 : 2 4 8 4 . L i n d g r e n , S . E . , K . P e t t e r s o n , A . J o h n s o n , P . L i n g v a l l , a n d A . K a s p e r s s o n . 1 9 8 5 . S i l a g e i n o c u l a t i o n - s e l e c t e d s t r a i n s , t e m p e r a t u r e , w i l t i n g a n d p r a c t i c a l a p p l i c a t i o n s . S w e d . J . A g r i c . R e s . 1 5 : 9 . 3 4 3 L i n d g r e n , 8 . , A . B r o m a n d e r , a n d K . P e t t e r s s o n . 1 9 8 8 . E v a l u a t i o n o f s i l a g e a d d i t i v e s u s i n g s c a l e - m o d e l s i l o s . S w e d i s h J . A g r i c . R e s . 1 8 : 4 1 . L o n d o n , J . 1 9 7 6 . T h e e c o l o g y a n d t a x o n o m i c s t a t u s o f t h e l a c t o b a c i l l i . A n n . R e v . M i c r o b i o l . 3 0 : 2 7 9 . M a h a n n a , C . W . 1 9 9 3 . S i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d a d d i t i v e u s e i n N o r t h A m e r i c a . I n : S i l a g e P r o d u c t i o n ; f r o m s e e d t o a n i m a l . P r o c . N a t i o n a l S i l a g e P r o d . C o n f e r e n c e . S y r a c u s e , N e w Y o r k . p p . 8 5 . M a r t i n s s o n , K . 1 9 9 2 . A s t u d y o f t h e e f f i c a c y o f a b a c t e r i a l i n o c u l a n t a n d f o r m i c a c i d a s a d d i t i v e s f o r g r a s s s i l a g e i n t e r m s o f m i l k p r o d u c t i o n . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 7 : 1 8 9 . M a y n e , O S . 1 9 9 3 . T h e e f f e c t o f f o r m i c a c i d , s u l f u r i c a c i d , a n d a b a c t e r i a l i n o c u l a n t o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d t h e f o o d i n t a k e a n d m i l k p r o d u c t i o n o f l a c t a t i n g d a i r y c o w s . A n i m P r o d 5 6 : 2 9 M c C u l l o u g h , M E . 1 9 7 8 . S i l a g e : s o m e g e n e r a l c o n s i d e r a t i o n s . I n : M . E . M c C u l l o u g h ( E d . ) F e r m e n t a t i o n o f S i l a g e - A R e v i e w . p p 3 - 2 8 . N a t i o n a l F e e d I n g r e d i e n t s A s s o c i a t i o n . W e s t D e s M o i n e s , I A . M c D o n a l d , P . , A . R . H e n d e r s o n , a n d S . J . E . H e r o n . 1 9 9 1 . T h e B i o c h e m i s t r y o f S i l a g e . 2 t h e d . C h a l c o m b e P u b l . C a m b r i a m P r i n t e r s L t d . , A b e r y s t w y t h , U K . M c l l r o y , R . J . 1 9 6 7 . C a r b o h y d r a t e o f g r a s s l a n d . H e r b a g e A b s t . 3 7 : 7 9 . M e l v i n , J . F . a n d M A . S u t h e r l a n d . 1 9 6 1 . E f f e c t o f s h a d i n g d u r i n g g r o w t h o n t h e s o l u b l e s u g a r s c o n t e n t s o f s h o r t r o t a t i o n r y e g r a s s . A u s t . J . E x p . A g r i c . a n d A n i m . H u s b . 1 : 1 5 3 M i n s o n , D J . a n d M M . M c L e o d . 1 9 7 0 . T h e d i g e s t i b i l i t y o f t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l g r a s s e s . P r o c . o f t h e 5 t h I n t n . G r a s s l . C o n g r . , S u r f e r s P a r a d i s e , A u s t r a l i a . M i n s o n , D J . 1 9 9 0 . F o r a g e i n R u m i n a n t N u t r i t i o n . A c a d e m i c P r e s s , l n c . , 8 a n D i e g o , C A . M o o n , N . J . 1 9 8 3 . I n h i b i t i o n o f t h e g r o w t h o f a c i d t o l e r a n t y e a s t s b y a c e t a t e , l a c t a t e , a n d p r o p i o n a t e a n d t h e i r s y n e r g i s t i c m i x t u r e s . J . A p p l . B a c t e r i o l . 5 5 : 4 5 3 . 