. u v a i L : : , v ‘ t z t S . . . N ? n A . m y 1 ! E " . l . . . 3 m 2 . r . 2 5 fi . . g 1 ; m . W ? A . . : , 9 t W . n W . 5 . 2 “ . J u « a . m . . d : ? . ‘ c . “ » 3 . Y i . l . . y y 2 c 4 x l \ . fl . fl x . r I 5 f l $ . » “ . . Q . . : “ 1 . ; . u 6 . . 4 . . v $ h w s m fi m . ! “ . r a . . . m 5 w . . . . . 3 . f n ; n fl . . y . w e g u . , fi 5 g s 4 . u - i . g t a l r a w ? C : V U h . 3 s u . a m I . é w n w ” o . y t m “ . “ , M . . n . a . fi . m m m w r . e a @ é J a w fl . d » 4 w e Z : 6 W L « 4 r . . . . . 1 . ? ‘ 1 n . . n . x L . : . . x fi r u o 6 . I 3 y 1 . . I d , . m . . 6 ‘ I I . . { x . 3 \ . ! I . . 1 ; . E A S T L A N S I N G , M I C H 4 8 8 2 4 - 1 0 4 8 W / é W B / I 3 ) 0 0 6 . L I B R A R I E S F f , ‘ M I C H I G A N S T A T E U N I V E R S I T Y T h i s i s t o c e r t i f y t h a t t h e t h e s i s e n t i t l e d S T R A T E G I E S F O R T H E M A N A G E M E N T O F F U N G I C I D E - R E S I S T A N T R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M ( S Y N . S C L E R O T I N I A H O M O E O C A R P A ) , T H E C A U S A L O R G A N I S M O F D O L L A R S P O T p r e s e n t e d b y D A V I D M U R P H Y G I L S T R A P h a s b e e n a c c e p t e d t o w a r d s f u l fi l l m e n t o f t h e r e q u i r e m e n t s f o r t h e D O C T O R O F d e g r e e i n P L A N T P A T H O L O G Y P H I L O S O P H Y M a j o r P r o f e s s o r ” s I f S i g n a t u r e 5 / Z 0 5 ’ / D a t e I M S U i s a n A f fi n n a t i v e A c t i o n / E q u a l O p p o r t u n i t y I n s t i t u t i o n P L A C E I N R E T U R N B O X t o r e m o v e t h i s c h e c k o u t f r o m y o u r r e c o r d . T O A V O I D F I N E S r e t u r n o n o r b e f o r e d a t e d u e . M A Y B E R E C A L L E D w i t h e a r l i e r d u e d a t e i f r e q u e s t e d . D A T E D U E D A T E D U E D A T E D U E ‘ I . 1 L 7 1 Q c a n ? J i m 1 ' 2 / 0 5 C I C I R C I D a t e D u o h d d - p J S S T R A T E G I E S F O R T H E M A N A G E M E N T O F F U N G I C I D E - R E S I S T A N T R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M ( S Y N . S C L E R O T I N I A H O M O E O C A R P A ) , T H E C A U S A L O R G A N I S M O F D O L L A R S P O T B Y D a v i d M u r p h y G i l s t r a p A D I S S E R T A T I O N S u b m i t t e d t o M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y i n p a r t i a l f u l f i l l m e n t o f t h e * r e q u i r e m e n t s f o r t h e d e g r e e o f D O C T O R O F P H I L O S O P H Y D e p a r t m e n t o f P l a n t P a t h o l o g y 2 0 0 5 A B S T R A C T S T R A T E G I E S F O R T H E M A N A G E M E N T O F F U N G I C I D E - R E S I S T A N T . R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M ( S Y N . S C L E R O T I N I A H O M O E O C A R P A ) , T H E C A U S A L O R G A N I S M O F D O L L A R S P O T B Y D a v i d M u r p h y G i l s t r a p D o l l a r s p o t i s a n i m p o r t a n t d i s e a s e o f t u r f g r a s s e s w o r l d w i d e . T h e p a t h o g e n , R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m , h a s d e v e l o p e d r e s i s t a n c e t o t h r e e c l a s s e s o f s y s t e m i c f u n g i c i d e s z ' t h e b e n z i m i d a z o l e s , t h e d i c a r b o x i m i d e s , a n d t h e d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s ( D M I ) . T w o m u l t i y e a r s t u d i e s a s s e s s e d c h a n g e s i n D M I s e n s i t i v i t i e s o v e r t i m e u s i n g D M I a n d n o n - D M I f u n g i c i d e s a t d i f f e r e n t r a t e s a p p l i e d a l o n e , i n a l t e r n a t i o n , o r i n c o m b i n a t i o n w i t h e a c h o t h e r . T h e f i r s t e x p e r i m e n t i n v o l v e d a D M I - r e s i s t a n t p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m r e s i d e n t t o a m i x t u r e o f c r e e p i n g b e n t g r a s s a n d a n n u a l b l u e g r a s s m a i n t a i n e d a s a g o l f — c o u r s e f a i r w a y . I s o l a t e s t a k e n a t f i v e t i m e p o i n t s w e r e g r o w n i n t o p u r e c u l t u r e a n d t h e n a s s a y e d u s i n g r e l a t i v e c o m p a r i s o n s o f t h e i r r a d i a l g r o w t h o n P D A a n d P D A a m e n d e d w i t h 2 u g m l q ' t r i a d i m e f o n ( D M I ) . A s i m i l a r e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d o n a D M I - s e n s i t i v e p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m f r o m a n o t h e r s i t e . I n b o t h s t u d i e s , t h e p a t h o g e n ’ s r e s i s t a n c e t o D M I f u n g i c i d e s i n c r e a s e d w i t h a l l t r e a t m e n t s t h a t i n v o l v e d e x p o s u r e s t o D M I f u n g i c i d e s . A p o s i t i v e r e l a t i o n s h i p w a s s h o w n b e t w e e n t h e n u m b e r o f D M I — f u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s a n d t h e r a t e s o f i n c r e a s e i n D M I r e s i s t a n c e . A n A F L P a n a l y s i s o f a s e l e c t i o n o f D M I - r e s i s t a n t a n d — s e n s i t i v e i s o l a t e s f a i l e d t o d i s t i n g u i s h d i f f e r e n c e s a m o n g t h o s e i s o l a t e s . A f i n a l i n v e s t i g a t i o n w a s c o n d u c t e d a t t h e D M I — r e s i s t a n t R . f l o c c o s u m s i t e a b o v e w h e r e u n s a t i s f a c t o r y d o l l a r - s p o t c o n t r o l h a d o c c u r r e d w i t h a f i r s t - t i m e u s e o f b o s c a l i d , a n e w d o l l a r — s p o t f u n g i c i d e o f t h e c a r b o x i m i d e c l a s s . I n a f i e l d e x p e r i m e n t , s i g n i f i c a n t n u m b e r s o f d o l l a r s p o t s a p p e a r e d a t t h r e e d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) w i t h b o s c a l i d c o m p a r e d t o a t r e a t m e n t w i t h c h l o r o t h a l o n i l o n l y . T h e d o l l a r s p o t s h a d d i s a p p e a r e d a t 8 D A T . I n a s e c o n d e x p e r i m e n t , t h e d o l l a r s p o t s b e g a n a p p e a r i n g a t 4 D A T a n d h a d d i s a p p e a r e d b y 1 4 D A T . T h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s i n t h e b o s c a l i d t r e a t m e n t w a s s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r . t h a n t h e c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t a t 9 a n d 1 2 D A T . I s o l a t e s w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e t r a n s i e n t d o l l a r - s p o t s d u r i n g t h e s e c o n d e x p e r i m e n t a n d f o u n d t o h a v e . s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r i n V i t r o r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d c o m p a r e d t o i s o l a t e s o f f i v e d i f f e r e n t s t r a i n s c o l l e c t e d i n o t h e r l o c a t i o n s i n M i c h i g a n . T o a l l o f t h o s e w h o b e l i e v e d t h a t t h i s w o u l d e v e n t u a l l y b e c o m p l e t e d i v A C K N O W L E D G E M E N T S O v e r t h e t w e l v e y e a r s i t h a s t a k e n t o c o m p l e t e m y t e r m i n a l d e g r e e , I h a v e r e c e i v e d s u b s t a n t i a l a s s i s t a n c e , s u p p o r t , a n d e n c o u r a g e m e n t f r o m n u m e r o u s i n d i v i d u a l s . F i r s t a n d f o r e m o s t , I t h a n k D r . J o e V a r g a s , J r . , f o r b e i n g m y m a j o r p r o f e s s o r a n d m e n t o r . I a p p r e c i a t e t h e a d v i c e a n d p a t i e n c e o f t h e r e s t o f m y c o m m i t t e e : D r s . L a r r y O l s e n , M a r y H a u s b e c k , W i l l i e K i r k , a n d e s p e c i a l l y R a y H a m m e r s c h m i d t w h o s e t i m e l y a n d d e t a i l e d e d i t i n g p l a y e d a k e y r o l e i n t h e c o m p l e t i o n o f t h i s t h e s i s . W i n f r e d M o t h e r w e l l s e r v e d a s a n a d d i t i o n a l p r o o f r e a d e r . D r s . S a s h a K r a v c h e n k o a n d O l i v e r S c h a b e n b e r g e r p r o v i d e d c r u c i a l a s s i s t a n c e w i t h m y s t a t i s t i c a l a n a l y s i s . I t h a n k M i c h a e l J o n e s f o r g r a c i o u s l y p r o v i d i n g r e s e a r c h s i t e s a n d t a k i n g d a t a a t t h e L o c h m o o r C l u b . S u b s t a n t i a l a s s i s t a n c e a n d a d v i c e w a s g i v e n b y t h e r e s e a r c h t e c h n i c i a n s i n t h e V a r g a s l a b : N a n c y D y k e m a , R o n D e t w e i l e r , a n d D a n i e l l e M c M a h o n . D r s . R o b G o l e m b i e w s k i , J o n P o w e l l , B r a n d o n H o r v a t h , a n d P h i l D w y e r h e l p e d m e t o b e t t e r u n d e r s t a n d p l a n t p a t h o l o g y w h i l e t h e y w e r e f e l l o w g r a d u a t e s t u d e n t s . M a r k C o l l i n s a t t h e t u r f c e n t e r w a s i n v a l u a b l e . T w o s t u d e n t w o r k e r s w h o h e l p e d m e o u t s i g n i f i c a n t l y w e r e G r e g E l l i o t a n d T r e v o r T h o r p . T h e C h a i r p e r s o n s o f t h e D e p a r t m e n t o f C r o p a n d S o i l S c i e n c e s w h e r e I a m e m p l o y e d h a v e g i v e n m e t h e i r f u l l s u p p o r t f o r t h i s e n d e a v o r : D r s . E l d o r P a u l , B o y d E l l i s , T a y l o r J o h n s t o n , D o u g B u h l e r , a n d J i m K e l l s . F e l l o w t u r f f a c u l t y w h o d i d t h e s a m e w e r e D r s . P a u l R i e k e , B r u c e B r a n h a m , J i m C r u m , a n d T r e y R o g e r s . O t h e r C S S f a c u l t y w h o i n s p i r e d m e w e r e D r s . B e r n i e K n e z e k , R u s s F r e e d , K a r e n R e n n e r , a n d L a r r y C o p e l a n d . W i t h i n t h e c o l l e g e I r e c e i v e d p a r t i c u l a r e n c o u r a g e m e n t f r o m D r s . F r e d P o s t o n , I a n G r a y , C l i f f J u m p , E u n i c e F o s t e r , R i c k B r a n d e n b u r g , B r i d g e t B e h e , B o b S c h u t z k i a n d W e i j u n Z h a o . O f f i c e p r o f e s s i o n a l s w h o w e r e a l w a y s h e l p f u l i n c l u d e d D o n n a E l l i s , K a t h y B e d f o r d , L i n d a C o l o n , J o a n G i l l i l a n d , C a r o l F o s b u r g , B e v e r l y R i e d i n g e r , , a n d D a r l e n e J o h n s o n . T i m e l y e n c o u r a g e m e n t , a d v i c e , a n d a f e l l o w s h i p w e r e p r o v i d e d b y H a r r i e t a n d D r . J i m B e a r d , m y m a j o r p r o f e s s o r f o r m y M . S . a t T e x a s A & M . O t h e r s w h o h e a r t e n e d m e a l o n g t h e w a y i n c l u d e d J i m E p o l i t o , D a n T a y l o r , M e l L a n f o r d , J i m W e i g e l , a n d D r . T e r r y W a r r e n . D u r i n g t h i s o r d e a l I h a v e e n j o y e d t h e s u p p o r t a n d e n c o u r a g e m e n t o f m y l o v e l y w i f e , t h e H o n o r a b l e P a u l a M a n d e r f i e l d , a n d m y c h i l d r e n : M a d e l i n e , H a r r i s o n , K a t h e r i n e , a n d R u d y . M y p a r e n t s , B e t t e a n d C h e n a G i l s t r a p , a n d m y t w o b r o t h e r s , F r a n k a n d R a n d y , b e l i e v e d i n m e , a s w e l l . v i T A B L E O F C O N T E N T S L I S T O F T A B L E S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . i X L I S T O F F I G U R E S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . X i i C H A P T E R 1 I N T R O D U C T I O N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . l D I S C O V E R Y O F D O L L A R S P O T A S A D I S E A S E O F T U R F G R A S S E S 2 T A X O N O M I C C L A S S I F I C A T I O N O F T H E D O L L A R - S P O T P A T H O G E N 3 R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M S I G N S - D O L L A R - S P O T S Y M P T O M S A N D E P I D E M E O L O G Y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 T H E N A T U R E O F F U N G I C I D E R E S I S T A N C E . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 R U T S T R O M I A F L O C C O S U M R E S I S T A N C E T O F U N G I C I D E S . . . . . . 2 0 C H A P T E R 2 E F F E C T S O F R E P E A T E D T R E A T M E N T S O F D E M E T H Y L A T I O N - I N H I B I T O R ( D M I ) F U N G I C I D E S O N D M I - S E N S I T I V E P O P U L A T I O N S O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M ' . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 1 L I T E R A T U R E R E V I E W . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 2 T h e E r g o s t e r o l - B i o s y n t h e s i s P a t h w a y a n d S t e r o l - B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 2 D M I F u n g i c i d e s — P r o d u c t D e v e l o p m e n t . . . . . . . . . . 4 6 D M I - F u n g i c i d e F o r m u l a t i o n s a n d E f f i c a c i e s . . . . . 5 2 D M I U s e o n D o l l a r S p o t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . S 3 D M I - S E N S I T I V E R . F L O C C O S U M S T U D Y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 3 A g r o n o m i c P r a c t i c e s a n d S i t e A s s e s s m e n t . . . . . . . 5 4 F u n g i c i d e T r e a t m e n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 8 F u n g i c i d e - A p p l i c a t i o n T e c h n i q u e s . . . . . . . . . . . . . . 6 1 S a m p l e C o l l e c t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 1 I n V i t r o S e n s i t i v i t y A s s e s s m e n t s a n d S t a t i s t i c a l A n a l y s i s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 2 S e n s i t i v i t y D i f f e r e n t i a t i o n U s i n g A F L P M a r k e r s 6 3 R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 4 C H A P T E R 3 E F F E C T S O F R E P E A T E D T R E A T M E N T S O F D E M E T H Y L A T I O N - I N H I B I T O R ( D M I ) F U N G I C I D E S O N D M I - R E S I S T A N T P O P U L A T I O N S O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M ’ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 5 L I T E R A T U R E R E V I E W . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 6 H u m a n S y s t e m s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 6 A n i m a l S y s t e m s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0 8 P l a n t S y s t e m s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 0 v i i T u r f S y s t e m s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 2 I N V E S T I G A T I O N O F R E P E A T E D F U N G I C I D E A P P L I C A T I O N S T O D M I - R E S I S T A N T R . F L O C C O S U M ' . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 3 E x p e r i m e n t a l A r e a a n d A g r o n o m i c P r a c t i c e s . . . . 1 1 3 S a m p l e C o l l e c t i o n a n d D a t e s o f S a m p l i n g . . . . . . 1 1 4 T r e a t m e n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 5 S t a t i s t i c a l A n a l y s i s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 6 R e s u l t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 7 D i s c u s s i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 9 C H A P T E R 4 I N V E S T I G A T I O N O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M S E N S I T I V I T Y T O B O S C A L I D . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 0 L I T E R A T U R E R E V I E W . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 1 P r o d u c t D e v e l o p m e n t , R e g i s t r a t i o n , a n d F o r m u l a t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 1 M o d e o f A c t i o n a n d A c t i v i t y . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 2 C a r b o x i m i d e R e s i s t a n c e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 3 L A B E L D I R E C T I O N S A N D P R E C A U T I O N S . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 4 A L A R M I N G R E P O R T S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 5 I N I T I A L A S S E S S M E N T S I N V I T R O . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 6 F I E L D E X P E R I M E N T I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 0 M a t e r i a l s a n d M e t h o d s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 0 R e s u l t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 2 F I E L D - E X P E R I M E N T I I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 5 M a t e r i a l s a n d M e t h o d s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 5 R e s u l t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 6 B R O A D E N E D D O S E - R E S P O N S E S T U D Y I N V I T R O I . . . . . . . . . . 1 4 8 M a t e r i a l s a n d M e t h o d s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 8 R e s u l t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 9 B R O A D E N E D D O S E - R E S P O N S E S T U D Y I N V I T R O I I . . . . . . . . . 1 5 0 M a t e r i a l s a n d M e t h o d s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 0 R e s u l t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ' 1 5 1 D I S C U S S I O N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 2 B e n z i m i d a z o l e F u n g i c i d e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 2 Q o I F u n g i c i d e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 3 D M I F u n g i c i d e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 6 D i c a r b o x i m i d e F u n g i c i d e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 0 C h l o r o t h a l o n i l F u n g i c i d e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 1 B o s c a l i d F u n g i c i d e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 2 C H A P T E R 5 C O N C L U S I O N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 5 B R O A D E R I M P L I C A T I O N S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 6 F U T U R E R E S E A R C H . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8 8 A P P E N D I X . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 1 v i i i L I S T O F T A B L E S T a b l e 1 . 1 . F i r s t r e p o r t s o f t u r f p a t h o g e n s r e s i s t a n t t o o n e o r m o r e f u n g i c i d e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 T a b l e 2 . 1 . C o m m o n n a m e s , c h e m i c a l n a m e s , t r a d e n a m e s , a n d c u r r e n t r e g i s t r a n t s o f d e m e t h y l a t i o n - i n h i b i t o r f u n g i c i d e s l a b e l e d f o r u s e o n c o m m e r c i a l t u r f i n t h e U . S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 6 T a b l e 2 . 2 . A v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 2 9 J u l y 1 9 9 4 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 2 m 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 7 T a b l e 2 . 3 . A p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t r e a t m e n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 8 T a b l e 2 . 4 . N u m b e r o f p r o p i c o n a z o l e a p p l i c a t i o n s a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 9 T a b l e 2 . 5 . P r o p i c o n a z o l e a m o u n t s i n g 1 0 0 ’ 2 a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 9 T a b l e 2 . 6 . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) c o l l e c t e d o n 1 4 O c t o b e r 1 9 9 4 a n d m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 2 m 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 0 T a b l e 2 . 7 . A v e r a g e - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) c o l l e c t e d o n 1 4 J u l y 1 9 9 5 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 1 m 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 1 T a b l e 2 . 8 . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 a n d m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g i x w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 1 n a , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 2 T a b l e 2 . 9 . A v e r a g e — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 1 2 J u l y 1 9 9 6 ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) a n d m e a n — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 1 n 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 3 T a b l e 2 . 1 0 . A v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 a n d m e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 1 m 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 4 T a b l e 2 . 1 1 . A v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 a n d m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s , r a t e s i n g 1 0 0 1 n 4 , a n d i n t e r v a l s o f a p p l i c a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 5 T a b l e 2 . 1 2 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t — r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 6 T a b l e 2 . 1 3 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t — r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 7 T a b l e 2 . 1 4 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 8 T a b l e 2 . 1 5 . N u m b e r o f c h l o r o t h a l o n i l a p p l i c a t i o n s a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 9 T a b l e 2 . 1 6 . C h l o r o t h a l o n i l a m o u n t s i n g 1 0 0 m “ 2 a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 0 T a b l e 2 . 1 7 . A n e x a m p l e o f a p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t r e a t m e n t s f o r a s t u d y t h a t w o u l d h a v e h a d g r e a t e r e f f i c i e n c y t h a n t h e o n e c o n d u c t e d a n d p r e s e n t e d i n C h a p t e r 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 1 T a b l e 3 . 1 . T r e a t m e n t s w i t h f u n g i c i d e s , r a t e s , a n d i n t e r v a l s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 1 T a b l e 3 . 2 . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f s i x t r e a t m e n t s w i t h t h r e e b l o c k s a t f i v e o b s e r v a t i o n s w i t h p e r c e n t i n c r e a s e o f f i n a l o b s e r v a t i o n c o m p a r e d t o f i r s t o b s e r v a t i o n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 2 T a b l e 3 . 3 . . S l o p e s o f l i n e a r t r e n d s o v e r t i m e b y t r e a t m e n t s a n d a s s o c i a t e d P — v a l u e s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 3 T a b l e 4 . 1 . A p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t r e a t m e n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 6 T a b l e 4 . 2 . M e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s o f s e v e n t r e a t m e n t s w i t h s i x f u n g i c i d e s r e p r e s e n t i n g d i f f e r e n t f u n g i c i d e c l a s s e s a t f i v e d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) w i t h l e a s t - s i g n i f i c a n t - d i f f e r e n c e ( L S D ) c o m p a r i s o n s ( P S 0 . 0 5 ) o f b a s e - 1 0 l o g - t r a n s f o r m e d c o u n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 7 T a b l e 4 . 3 . M e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s o f s e v e n t r e a t m e n t s w i t h s i x f u n g i c i d e s r e p r e s e n t i n g d i f f e r e n t f u n g i c i d e c l a s s e s a t 2 1 d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) w i t h l e a s t - s i g n i f i c a n t - d i f f e r e n c e ( L S D ) c o m p a r i s o n s ( P S 0 . 0 5 ) o f b a s e — 1 0 l o g — t r a n s f o r m e d c o u n t s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 8 T a b l e 4 . 4 . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f f i f t e e n i s o l a t e s i n t h r e e r e p l i c a t i o n s g r o w n o n P D A o n l y a n d P D A a m e n d e d w i t h 4 0 u g m l " l b o s c a l i d . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 9 T a b l e 4 . 5 . P e r c e n t — m e a n — r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f e i g h t i s o l a t e s g r o w n o n P D A o n l y a n d P D A a m e n d e d w i t h t h r e e s e t s o f d i f f e r e n t s i n g l e - s i t e f u n g i c i d e s w i t h t h r e e r e p l i c a t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 0 T a b l e 4 . 6 . M e a n - p e r c e n t - r a d i a l - g r o w t h v a l u e s f r o m t h r e e e x p e r i m e n t s a t t h e L o c h m o o r C l u b f r o m 1 9 9 1 - 2 0 0 4 w i t h n o s t a t i s t i c a l i n f e r e n c e s n o t e d o r i m p l i e d . . . . . . . . . . . . . . 1 7 1 T a b l e 4 . 7 M e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f e i g h t t r e a t m e n t s w i t h t h r e e r e p l i c a t i o n s a t t e n c o n c e n t r a t i o n s o f b o s c a l i d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 2 x i L I S T O F F I G U R E S F i g u r e 2 . 1 . M a p o f B l o c k 4 w i t h t r e a t m e n t n u m b e r s a b o v e o r b e l o w e a c h 2 . 1 m b y 8 . 4 m ( 1 7 . 6 H P ) p l o t w i t h 1 . 2 m b y 3 m ( 3 . 6 m 2 ) s a m p l i n g a r e a s o u t l i n e d a n d m o w i n g d i r e c t i o n s i n d i c a t e d b y p a r a l l e l a r r o w s i n o p p o s i t e d i r e c t i o n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 2 F i g u r e 2 . 2 . M e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h o f t h r e e t r e a t m e n t s w i t h 4 r e p l i c a t i o n s a t 3 o b s e r v a t i o n d a t e s w i t h e a c h t r e a t m e n t a p p l y i n g c h l o r o t h a l o n i l a n n u a l l y . 9 3 F i g u r e 3 . 1 . T r e a t m e n t m e a n s f o r p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h b y o b s e r v a t i o n d a t e s [ f r o m G i l s t r a p e t . a l ( 8 ) ] . . . . . . 1 2 4 F i g u r e 3 . 2 . E s t i m a t e d l i n e a r t r e n d s b y t r e a t m e n t . . . . . . 1 2 5 F i g u r e 4 . 1 . D o s e — r e s p o n s e c u r v e f o r t h e a v e r a g e - p e r c e n t r e l a t i v e - g r o w t h m e a s u r e m e n t s o f t h r e e r e p l i c a t e s o f i s o l a t e L F - 7 a t s e v e n c o n c e n t r a t i o n s o f b o s c a l i d . . . . . 1 7 3 F i g u r e 4 . 2 . R e g r e s s i o n l i n e o f t h r e e r e p l i c a t i o n s o f m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h m e a s u r e m e n t s o f i s o l a t e L F - 7 a g a i n s t t h e b a s e - 1 0 l o g a r i t h m s o f f i v e - f u n g i c i d e c o n c e n t r a t i o n s r a n g i n g f r o m 5 t o 4 0 u g m l q ’ . . . . . . . . . . . 1 7 3 F i g u r e 4 . 3 . D o l l a r — s p o t c o u n t s o f t h e m e a n s o f s e v e n t r e a t m e n t s w i t h 4 r e p l i c a t i o n s ( F i e l d - E x p e r i m e n t I ) . . 1 7 4 F i g u r e 4 . 4 . M e a n — d o l l a r — s p o t c o u n t s o f t h e m e a n s o f t h r e e t r e a t m e n t s w i t h f o u r r e p l i c a t i o n s a t n i n e o b s e r v a t i o n s ( F i e l d E x p e r i m e n t I I ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 5 F i g u r e 4 . 5 . M e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s o f t h e m e a n s o f t h r e e t r e a t m e n t s w i t h f o u r r e p l i c a t i o n s a t f i v e o b s e r v a t i o n s ( F i e l d E x p e r i m e n t I I ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 6 F i g u r e 4 . 6 . D o s e - r e s p o n s e c u r v e s f o r t h e p e r c e n t - m e a n - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f e i g h t i s o l a t e s a t t e n c o n c e n t r a t i o n s o f b o s c a l i d e x p r e s s e d a s b a s e - 1 0 l o g a r i t h m s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 7 x i i C H A P T E R 1 I N T R O D U C T I O N D I S C O V E R Y O F D O L L A R S P O T A S A D I S E A S E O F T U R F G R A S S E S D o l l a r s p o t i s a p r o m i n e n t a n d s e r i o u s t u r f g r a s s d i s e a s e i n m o s t p a r t s o f t h e w o r l d . S y m p t o m s o f t h e d i s e a s e w e r e n o t e d f i r s t p r o b a b l y b y P i p e r a n d C o e w h o i n v e s t i g a t e d b r o w n s p o t s “ v a r y i n g f r o m a f e w i n c h e s t o a f o o t o r m o r e i n d i a m e t e r , w h i c h a p p e a r e d m o r e o r l e s s a b u n d a n t l y s c a t t e r e r e d ” a b o u t o n g o l f — c o u r s e — p u t t i n g g r e e n s n e a r P h i l a d e l p h i a i n 1 9 1 3 ( 1 0 6 ) . E v e r y b r o w n a r e a o n p u t t i n g g r e e n s a t t h a t t i m e w a s t e r m e d “ s u n s c a l d ” ( 1 0 7 ) , a n d i n t h i s i n s t a n c e i t w a s c o n c l u d e d t h a t t h e c a u s e w a s p r i m a r i l y p o o r d r a i n a g e ( 1 0 6 ) . I n 1 9 1 4 , s i m i l a r b r o w n s p o t s a p p e a r e d o n t u r f b e i n g e x p e r i m e n t e d u p o n b y M r . F r e d T a y l o r a t h i s h o m e n e a r P h i l a d e l p h i a w h o r e p o r t e d “ a f i n e w h i t e c o b w e b b y c o v e r i n g c o u l d b e s e e n o n t h e n e w l y , f o r m e d p a t c h e s i n t h e e a r l y m o r n i n g " ( 1 0 7 ) . A b i o t i c m a l a d y w a s s u s p e c t e d b e c a u s e o f t h e “ d e f i n i t e n e s s o f t h e s p o t s a n d t h e i r c o n c e n t r i c g r o w t h . ” H o w e v e r , i n v e s t i g a t i o n s b y s e v e r a l p a t h o l o g i s t f a i l e d t o i d e n t i f y a c a u s a l o r g a n i s m ( 1 0 6 ) . B r o w n s p o t s c o u l d b e f o u n d a b u n d a n t l y o n g o l f c o u r s e s i n t h e W a s h i n g t o n , D . C . , a r e a b y 1 9 1 6 . P i p e r a n d C o e r e p o r t e d t h a t “ e a r l y i n t h e m o r n i n g a f i n e w h i t e m y c e l i u m c o u l d b e s e e n c o v e r i n g n e w s p o t s ” t h a t w e r e “ a f e w i n c h e s ” i n d i a m e t e r ( 1 0 6 ) . L a r g e r s p o t s w i t h t w o — f o o t d i a m e t e r s w e r e o b s e r v e d a c t i v e l y g r o w i n g a n d h a v i n g e d g e s “ s h a r p l y m a r k e d b y a n a r r o w z o n e o f d a r k s m o k y g r e e n w h e r e t h e g r a s s l e a v e s a r e d y i n g . ” S m a l l b l a c k s c l e r o t i a w e r e c o l l e c t e d a l o n g t h e s e e d g e s a n d p l a c e d i n c u l t u r e . T h e d a r k m y c e l i a p r o d u c e d w e r e e x a m i n e d b y P i p e r a n d C o e a n d d e e m e d t o b e t h a t o f R h i z o c t o n i a s o l a n i K U h n . T h e p o s s i b i l i t y o f t h e p r e s e n c e o f t w o c a u s a l o r g a n i s m s c a u s i n g t w o d i f f e r e n t t u r f g r a s s d i