3 4 4 M u c k , R . E . 1 9 8 8 . F a c t o r s i n f l u e n c i n g s i l a g e q u a l i t y a n d t h e i r i m p l i c a t i o n s f o r m a n a g e m e n t . J . D a i r y S c i . 7 1 : 2 9 9 2 . M u c k , R . E . 1 9 8 9 . I n i t i a l b a c t e r i a l n u m b e r s o n l u c e r n e p r i o r t o e n s i l i n g . G r a s s F o r a g e S c i . 4 4 : 1 9 . M u c k , R . E . 1 9 9 1 . P r e d i c t i n g l a c t i c a c i d b a c t e r i a l n u m b e r s o n l u c e r n e . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 5 : 2 7 3 . M u c k , R . E . a n d K . K . B o l s e n . 1 9 9 2 . S i l a g e p r e s e r v a t i o n a n d s i l a g e a d d i t i v e p r o d u c t s . N F I A F i e l d G u i d e f o r H a y a n d S i l a g e M a n a g e m e n t i n N o r t h A m e r i c a . N F I A , W e s t D e s M o i n e s , I A . p p . 1 0 5 . M u c k , R . E . a n d R . E . P i t t . 1 9 9 3 . E n s i l i n g a n d i t s e f f e c t o n c r o p q u a l i t y . I n : S i l a g e P r o d u c t i o n ; f r o m s e e d t o a n i m a l . P r o c . N a t i o n a l S i l a g e P r o d . C o n f e r e n c e . S y r a c u s e , N e w Y o r k . p p . 5 7 . M u c k , R . E . 1 9 9 3 . T h e r o l e o f s i l a g e a d d i t i v e s i n m a k i n g h i g h q u a l i t y s i l a g e . I n : S i l a g e P r o d u c t i o n ; f r o m s e e d t o a n i m a l . P r o c . N a t i o n a l S i l a g e P r o d . C o n f e r e n c e . S y r a c u s e , N e w Y o r k . p p . 1 0 6 . N a r a s i m h a l u , P . , L . J . H a l l i d a y , J . B . S a n d e r s o n , H . T . K u n e l i u s , a n d K . A . W i n t e r . 1 9 9 2 . T h e c o m p o s i t i o n , i n t a k e , a n d d i g e s t i b i l i t y o f t i m o t h y s i l a g e p r e s e r v e d u n t r e a t e d o r t r e a t e d w i t h f o r m i c a c i d o r a c e l l u l a s e - h e m i c e l l u l a s e p r e p a r a t i o n . C a n J . A n i m . S c i . 7 2 : 4 3 1 . N e l s o n , C . J . a n d L E . M o s e r . 1 9 9 4 . P l a n t f a c t o r s a f f e c t i n g f o r a g e q u a l i t y . I n : F o r a g e O u a l i t y , E v a l u a t i o n , a n d U t i l i z a t i o n . G . C . F a h e y , J r . , M . C o l l i n s , D . R . M e r t e n s , a n d L E . M o s e r , E d s . N a t i o n a l C o n f e r e n c e o n F o r a g e O u a l i t y , E v a l u a t i o n , a n d U t i l i z a t i o n . U n i v e r s i t y o f N e b r a s k a , L i n c o l n . N e l s o n , M . L . a n d M . J . B o z i c h . 1 9 9 5 . E f f e c t o f s t o r a g e t e m p e r a t u r e a n d t i m e o n f i b e r c o n t e n t o f f r e s h e n d e n s i l e d a l f a l f a . J . A n i m . S c i . 7 3 : 3 3 9 ( A b s t r . ) . N o b l e , A . a n d K . F . L o w e . 1 9 7 4 . A l c o h o l s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s i n v a r i o u s t r o p i c a l a n d t e m p e r a t e p a s t u r e s s p e c i e s . T r o p . G r a s s l a n d s . 8 : 1 7 9 . O ' L e a r y , J . a n d R . W . H e m k e m . 1 9 8 5 . E f f e c t o f i n o c u l a t i o n w i t h d i f f e r e n t l a c t i c a c i d b a c t e r i a l t y p e s o n c o r n s i l a g e f e r m e n t a t i o n . J . D a i r y S c i . 6 8 ( S u p p l . 1 ) : 1 2 5 . O ‘ N e i l , K . A . , M . S . A l l e n . 1 9 9 2 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d d u r a t i o n o f 3 4 5 s a m p l e s t o r a g e b e f o r e o v e n - d r y i n g o n f o r a g e f i b e r a n a l y s e s . J . D a i r y S c i . 7 6 : 5 3 5 . O h y a m a , Y . a n d P . M c D o n a l d . 1 9 7 5 . T h e e f f e c t o f s o m e a d d i t i v e s o n a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f s i l a g e s . J . S c i . F o o d A g r i c . 2 6 : 9 4 1 . O h y a m a , Y . , M o r i c h i , T , a n d M a s a c h i , S . 1 9 7 5 8 . T h e e f f e c t o f i n o c u l a t i o n w i t h L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m a n d t h e e f f e c t o f g l u c o s e a t e n s i l i n g o n t h e q u a l i t y o f a e r a t e d s i l a g e s . J . o f t h e S c i . o f F o o d a n d A g r i c . 2 6 : 1 0 0 1 . O h y a m a , Y . , 8 . M a s a k i , a n d S . H a r a . 1 9 7 5 b . F a c t o r s i n f l u e n c i n g a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f s i l a g e s a n d c h a n g e s i n c h e m i c a l c o m p o s i t i o n a f t e r o p e n i n g s i l o s . J . S c i . F o o d A g r i c . 2 6 : 1 1 3 7 . O j e d a , F . , R . F e r n a n d e z , y F . C a fi i z a l e s . 1 9 8 7 . P a s t o s y F o r r a g e s . R e v i s t a d e l a E E P F " l n d i o H a t u e y " . M a t a n z a s , C u b a . 3 : 4 8 1 . O s t l i n g , O E . a n d S E . L i n d g r e e n . 1 9 9 1 . B a c t e r i a i n m a n u r e a n d o n N P K - f e r t i l i z e d s i l a g e c r o p s . J . S c i . F o o d A g r i c . 5 5 : 5 7 9 . P a n d i t h a r a t n e , 8 . , V . G . A l l e n , J . P . F o n t e n o t , a n d M . C . N . J a y a s u r i y a . 1 9 8 6 . E n s i l i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f t r o p i c a l g r a s s e s a s i n f l u e n c e d b y s t a g e o f g r o w t h , a d d i t i v e s a n d c h o p p i n g l e n g t h . J . A n i m . S c i . 6 3 : 1 9 7 . P a n d i t h a r a t n e , 8 . , V . G . A l l e n , J . P . F o n t e n o t , a n d M . C . N . J a y a s u r i y a . 1 9 8 8 . E f f e c t o f s t a g e o f g r o w t h a n d c h o p p i n g l e n g t h o n d i g e s t i b i l i t y a n d p a l a t a b i l i t y 0 f g u i n e a - A g r a s s s i l a g e . J . A n i m . S c i . 6 6 : 1 0 0 5 . P e l c z a r , M . J . a n d R D . R e e d . 1 9 7 2 . M i c r o b i o l o g y . M c G r a w H i l l B o o k C o . N e w Y o r k , N Y . P h i l l i p , L . E . , L . U n d e r h i l l , a n d H . G a r i n o . 1 9 9 0 . E f f e c t s o f t r e a t i n g l u c e r n e w i t h a n i n o c u l a n t o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a a n d f o r m i c a c i d u p o n c h e m i c a l c h a n g e s d u r i n g f e r m e n t a t i o n , a n d u p o n t h e n u t r i t i v e v a l u e o f t h e s i l a g e f o r l a m b s . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 5 : 3 3 7 . P l a y n e , M . J . a n d P . M c D o n a l d . 1 9 6 6 . T h e b u f f e r i n g c o n s t i t u e n t s o f h e r b a g e a n d s i l a g e . J . S c i . F o o d A g r i c . 1 7 : 2 6 4 . P i t t , R . E . 1 9 8 6 . D r y m a t t e r l o s s e s d u e t o o x y g e n i n f i l t r a t i o n i n s i l o s . J . A g r i c . E n g . R e s . 3 5 : 1 9 3 . P i t t , R . E . 1 9 9 1 . A m o d e l o f c e l l u l a s e a n d a m y l a s e a d d i t i v e s i n s i l a g e . J . 3 4 6 D a i r y S c i . 7 3 : 1 7 8 8 . P i t t , R . E . , R . E . M u c k , a n d N B . P i c k e r i n g . 1 9 9 1 a . A m o d e l o f a e r o b i c f u n g a l g r o w t h i n s i l a g e . 