s e a s e s w a s n o t a d d r e s s e d . T A X O N O M I C C L A S S I F I C A T I O N O F T H E D O L L A R - S P O T P A T H O G E N T h e d i f f e r e n c e s i n r e l a t i v e - s p o t d i a m e t e r s l e d t o t h e c o n n o t a t i o n s o f “ l a r g e b r o w n p a t c h ” a n d “ s m a l l b r o w n p a t c h ” , w h i c h w a s d e s c r i b e d b y M o n t e i t h a n d D a h l i n 1 9 3 2 ( 9 5 ) . T h e y p r o p o s e d t h a t i t b e c a l l e d “ d o l l a r s p o t ” , a n a m e a l r e a d y b e i n g u s e d f o r t h e d i s e a s e . T h e y s u g g e s t e d t h a t i t s p a t h o g e n w a s a f u n g u s a n d p r o b a b l y a s p e c i e s o f t h e R h i z o c t o n i a D C g e n u s s i n c e P i p e r a n d C o e h a d a l r e a d y i d e n t i f i e d R . s o l a n i a s c a u s i n g “ l a r g e b r o w n p a t c h ” . M o n t e i t h a n d D a h l p r o p o s e d s h o r t e n i n g t h i s n a m e t o “ b r o w n p a t c h ” . I n 1 9 3 7 , B e n n e t t c o l l e c t e d a n d c u l t u r e d i s o l a t e s f r o m d o l l a r s p o t s i n B r i t a i n , A m e r i c a , a n d A u s t r a l i a ( 9 ) . O n l y r u d i m e n t a r y , s t e r i l e a p o t h e c i a g r e w o n a n y o f t h e A m e r i c a n o r A u s t r a l i a n i s o l a t e s . O n e g r o u p o f B r i t i s h s a m p l e s p r o d u c e d a s c o s p o r e s , a n d a n o t h e r p r o d u c e d a s c o s p o r e s a n d c o n i d i o s p o r e s . H e c o n s i d e r e d h i s c o l l e c t i o n s a s r e p r e s e n t i n g t h r e e s t r a i n s o f t h e s a m e s p e c i e s ; d i f f e r e n c e s i n p a t h o g e n i c i t y w e r e n o t r e p o r t e d . B e n n e t t d e s c r i b e d t h e p a t h o g e n a s a p e r f e c t f u n g u s b a s e d o n h i s o b s e r v a t i o n s o f t h e i s o l a t e s t h a t p r o d u c e d b o t h a s c o s p o r e s a n d c o n d i o s p o r e s , a n d h e n a m e d i t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . U n f o r t u n a t e l y , t h o s e i s o l a t e s n o l o n g e r e x i s t ( 1 2 1 ) . F i n d i n g s w e r e s i m i l a r i n l a t e r a t t e m p t s t o d u p l i c a t e B e n n e t t ’ s w o r k e x c e p t n o n e o f t h e B r i t i s h i s o l a t e s p r o d u c e d c o n i d i o s p o r e s ( 6 , 7 7 , 1 2 4 ) . E f f o r t s w i t h s o l e l y A m e r i c a n i s o l a t e s h a v e y i e l d e d n o t h i n g m o r e t h a n a b o r t e d o r s t e r i l e a p o t h e c i a ( 4 3 , 4 4 ) . N a t u r a l o c c u r r e n c e s o f s c l e r o t i a o r c o n i d i o s p o r e s h a v e n o t b e e n r e p o r t e d ( 9 7 , 1 2 4 ) . N e w e l l a n d B a l d w i n , i n 1 9 9 0 ( 1 0 0 ) a n d 1 9 9 2 ( 6 ) , r e p o r t e d f i n d i n g f e r t i l e a p o t h e c i a o n b o t h d i s e a s e d a n d h e a l t h y f e s c u e g r a s s e s ( F e s t u c a L . s p . ) g r o w i n g i n E n g l a n d . H o w e v e r , t h e y w e r e u n a b l e t o c o n f i r m p a t h o g e n i c i t y u s i n g K o c h ’ s P o s t u l a t e s . C o u c h s t a t e d t h a t a s c o s p o r e s a n d c o n i d i o s p o r e s a p p e a r e d t o b e o f m i n o r i m p o r t a n c e i n t h e e p i d e m i o l o g y o f t h e d i s e a s e ( 1 6 ) . W h e t z e l , i n 1 9 4 5 ( 1 5 4 ) , e x c l u d e d S . h o m o e o c a r p a f r o m t h e f a m i l y S c l e r o t i n i a c e a e b e c a u s e i t d i d n o t p r o d u c e t r u e s c l e r o t i a . A y e a r l a t e r h e s u g g e s t e d t h a t i t w a s p r o b a b l y R u t s t r o e m i a s p . a n d s y n o n y m o u s w i t h a p r e v i o u s l y d e s c r i b e d f u n g u s C i b o r i a a r m e r i a e V o n H o h n e l ( 1 5 5 ) . J a c k s o n a l s o c o n c l u d e d t h a t t h e o r g a n i s m m o s t l i k e l y b e l o n g e d i n t h e g e n u s R u t s t r o e m i a ( 7 7 ) . H e a l s o s u g g e s t e d t h a t t h e s y m p t o m s o f d o l l a r s p o t m a y h a v e b e e n c a u s e d b y m o r e t h a n o n e s p e c i e s . K o h n c o n c l u d e d t h a t t h e o r g a n i s m w o u l d m o r e a p p r o p r i a t e l y f i t i n t o e i t h e r t h e L a n z i a S a c c . a n d / o r M b e l l e r o d i s c u s H e n n . g e n e r a ( 8 3 ) . M a n y p u b l i c a t i o n s c o n c e r n i n g d o l l a r s p o t l i s t L a n z i a a n d . M b e l l e r o d i s c u s b u t n o t S c l e r o t i n i a a s k e y w o r d s ( 6 , 1 1 , 5 7 , 6 4 , 7 9 , 1 0 0 ) . K o h n a g r e e d w i t h J a c k s o n t h a t m o r e t h a n o n e s p e c i e s m i g h t b e i n v o l v e d ( 8 4 ) . T h e t e r m “ d o l l a r s p o t s y n d r o m e ” w a s s u g g e s t e d b y S m i l e y ( 1 2 0 ) . M y c o l o g i s t s u s i n g t r a d i t i o n a l t a x o n o m y f o r o v e r f i f t y y e a r s f a i l e d t o d i s t i n c t l y i d e n t i f y a n d r e c l a s s i f y t h e o r g a n i s m ( s ) r e s p o n s i b l e , a n d i t s e p i t h e t r e m a i n e d S . h o m o e o c a r p a F . T . B e n n e t t ( 1 1 1 ) . K o h n a n d G r e n v i l l e f o u n d S . h o m o e o c a r p a t o b e u n i q u e i n a s e r i e s o f s t u d i e s t h a t c o m p a r e d a n a t o m i c a l , h i s t o c h e m i c a l , a n d u l t r a s t r u c t u r a l p r o p e r t i e s o f s e l e c t e d s t r o m a t a l a n d s c l e r o t i a l f u n g i g r o w n i n V i t r o ( 8 4 , 8 5 ) . T h e f i r s t r e p o r t s o f s t u d i e s w i t h t h e D N A o f t h e p a t h o g e n b e g a n i n 1 9 9 3 w h e n C a r b o n e a n d K o h n ( 1 2 ) a n a l y z e d s o m e o f i t s i s o l a t e s a s w e l l a s o t h e r s c l a s s i f i e d a s m e m b e r s o f t h e S c l e r o t i n i a c e a e . T h e y p l a c e d S . h o m o e o c a r p a i n c l o s e r e l a t i o n s w i t h f o u r R u t s t r o e m i a s p . b a s e d o n p h y l o g e n e t i c c o m p a r i s o n s u s i n g n u c l e a r r i b o s o m a l i n t e r n a l t r a n s c r i b e d s p a c e r — r e g i o n 1 ( I T S l ) s e q u e n c i n g . N o c o m p a r i s o n s w e r e m a d e t o a n y i s o l a t e s o f . M b e l l e r o d i s c u s o r L a n z i a , ( 1 1 0 ) , b o t h g e n e r a t h a t K o h n h a d s u p p o r t e d e a r l i e r a s b e i n g p o s s i b i l i t i e s w h e r e i t s h o u l d b e l o n g ( 8 3 ) . H o l s t - J e n s e n e t a l . s e q u e n c e d I T S l a n d I T S Z r e g i o n s p l u s p a r t o f t h e n u c l e a r r i b o s o m a l s m a l l s u b u n i t ( 1 8 S r D N A ) r e g i o n s o f a b r o a d e r s p e c t r u m o f i s o l a t e s . T h e i r a n a l y s i s s h o w e d S . h o m o e o c a r p a i n a c l u s t e r w i t h s e v e r a l R u t s t r o e m i a s p e c i e s a n d a p a r t f r o m a s o l e L a n z i a s p e c i e ( 6 7 ) . P o w e l l a n d V a r g a s i n 1 9 9 9 s h o w e d t h a t t h e c a u s a l o r g a n i s m m o s t c l o s e l y r e s e m b l e d R u t s t r o e m i a c u n i c u l i ( B o u d i e r ) E l l i o t t a n d R . h e n n i n g s i a n u m ( P l é t t n . ) T . S c h u m a c h . & L . M . K o h n . u s i n g p a r s i m o n y a n a l y s i s o f I T S l s e q u e n c i n g a s a b a s i s ( 1 1 0 ) . T h e y p r o p o s e d a n e w n a m e , R u t s t r o e m i a f e s t u c a e , f o r t h e c a u s a l o r g a n i s m o f d o l l a r — s p o t d i s e a s e o f B r i t i s h o r i g i n . R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m w a s p r o p o s e d a s a n e w n a m e f o r t h e c o r r e s p o n d i n g p a t h o g e n i n N o r t h A m e r i c a , A u s t r a l i a , a n d t h e N e t h e r l a n d s , ( 1 0 9 ) . T h i s n a m e a p p e a r s a s s u c h i n r e c e n t l y p u b l i s h e d m o n o g r a p h s ( 8 , 1 4 1 , 1 4 2 ) ; a n d , i t w i l l b e u s e d t h r o u g h o u t t h e b a l a n c e o f t h i s d i s s e r t a t i o n . R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M S I G N S - D O L L A R - S P O T S Y M P T O M S A N D E P I D E M E O L O G Y B o t h w a r m - s e a s o n — a n d c o o l — s e a s o n — t u r f g r a s s s p e c i e s a n d c u l t i v a r s a r e s u s c e p t i b l e t o d o l l a r s p o t i n v a r y i n g d e g r e e s ( 7 , 1 6 , 6 6 , 9 2 , 9 8 , 1 3 0 , 1 4 7 , 1 5 6 ) . M y c e l i a o f R . f l o c c u s u m c a n s u r v i v e l o n g p e r i o d s o f i n a c t i v i t y a s s t r o m a t a u p o n o r e m b e d d e d i n a b o v e — g r o u n d — t u r f g r a s s t i s s u e , p r i m a r i l y t h e l e a v e s ( 5 9 ) . I t m a y e x i s t f o r b r i e f p e r i o d s i n p l a n t d e b r i s a s a f a c u l t a t i v e s a p r o p h y t e ( 1 3 8 ) . H y p h a e e l o n g a t e v i a t e r m i n a l - c e l l d i v i s i o n u n d e r f a v o r a b l e c o n d i t i o n s a n d e n t e r t h e p l a n t t h r o u g h s t o m a t a a n d c u t - l e a f t i p s ( 9 5 ) . A p p r e s s o r i a h a v e a l s o b e e n o b s e r v e d s u g g e s t i n g d i r e c t p e n e t r a t i o n ( 3 8 ) . H a r m a n e t a l . s t a t e d t h a t t h e p a t h o g e n d e m o n s t r a t e s t w o d i s t i n c t p e r i o d s o f g r o w t h : a s l o w — g r o w i n g p h a s e w h e r e s m a l l c o l o n i e s l a y i n a q u i e s c e n t s t a t e a n d a r a p i d l y g r o w i n g p h a s e i n w h i c h c o p i o u s a m o u n t s o f m y c e l i u m a r e p r o d u c e d ( 6 0 ) . E n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s f a v o r a b l e f o r d i s e a s e a c t i v i t y v a r y a m o n g i s o l a t e s f r o m d i f f e r e n t g e o g r a p h i c a l a r e a s ( 1 3 3 ) . B e n n e t t f o u n d t h a t t h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e r a n g e f o r i n V i t r o g r o w t h o f B r i t i s h i s o l a t e s w a s 2 0 t o 3 0 C , a n d t h a t g r o w t h o c c u r r e d v e r y s l o w l y a t 0 — 1 C . N o n e o f t h e A m e r i c a n o r A u s t r a l i a n i s o l a t e s g r e w a t t h a t t e m p e r a t u r e , b u t b o t h g r e w o p t i m a l l y a t 3 0 C a n d 2 5 C r e s p e c t i v e l y ( 9 ) . E n d o f o u n d t h a t 3 2 C w a s t h e m a x i m u m t e m p e r a t u r e a t w h i c h a n y o f h i s c o l l e c t i o n o f i s o l a t e s c o u l d s u r v i v e u n d e r c o n t r o l l e d c o n d i t i o n s ( 3 7 ) . C o n d i t i o n s f a v o r a b l e f o r R . f l o c c u s u m a r e g e n e r a l l y c o o l - h u m i d n i g h t s w i t h t e m p e r a t u r e s a s l o w a s 1 5 C w i t h e x t e n d e d p e r i o d s o f l e a f w e t n e s s a n d w a r m d a y s w i t h t e m p e r a t u r e s a s h i g h a s 3 2 C ( 1 4 1 ) . T h e p a t h o g e n h a s d e m o n s t r a t e d i t s a d a p t a b i l i t y t o p r o l i f e r a t e a t t h e h i g h e r e n d o f t h i s t e m p e r a t u r e r a n g e i n w a r m e r c l i m a t e s ( 4 6 , 4 7 ) a n d a t t h e l o w e r e n d o f t h i s t e m p e r a t u r e r a n g e i n c o o l e r r e g i o n s ( 1 3 1 , 1 3 4 ) . P u f f y a e r i a l m y c e l i u m m a y b e s e e n g r o w i n g f r o m i n f e c t e d l e a v e s b e f o r e t h e d e w d r i e s a n d b r i d g i n g t o a d j a c e n t , h e a l t h y l e a v e s s o t h a t f u r t h e r i n f e c t i o n s m a y o c c u r ( 6 9 , 1 3 1 ) . M o v e m e n t o f t h e p a t h o g e n b e y o n d l e a f - t o - l e a f t r a n s m i s s i o n o c c u r s i n a p a s s i v e m a n n e r v i a i n f e c t e d t i s s u e i n p l a n t d e b r i s , m a i n l y l e a f c l i p p i n g s ( 1 5 ) . M e a n s o f t r a n s p o r t a c r o s s a s w a r d i n c l u d e w i n d , r a i n ( 1 2 2 ) , e q u i p m e n t , a s w e l l a s h u m a n t r a f f i c a n d a n i m a l a c t i v i t i e s ( 1 2 4 ) . M i g r a t i o n o v e r l o n g e r d i s t a n c e s o c c u r s o n s h o e s , e q u i p m e n t ( 7 6 ) , a n d p r o b a b l y o n c l o t h i n g , w i l d l i f e , a n d d o m e s t i c a t e d d o g s , p a r t i c u l a r l y t h o s e w h o s e o w n e r s h a v e b e e n c o n t r a c t e d b y g o l f c o u r s e s t o f r i g h t e n g e e s e a n d o t h e r w a t e r f o w l a w a y f r o m t h e i r p r e m i s e s . N o e v i d e n c e o f d o l l a r s p o t a s a s e e d - b o r n e d i s e a s e h a s b e e n r e p o r t e d ( 1 ) , t h e r e f o r e d i s s e m i n a t i o n v i a s e e d a s a v e c t o r i s i m p r o b a b l e . H s i a n g s p e c u l a t e d t h a t w i n d c o u l d h a v e t r a n s p o r t e d m y c e l i a i n t o s o u t h e r n O n t a r i o f r o m t h e U n i t e d S t a t e s ( 7 0 ) , b u t t h i s i s u n l i k e l y s i n c e t h e p a t h o g e n i s n o t k n o w n t o p r o d u c e a i r b o r n e s p o r e s . K e r r r e p o r t e d t h a t R . f l o c c o s u m m y c e l i a , i n t r o d u c e d i n t o t h e s o i l , g r e w v i g o r o u s l y f o r a s h o r t p e r i o d o f t i m e a n d p r o d u c e d a m y c o t o x i n t h a t i n h i b i t e d r o o t g r o w t h o f s e v e r a l c e r e a l s w i t h o u t p e n e t r a t i n g t h e m ( 8 2 ) . E n d o a n d h i s c o — i n v e s t i g a t o r s a s s a y e d s t u n t e d r o o t s o f c r e e p i n g b e n t g r a s s ( A g r o s t i s s t o l o n i f e r a L . ) s y m p t o m a t i c f o r d o l l a r s p o t . T h e y i s o l a t e d g a l a c t o s e f r o m c u l t u r e s o f R . f l o c c o s u m a n d i d e n t i f i e d t h e s u g a r a s b e i n g t o x i c t o b e n t g r a s s e s ( 3 9 , 4 0 , 4 1 , 8 9 ) . C o u c h s t a t e d t h a t R . f l o c c o s u m c a n c o l o n i z e s u c h u n d e r s i z e d r o o t s ( 1 6 ) . I n f e c t i o n c e n t e r s a r e d i s t i n c t n e c r o t i c s p o t s t h a t s i n k s l i g h t l y a n d m a y i n c r e a s e i n d i a m e t e r t o a p p r o x i m a t e l y 2 0 - 3 5 m m w h e r e t h e t u r f i s b e i n g m a i n t a i n e d a t a c u t t i n g h e i g h t o f l e s s t h a n 1 3 m m ( 1 3 3 , 1 4 1 ) . T h e s e c i r c u l a r s p o t s r e a c h s o m e f i n i t e d i a m e t e r a n d d o n o t e n l a r g e f u r t h e r . T h e r e a s o n f o r t h i s i s n o t w e l l u n d e r s t o o d ( 1 3 3 ) . T h e s e c i r c l e s a r e l e s s d i s t i n g u i s h a b l e a n d m a y g r o w i n t o d i a m e t e r s o f a p p r o x i m a t e l y 1 5 0 m m . w h e r e t h e t u r f i s a l l o w e d t o g r o w t a l l e r ( 1 2 1 ) . C o u c h s t a t e d t h a t b l i g h t e d a r e a s c o u l d r e a c h a w i d t h o f n e a r l y f o u r m e t e r s w h e r e t h e t u r f i s m o w e d i n f r e q u e n t l y ( 1 6 , 1 5 3 ) . A d j a c e n t i n f e c t i o n c e n t e r s m a y c o a l e s c e r e g a r d l e s s o f t h e c u t t i n g h e i g h t ( 1 6 , 1 4 1 ) . H a r m a n i n o c u l a t e d c r e e p i n g b e n t g r a s s w i t h 2 7 i s o l a t e s f r o m d i f f e r e n t a r e a s a n d h o s t s . H i s e f f o r t s t o r e - i s o l a t e t h e p a t h o g e n f r o m t h e h u b a r e a s o f i n f e c t i o n c e n t e r s w e r e f u t i l e ( 6 1 ) . O t h e r s y m p t o m s o f t h e d i s e a s e a r e s m a l l l e a f — l e s i o n s t h a t a r e f i r s t c h l o r o t i c , t h e n w a t e r s o a k e d , a n d l a s t l y n e c r o t i c ( 1 2 1 ) . T h e l e s i o n s h a v e s m o o t h e d g e s a s o p p o s e d t o t h e i r r e g u l a r l y - s h a p e d s y m p t o m s c a u s e d b y R . s o l a n i . A n e c r o t i c b a n d m a y f o r m a c r o s s t h e l e a v e s t h a t c a n b e l i g h t o r d a r k , d e p e n d i n g u p o n t h e s p e c i e s o f t h e h o s t . T h e s e b a n d s o f t e n h a v e a n h o u r g l a s s s h a p e ( 1 2 1 ) , m o r e s o o n c o o l - s e a s o n g r a s s e s t h a n o n w a r m - s e a s o n g r a s s e s ( 3 0 ) . T h e s e b a n d s m a y b e o u t l i n e d w i t h a r e d d i s h - b r o w n b o r d e r . A n e x c e p t i o n i s o n a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) u p o n w h i c h t h e b a n d s h a v e n o b o r d e r s ( 1 4 1 ) . E n t i r e l e a v e s m a y b e c o m e b l i g h t e d a n d s h r i v e l w i t h i n a f e w d a y s ( 2 9 ) . D a m a g e d t u r f g r a s s e s u s u a l l y r e c o v e r c o m p l e t e l y w h e n e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s b e c o m e u n f a v o r a b l e f o r p a t h o g e n g r o w t h i f a n a d e q u a t e s u p p l y o f n i t r o g e n a n d w a t e r i s 1 0 a v a i l a b l e . T h i s i s e s p e c i a l l y t r u e d u r i n g c o o l w e a t h e r i n t h e f a l l . H o w e v e r , d i s e a s e s y m p t o m s m a y p e r s i s t t h r o u g h o u t t h e w i n t e r i f t u r f g r a s s - g r o w i n g c o n d i t i o n s a r e p o o r ( 1 3 3 ) . I t s s y m p t o m s c a n b e q u i t e u n r e l e n t i n g o n c e t h e d i s e a s e i s w e l l e s t a b l i s h e d ( 9 5 , 1 2 4 ) . J a c k s o n r e p o r t e d s y m p t o m s p e r s i s t i n g o n “ s e a m a r s h t u r f ” i n w e s t e r n E n g l a n d f r o m 1 9 5 8 t h r o u g h 1 9 6 0 ( 7 1 , 7 2 , 7 3 ) d u r i n g w h i c h t i m e t h e w i n t e r s w e r e m i l d , a n d a d d i t i o n s o f n i t r o g e n o u s f e r t i l i z e r s w e r e q u i t e l o w ( N . J a c k s o n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . S m i t h r e p o r t e d t h a t i n “ s e a — m a r s h t u r f ” t h e p r i m a r y s p e c i e s a n d a p p a r e n t l y s o l e h o s t o f t h e d i s e a s e w a s s l e n d e r c r e e p i n g r e d f e s c u e ( F e s t u c a r u b r a L . s u b s p . l i t o r a l i s [ M e y e r ] A u q u i r ) m i x e d w i t h c r e e p i n g b e n t g r a s s , a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) a n d p e a r l w o r t ( S a g i n a p r o c u m b e n s ) ( 1 2 7 ) . T h e d i s e a s e c a n b e a c t i v e y e a r a r o u n d o n w a r m — s e a s o n t u r f g r a s s e s ( 9 1 ) . C O N T A C T F U N G I C I D E S F O R T H E C O N T R O L O F D O L L A R S P O T T h e f i r s t f u n g i c i d e u s e d o n t u r f w a s a c o m b i n a t i o n o f c o p p e r s u l f a t e a n d h y d r a t e d l i m e k n o w n a s B o r d e a u x m i x t u r e . B y 1 9 1 9 , i t w a s g e n e r a l l y u s e d t o c o n t r o l b r o w n p a t c h , o r “ l a r g e b r o w n p a t c h ” , a s t h e d i s e a s e w a s t h e n k n o w n ( 9 5 ) . I t w a s i n e f f e c t i v e o n “ s m a l l b r o w n p a t c h ” a n d i t s u s e o n t u r f w a s a b a n d o n e d l a t e r d u e t o a p h y t o t o x i c 1 1 E n g l a n d . S e v e r a l o f h i s a n n u a l r e p o r t s d e m o n s t r a t e d t h e a c c u m u l a t i o n o f c o p p e r i n t h e s o i l ( 1 3 2 ) . I n 1 9 2 7 , M o n t e i t h r e p o r t e d t h a t m e r c u r y c o m p o u n d s w e r e e f f e c t i v e o n “ s m a l l b r o w n - p a t c h ” ( 9 3 , 9 4 ) . A s h o r t a g e o f m e r c u r y d u r i n g W o r l d W a r I I d i c t a t e d t h e n e e d f o r a l t e r n a t i v e f u n g i c i d e s ( 9 6 ) . T h e u s e o f t h i r a m o n d o l l a r s p o t h a d m i x e d s u c c e s s i n t h e 1 9 4 0 5 a n d e a r l y 1 9 5 0 s ( 3 , 4 , 5 8 ) . I t i s g e n e r a l l y b e l i e v e d t h a t t h i s e r a m a r k e d t h e r e a l b e g i n n i n g o f p l a n t — f u n g i c i d e t e c h n o l o g y ( 6 5 ) . I n 1 9 4 9 , t h e f i r s t N a t i o n a l C o o p e r a t i v e T u r f F u n g i c i d e T r i a l w a s c o n d u c t e d i n w h i c h e l e v e n - t u r f f u n g i c i d e s w e r e t e s t e d a t t w e l v e l o c a t i o n s ( 1 9 ) . T h e s e w e r e l o c a t e d i n e i g h t s t a t e s a n d o n e C a n a d i a n p r o v i n c e . T h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s w i t h e a c h t r e a t m e n t w a s c o u n t e d a t t r i a l s i t e s i n C a l i f o r n i a , I o w a , M a s s a c h u s e t t s , I n d i a n a , a n d t w o l o c a t i o n s i n R h o d e I s l a n d . T h e d a t a w e r e a s s i m i l a t e d b y R o w e l l a t t h e R h o d e I s l a n d A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n , a n d t h e r e s u l t s w e r e c i r c u l a t e d a s t w e l v e — p a g e m i m e o g r a p h s ( 1 1 2 ) . D a v i s i n t e r p r e t e d t h e s e f i n d i n g s a s d e m o n s t r a t i n g t h e s u p e r i o r i t y o f t h e c a d m i u m - c o n t a i n i n g p r o d u c t s i n s u p p r e s s i n g R . f l o c c o s u m ( 1 9 ) . H e c o n f i r m e d t h i s i n s u b s e q u e n t r e p o r t s ( 1 8 , 2 0 , 2 1 , 2 2 ) . I n 1 9 5 1 , S m i t h w a s a p p o i n t e d t u r f g r a s s p a t h o l o g i s t a t t h e S p o r t s T u r f R e s e a r c h I n s t i t u t e ( S T R I ) i n B i n g l e y , 1 2 d o l l a r - s p o t f u n g i c i d e s ( 5 8 , 1 3 3 ) . C y c l o h e x i m i d e i s a n h i g h e f f i c a c y o f c a d m i u m a n d m e r c u r y c o m p o u n d s ( l 2 3 , 1 2 4 , 1 2 6 , 1 2 8 ) . T h e a n t i b i o t i c g r i s e o f u l v i n w a s r e p o r t e d a s h a v i n g e f f e c t i v e , e a r l y - s e a s o n c o n t r o l o f d o l l a r s p o t ( 1 2 5 ) b u t l e s s t h a n a d e q u a t e e f f i c a c y a f t e r t h a t ( 1 2 6 ) . J a c k s o n r e p l a c e d S m i t h i n 1 9 5 8 a n d c o n t i n u e d t h e f u n g i c i d e — r e s e a r c h p r o g r a m a t S T R I . S u b s e q u e n t l y , h e r e p o r t e d d o l l a r - s p o t c o n t r o l w i t h O r t h o L a w n a n d T u r f F u n g i c i d e , a c o m b i n a t i o n p r o d u c t c o n t a i n i n g 6 6 % f o l p e t , 1 0 % t h i r a m , a n d 5 % c a d m i u m c a r b o n a t e . A c a d m i u m — a n d u r e a - b a s e d p r o d u c t d e v e l o p e d e a r l i e r b y S m i t h ( 1 2 9 ) w a s a l s o e f f e c t i v e ( 7 4 ) . C a d m i u m - c o n t a i n i n g f u n g i c i d e s w e r e b a n n e d i n t h e U . K . i n 1 9 6 5 ( 1 3 2 ) a n d s h o r t l y t h e r e a f t e r i n t h e U . S . ( 9 0 ) d u e t o t h e i r t o x i c o l o g i c a l a n d c a r c i n o g e n i c p r o p e r t i e s . F i e l d r e s e a r c h d u r i n g t h i s t i m e s h o w e d a d e q u a t e c o n t r o l o f d o l l a r s p o t u s i n g f o l p e t , q u i n t o z e n e , a n d t h r e e m e r c u r y - b a s e d f u n g i c i d e s ( 7 5 ) . Q u i n t o z e n e , o r p e n t a c h l o r o n i t r o b e n z e n e ( P C N B ) ( 1 5 0 ) , h a d m u c h b e t t e r c o n t r o l w h e n a p p l i e d a s a s p r a y r a t h e r t h a n a s a d u s t ( 7 5 ) . C y c l o h e x i m i d e , a n i l a z i n e , a n d c h l o r o t h a l o n i l b e c a m e a v a i l a b l e i n t h e l a t e 1 9 6 0 8 a n d p r o v e d t o b e e f f e c t i v e 1 3 a n t i b i o t i c w i t h f u n g i c i d a l p r o p e r t i e s . I t w a s m a r k e t e d a s A c t i d i o n e ( 2 3 ) a n d o f f e r e d a c c e p t a b l e d o l l a r — s p o t c o n t r o l u p u n t i l t h e m i d 1 9 8 0 5 ( 2 8 , 4 5 ) . T h e p r o d u c t r e g i s t r a t i o n w a s c a n c e l l e d i n 1 9 8 8 d u e t o i t s h i g h t o x i c i t y ( 1 5 7 ) . A n i l a z i n e i s a s u b s t i t u t e d - a r o m a t i c t r i a z i n e ( 1 5 1 ) a n d o n e o f t h e f i r s t o r g a n i c c o m p o u n d s u s e d a s a f u n g i c i d e ( 6 5 ) . I t w a s m a r k e t e d a s D y r e n e b y M i l e s I n c . a n d o f f e r e d b r o a d — s p e c t r u m c o n t r o l o f m a n y p l a n t d i s e a s e s . T h e p r o d u c t r e g i s t r a t i o n w a s v o l u n t a r i l y c a n c e l l e d b y t h e m a n u f a c t u r e r d u e t o i t s d e t e c t i o n i n g r o u n d w a t e r ( 1 0 4 ) . C h l o r o t h a l o n i l i s a s u b s t i t u t e d - a r o m a t i c n i t r i l e f u n g i c i d e ( 9 9 ) t h a t i s o n e o f t h e m o s t w i d e l y u s e d f u n g i c i d e s i n t h e w o r l d . G r a c e - S i e r r a C r o p P r o t e c t i o n v o l u n t a r i l y c a n c e l l e d C a l o — C h l o r a n d C a l o — G r a n i n 1 9 9 3 , p r i m a r i l y d u e t o c o n c e r n s a b o u t m e r c u r y b i o — m a g n i f i c a t i o n ( 1 0 5 ) . T h e s e w e r e t h e l a s t m e r c u r y — b a s e d t u r f f u n g i c i d e s s o l d i n t h e U . S . T h e s e p r o d u c t s w e r e u s e d p r i m a r i l y t o c o n t r o l t h e s n o w - m o l d d i s e a s e s T y p h u l a b l i g h t a n d M i c r o d o c h i u m p a t c h o n g o l f c o u r s e t e e s a n d g r e e n s . T h e p r o d u c t s c o u l d b e l a w f u l l y s o l d u n t i l m i d 1 9 9 4 ( 1 3 7 ) . U s e o f t h e s e p r o d u c t s i s s t i l l p e r m i t t e d a n d h a v e b e e n r e p o r t e d b e i n g c o m m o n l y u s e d i n M i n n e s o t a a s r e c e n t l y a s 1 9 9 9 ( 4 2 ) . S m a l l d w i n d l i n g s t o c k p i l e s s t i l l e x i s t i n n o r t h e r n M i c h i g a n a n d 1 4 s u r e l y i n o t h e r l o c a l e s , a s w e l l , w h e r e s n o w f a l l i s s i g n i f i c a n t . A l l o f t h e a b o v e a r e c o n t a c t f u n g i c i d e s , w h i c h c a n a l s o b e r e f e r r e d t o a s b e i n g m u l t i — s i t e f u n g i c i d e s b e c a u s e t h e y a f f e c t s e v e r a l o f t h e p a t h o g e n ’ s c r i t i c a l m e t a b o l i c p a t h w a y s ( 7 8 , 1 5 1 ) C o n t a c t f u n g i c i d e s a r e a l s o k n o w n a s p r o t e c t a n t f u n g i c i d e s b e c a u s e w h e n a p p l i e d t h e y f o r m a p r o t e c t i v e - s u r f a c e b a r r i e r t h a t i n h i b i t s s p o r e g e r m i n a t i o n ( 9 9 ) . C o n t a c t f u n g i c i d e s m u s t b e a p p l i e d a s p r o p h y l a c t i c s ( 1 1 8 ) a n d h a v e s h o u l d a d h e r e w e l l t o f o l i a g e ( 1 1 6 ) . T u r f g r a s s - s h o o t g r o w t h o c c u r s f r o m t h e b a s e o f t h e p l a n t , a n d t h e r e f o r e a n a p p r e c i a b l e a m o u n t o f a n y l e a f s u r f a c e s c o v e r e d w i t h a c o n t a c t f u n g i c i d e a r e r e m o v e d w h e n m o w e d . A l s o , t h e i r e x p o s u r e t o l i g h t , m o i s t u r e , a n d o t h e r e n v i r o n m e n t a l f a c t o r s l e a d s t o e r o s i o n a n d d e g r a d a t i o n o f t h e s e c o m p o u n d s ( 1 5 1 ) . A c c o r d i n g l y , c o n t a c t - f u n g i c i d e e f f e c t i v e n e s s i s r e l a t i v e l y s h o r t — l i v e d . S Y S T E M I C F U N G I C I D E S F O R T H E C O N T R O L O F D O L L A R S P O T A s y s t e m i c f u n g i c i d e e n t e r s t h e p l a n t a n d m o v e s w i t h i n t h e p l a n t t o s o m e d e g r e e a s o p p o s e d t o a c o n t a c t f u n g i c i d e ( 9 9 ) . T h e c o m p o u n d o r i t s d e r i v a t i v e ( s ) m a y m o v e s h o r t d i s t a n c e s i n p y r e n c h y m a t i s s u e o r b e t r a n s p o r t e d r e l a t i v e l y l o n g d i s t a n c e s v i a t h e x y l e m , t h e 1 5 p h l o e m , o r b o t h . T h e d e g r e e t o w h i c h s u c h m o v e m e n t o c c u r s d e p e n d s u p o n t h e c h e m i s t r y o f t h e f u n g i c i d e a n d t h e h e a l t h s t a t u s o f t h e p l a n t . A s y s t e m i c f u n g i c i d e i s n o l o n g e r e x p o s e d t o e n v i r o n m e n t a l e r o s i o n a n d d e g r a d a t i o n o n c e i t i s i n s i d e t h e p l a n t . T h e r e f o r e , t h e y h a v e r e s i d u a l e f f e c t s t h a t a r e g e n e r a l l y t w o t o t h r e e t i m e s l o n g e r t h a n t h e c o n t a c t f u n g i c i d e s . S y s t e m i c f u n g i c i d e s c a n a l s o b e r e f e r r e d t o a s b e i n g s i n g l e — s i t e f u n g i c i d e s b e c a u s e t h e y a f f e c t a p a t h o g e n ’ s m e t a b o l i s m b y a l t e r i n g o n e v i t a l p r o c e s s , o r v e r y f e w c l o s e l y - r e l a t e d p r o c e s s e s ( 1 5 1 ) . S y s t e m i c f u n g i c i d e s a r e g r o u p e d i n t o c l a s s e s . F u n g i c i d e s w i t h i n a c o m m o n c l a s s u s e t h e s a m e p h y s i o l o g i c a l m o d e o f a c t i o n t o c o n t r o l p a t h o g e n s . M o s t s y s t e m i c f u n g i c i d e s a r e f u n g i s t a t i c r a t h e r t h a t f u n g i c i d a l s i n c e o f t e n t h e p a t h o g e n r e c o v e r s a n d i s a b l e t o r e p r o d u c e a s t h e c h e m i c a l d i s s i p a t e s ( 1 0 ) . T h e f i r s t g r o u p o r c l a s s o f s y s t e m i c f u n g i c i d e s , t h e b e n z i m i d a z o l e s , w a s i n t r o d u c e d i n 1 9 6 8 ( 2 6 ) . P r o d u c t s f r o m t w o m o r e c l a s s e s , t h e d i c a r b o x i m i d e s ( 1 0 8 ) , a n d t h e d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s ( 1 1 5 ) b e g a n t o a p p e a r i n t h e 1 9 7 0 5 . T h e y w e r e a l l h i g h l y e f f e c t i v e o n a b r o a d s p e c t r u m o f d i s e a s e s a n d b e c a m e w i d e l y u s e d . E a c h o f t h e s e c l a s s e s p a r t i a l l y o r c o m p l e t e l y l o s t t h e i r e f f e c t i v e n e s s o n 1 6 c e r t a i n p a t h o g e n s o v e r t i m e a s p o p u l a t i o n s b e c a m e r e s i s t a n t t o e a c h o f t h e m . T H E N A T U R E O F F U N G I C I D E R E S I S T A N C E A f u n g a l s t r a i n i s a g r o u p o f c l o n a l l y r e l a t e d i s o l a t e s ( 6 3 ) . R e s i s t a n c e t o f u n g i c i d e s i s t h e h e r i t a b l e a b i l i t y o f a s t r a i n t o c o m p l e t e l y o r p a r t i a l l y o v e r c o m e t h e e f f e c t s o f s i n g l e o r r e p e a t e d e x p o s u r e s t o t h o s e p a r t i c u l a r o r s i m i l a r c h e m i c a l s ( 2 5 ) . T h e r e s i s t a n c e c a n b e q u a l i t a t i v e o r q u a n t i t a t i v e ( 5 1 , 8 6 ) . I n g e n e t i c t e r m s , q u a l i t a t i v e r e s i s t a n c e i s w h e n a s i n g l e - m a j o r g e n e w i t h i n a p a t h o g e n c o n f e r s c o m p l e t e r e s i s t a n c e t o a f u n g i c i d e . F u n g a l s t r a i n s s e n s i t i v e t o a f u n g i c i d e a r e t e r m e d c o m m o n o r “ w i l d — t y p e ” s t r a i n s ( 2 6 , 1 3 8 ) . T h o s e t h a t c a n s u r v i v e a n d r e p r o d u c e u n d e r n a t u r a l c o n d i t i o n s a r e s a i d t o b e e n v i r o n m e n t a l l y f i t ( 6 8 ) . T h e d e g r e e o f t h i s f i t n e s s c a n v a r y , a n d t h e r e l a t i v e f i t n e s s o f s e n s i t i v e a n d r e s i s t a n t s t r a i n s i s o f p a r t i c u l a r i m p o r t a n c e ( 2 4 , 1 5 8 ) . F u n g i c i d e - r e s i s t a n t s t r a i n s t h a t c a n c o n t i n u e t o e x i s t i n c o m p e t i t i o n w i t h w i l d — t y p e s t r a i n s m u s t h a v e p a t h o g e n i c a g g r e s s i v e n e s s ( 1 4 1 ) . T h e p r e s e n c e o f a f u n g i c i d e , w h e r e r e s i s t a n t i s o l a t e s e x i s t , e f f e c t s t h e d i v e r g e n c e o f a p o p u l a t i o n i n t o s u b - p o p u l a t i o n s c o n s i s t i n g o f e i t h e r r e s i s t a n t o r s e n s i t i v e l 7 s t r a i n s t h a t a r e d i s t i n c t g e n o t y p e s ( 8 8 , 1 5 8 ) . T h i s p a t t e r n o f d e v e l o p m e n t i s t e r m e d d i s r u p t i v e s e l e c t i o n ( 5 1 ) . R e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f t h e f u n g i c i d e w i l l c o n t i n u e t o e l i m i n a t e s e n s i t i v e s t r a i n s a n d h a v e n o e f f e c t u p o n t h e r e s i s t a n t o n e s . T h e u s e o f h i g h l y e f f e c t i v e a n d p e r s i s t e n t f u n g i c i d e s ( 2 5 ) a p p l i e d w i t h t h o r o u g h c o v e r a g e ( 5 1 ) i s t h e m o s t e f f i c i e n t w a y t o e l i m i n a t e s e n s i t i v e s t r a i n s . F u r t h e r a p p l i c a t i o n s o f s u c h a f u n g i c i d e o r a n o t h e r m e m b e r o f i t s c l a s s a r e o f t e n u n e c o n o m i c a l w h e n a q u a l i t a t i v e l y — r e s i s t a n t s t r a i n d o m i n a t e s a s w a r d ( 2 7 ) . A r e s i s t a n t i s o l a t e a r i s e s f r o m a s p o n t a n e o u s m u t a t i o n ( 3 6 , 9 9 ) . T h e r e i s n o d e f i n i t e e v i d e n c e o f a s y s t e m i c f u n g i c i d e a s a m u t a g e n i c , a l t h o u g h H a s t i e r e p o r t e d b e n o m y l — i n d u c e d i n s t a b i l i t y w i t h A s p e r g i l l i s n i d u l a n s L i n k ( 6 2 ) . A t t e m p t s t o s e l e c t f o r r e s i s t a n t i s o l a t e s u s i n g r e p e a t e d e x p o s u r e s t o s u b — l e t h a l d o s e s o f f u n g i c i d e s h a v e b e e n u n s u c c e s s f u l ( 4 8 ) . K o l l e r s t a t e d t h a t f u n g i c i d e r e s i s t a n c e h a s d e v e l o p e d w h e r e r e s i s t a n t i s o l a t e s w e r e p r e s e n t p r i o r t o a n y f u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s , a n d t h a t t h e r e s u l t i n g p o p u l a t i o n s h i f t w a s d u e t o f u n g i c i d e s e l e c t i o n a n d n o t t o a m u t a g e n i c e f f e c t o f t h e t o x i c a n t i t s e l f ( 8 6 ) . S t r a i n s r e s i s t a n t t o t h e b e n z i m i d a z o l e s a r e a t l e a s t a s e n v i r o n m e n t a l l y f i t a s t h e c o m m o n s t r a i n s ( 2 7 ) . T h e 1 8 r e s u l t i n g p o p u l a t i o n s h i f t l a s t s f o r y e a r s o n c e f u n g i c i d e s e l e c t i o n e l i m i n a t e s t h e s e n s i t i v e s t r a i n s ( 2 6 ) , i f n o t p e r m a n e n t l y a n d i r r e v e r s i b l y ( 2 7 ) . A d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t s t r a i n o f t e n h a s r e d u c e d e n v i r o n m e n t a l f i t n e s s s o t h a t d i c a r b o x i m i d e a p p l i c a t i o n s c a n b e e f f e c t i v e l y r e s u m e d w h e n t h e r e s i s t a n t s t r a i n d i e s o f f t o t h e e x t e n t t h a t a s e n s i t i v e s t r a i n a g a i n d o m i n a t e s t h e p o p u l a t i o n ( 2 5 , 5 0 , 1 4 8 ) . Q u a n t i t a t i v e r e s i s t a n c e i s c o n t r o l l e d b y m u l t i p l e g e n e s w i t h i n t h e p a t h o g e n ( 6 5 ) . R e s i s t a n c e i s n o t c o m p l e t e b u t r a t h e r i n t e r m e d i a t e t o s o m e d e g r e e . R e p e a t e d — f u n g i c i d e — s e l e c t i o n p r e s s u r e f a v o r s t h e s t r a i n s h a v i n g t h e g r e a t e s t r e s i s t a n c e . D i s e a s e c o n t r o l b e c o m e s i n t e r m e d i a t e a s w e l l a n d c a n o n l y b e i m p r o v e d b y e i t h e r i n c r e a s i n g t h e a p p l i c a t i o n r a t e o r s h o r t e n i n g t h e s p r a y i n t e r v a l ( 5 1 ) . Q u a n t i t a t i v e r e s i s t a n c e t o t h e D M I s h a s b e e n d e m o n s t r a t e d w i t h m a n y p a t h o g e n s ( 8 7 ) . T h i s c o n d i t i o n i s a l s o k n o w n a s r e d u c e d s e n s i t i v i t y a s o p p o s e d t o c o m p l e t e r e s i s t a n c e ( 9 9 , 1 4 4 ) . T h i s p a t t e r n o f d e v e l o p m e n t i s t e r m e d d i r e c t i o n a l s e l e c t i o n ( 8 8 ) . C r o s s - r e s i s t a n c e i s a c o n d i t i o n i n w h i c h a p a t h o g e n i s a l s o r e s i s t a n t t o f u n g i c i d e s o f t h e s a m e c l a s s ( 1 4 1 ) . A b e n z i m i d a z o l e — r e s i s t a n t p a t h o g e n i s r e s i s t a n t t o b o t h b e n o m y l a n d t h i o p h a n a t e - m e t h y l . I p r o d i o n e a n d v i n c l o z o l i n l 9 u s i n g i n v i t r o r e s p o n s e t e s t s a n d r e p o r t e d i t i n 1 9 6 6 a r e s i m i l a r l y i n e f f e c t i v e o n a d i c a r b o x i m i d e — r e s i s t a n t s t r a i n . C r o s s — r e s i s t a n c e t o t h e D M I s i n c l u d e s r e s i s t a n c e t o t r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , p r o p i c o n a z o l e , c y p r o c o n a z o l e , t e b u c o n a z o l e , a n d m y c l o b u t a n i l . A f u n g i c i d e m a y b e i n e f f e c t i v e e v e n i f i t h a s n e v e r b e e n u s e d b e f o r e a t t h a t p a r t i c u l a r l o c a t i o n i f c r o s s — r e s i s t a n t s t r a i n s a r e p r e s e n t . M u l t i r e s i s t a n c e i s a c o n d i t i o n i n w h i c h a p a t h o g e n i s r e s i s t a n t t o m o r e t h a n o n e f u n g i c i d e c l a s s ( 1 4 1 ) . E x a m p l e s o f t h i s w o u l d b e a s t r a i n t h a t i s r e s i s t a n t t o b o t h t h e b e n z i m i d a z o l e s a n d t h e d i c a r b o x i m i d e s , o r a s t r a i n t h a t i s r e s i s t a n t t o t h e b e n z i m i d a z o l e s a n d t h e D M I s . T h e t e r m m u l t i r e s i s t a n t c o u l d b e c o n f e r r e d t o a s t r a i n t h a t i s r e s i s t a n t t o t h r e e o r m o r e c l a s s e s a s w e l l . R U T S T R O M I A F L O C C O S U M R E S I S T A N C E T O F U N G I C I D E S I n 1 9 6 4 , J a c k s o n f o u n d e v i d e n c e t h a t R . f l o c c u s u m w a s r e s i s t a n t t o c a d m i u m f u n g i c i d e s a t t h e R h o d e I s l a n d A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t i o n . H i s s u b s e q u e n t f i e l d e x p e r i m e n t s s h o w e d n o c o n t r o l u s i n g C a d m i n a t e , a c a d m i u m s u c c i n a t e f u n g i c i d e , a t s i x t i m e s t h e r e c o m m e n d e d r a t e ( 7 6 ) . F i v e m e r c u r y f u n g i c i d e s a l s o p r o v e d i n e f f e c t i v e . H e c o n f i r m e d t h i s c r o s s — r e s i s t a n c e a n d m u l t i r e s i s t a n c e 2 0 f l o c c u s u m , M i c r o d o c h i u m n i v a l e ( F r . ) S a m u e l s & I . C . ( 7 6 ) . W i d e s p r e a d o c c u r r e n c e s o n t h e e a s t c o a s t w e r e c o n f i r m e d b y C o l e e t . a l i n 1 9 6 8 ( 1 4 ) . I n 1 9 7 0 , N i c h o l s o n i n v e s t i g a t e d i n s t a n c e s o f s u s p e c t e d R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o a n i l a z i n e . T h e s e i n c i d e n c e s w e r e i s o l a t e d a n d n o t w i d e s p r e a d ( 1 0 1 ) . N i c h o l s o n ( 1 0 2 ) a n d N i c h o l s o n e t a l . ( 1 0 3 ) d o c u m e n t e d t h i s r e s i s t a n c e i n 1 9 7 1 . T h e f i r s t r e p o r t o f b e n o m y l — r e s i s t a n t s t r a i n s o f R . f l o c c u s u m w a s b y G o l d b e r g a n d C o l e i n 1 9 7 3 ( 5 4 ) . W a r r e n e t a l . d o c u m e n t e d c r o s s — r e s i s t a n c e w i t h o t h e r b e n z i m i d a z o l e s a y e a r l a t e r ( 1 5 2 ) . A c r o s s — r e s i s t a n t , m u l t i r e s i s t a n t s t r a i n t o t h e b e n z i m i d a z o l e s a n d t h e d i c a r b o x i m i d e c l a s s e s w a s r e p o r t e d b y D e t w e i l e r e t . a l i n 1 9 8 3 ( 3 5 ) . G o l e m b i e w s k i e t a l . i n 1 9 9 5 ( 5 6 ) c h a r a c t e r i z e d a s t r a i n t h a t w a s c r o s s - r e s i s t a n t t o t r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , a n d p r o p i c o n a z o l e . S t r a i n s o f R . f l o c c u s u m t h a t a r e m u l t i r e s i s t a n t t o t h e b e n z i m i d a z o l e s , d i c a r b o x i m i d e s , a n d D M I s , a n d a l s o c r o s s - r e s i s t a n t w i t h i n e a c h c l a s s , n o w e x i s t ( 1 3 6 , 1 3 9 , 1 4 1 ) . R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m w a s t h e f i r s t t u r f g r a s s p a t h o g e n r e p o r t e d t o b e r e s i s t a n t t o a f u n g i c i d e ( 7 6 ) . T a b l e 1 . 1 l i s t s t u r f g r a s s p a t h o g e n s t o w h i c h f u n g i c i d e r e s i s t a n c e h a s b e e n r e p o r t e d . I t i s o f n o t e t h a t R . 2 1 H a l l e t t , a n d P y r i c u l a r i a g r i s e a ( C k e . ) S a c c . a r e f a c u l t a t i v e s a p r o p h y t e s , a n d E r y s i p h e g r a m i n i s D C i s a n o b l i g a t e p a r a s i t e ( 1 4 1 ) . T h e s e p a t h o g e n t y p e s l i v e a l l o r m o s t a l l o f t h e t i m e a s p a r a s i t e s ( 2 ) . F u n g i c i d e s a p p l i e d d u r i n g t h e s e t i m e s a r e p a r t i c u l a r l y e f f e c t i v e o n t h e c o m m o n s t r a i n s ( 1 4 1 ) . T h i s m a k e s t h e m e a s i l y s e l e c t e d a g a i n s t , i . e . , e l i m i n a t e d , s o t h a t s h i f t s t o w a r d f u n g i c i d e — r e s i s t a n t p o p u l a t i o n s c a n o c c u r a s d e s c r i b e d e a r l i e r . T h e o t h e r t y p e s o f p l a n t - p a t h o g e n i c f u n g i a r e t h e f a c u l t a t i v e p a r a s i t e s t h a t c a n s u r v i v e l o n g p e r i o d s a n d r e p r o d u c e a s s a p r o p h y t e s w h e n n o t c a u s i n g d i s e a s e ( 2 ) . F u n g i c i d e s a r e l e s s l i k e l y t o b e a p p l i e d t o c o n t r o l t h e s e p a t h o g e n s w h e n t h e y a r e n o t c a u s i n g d i s e a s e . C o n s e q u e n t l y , c o m m o n s t r a i n s u s u a l l y h a v e a m p l e o p p o r t u n i t y t o r e p o p u l a t e a n a r e a u n i m p e d e d b y f u n g i c i d e s . T h i s a b i l i t y t o “ e s c a p e " e x p o s u r e t o f u n g i c i d e s i s t h e s i n g l e m o s t i m p o r t a n t f a c t o r i n d e t e r m i n i n g a p a t h o g e n ’ s p r o p e n s i t y t o d e v e l o p f u n g i c i d e r e s i s t a n c e ( 8 0 ) . S e n s i t i v e s t r a i n s h a v e t o b e r e d u c e d i n n u m b e r s v i a d i r e c t i o n a l — s e l e c t i o n p r e s s u r e c a u s e d b y t h e u s e o f a f u n g i c i d e c l a s s b e f o r e a n e w s t r a i n r e s i s t a n t t o t h a t c l a s s c a n b e g i n t o d o m i n a t e t h e p o p u l a t i o n ( 1 4 1 ) . 2 2 T h e r e m a i n i n g t w o p a t h o g e n s s h o w n i n T a b l e 1 a r e f a c u l t a t i v e p a r a s i t e s . P y t h i u m a p h i d e r m a t u m ( E d s o n ) F i t z p a t r i c k h a s s h o w n r e s i s t a n c e t o m e t a l a x y l ( 1 1 3 ) . H o w e v e r , l e s s t h a n 1 0 0 o f t h e m o r e t h a n 1 0 , 0 0 0 U . S . g o l f c o u r s e s h a v e b e e n v e r i f i a b l y a f f e c t e d d u r i n g m o r e t h a n 2 0 y e a r s o f m e t a l a x y l u s e . M o s t o f t h e s e i n s t a n c e s o c c u r r e d w h e r e a c o m b i n a t i o n o f h i g h r a t e s a n d f r e q u e n t a p p l i c a t i o n s w e r e m a d e ( 1 4 1 ) . C o l l e t o t r i c h u m g r a m i n i c o l a ( C e s . ) W i l s . i s a t r u e e x c e p t i o n , h o w e v e r , i n t h a t r e s i s t a n c e h a s h a p p e n e d a f t e r o n l y a l i m i t e d n u m b e r o f a p p l i c a t i o n s w i t h a Q o I f u n g i c i d e ( 5 , 1 4 1 ) . D o l l a r s p o t i s t h e m o s t c o m m o n ( 1 6 , 3 1 ) , e x p e n s i v e ( 1 4 4 ) , a n d e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t ( 3 3 ) d i s e a s e t o m a n a g e o n U . S . g o l f c o u r s e s . T h e e x c e p t i o n i s i n p o r t i o n s o f t h e P a c i f i c N o r t h w e s t w h e r e M i c r o d o c h i u m p a t c h i s m o r e p r o b l e m a t i c t h a n d o l l a r s p o t ( 1 3 , 5 8 ) . D o l l a r — s p o t p r e s e n c e i n O r e g o n a n d W a s h i n g t o n w a s n o t r e p o r t e d u n t i l 1 9 9 1 a n d 1 9 9 2 r e s p e c t i v e l y ( 1 3 5 ) . F u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s a r e u s u a l l y w a r r a n t e d w h e r e d o l l a r s p o t u n d e s i r a b l y a f f e c t s t h e f u n c t i o n a l i t y o r a e s t h e t i c v a l u e o f a t u r f a n d e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s f a v o r a b l e t o t h e d e v e l o p m e n t o f t h e d i s e a s e p e r s i s t ( 3 9 , 1 3 3 , 1 4 1 ) . D o l l a r s p o t i s b e c o m i n g i n c r e a s i n g l y m o r e d i f f i c u l t t o c o n t r o l ( 3 2 , 8 1 ) , a n d s o m e o f t h e r e s i s t a n t 2 3 s t r a i n s a p p e a r t o b e m o r e a g g r e s s i v e t h a n t h e s e n s i t i v e o n e s t h a t t h e y d i s p l a c e d ( 1 4 0 ) . F u n g i c i d e r e s i s t a n c e t o R . f l o c c u s u m h a s f o r c e d t u r f m a n a g e r s t o s t o p u s i n g t h e b e n z i m i d a z o l e s , t o p e r i o d i c a l l y w i t h h o l d t h e d i c a r b o x i m i d e s , t o a p p l y D M I s a t i n c r e a s e d r a t e s a n d / o r r e d u c e d i n t e r v a l s , a n d t o r e s o r t t o g r e a t e r o r s o l e u s e o f a c o n t a c t f u n g i c i d e . I t w o u l d b e i n t h e b e s t i n t e r e s t o f m a n u f a c t u r e r s a n d e n d — u s e r s a l i k e t o s t o p o r d e l a y t h e a d v e n t o f f u n g i c i d e — r e s i s t a n t R . f l o c c u s u m . T h e p r e v a i l i n g c o n c e p t s a r e t h a t f u n g i c i d e r e s i s t a n c e c a n b e m a n a g e d b y a p p l y i n g c o n t a c t a n d s y s t e m i c f u n g i c i d e s e i t h e r i n c o m b i n a t i o n o r b y a l t e r n a t i n g t h e m ( 1 6 , 1 7 , 1 1 9 , 1 3 3 , l 4 6 ) , d e s p i t e a l a c k o f r e s e a r c h ( 1 1 7 , 1 4 1 , 1 4 9 ) . T h i s t h e s i s w i l l c l a r i f y t h e s e t h e o r i e s a s t h e y r e l a t e t o d o l l a r s p o t . C h a p t e r s 2 a n d 3 w i l l d e t a i l s t u d i e s i n v o l v i n g R . f l o c c o s u m e x p o s u r e t o r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f D M I s , d i c a r b o x i m i d e s , a n d c h l o r o t h a l o n i l , s o m e o f w h i c h h a s b e e n p r e v i o u s l y r e p o r t e d ( 5 2 , 5 3 , 1 1 4 ) . C h a p t e r 4 c o n c e r n s a n i n v e s t i g a t i o n o f b o s c a l i d , t h e f i r s t o f a n e w c l a s s o f f u n g i c i d e s u s e d o n d o l l a r s p o t . T h e b r o a d e r i m p l i c a t i o n s o f t h e s e s t u d i e s a n d s u g g e s t e d f u t u r e r e s e a r c h a r e c o n t a i n e d i n C h a p t e r 5 . 