2 . A e r o b i c S t a b i l i t y . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 6 : 3 0 1 . P i t t , R . E . , Y . L i u , a n d R . E . M u c k . 1 9 9 1 b . S i m u l a t i o n o f t h e e f f e c t o f a d d i t i v e s o n a e r o b i c s t a b i l i t y o f a l f a l f a a n d c o r n s i l a g e s . T r a n s . A S A E . 3 4 : 1 6 3 3 . R a e k e r , M . O . , C . J . B e r n , L . A . J o h n s o n , a n d B A , G l a t z . 1 9 9 2 . P r e s e r v a t i o n o f h i g h - m o i s t u r e m a i z e b y v a r i o u s p r o p i o n a t e t r e a t m e n t s . C e r e a l C h e m . 6 9 : 6 6 . R a u r a m a a , A . , J . S e t a l a , a n d T . M o i s i o . 1 9 8 7 a . T h e e f f e c t o f i n o c u l a n t s a n d c e l l u l a s e o n t h e f e r m e n t a t i o n a n d m i c r o b i o l o g i c a l c o m p o s i t i o n o f g r a s s s i l a g e . I . B i o c h e m i c a l c h a n g e s i n t h e s i l a g e s . J . A g r i c . S c i . i n F i n l a n d . 5 9 : 3 7 1 . R a u r a m a a , A . , J . S e t a l a , T . M o i s i o , a n d S . S i v e l a . 1 9 8 7 b . T h e e f f e c t o f i n o c u l a n t s a n d c e l l u l a s e o n t h e f e r m e n t a t i o n a n d m i c r o b i o l o g i c a l c o m p o s i t i o n o f g r a s s s i l a g e . l l . M i c r o b i o l o g i c a l c h a n g e s i n t h e s i l a g e . J . A g r i c . S c i . i n F i n l a n d . 5 9 : 3 7 1 . R o d r i g u e z , A . A . , 8 . R . R u s t , M . T . Y o k o y a m a , a n d E D . R i q u e l m e . 1 9 9 4 . M i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d e n z y m e s i n f o r a g e s o r g h u m e n s i l e d u n d e r t e m p e r a t e a n d t r o p i c a l e n v i r o n m e n t s . I . M i c r o b i a l S u c c e s s i o n . J . A n i m . S c i . 7 2 : 3 0 1 ( A b s t r . ) . R o d r i g u e z , A . A . , S . R . R u s t , M . T . Y o k o y a m a , a n d E . O . R i q u e l m e . 1 9 9 5 . C o m p a r i s o n o f c o m m e r c i a l e n z y m e p r e p a r a t i o n s 0 n N D F d i s a p p e a r a n c e f r o m f o r a g e s o r g h u m . J . A n i m . S c i . 7 3 : 1 0 2 ( A b s t r . ) . R o o k e , J . A . 1 9 9 0 . T h e n u m b e r s o f e p i p h y t i c b a c t e r i a o n g r a s s a t e n s i l a g e o n c o m m e r c i a l f a r m s . J . S c i . F o o d A g r i c . 5 1 : 5 2 5 . R u s s e l , J . B . a n d R . J . W a l l a c e . 1 9 8 8 . E n e r g y y i e l d i n g a n d c o n s u m i n g r e a c t i o n s . I n : T h e R u m e n M i c r o b i a l E c o s y s t e m . P . N . H o l z e n d , e d . E l s e v i e r A p p l i e d S c i e n c e , N e w Y o r k . R u s t , S . R . , H . S . K i m , a n d G . L . E n d e r s . 1 9 8 9 . E f f e c t s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t o n f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d n u t r i t i v e v a l u e o f c o r n s i l a g e . J . P r o d . A g r i c . 2 : 2 3 5 . 3 4 7 R u s t , S R . a n d M T . Y o k o y a m a . 1 9 9 2 . F e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a s s o c i a t e d w i t h a e r o b i c i n s t a b i l i t y o f h i g h - m o i s t u r e c o r n . J . P r o d . A g r i c . 5 : 4 5 4 . S a l i s b u r y , R . l . , R . E . M a t h e r , a n d C . B . B e n d e r . 1 9 4 9 . V a r i o u s c a r b o h y d r a t e s a s e n e r g y s o u r c e s f o r m s o m e m i x e d c u l t u r e s o f s i l a g e s o r g a n i s m s . J . D a i r y S c i . 