2 4 T a b l e 1 . 1 . o n e o r m o r e f u n g i c i d e s . F i r s t r e p o r t s o f t u r f p a t h o g e n s r e s i s t a n t t o Y e a r P a t h o g e n F u n g i c i d e R e f e r e n c e 1 9 6 6 R . f l o c c o s u m l c a d m i u m s u c c i n a t e ( 7 6 ) c a d m i u m c h l o r i d e c a d m i u m s u l f a t e m e r c u r i c c h l o r i d e 1 9 7 1 f l o c c o s u m a n i l a z i n e ( 1 0 3 ) 1 9 7 2 E . g r a m i n i s 2 b e n o m y l ( 1 4 3 ) 1 9 7 3 f l o c c o s u m b e n o m y l ( 5 4 ) t h i a b e n d a z o l e t h i o p h a n a t e — e t h y l t h i o p h a n a t e - m e t h y l 1 9 8 2 M 3 n i v a l e 3 i p r o d i o n e ( 1 3 ) v i n c l o z o l i n 1 9 8 3 R . f l o c c o s u m i p r o d i o n e ( 3 5 ) 1 9 8 4 M 1 n i v a l e b e n o m y l ( 4 9 ) t h i o p h a n a t e — m e t h y l 1 9 8 4 P . a p h i d e r m a t u m 4 m e t a l a x y l ( 1 1 3 ) 1 9 8 9 C . g r a m i n i c o l a 5 b e n o m y l ( 3 4 ) t h i o p h a n a t e - e t h y l t h i o p h a n a t e — m e t h y l 1 9 9 5 R . f l o c c o s u m t r i a d i m e f o n ( 5 5 ) f e n a r i m o l p r o p i c o n a z o l e 2 0 0 1 p . g r i s e a 6 a z o x y s t r o b i n ( 1 4 5 ) t r i f l o x y s t r o b i n 2 0 0 3 C . g r a m i n i c o l a a z o x y s t r o b i n ( 5 ) t r i f l o x y s t r o b i n R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m ( s y n . S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a F . T . B e n n e t ) , c a u s a l p a t h o g e n o f d o l l a r s p o t 2 E r y s i p h e g r a m i n i s D C , c a u s a l p a t h o g e n o f p o w d e r y m i l d e w 3 M i c r o d o c h i u m n i v a l e ( F r . ) S a m u e l s & I . C . H a l l e t t , c a u s a l p a t h o g e n o f M i c r o d o c h i u m p a t c h 4 P y t h i u m a p h i d e r m a t u m ( E d s o n ) F i t z p a t r i c k , c a u s a l p a t h o g e n o f P y t h i u m b l i g h t s C o l l e t o t r i c h u m g r a m i n i c o l a ( C e s . ) W i l s . , c a u s a l p a t h o g e n o f a n t h r a c n o s e 6 P y r i c u l a r i a g r i s e a ( C k e . ) S a c c . , c a u s a l p a t h o g e n o f g r e y l e a f s p o t 2 5 1 0 . 1 1 . L i s t o f R e f e r e n c e s A g a r w a l , V . K . a n d S i n c l a i r , J . B . 1 9 9 7 . P r i n c i p l e s o f S e e d P a t h o l o g y . 2 n d e d . B o c a R a t o n F L : C R C L e w i s P u b l i s h e r s . 5 3 9 p . A g r i o s , G . N . 1 9 9 7 . P l a n t P a t h o l o g y . 4 t h e d . S a n D i e g o : A c a d e m i c P r e s s . 6 3 5 p . A n o n y m o u s . 1 9 4 2 . T e t r a m e t h y l t h i u r a m d i s u l f i d e . T i m e l y T u r f T o p i c s , 1 9 4 2 J u n e , p . 2 . A n o n y m o u s . 1 9 4 2 . T e t r a m e t h y l t h i u r a m d i s u l f i d e a c c l a i m e d a s g o o d m e r c u r y s u b s t i t u t e . T i m e l y T u r f T o p i c s , 1 9 4 2 N o v . , p . 5 . A v i l a - A d a m e , C . , O l a y a , C . , a n d K e l l e r , W . 2 0 0 3 . C h a r a c t e r i z a t i o n o f C o l l e t o t r i c h u m g r a m i n i c o l a i s o l a t e s r e s i s t a n t t o s t r o b i l u r i n - r e l a t e d Q o I f u n g i c i d e s . P l a n t D i s . 8 7 : 1 4 2 6 — 1 4 3 2 . B a l d w i n , N . A . a n d N e w e l l , A . J . 1 9 9 2 . F i e l d p r o d u c t i o n o f f e r t i l e a p o t h e c i a b y S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a i n F e s t u c a t u r f . J . S p o r t s T u r f . R e s . I n s t . 6 8 : 7 3 - 7 6 . B e a r d , J . B . 1 9 7 3 . T u r f g r a s s S c i e n c e a n d C u l t u r e . E n g l e w o o d C l i f f s N J : P r e n t i c e — H a l l . 6 5 8 p . B e a r d , J . B . a n d B e a r d , H . J . 2 0 0 5 . B e a r d ' s T u r f g r a s s E n c y c l o p e d i a f o r G o l f C o u r s e s , G r o u n d s , L a w n s , S p o r t s F i e l d s . E . L a n s i n g M I : M i c h . S t . U n i v . P r e s s . 5 1 3 p . B e n n e t t , F . T . 1 9 3 7 . D o l l a r s p o t d i s e a s e o n t u r f a n d i t s c a u s a l o r g a n i s m S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a n . s p . A n n . A p p l . B i o l . 2 4 : 2 3 6 — 2 5 7 . B o h m o n t , B . L . 2 0 0 3 . T h e S t a n d a r d P e s t i c i d e U s e r ' s G u i d e . U p p e r S a d d l e R i v e r N J : P r e n t i c e — H a l l . 5 5 7 p . B u r p e e , L . L . a n d G o u l t y , L . G . 1 9 8 6 . E v a l u a t i o n o f t w o d o l l a r s p o t f o r e c a s t i n g s y s t e m s f o r c r e e p i n g b e n t g r a s s . C a n . J . P l a n t S c i . 6 6 : 3 4 5 - 3 5 1 . 2 6 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 1 6 . 1 7 . 1 8 . 1 9 . 2 0 . 2 1 . 2 2 . 2 3 . 2 4 . C a r b o n e , I . a n d K o h n , L . M . 1 9 9 3 . R i b o s o m a l D N A s e q u e n c e d i v e r g e n c e w i t h i n i n t e r n a l t r a n s c r i b e d s p a c e r 1 o f t h e S c l e r o t i n i a c e a e . M y c o l o g i a 8 5 : 4 1 5 — 4 2 7 . C h a s t a g n e r , G . A . a n d V a s s e y , W . E . 1 9 8 2 . O c c u r e n c e o f i p r o d i o n e - t o l e r a n t F u s a r i u m n i v a l e u n d e r f i e l d c o n d i t i o n s . P l a n t D i s . R p t r . 6 6 : 1 1 2 - 1 1 4 . C o l e , H . , T a y l o r , B . , a n d D u i c h , J . 1 9 6 8 . E v i d e n c e o f d i f f e r i n g t o l e r a n c e t o f u n g i c i d e s a m o n g i s o l a t e s o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . P h y t o p a t h o l o g y 5 6 : 6 8 3 — 6 8 6 . C o u c h , H . B . 1 9 6 2 . D i s e a s e s o f T u r f g r a s s e s . N e w Y o r k : R e i n h o l d P u b . C o r p . 2 8 9 p . C o u c h , H . B . 1 9 9 5 . D i s e a s e s o f T u r f g r a s s e s . 3 r d e d . M a l a b a r F L : K r i e g e r P u b . 4 2 1 p . D a n n e b e r g e r , T . K . 1 9 9 3 . T u r f g r a s s E c o l o g y & M a n a g e m e n t . C l e v e l a n d : F r a n z a k & F o s t e r . 2 0 1 p . D a v i s , S . H . 1 9 5 0 . T e s t s o f t u r f f u n g i c i d e s i n N e w J e r s e y . P e n n . S t . C o l . T u r f g r a s s C o n f . P r o c . , V o l . 2 0 , p . 2 1 — 3 0 . D a v i s , S . H . 1 9 5 0 . A r e p o r t o n t h e 1 9 4 9 n a t i o n a l c o o p e r a t i v e t u r f f u n g i c i d e t r i a l s . R u t g e r s U n i v e r s i t y S h o r t C o u r s e i n T u r f . M a n a g e m e n t , 1 8 , p . 5 1 - 5 7 . D a v i s , S . H . 1 9 5 3 . D i s e a s e s o f t u r f g r a s s e s a n d t h e 1 9 4 2 f u n g i c i d e t r i a l s . G o l f d o m , 2 7 ( 6 ) , p . 6 6 , 6 8 , 7 9 — 8 4 . D a v i s , S . H . 1 9 5 5 . T u r f f u n g i c i d e t r i a l s - 1 9 5 4 . R u t g e r s U n i v e r s i t y S h o r t C o u r s e i n T u r f . M a n a g e m e n t , 2 3 , p . 1 — 4 . D a v i s , S . H . , E n g e l , R . E . , a n d S n y d e r , H . D . 1 9 5 5 . 1 9 5 4 t u r f f u n g i c i d e t r i a l s . T h e G o l f C o u r s e R e p o r t e r , 2 3 ( 1 ) , p . 3 2 - 3 4 . D e k k e r , J . 1 9 6 3 . A n t i b i o t i c s i n t h e c o n t r o l o f p l a n t d i s e a s e s . A n n l . R e v . o f M i c r o b i o l . 1 7 : 2 4 3 - 2 6 2 . D e k k e r , J . 1 9 8 2 . I n t r o d u c t i o n . p . 1 — 6 . I n F u n g a l R e s i s t a n c e i n C r o p P r o t e c t i o n , e d i t e d b y J . D e k k e r 2 7 2 5 . 2 6 . 2 7 . 2 8 . 2 9 . 3 0 . 3 1 . 3 2 . 3 3 . 3 4 . a n d S . G . G e o r g o p o u l u s . W e g e n i n g e n , T h e N e t h e r . : C e n t r e A g r i c u l . P u b . D o c u m e n t . D e k k e r , J . 1 9 8 7 . D e v e l o p m e n t o f r e s i s t a n c e t o m o d e r n f u n g i c i d e s a n d s t r a t e g i e s f o r i t s a v o i d a n c e . p . 3 9 — 5 2 . I n . M O d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d . M e C h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . D e l f , C . J . 1 9 8 7 . B e n z i m i d a z o l e a n d r e l a t e d f u n g i c i d e s . p . 2 3 3 - 2 4 4 . I n . M b d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d . M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . D e l f , C . J . 1 9 8 8 . R e s i s t a n c e m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s f o r b e n z i m i d a z o l e s . p . 4 1 - 4 3 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n . N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . D e r n o e d e n , P . 1 9 8 0 . E x p e r i m e n t a l f u n g i c i d e s f o r d o l l a r s p o t c o n t r o l , 1 9 7 9 . F u n g . N e m a t . T e s t s 3 5 : 1 4 9 . D e r n o e d e n , P . H . 1 9 9 4 . S y m p t o m o l o g y a n d m a n a g e m e n t o f c o m m o n t u r f g r a s s d i s e a s e s i n t h e t r a n s i t i o n z o n e a n d N o r t h e r n r e g i o n s . p . 2 4 9 - 2 6 3 . I n H a n d b o o k o f I n t e g r a t e d P e s t M a n a g e m e n t f o r T u r f a n d O r n a m e n t a l s , e d i t e d b y A . R . L e s l i e . B o c a R a t o n : L e w i s P u b l i s h e r s . D e r n o e d e n , P . H . 1 9 9 5 . T u r f g r a s s d i s e a s e s a n d t h e i r m a n a g e m e n t . p . 8 7 — 1 7 0 . I n M a n a g i n g T u r f g r a s s P e s t s , e d i t e d b y T . L . W a t s c h k e , P . H . D e r n o e d e n a n d D . J . S h e t l a r . B o c a R a t o n F L : L e w i s P u b . D e r n o e d e n , P . H . 1 9 9 8 . T h e d i r t y h a l f - d o z e n ( c r e e p i n g b e n t g r a s s d i s e a s e s ) . G r o u n d s M a i n t e n a n c e , 3 3 ( 3 ) , p . D e r n o e d e n , P . H . 2 0 0 0 . D o l l a r s p o t : G e t t i n g t o u g h e r t o m a n a g e i n c r e e p i n g b e n t g r a s s . T U R F A X , 8 ( 1 ) , p . 1 — 2 , 6 . D e r n o e d e n , P . H . 2 0 0 3 . T o p 5 d i s e a s e s o f c o o l - s e a s o n t u r f . S p o r t s T U R F , 1 9 ( 2 ) , p . 1 4 , 1 6 , 1 8 , 2 0 . D e t w e i l e r , A . R . , V a r g a s , J . M . , J r . , a n d B r e n d t , W . L . 1 9 8 9 . R e s i s t a n c e o f C o l l e t o t r i c h u m g r a m i n i c o l a t o 2 8 3 5 . 3 6 . 3 7 . 3 8 . 3 9 . 4 0 . 4 1 . 4 2 . 4 3 . 4 4 . b e n o m y l . P r o c . S i x t h I n t l . T u r f g r a s s C o n f . , V o l . 6 , p . 3 5 9 - 3 6 2 . D e t w e i l e r , R . , V a r g a s , J . M . , J r . , a n d D a n n e b e r g e r , T . K . 1 9 8 3 . R e s i s t a n c e o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o i p r o d i o n e a n d b e n o m y l . P l a n t D i s . 6 7 : 6 2 7 - 6 3 0 . E c k e r t , J . W . 1 9 8 8 . H i s t o r i c a l d e v e l o p m e n t o f f u n g i c i d e r e s i s t a n c e i n p l a n t p a t h o g e n s . p . 1 - 3 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n . N o r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . E n d o , R . M . 1 9 6 3 . I n f l u e n c e o f t e m p e r a t u r e o n r a t e o f g r o w t h o f f i v e f u n g a l p a t h o g e n s o f t u r f g r a s s a n d o n r a t e o f d i s e a s e s p r e a d . P h y t o p a t h o l o g y 5 3 : 8 5 7 - 8 6 1 . E n d o , R . M . 1 9 6 6 . C o n t r o l o f d o l l a r s p o t o f t u r f — g r a s s b y n i t r o g e n a n d i t s p r o b a b l e b a s i s . P h y t o p a t h o l o g y ( A b s t r . ) 5 6 : 8 7 7 . E n d o , R . M . a n d M c C a i n , A . H . 1 9 6 1 . F u n g u s d i s e a s e s o f t u r f g r a s s a n d t h e i r c o n t r o l . C a l i f o r n i a T u r f g r a s s C u l t u r e , 1 1 ( 2 ) , p . 9 - 1 0 , 1 2 - 1 4 . E n d o , R . M . a n d M a l c a , I . 1 9 6 5 . M o r p h o l o g i c a l a n d c y t o h i s t o l o g i c a l r e s p o n s e s o f p r i m a r y r o o t s o f b e n t g r a s s t o S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a a n d D - g a l a c t o s e . P h y t o p a t h o l o g y 5 5 : 7 8 1 - 7 8 9 . E n d o , R . M . , M a l c a , I . , a n d K r a u s m a n , E . 1 9 6 4 . D e g e n e r a t i o n o f t h e a p i c a l m e r i s t e m a n d a p e x o f b e n t g r a s s r o o t s b y a f u n g a l t o x i n . P h y t o p a t h o l o g y 5 4 : 1 1 7 5 — 1 1 7 6 . F a l b o , B . 1 9 9 9 . W h i l e s u p p l i e s l a s t . . . : A s s t o c k p i l e s o f m e r c u r y - b a s e d s n o w m o l d c o n t r o l s d w i n d l e , N o r t h e r n s u p e r i n t e n d e n t s h u s t l e t o f i n d a l t e r n a t i v e s . G o l f d o m , 5 5 ( 1 ) , p . 8 2 - 8 4 . F e n s t e r m a c h e r , J . M . 1 9 7 0 . V a r i a t i o n w i t h i n S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a F . T . B e n n e t t . T h e s i s ( M . S . ) , U n i v . R . I . , 1 0 6 p . F e n s t e r m a c h e r , J . M . 1 9 8 0 . C e r t a i n f e a t u r e s o f d o l l a r s p o t d i s e a s e a n d i t s c a u s a l o r g a n i s m , S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . p . 4 9 - 5 3 . I n A d v a n c e s i n T u r f g r a s s 2 9 4 5 . 4 6 . 4 7 . 4 8 . 4 9 . 5 0 . 5 1 . 5 2 . 5 3 . P a t h o l o g y , e d i t e d b y B . G . J o y n e r a n d P . O . L a r s e n . D u l u t h M N : H a r c o u r t B r a c e J o v a n o v i c h . F o w l e r , M . C . 1 9 8 6 . C u r a t i v e c o n t r o l o f d o l l a r s p o t , 1 9 8 5 . F u n g . N e m a t . T e s t s 4 1 : 1 5 1 . F r e e m a n , T . E . 1 9 5 9 . F l o r i d a i s o l a t e s o f d o l l a r s p o t f u n g u s s t a n d h o t w e a t h e r . F l a . A g r i . E x p . S t a . R e s . R p t . 4 : 3 . F r e e m a n , T . E . 1 9 6 9 . D i s e a s e s o f t u r f g r a s s e s i n w a r m - h u m i d r e g i o n s . p . 3 4 0 - 3 4 5 . I n P r o c . o f t h e I n t l . T u r f g r a s s R e s . C o n f . B i n g l e y , Y o r k s h i r e : S p o r t s T u r f R e s . I n s t . F u c h s , A . a n d d e W a a r d , M . A . 1 9 8 2 . R e s i s t a n c e t o e r g o s t e r o l - b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s . p . 7 1 - 8 6 . I n F u n g a l R e s i s t a n c e i n C r o p P r o t e c t i o n , e d i t e d b y J . D e k k e r a n d S . G . G e o r g o p o u l u s . W e g e n i n g e n , T h e N e t h e r . : C e n t r e A g r i c u l . P u b . D o c u m e n t . F u s h t e y , S . G . 1 9 8 4 . C o n t r o l o f F u s a r i u m p a t c h d i s e a s e i n f i n e t u r f g r a s s . R e s . S t a . , A g a s s i z , B . C . . R e s . R e v . 1 9 8 4 : 3 — 5 . G a u o t , J . - M . 1 9 8 8 . C h a r a c t e r i s t i c s a n d p o p u l a t i o n d y n a m i c s o f B o t r y t i s c i n e r a a n d o t h e r p a t h o g e n s r e s i s t a n t t o d i c a r b o x i m i d e s . p . 5 3 - 5 7 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n . N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . G e o r g o p o u l u s , S . G . 1 9 8 8 . G e n e t i c s a n d p o p u l a t i o n d y n a m i c s . p . 