3 2 : 9 0 1 . S a n d e r s o n , M A . 1 9 9 3 . A e r o b i c s t a b i l i t y a n d i n v i t r o f i b e r d i g e s t i b i l i t y 0 n m i c r o b i a l l y i n o c u l a t e d c o r n a n d s o r g h u m s i l a g e . J . A n i m . S c i . 7 1 : 5 0 5 . S A S / S T A T . 1 9 9 0 . S A S U s e r ' s G u i d e ( V e r s i o n 6 ) . S A S l n s t . , I n c . , C a r y , N C . S a t t e r , L . D . , R . E . , M u c k , B . A . J o n e s , T . R . D h i m a n , J . A . W o o l f o r d , a n d O M . W a c e k . 1 9 9 1 . E f f i c a c y o f b a c t e r i a l i n o c u l a n t s f o r l u c e r n e s i l a g e . I n : F o r a g e C o n s e r v a t i o n T o w a r d s 2 0 0 0 . P a h l o w , G . a n d H . H o n i g . ( E d s . ) I n s t . G r a s s l . F o r a g e R e s . , B r a u n s c h w e i g , G e r m a n y . p p . 3 4 2 . S c h a e f e r , D . M . , P . G . B r o t z , S . C . A r p . , a n d D . K . C o o k . 1 9 8 9 . I n o c u l a t i o n o f c o r n s i l a g e a n d h i g h m o i s t u r e c o r n w i t h l a c t i c a c i d b a c t e r i a a n d i t s e f f e c t s o n t h e s u b s e q u e n t f e r m e n t a t i o n a n d o n f e e d l o t p e r f o r m a n c e o f b e e f s t e e r s . A n i m . F e e d S c i . T e c h . 2 5 : 2 3 . S e a l e , D . R . 1 9 8 6 . B a c t e r i a l i n o c u l a n t s a s s i l a g e a d d i t i v e s . J . A p p l i . B a c t e r i o l . S y m p . S u p p . 9 8 . S e a l e , D . R . , A . R . H e n d e r s o n , K . O . P e t t e r s s o n , a n d J . F . L o w e . 1 9 8 6 . T h e e f f e c t o f a d d i t i o n o f s u g a r a n d i n o c u l a t i o n w i t h t w o c o m m e r c i a l i n o c u l a n t s o n t h e f e r m e n t a t i o n o f l u c e r n e s i l a g e i n l a b o r a t o r y s i l o s . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 1 : 6 1 . S h a v e r , R . D . , R . A . E r d m a n , A . M . O ' C o n n e r , a n d J . H . V a n d e r s a l l . 1 9 8 5 . E f f e c t s o f s i l a g e p H o n v o l u n t a r y i n t a k e o f c o r n s i l a g e a n d a l f a l f a h a y l a g e . J . D a i r y S c i : 6 8 : 3 3 8 . S h e p e r d , A . C . a n d L . K u n g , J r . 1 9 9 4 . E f f e c t o f a n e n z y m e a d d i t i v e o n c o r n s i l a g e e n s i l e d a t v a r i o u s s t a g e s o f m a t u r i t y . J . A n i m . S c i . 7 2 ( S u p p l . 1 ) : 6 7 . S h e p e r d , A . C . , M . M a s l a n k a , D . Q u i n n , a n d L . K u n g , J r . 1 9 9 5 . A d d i t i v e s c o n t a i n i n g b a c t e r i a a n d e n z y m e s f o r a l f a l f a s i l a g e . J . D a i r y S c i , 7 8 : 5 6 5 . S h o c k e y , W . L . , B . A . D e h o r i t y , a n d H . R . C o n r a d . 1 9 8 5 . E f f e c t s o f m i c r o b i a l 3 4 8 i n o c u l a n t o n f e r m e n t a t i o n o f a l f a l f a a n d c o r n . J D a i r y S c i . 6 8 : 3 0 7 6 . S h o c k e y , W . L . , a n d D . C . B o r g e n . 1 9 9 1 . E f f e c t o f s a l t o n f e r m e n t a t i o n o f a l f a l f a . 2 . T r e a t m e n t w i t h s o d i u m c h l o r i d e , C l o s t r i d i u m b u t y r i c u m , a n d l a c t i c a c i d b a c t e r i a . J . D a i r y S c i . 7 4 : 1 6 0 . S m i t h , D . 