1 2 - 1 3 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N b r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , S c h a b e n b e r g e r , 0 . , a n d G o l e m b i e w s k i , R . 1 9 9 8 . F u n g i c i d e u s e o n D M I - r e s i s t a n t d o l l a r s p o t . 7 0 t h A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c . , V o l . 2 7 , p . 1 3 7 — 1 3 9 . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , J o n e s , A . , a n d S c h a b e n b e r g e r , O . 1 9 9 7 . F u n g i c i d e e f f i c a c y o n d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t i o n ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . R e s . J . I n t . T u r f g r a s s S o c . 8 : 8 7 5 — 8 8 1 . 3 0 5 4 . 5 5 . 5 6 . 5 7 . 5 8 . 5 9 . 6 0 . 6 1 . 6 2 . 6 3 . G o l d b e r g , C . W . a n d C o l e , H . 1 9 7 3 . I n v i t r o s t u d y o f b e n o m y l t o l e r a n c e e x h i b i t e d b y S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . ( A b s t r . ) P h y t o p a t h o l o g y 6 3 : 2 0 1 . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s , J . M . , J r . , J o n e s , A . L . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 3 . R e s i s t a n c e o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s . ( A b s t r . ) P h y t o p a t h o l o g y 8 3 : 1 3 7 1 . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s J r . , J . M . , J o n e s , A . L . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 5 . D e t e c t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n c e i n S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a p o p u l a t i o n s . P l a n t D i s . 7 9 : 4 9 1 - 4 9 3 . G o o d m a n , D . M . a n d B u r p e e , L . L . 1 9 9 1 . B i o l o g i c a l c o n t r o l o f d o l l a r s p o t d i s e a s e o f c r e e p i n g b e n t g r a s s . P h y t o p a t h o l o g y 8 1 : 1 4 3 8 - 1 4 4 6 . G o u l d , C . J . 1 9 6 5 . F u n g i c i d e s u s e d f o r t u r f g r a s s d i s e a s e c o n t r o l i n t h e U . S . A . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 4 1 : 3 2 - 3 9 . H a l i s k y , P . M . , M y e r s , R . F . , a n d W a g n e r , R . E . 1 9 8 1 . R e l a t i o n s h i p o f t h a t c h t o n e m a t o d e s , d o l l a r s p o t a n d f u n g i c i d e s i n K e n t u c k y b l u e g r a s s t u r f . P r o c . 4 t h I n t . T u r f g r a s s R e s . C o n f . , p . 4 1 4 - 4 2 0 . H a r m a n , G . E . 1 9 9 9 . T h e b a s i c b i o l o g y a n d e t i o l o g y o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a , t h e c a u s a l a g e n t o f d o l l a r s p o t . p . 2 4 . I n 1 9 9 9 T u r f g r a s s a n d E n v i r o n m e n t a l R e s e a r c h S u m m a r y . F a r H i l l s N J : U . S . G o l f A s s n . G r e e n S e c t . H a r m a n , G . E . 2 0 0 0 . T h e b a s i c b i o l o g y a n d e t i o l o g y o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a , t h e c a u s a l a g e n t o f d o l l a r s p o t . p . 2 3 . I n 2 0 0 0 T u r f g r a s s a n d E n v i r o n m e n t a l R e s e a r c h S u m m a r y . F a r H i l l s N J : U . S . G o l f A s s n . G r e e n S e c t . H a s t i e , A . C . 1 9 7 0 . B e n l a t e - i n d u c e d i n s t a b i l i t y o f A s p e r g i l l u s d i p l o i d s . N a t u r e 2 2 6 : 7 7 1 . H a w k s w o r t h , D . L . , K i r k , P . M . , S u t t o n , B . C . , a n d P e g l e r , D . N . 1 9 9 5 . A i n s w o r t h a n d B i s b y ' s D i c t i o n a r y o f t h e F u n g i . O x o n , U . K . : C A B I n t e r n a t i o n a l . 6 1 6 p . 3 1 6 4 . 6 5 . 6 6 . 6 7 . 6 8 . 6 9 . 7 0 . 7 1 . 7 2 . 7 3 . 7 4 . 7 5 . H a y g o o d , R . A . a n d M a z u r , A . R . 1 9 9 0 . E v a l u a t i o n o f G l i o c l a d i u m V i r e n s a s a b i o c o n t r o l a g e n t o f d o l l a r s p o t o n b e r m u d a g r a s s . P h y t o p a t h o l o g y 8 0 : 4 3 5 . H e w i t t , H . G . 1 9 9 8 . F u n g i c i d e s i n C r o p P r o t e c t i o n . N e w Y o r k : C A B I n t e r n a t i o n a l . 2 2 1 p . H o d g e s , C . F . , B l a i n e , W . M . , a n d R o b i n s o n , P . W . 1 9 7 5 . S e v e r i t y o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a b l i g h t o n v a r i o u s c u l t i v a r s o f f i n e - l e a v e d f e s c u e s . P l a n t D i s . R p t r . 5 9 : 1 2 — 1 4 . H o l s t - J e n s e n , A . , V a a g e , M . , a n d S c h u m a c h e r , T . 1 9 9 8 . A n a p p r o x i m a t i o n t o t h e p h y l o g e n y o f S c l e r o t i n i a a n d r e l a t e d g e n e r a . N o r d i c J . B o t . 1 8 : 7 0 5 - 7 1 9 . H o l t , J . S . 1 9 9 0 . F i t n e s s a n d e c o l o g i c a l a d a p t a b i l i t y o f h e r b i c i d e - r e s i s t a n t b i o t y p e s . p . I n M a n a g i n g R e s i s t a n c e t o A g r o c h e m i c a l s : F r o m F u n d a m e n t a l R e s e a r c h t o P r a c t i c a l S t r a t e g i e s , e d i t e d b y M . B . G r e e n , H . M . L e B a r o n a n d W . K . M o b e r g . W a s h . D . C . : A m e r . C h e m . S o c . H o w a r d , F . L . , R o w e l l , J . B . , a n d K e i l , H . L . 1 9 5 1 . F u n g u s D i s e a s e s O f T u r f G r a s s e s , 1 9 5 1 . K i n g s t o n : R . I . A g r i . E x p . S t a t . 5 6 p . H s i a n g , T . , B a r t o n , W . , a n d H a r v i e , B . 1 9 9 5 . R e s i s t a n c e t o d e m e t h y l a t i o n - i n h i b i t i n g f u n g i c i d e s i n O n t a r i o t u r f g r a s s p a t h o g e n s , 1 9 9 4 - 1 9 9 5 . G u e l p h T u r f g r a s s I n s t i t u t e : 1 9 9 5 R e s e a r c h R e p o r t - A d d e n d u m , p . 2 1 - 2 2 . J a c k s o n , N . 1 9 5 9 . T u r f d i s e a s e n o t e s , 1 9 5 9 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 1 0 : 4 7 - 5 3 . J a c k s o n , N . 1 9 6 0 . T u r f d i s e a s e n o t e s , 1 9 6 0 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 1 0 : 1 7 1 - 1 7 5 . J a c k s o n , N . 1 9 6 1 . T u r f d i s e a s e n o t e s , 1 9 6 1 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 1 0 : 2 9 7 - 2 9 9 . J a c k s o n , N . 1 9 6 2 . T u r f d i s e a s e n o t e s , 1 9 6 2 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 1 0 : 4 1 0 - 4 1 5 . J a c k s o n , N . 1 9 6 4 . T u r f d i s e a s e n o t e s , 1 9 6 4 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 4 0 : 7 6 — 8 0 . 3 2 7 6 . 7 7 . 7 8 . 7 9 . 8 0 . 8 1 . 8 2 . 8 3 . 8 4 . 8 5 . J a c k s o n , N . 1 9 6 6 . D o l l a r s p o t d i s e a s e a n d i t s c o n t r o l , w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o c h a n g e s i n t h e s u s c e p t i b i l i t y o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o c a d m i u m a n d m e r c u r y f u n g i c i d e s . P r o c . 7 t h I l l . T u r f g r a s s C o n f . , p . 2 1 - 2 5 . J a c k s o n , N . 1 9 7 3 . A p o t h e c i a l p r o d u c t i o n o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a F . T . B e n n e t t . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 4 9 : 5 8 - 6 3 . J a c o b , F . a n d N e w m a n , S . 1 9 8 7 . P r i n c i p l e s o f u n t a k e a n d s y s t e m i c t r a n s p o r t o r f u n g i c i d e s w i t h i n t h e p l a n t . p . 1 3 - 2 9 . I n . M O d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . J o h n s o n , B . J . , C a r r o w , R . N . , a n d B u r n s , R . E . 1 9 8 7 . B e r m u d a g r a s s t u r f r e s p o n s e t o m o w i n g p r a c t i c e s a n d f e r t i l i z e r . A g r o n . J . 7 9 : 6 7 7 - 6 8 0 . K a b l e , P . F . a n d J e f f e r y , H . 1 9 8 0 . S e l e c t i o n f o r t o l e r a n c e i n o r g a n i s m s e x p o s e d t o s p r a y s o f b i o c i d e m i x t u r e s : a t h e o r e t i c a l m o d e l . P h y t o p a t h o l o g y 7 0 : 8 - 1 2 . K a n e , R . 2 0 0 1 . I s d o l l a r s p o t e v o l v i n g i n t o a n u n c o n t r o l l a b l e b e a s t ? O n C o u r s e , 5 5 ( 3 ) . P . 1 4 - 1 6 , 1 8 . K e r r , A . 1 9 5 6 . S o m e i n t e r a c t i o n s b e t w e e n p l a n t r o o t s a n d p a t h o g e n i c s o i l f u n g i . A u s t . J . B i o l . S c i . 9 : 4 5 — 5 2 . K o h n , L . M . 1 9 7 9 . D e l i m i t a t i o n o f t h e e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t p l a n t p a t h o g e n i c S c l e r o t i n i a s p e c i e s . P h y t o p a t h o l o g y 6 9 : 8 8 1 - 8 8 6 . K o h n , L . M . a n d G r e n v i l l e , D . 1 9 8 7 . S o m e f a c t o r s i n f l u e n c i n g l i p i d s t o r a g e i n s c l e r o t i a o f S c l e r o t i n i a . M y c o l o g i a 7 9 : 9 0 7 - 9 0 9 . K o h n , L . M . a n d G r e n v i l l e , D . J . 1 9 8 9 . A n a t o m y a n d h i s t o c h e m i s t r y o f s t r o m a t a l a n a m o r p h s i n t h e S c l e r o t i n i a c e a e . C a n . J . B o t . 6 7 : 3 7 1 - 3 9 3 . 3 3 8 6 . 8 7 . 8 8 . 8 9 . 9 0 . 9 1 . 9 2 . 9 3 . 9 4 . 9 5 . 9 6 . K o l l e r , W . 1 9 8 8 . S t e r o l d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s : m e c h a n i s m o f a c t i o n a n d r e s i s t a n c e . p . 7 9 - 8 8 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N b r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . K o l l e r , W . a n d S c h e i n p f l u g , H . 1 9 8 7 . F u n g a l r e s i s t a n c e t o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s . P l a n t D i s . 7 1 : 1 0 6 6 — 1 0 7 4 . L u c a s , J . A . 1 9 9 8 . P l a n t P a t h o l o g y a n d P l a n t P a t h o g e n s . 3 r d e d . M a l d e n M A : B l a c k w e l l S c i . 2 7 4 p . M a l c a , I . a n d E n d o , R . M . 1 9 6 5 . I d e n t i f i c a t i o n o f g a l a c t o s e i n c u l t u r e s o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a a s t h e f a c t o r t o x i c t o b e n t g r a s s e s . P h y t o p a t h o l o g y 5 5 : 7 7 5 - 7 8 0 . M a s s i e , L . B . , C o l e , H . , a n d D u i c h , J . 1 9 6 9 . E f f e c t i v e c o n t r o l o f S c l e r o t i n i a d o l l a r s p o t a n d R h i z o c t o n i a b r o w n p a t c h w i t h B e n l a t e . P h y t o p a t h o l o g y ( A b s t r . ) 5 9 : 4 0 1 . M c C a r t y , L . B . a n d M i l l e r , G . 2 0 0 2 . M a n a g i n g B e r m u d a g r a s s T u r f : S e l e c t i o n , C o n s t r u c t i o n , C u l t u r a l P r a c t i c e s , a n d P e s t M a n a g e m e n t S t r a t e g i e s . C h e l s e a M I : A n n A r b o r P r e s s . 2 2 1 p . M e y e r , J . R . , S m e j k a l , C . A . , a n d R o s s i , F . 1 9 9 5 . R e s p o n s e o f c r e e p i n g a n d c o l o n i a l b e n t g r a s s v a r i e t i e s t o d o l l a r s p o t , 1 9 9 4 . 2 9 p . M o n t e i t h , J . 1 9 2 7 . 1 9 2 7 e x p e r i m e n t s o n b r o w n - p a t c h c o n t r o l . U S G A G r e e n S e c t . B u l l . 7 : 2 1 0 — 2 1 6 . M o n t e i t h , J . 1 9 2 7 . O b s e r v a t i o n s o n b r o w n - p a t c h c o n t r o l i n 1 9 2 7 . U S G A G r e e n S e c t . B u l l . 7 : 2 3 7 - 2 4 7 . M o n t e i t h , J . a n d D a h l , A . S . 1 9 3 2 . T u r f g r a s s D i s e a s e s a n d T h e i r C o n t r o l . F a r H i l l s N J : U . S . G o l f A s s n . 1 8 7 p . M o n t e i t h , J . , J r . 1 9 4 0 . W h a t w a r i s d o i n g t o t u r f t r e a t m e n t . T h e A u s t r a l i a n G r e e n k e e p e r , 5 ( 2 ) , p . 1 1 - 1 3 . 3 4 9 7 . 9 8 . 9 9 . 1 0 0 . 1 0 1 . 1 0 2 . 1 0 3 . 1 0 4 . 1 0 5 . 1 0 6 . 1 0 7 . 1 0 8 . M o r d u e , J . E . M . 1 9 7 9 . S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a : C M I d e s c r i p t i o n o f p l a n t p a t h o g e n i c f u n g i a n d b a c t e r i a N o . 6 1 8 . 1 8 - 1 9 p . M o s s , W . P . , H a g a n , A . K . , B o w e n , K . L . , a n d D i c k e n s , R . 1 9 9 5 . R e a c t i o n o f b e r m u d a g r a s s c u l t i v a r s a n d s e l e c t i o n s t o d o l l a r s p o t i n A l a b a m a , 1 9 9 4 . B i o l . C u l t . T e s t s f o r C o n t r o l o f P l a n t D i s . 1 0 : 3 3 . N e n e , Y . L . a n d T h a p l i y a l , P . N . 1 9 9 3 . F u n g i c i d e s i n P l a n t D i s e a s e C o n t r o l . 3 r d e d . N e w Y o r k : I n t l . S c i . P u b l i s h e r . 6 9 1 p . N e w e l l , A . J . a n d B a l d w i n , N . A . 1 9 9 0 . T h e o c c u r r e n c e o f d o l l a r s p o t o n F e s t u c a r u b r a : S u b s p e c i e s a n d c u l t i v a r s . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 6 6 : 1 1 5 - 1 1 9 . N i c h o l s o n , J . F . 1 9 7 0 . T o l e r a n c e o f S c l e r o t i n i a d o l l a r s p o t f u n g u s t o D y r e n e . P r o c . A n n i v . T u r f g r a s s C o n f . S h o w ( I l l . ) , V o l . 1 1 , p . 3 3 . N i c h o l s o n , J . F . 1 9 7 1 . [ C o n t r o l o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a i n c r e e p i n g b e n t g r a s s w i t h D y r e n e , 1 9 7 1 . ] . F u n g i c i d e N e m a t i c i d e T e s t s 2 7 : 1 3 3 . N i c h o l s o n , J . F . , M e y e r , W . A . , S i n c l a i r , J . B . , a n d B u t l e r , J . D . 1 9 7 1 . T u r f i s o l a t e s o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o l e r a n t t o D y r e n e . P h y t O p a t h o l o g i s c h e Z e i t s c h r i f t 7 2 : 1 6 9 — 1 7 2 . P a l m , E . W . 1 9 9 3 . V o l u n t a r y c a n c e l l a t i o n o f D y r e n e . G a t e w a y G r e e n , 1 9 ( 1 ) M a r c h , p . 1 0 . P h i l l i p s , H . 1 9 9 4 . O f f t h e m a r k e t . G o l f C o u r s e N e w s , 5 ( 6 ) , p . l , 3 9 . P i p e r , C . V . a n d C o e , H . S . 1 9 1 9 . R h i z o c t o n i a i n l a w n s a n d p a s t u r e s . P h y t o p a t h o l o g y 9 : 8 9 — 9 2 . P i p e r , C . V . a n d O a k l e y , R . A . 1 9 2 1 . T h e b r o w n - p a t c h d i s e a s e o f t u r f . B u l l e t i n o f t h e G r e e n S e c t i o n o f t h e U . S . G o l f A s s o c i a t i o n , 1 ( 6 ) J u n e , p . 1 1 2 - 1 1 5 . P o m m e r , E . H . a n d L o r e n z , G . 1 9 8 7 . D i c a r b o x i m i d e f u n g i c i d e s . p . 9 1 - 1 0 6 . I n M o d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s 3 5 1 0 9 . 1 1 0 . 1 1 1 . 1 1 2 . 1 1 3 . 1 1 4 . 1 1 5 . 1 1 6 . 1 1 7 . o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . P o w e l l , J . F . 1 9 9 8 . S e a s o n a l V a r i a t i o n a n d T a x o n o m i c C l a r i f i c a t i o n o f t h e D o l l a r S p o t P a t h o g e n : S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . D i s s . ( P h . D . ) , M i c h . S t . U n i v . , 8 1 p . P o w e l l , J . F . a n d V a r g a s , J . M . , J r . 1 9 9 9 . T a x o n o m i c c l a r i f i c a t i o n o f t h e d o l l a r s p o t p a t h o g e n : S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a B e n n e t t . P h y t o p a t h o l o g y ( A b s t r . ) 8 9 : 5 6 1 . R o s s m a n , A . Y . , P a l m , M . E . , a n d S p i e l m a n , L . J . 1 9 8 7 . A L i t e r a t u r e G u i d e f o r t h e I d e n t i f i c a t i o n o f P l a n t P a t h o g e n i c F u n g i . S t . P a u l M N : A m e r . P h y t o p a t h . S o c . 2 5 2 p . R o w e l l , J . B . 1 9 5 0 . C o o p e r a t i v e t u r f f u n g i c i d e t r i a l s . U S G A J o u r n a l a n d T u r f M a n a g e m e n t 3 : 3 1 . S a n d e r s , P . L . 