1 9 7 3 . C h e m i s t r y a n d B i o c h e m i s t r y o f H e r b a g e . G . W . B u t l e r a n d R . W . B a i l e y ( E d s . ) A c a d e m i c P r e s s , N e w Y o r k . V o l 1 : 1 0 6 . S m i t h , E . J . , A . R . H e n d e r s o n , J . D . O l d m a n , D . A . W h i t a k e r , K . A i t c h i s o n , D . H . H e n d e r s o n , a n d J . M . K e l l y . 1 9 9 3 . T h e i n f l u e n c e o f a n i n o c u l a n t / e n z y m e p r e p a r a t i o n a s a n a d d i t i v e f o r g r a s s s i l a g e o f f e r e d i n c o m b i n a t i o n w i t h t h r e e l e v e l s o f c o n c e n t r a t e s u p p l e m e n t a t i o n o n p e r f o r m a n c e o f l a c t a t i n g d a i r y c o w s . A n i m . P r o d . 5 6 : 3 0 1 . S o d e r l u n d , S . 1 9 8 8 . S i l a g e a d d i t i v e u s e i n U S . P r o c . o f t h e 1 1 t h A n n u a l V i r g i n i a F o r a g e a n d G r a s s l a n d C o u n c i l M e e t i n g . S t a u n t o n , V A . S p o e l t r a , S . F . , M . G . C o u r t i n , a n d J . A . V a n B e e r s . 1 9 8 8 . A c e t i c a c i d b a c t e r i a c a n i n i t i a t e a e r o b i c d e t e r i o r a t i o n o f w h o l e - c o r n m a i z e s i l a g e . J . A g r i c . S c i . 1 1 1 : 1 2 7 . S p o e l t r a , S F . a n d P . G . v a n W i k s e l a a r . 1 9 9 2 . T h e e f f e c t s o f e n s i l i n g c r o p m a i z e w i t h a m u l t i - e n z y m e p r e p a r a t i o n o n t h e c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f t h e r e s u l t i n g s i l a g e . J . S c i . F o o d a g r i c . 6 0 : 2 2 3 . S t e e l , R . G . D . a n d J . H . T o r r i e . 1 9 9 0 . P r i n c i p l e s a n d P r o c e d u r e s o f S t a t i s t i c s ; A B i o m e t r i c a l A p p r o a c h . 2 M I E d . M c G r a w H i l l , N e w Y o r k , N Y . S t i r l i n g , A . C . a n d R . W h i t t e n b u r y . 1 9 6 3 . S o u r c e s o f t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a o c c u r r i n g i n s i l a g e . J . A p p l . B a c t . 2 6 : 8 6 . S t o k e s , M R . 1 9 9 2 . E f f e c t s o f a n e n z y m e m i x t u r e , a n i n o c u l a n t , a n d t h e i r i n t e r a c t i o n o n s i l a g e f e r m e n t a t i o n a n d d a i r y p r o d u c t i o n . J . D a i r y S c i . 7 5 : 7 6 4 . S t o k e s , M R . a n d J . C h e n . 1 9 9 4 . E f f e c t s o f a n e n z y m e - i n o c u l a n t m i x t u r e o n t h e c o u r s e o f f e r m e n t a t i o n o f c o r n s i l a g e . J . D a i r y S c i . 7 7 : 3 4 0 1 . T j a n d r a a t m a d j a , M . , B . W . N o r t o n , a n d L C . M a c R a e . 1 9 9 0 . A n u m e r i c a l t a x o n o m i c s t u d y o f l a c t i c a c i d b a c t e r i a f r o m t r o p i c a l s i l a g e s . J . A p p l i e d B a c t . 6 6 8 : 5 4 3 . T W T p t B j a o j r i r a t a o o n t t n p l i d e d e d c r r a n r a c h . a a s . J a l t t o m M m g r a i a a f 1 f d c d s 0 j r o j s a r a o e , a , b s g . M e M m . . a i s , n , x B r B d g . B . h W i W w . . o i o d e u t m e N N c e h o o n . r r s t t t h l e i o o g l n 7 n u , : e , m n u 6 n a 0 a s d 2 e n d . d a C r C L e L d d n . . m d i f M M o l a f a a c e s c R R r s . . e n a a e t e e s . 1 v i e n 1 o W 9 9 r 9 9 o 1 4 n . a r l d F n e t m e . J . E M l m s r a n i e i c r i n c t o n a d t i l o a g e b a o i f d t n o n o n s . : 8 2 . 3 4 9 T j a n d r a a t m a d j a , M . , B . W . N o r t o n , a n d L C . M a c R a e . 1 9 9 4 b . E n s i l a g e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h r e e t r o p i c a l g r a s s e s a s i n f l u e n c e d b y s t a g e o f g r o w t h a n d a d d i t i o n o f m o l a s s e s . W o r l d J . M i c r o b a n d B i o t e c h . 1 0 : 7 4 . U m a fi a , R . , C . R . S t a p l e s , D . B . B a t e s , C . J . W i l c o x , a n d W . C . M a h a n n a . 1 9 9 1 . E f f e c t s o f a m i c r o b i a l i n o c u l a n t a n d ( o r ) s u g a r c a n e m o l a s s e s o n t h e f e r m e n t a t i o n , a e r o b i c s t a b i l i t y , a n d d i g e s t i b i l i t y o f b e r m u d a g r a s s e n s i l e d a t t w o m o i s t u r e c o n t e n t s . J . D a i r y S c i . 6 9 : 4 5 8 8 . V a n S o e s t , P . J . 1 9 6 8 . S t r u c t u r a l a n d c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s w h i c h l i m i t t h e n u t r i t i v e v a l u e o f f o r a g e s . I n : C . M . h a r r i s o n ( E d . ) . F o r a g e E c o n o m i c s - O u a l i t y . A S A S . S p e c . P u b l . , A S A , M a d i s o n , W I . V a n S o e s t , P . J . 1 9 9 4 . F o r a g e C o n s e r v a t i o n . I n : P . J . V a n S o e s t ( e d ) . N u t r i t i o n a l E c o l o g y o f t h e R u m i n a n t . 2 “ d E d i t i o n . C o r n e l l U n i v e r s i t y P r e s s . V a n S o e s t , P . J . , J . R . R o b e r t s o n , a n d B . A . L e w i s . 1 9 9 1 . M e t h o d s f o r d i e t a r y f i b e r , n e u t r a l d e t e r g e n t f i b e r , n o n - s t a r c h p o l y s a c c h a r i d e i n r e l a t i o n t o a n i m a l n u t r i t i o n . J . D a i r y S c i . 7 4 : 3 5 8 3 . V a n V u u r e n , A . M . , K . B e r g s m a , F . F r o I - K r a m e r , a n d J . A . C . v a n B e e r s . 1 9 8 9 . E f f e c t s o f a d d i t i o n o f c e l l w a l l d e g r a d i n g e n z y m e s o n t h e c h e m i c a l a n d i n s a c c o d e g r a d a t i o n o f g r a s s s i l a g e . G r a s s a n d F o r a g e S c i . 4 4 : 2 2 3 . V i c e n t e - C h a n d l e r , J . A b r u fi a , R . C a r o - C o s t a s y S . S i l v a . 1 9 8 3 . P r o d u c c i d n y u t i l i z a c i é n i n t e n s i v a d e l a s f o r r a j e r a s e n P u e r t o R i c o . B o l . 2 7 1 . U n i v . o f P R . , E E A , R P , P R . V o l o n e c , J . J . , a n d C . J . N e l s o n . 1 9 8 4 . C a r b o h y d r a t e m e t a b o l i s m i n l e a f m e r i s t e m s o f t a l l f e s c u e . I . R e l a t i o n s h i p t o g e n e t i c a l l y a l t e r e d l e a f e l o n g a t i o n r a t e s . P l a n t P h y s i o l / 7 4 : 5 9 0 . V o u g h , L R . a n d G . C . M a r t e n . 1 9 7 1 . I n f l u e n c e o f s o i l m o i s t u r e a n d a m b i e n t t e m p e r a t u r e o n y i e l d a n d q u a l i t y o f a l f a l f a f o r a g e . A g r o n . J . 6 3 : 4 0 . 3 5 0 W a t s o n , S J . a n d M . J . N a s h . 1 9 6 0 . T h e C o n s e r v a t i o n o f G r a s s a n d F o r a g e C r o p s . O l i v e r a n d B o y d , E d i n b u r g h . W a r d y n s k y , F . A . , S . R . R u s t , a n d M T . Y o k o y a m a . 1 9 9 3 . E f f e c t s o f m i c r o b i a l i n o c u l a t i o n o f h i g h m o i s t u r e c o r n o n f e r m e n t a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s , a e r o b i c s t a b i l i t y a n d c a t t l e p e r f o r m a n c e . J . A n i m . S c i . 7 1 : 2 2 4 6 . W e i n b e r g , 2 . , 6 . 6 . A s h b e l l , Y . H e n , a n d A . A z r i e l i . 1 9 9 3 . T h e e f f e c t o f a p p l y i n g l a c t i c a c i d b a c t e r i a a t e n s i l i n g o n t h e a e r o b i c s t a b i l i t y o f s i l a g e s . J . A p p l . B a c t . 7 5 : 5 1 2 . W i l k i n s o n , J . M . , R . F . W i l s o n , a n d T N . B a r r y . 1 9 7 6 . F a c t o r s a f f e c t i n g t h e n u t r i t i v e v a l u e o f s i l a g e . O u t l o o k o n A g r i c . 9 : 3 . W i l k i n s o n , J . M . 1 9 8 3 . S i l a g e s m a d e f r o m t r o p i c a l a n d t e m p e r a t e c r o p s . l . T h e e n s i l i n g p r o c e s s a n d i t s i n f l u e n c e o n f e e d v a l u e . W o r l d A n i m . R e v . J a n - M a c h . W i l s o n , J . R . 1 9 8 2 . E n v i r o n m e n t a l a n d n u t r i t i o n a l f a c t o r s a f f e c t i n g h e r b a g e q u a l i t y . I n : J . B . H a c k e r ( E d ) . N u t r i t i o n a l L i m i t t o A n i m a l P r o d u c t i o n f r o m P a s t u r e s . C o m m o n w e a l t h A g r i c . B u r e a u x , F a r n h a m R o y a l , U K . W i l s o n , J . R . a n d C . W . F o r d . 1 9 7 3 . T e m p e r a t u r e i n f l u e n c e s o n t h e i n v i t r o d i g e s t i b i l i t y a n d s o l u b l e c a r b o h y d r a t e s a c c u m u l a t i o n o f t r o p i c a l a n d t e m p e r a t e g r a s s e s . A u s t . J . A g r i c . R e s . 2 4 : 1 8 7 . W i t t e n b e r g , K . M . , J . R . I n g a l l s , a n d T . J . D e v l i n . 1 9 8 3 . T h e e f f e c t o f l a c t o b a c t e r i a i n o c u l a t i o n o n c o r n s i l a g e p r e s e r v a t i o n a n d f e e d i n g v a l u e f o r g r o w i n g b e e f a n i m a l s a n d l a m b s . C a n . J . A n i m . S c i . 6 3 : 9 1 7 . W i t t e n b e r g , K M . 1 9 9 3 . N u t r i t i v e v a l u e o f h i g h m o i s t u r e a l f a l f a h a y p r e s e r v e d w i t h P e d i o c o c c u s p e n t a s a c e u s . C a n J A n i m S c i . W o l t h , J . E . 1 9 8 9 . U s e o f a s i l a g e i n o c u l a n t t o i m p r o v e f e e d i n g s t a b i l i t y a n d i n t a k e o f a c o r n s i l a g e g r a i n d i e t . J . D a i r y S i c . 7 2 : 5 4 5 . W o o l f o r d , M . K . 1 9 8 4 . T h e S i l a g e F e r m e n t a t i o n . I n : A . I . L a s k i n a n d R . I . M a t e l e s ( E d . ) M i c r o b i o l o g y S e r i e s . V o l . 1 4 . M a r c e l D e c k e r , N e w Y o r k . W o o l f o r d , M . K . 1 9 9 0 . T h e d e t r i m e n t a l e f f e c t o f a i r o n s i l a g e . J . A p p l . B a c t . 6 8 : 1 0 1 . W o o l f o r d , M . K . 1 9 9 2 . S i l a g e : r e t h i n k i n g s i l a g e f e r m e n t a t i o n . W h a t 3 5 1 h a p p e n s ? I s i t n e c e s s a r y ? C a n w e c h a n g e i t t o c o n t r o l e f f l u e n t a n d m a k e i t m o r e s u i t a b l e f o r r u m e n f e r m e n t a t i o n ? I n : P . T . L y o n s ( E d . ) B i o t e c h n o l o g y i n t h e F e e d I n d u s t r y . A l l t e c h , N i c h o l a s v i l l e , K Y . p p . 2 2 7 . W y l a n , C B 1 9 5 4 . A n a l y t i c a l s t u d i e s o n t h e c a r b o h y d r a t e o f g r a s s e s a n d c l o v e r s . 3 . C a r b o h y d r a t e b r e a k d o w n d u r i n g w i l t i n g a n d e n s i l a g e . J . S c i . F o o d . A g r i c . 4 : 5 2 7 . V . L I B R A R I E S i l l ) l l l l l l l l l l l l l l l l l 1 1 5 3 9 3 9 . ) . M I C H I G A N s r n r : U N I l l l l l l l l l l l m l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l 3 1 2 9 3 0 1 3