1 9 8 4 . F a i l u r e o f m e t a l a x y l t o c o n t r o l P y t h i u m b l i g h t o f t u r f g r a s s i n P e n n s y l v a n i a . P l a n t D i s . 6 8 : 7 7 6 - 7 7 7 . S c h a b e n b e r g e r , O . a n d P i e r c e , F . J . 2 0 0 2 . C o n t e m p o r a r y S t a t i s t i c a l M o d e l s f o r t h e P l a n t a n d S o i l S c i e n c e s . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . 7 3 8 p . S c h e i n p f l u g , H . a n d K u c k , K . H . 1 9 8 7 . S t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t i n g p i p e r a z i n e , p y r i d i n e , p y r i m i d i n e , a n d a z o l e f u n g i c i d e s . p . 1 7 3 - 2 0 4 . I n M b d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . S c h u l z , U . a n d S c h e i n p f l u g , H . 1 9 8 8 . S t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t i n g f u n g i c i d e s : A n t i f u n g a l p r o p e r t i e s a n d a p p l i c a t i o n i n c e r e a l s . p . 2 1 1 - 2 6 1 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I I : S t e r o l S y n t h e s i s I n h i b i t o r s I n P l a n t P r o t e c t i o n , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . S c h u m a n n , G . L . a n d W i l k i n s o n , H . T . 1 9 9 2 . R e s e a r c h m e t h o d s a n d a p p r o a c h e s t o t h e s t u d y o f d i s e a s e s i n t u r f g r a s s e s . p . 6 5 3 — 6 8 8 . I n T u r f g r a s s , e d i t e d b y D . 3 6 1 1 8 . 1 1 9 . 1 2 0 . 1 2 1 . 1 2 2 . 1 2 3 . 1 2 4 . 1 2 5 . 1 2 6 . 1 2 7 . 1 2 8 . V . W a d d i n g t o n , R . N . C a r r o w a n d R . C . S h e a r m a n . M a d i s o n W I : A m e r . S o c . A g r o n . , C r o p S c i . S o c . A m e r . , S o i l S c i , S o c . A m e r . S c h w i n n , F . J . 1 9 8 2 . C h e m i c a l c o n t r o l o f f u n g a l d i s e a s e s : I m p o r t a n c e a n d p r o b l e m s . p . 7 - 1 5 . I n F u n g a l R e s i s t a n c e i n C r o p P r o t e c t i o n , e d i t e d b y J . D e k k e r a n d S . G . G e o r g o p o u l u s . W e g e n i n g e n , T h e N e t h e r . : C e n t r e A g r i c u l . P u b . D o c u m e n t . S e t t l e , D . , F r y , J . , a n d T i s s e r a t , N . 2 0 0 1 . D o l l a r s p o t a n d b r o w n p a t c h f u n g i c i d e m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s i n f o u r c r e e p i n g b e n t g r a s s c u l t i v a r s . C r o p S c i . 4 1 : 1 1 9 0 - 1 1 9 7 . S m i l e y , R . W . 1 9 8 3 . C o m p e n d i u m o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . S t . P a u l M N : A m e r . P h y t o p a t h . S o c . 1 0 2 p . S m i l e y , R . W . , D e r n o e d e n , P . H . , a n d C l a r k e , B . B . 1 9 9 2 . C o m p e n d i u m o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 2 n d e d . S t . P a u l M N : A m e r . P h y t o p a t h . S o c . 9 8 p . S m i t h , J . D . 1 9 5 1 . F u n g i a n d T u r f D i s e a s e s : 1 . A n i n t r o d u c t i o n t o t h e b i o l o g y o f t h e f u n g i . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 8 : 6 0 - 6 6 . S m i t h , J . D . 1 9 5 4 . D o l l a r s p o t d i s e a s e : f u n g i c i d e t r i a l s , 1 9 5 4 : A p r e l i m i n a r y r e p o r t o n t h e c o m p a r i s o n o f c e r t a i n f u n g i c i d e s f o r t h e p r e v e n t i o n a n d c u r e f o r t h e d i s e a s e . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 8 : 3 5 5 - 3 5 9 . S m i t h , J . D . 1 9 5 5 . F u n g i a n d t u r f d i s e a s e s : D o l l a r s p o t d i s e a s e . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 8 : 3 5 - 5 9 . S m i t h , J . D . 1 9 5 6 . T h e u s e o f g r i s e o f u l v i n a g a i n s t d o l l a r s p o t a n d F u s a r i u m p a t c h d i s e a s e s o f t u r f . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 2 0 3 - 2 0 9 . S m i t h , J . D . 1 9 5 6 . D o l l a r s p o t t r i a l s , 1 9 5 6 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 2 3 5 - 2 4 3 . S m i t h , J . D . 1 9 5 7 . T h e e f f e c t o f d o l l a r s p o t d i s e a s e o n t h e b o t a n i c a l c o m p o s i t i o n o f t u r f o f s e a - m a r s h f e s c u e . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 3 2 2 - 3 2 3 . S m i t h , J . D . 1 9 5 7 . D o l l a r s p o t - f u n g i c i d e t r i a l , 1 9 5 6 . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 3 5 3 — 3 5 4 . 3 7 1 2 9 . 1 3 0 . 1 3 1 . 1 3 2 . 1 3 3 . 1 3 4 . 1 3 5 . 1 3 6 . 1 3 7 . 1 3 8 . 1 3 9 . S m i t h , J . D . 1 9 5 7 . C a d m i u m c h l o r i d e / u r e a f o r d o l l a r s p o t c o n t r o l w i t h a n o t e o n t h e e f f e c t o f c a d m i u m c h l o r i d e w i t h s u l p h a t e o f a m m o n i a a p p l i c a t i o n s o n e a r t h w o r m c a s t s . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 3 5 5 - 3 5 9 . S m i t h , J . D . 1 9 5 8 . T h e e f f e c t o f s p e c i e s a n d v a r i e t i e s o f g r a s s e s o n t u r f d i s e a s e s . J . S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 : 4 6 2 - 4 6 6 . S m i t h , J . D . 1 9 5 9 . F u n g a l D i s e a s e s o f T u r f G r a s s e s , 1 9 5 9 . B i n g l e y , Y o r k s h i r e : S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 0 p . S m i t h , J . D . a n d J a c k s o n , N . 1 9 6 5 . F u n g a l D i s e a s e s o f T u r f G r a s s e s . 2 n d e d . B i n g l e y , E n g l a n d : S p o r t s T u r f R e s . I n s t . 9 7 p . S m i t h , J . D . , J a c k s o n , N . , a n d W o o d h o u s e , A . R . 1 9 8 9 . F u n g a l D i s e a s e s o f A m e n i t y T u r f G r a s s e s . L o n d o n : E . & F . N . S p o n . 4 0 1 p . S m i t h , J . D . , G o s s e n , B . D . , a n d H s i a n g , T . 2 0 0 1 . F i r s t r e p o r t o f d o l l a r s p o t , c a u s e d b y S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a , o n P o a p r a t e n s i s i n S a s k a t c h e w a n , C a n a d a . P l a n t D i s . 7 : 8 0 3 . S t a h n k e , G . K . a n d F 0 5 5 , C . R . 1 9 9 4 . F i r s t r e p o r t o f d o l l a r s p o t , c a u s e d b y S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a , o n t u r f g r a s s i n W a s h i n g t o n . P l a n t D i s . 7 8 : 1 0 0 . V a r g a s , J . M . 1 9 9 8 . M a n a g i n g r e s i s t a n c e : P a r t I . F u n g i c i d e s : T h e s t r a t e g y o f p r e v e n t i n g t u r f g r a s s - p a t h o g e n r e s i s t a n c e b y a l t e r n a t i n g f u n g i c i d e s i s i n e f f e c t i v e . G r o u n d s M a i n t e n a n c e , 3 3 , p . 1 8 - 2 4 . V a r g a s , J . M . , J r . 1 9 9 3 . A l t e r n a t i v e s t o m e r c u r y f u n g i c i d e s f o r t h e c o n t r o l o f s n o w m o l d . N e w s n o t e s ( M i c h i g a n T u r f g r a s s F o u n d a t i o n ) , F a l l , p . 7 - 8 . V a r g a s , J . M . , J r . 1 9 9 4 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 2 n d e d . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . 2 9 4 p . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 2 . T o r o t a t e o r n o t t o r o t a t e ? : S u p e r i n t e n d e n t s m a y n o t f u l l y u n d e r s t a n d t h e r a t i o n a l e f o r r o t a t i n g f u n g i c i d e s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , 7 0 ( 4 ) , p . 5 3 - 5 6 . 3 8 1 4 0 . 1 4 1 . 1 4 2 . 1 4 3 . 1 4 4 . 1 4 5 . 1 4 6 . 1 4 7 . 1 4 8 . 1 4 9 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 3 . A g g r e s s i v e d o l l a r s p o t r a i s e s i m p o r t a n t q u e s t i o n s . T u r f G r a s s T R E N D S , M a y , p . 4 3 - 4 4 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 5 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 3 r d e d . H o b o k e n N J : J o h n W i l e y a n d S o n s . 3 2 2 p . V a r g a s , J . M . , J r . a n d T u r g e o n , A . J . 2 0 0 4 . P o a a n n u a : P h y s i o l o g y . C u l t u r e , a n d C o n t r o l o f A n n u a l B l u e g r a s s . H o b o k e n N J : W i l e y . 1 6 5 p . V a r g a s , J . M . , J r . , B e a r d , J . B . , a n d P a y n e , K . T . 1 9 7 2 . T h e c o m p a r a t i v e i n c i d e n c e o f T y p h u l a b l i g h t a n d F u s a r i u m p a t c h o n 5 6 K e n t u c k y b l u e g r a s s c u l t i v a r s . P l a n t D i s . R p t r . 5 6 : 3 2 - 3 4 . V a r g a s , J . M . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 2 . D o l l a r s p o t r e s i s t a n c e t o D M I f u n g i c i d e s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , M a r c h , p . 5 0 - 5 4 . V i n c e l l i , P . a n d D i x o n , E . 2 0 0 1 . R e s i s t a n c e t o Q o I ( = s t o b i l u r i n ) f u n g i c i d e s i n P y r i c u l a r i a g r i s e a f r o m p e r e n n i a l r y e g r a s s . ( A b s t r . ) P h y t o p a t h o l o g y 9 1 : 5 9 2 . V i n c e l l i , P . a n d D i x o n , E . 2 0 0 2 . R e s i s t a n c e t o Q o I ( s t r o b i l u r i n — l i k e ) f u n g i c i d e s i n i s o l a t e s o f P y r i c u l a r i a g r i s e a f r o m p e r e n n i a l r y e g r a s s . P l a n t D i s . 8 6 : 2 3 5 - 2 4 0 . V i n c e l l i , P . , D o n e y , J . C . , a n d P o w e l l , A . J . 1 9 9 7 . V a r i a t i o n a m o n g c r e e p i n g b e n t g r a s s c u l t i v a r s i n r e c o v e r y f r o m e p i d e m i c s o f d o l l a r s p o t . P l a n t D i s . 8 1 : 9 9 - 1 0 2 . W a d e , M . 1 9 8 8 . S t r a t e g i e s f o r p r e v e n t i n g o r d e l a y i n g t h e o n s e t o f r e s i s t a n c e t o f u n g i c i d e s a n d f o r m a n a g i n g r e s i s t a n c e o c c u r e n c e s . p . 1 4 - 1 5 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N a r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . W a l s h , B . , I k e d a , S . , a n d B o l a n d , G . 1 9 9 9 . B i o l o g y a n d m a n a g e m e n t o f d o l l a r s p o t ( S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a ) ; a n i m p o r t a n t d i s e a s e o f t u r f g r a s s . H o r t S c i . 3 4 : 1 3 — 2 0 . 3 9 1 5 0 . 1 5 1 . 1 5 2 . 1 5 3 . 1 5 4 . 1 5 5 . 1 5 6 . 1 5 7 . 1 5 8 . W a r e , G . W . 1 9 9 4 . T h e P e s t i c i d e B o o k . 4 t h e d . F r e s n o C A : T h o m s o n P u b l i c a t i o n s . 3 8 6 p . W a r e , G . W . 2 0 0 0 . T h e P e s t i c i d e B o o k . 5 t h e d . B a k e r s f i e l d C A : K o v a k B o o k s . 4 1 8 p . W a r r e n , C . G . , S a n d e r s , P . , a n d C o l e , H . 1 9 7 4 . S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o l e r a n c e t o b e n z i m i d a z o l e c o n f i g u r a t i o n f u n g i c i d e s . P h y t o p a t h o l o g y 6 4 : 1 1 3 9 - 1 1 4 2 . W a t k i n s , J . E . 1 9 9 7 . D i s e a s e s o f c o o l s e a s o n t u r f g r a s s i n t h e G r e a t P l a i n s . p . 1 1 9 - 1 4 4 . I n I n t e g r a t e d T u r f g r a s s M a n a g e m e n t f o r t h e . N O r t h e r n G r e a t P l a i n s , e d i t e d b y F . P . B a x e n d a l e a n d R . E . G a u s s o i n . L i n c o l n N E : C o o p . E x t . , I n s t . A g . N a t . R e s . , U n i v . N e b . W h e t z e l , H . H . 1 9 4 5 . A s y n o p s i s o f t h e g e n e r a a n d s p e c i e s o f t h e S c l e r o t i n i a c e a e , a f a m i l y o f o f s t r o m a t i c i n o p e r c u l a t e d i s c o m y c e t e s . M y c o l o g y 3 7 : 6 4 8 - 7 1 4 . W h e t z e l , H . H . 1 9 4 6 . T h e c y p e r i c o l o u s a n d j u n c i c o l o u s s p e c i e s o f S c l e r o t i n i a . F a r l o w i a 2 : 3 8 5 - 4 3 7 . W i l k i n s o n , J . F . , M a r t i n , D . P . , a n d L a r s e n , P . O . 1 9 7 5 . K e n t u c k y b l u e g r a s s a n d p e r e n n i a l r y e g r a s s c u l t i v a r s u s c e p t i b i l i t y t o S c l e r o t i n i a d o l l a r s p o t . P l a n t D i s . R p t r . 5 9 : 9 3 5 — 9 3 8 . W o r f , G . L . 1 9 8 8 . F u n g i c i d e C h a n g e s i n 1 9 8 8 . G r a s s R o o t s 1 5 : 2 7 . Z a d o k a , J . C . 1 9 8 2 . C a n w e u s e m o d e l s d e s c r i b i n g t h e p o p u l a t i o n d y n a m i c s o f f u n g i c i d e - r e s i s t a n t s t r a i n s ? p . 1 4 9 - 1 6 0 . I n F u n g a l R e s i s t a n c e i n C r o p P r o t e c t i o n , e d i t e d b y J . D e k k e r a n d S . G . G e o r g o p o u l u s . W e g e n i n g e n , T h e N e t h . : C e n t r e A g r i c u l . P u b . D o c u m e n t . 4 0 C H A P T E R 2 E F F E C T S O F R E P E A T E D T R E A T M E N T S O F D E M E T H Y L A T I O N - I N H I B I T O R ( D M I ) F U N G I C I D E S O N D M I - S E N S I T I V E P O P U L A T I O N S O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M 4 1 L I T E R A T U R E R E V I E W T h o u s a n d s o f c o m p o u n d s c o n t i n u e t o b e i s o l a t e d , s y n t h e s i z e d , a n d s c r e e n e d i n h o p e s o f f i n d i n g a n t i m i c r o b i a l p r o p e r t i e s . M o s t o f t h e c o m p o u n d s s h o w n t o b e s u c c e s s f u l i n c l i n i c a l t r i a l s w e r e a c t i v e o n b a c t e r i a a n d n o t f u n g i ( 2 1 ) . T h e f i r s t u s e s o f a n t i f u n g a l c o m p o u n d s w e r e r e s t r i c t e d t o h u m a n m e d i c i n e , f o l l o w e d b y v e t e r i n a r y a p p l i c a t i o n s , b e f o r e b e i n g e x p a n d e d p o s s i b l y f o r t h e t r e a t m e n t o f f u n g a l d i s e a s e s o f p l a n t s ( 4 4 ) . T h e d e v e l o p m e n t o f c o m p o u n d s t h a t i n t e r f e r e w i t h s t e r o l f u n c t i o n a n d m e t a b o l i s m w i t h i n f u n g a l p a t h o g e n s h a v e b e c o m e i n c r e a s i n g l y p r e v a l e n t i n p l a n t - , a n i m a l - , a n d h u m a n - d i s e a s e m a n a g e m e n t ( 1 1 ) . T h e E r g o s t e r o l - B i o s y n t h e s i s P a t h w a y a n d S t e r o l — B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s S t e r o l s a r e i m p o r t a n t i n t h e m a i n t e n a n c e o f c e l l — m e m b r a n e i n t e g r i t y , s y n t h e s i s o f b i l e a c i d s , a n d t h e p r o d u c t i o n o f s t e r o i d h o r m o n e s ( 4 4 ) . C a m p e s t e r o l , s i t o s t e r o l , a n d s t i g m a s t e r o l a r e t h e m a i n s t e r o l s f o u n d i n p l a n t s ( 1 0 ) . C h o l e s t e r o l i s t h e p r e d o m i n a n t s t e r o l i n m a m m a l s ( 6 9 ) . E r g o s t e r o l i s t h e c h a r a c t e r i s t i c s t e r o l i n t h e a s c o m y c e t e s , b a s i d i o m y c e t e s , a n d d e u t e r o m y c e t e s ( 9 5 ) , w h i c h a r e t h e t h r e e c l a s s e s o f t h e h i g h e r f u n g i ( 1 ) . 4 2 K o l l e r c l a s s i f i e d s t e r o l - i n t e r f e r i n g a n t i f u n g a l a g e n t s i n t o f o u r g r o u p s ( 4 4 ) . T h e f i r s t o f t h e s e w a s t h e p o l y e n e m i c r o l i d e s , w h i c h b e g a n w i t h t h e d e s c r i p t i o n o f n y s t a t i n i n 1 9 5 0 ( 3 4 ) . A m p h o t e r i c i n B f o l l o w e d i n 1 9 5 6 ( 2 9 ) a n d b e c a m e t h e m o s t u s e f u l o f t h e p o l y e n e m i c r o l i d e s ( 2 1 ) o f w h i c h m o r e t h a n 2 0 0 c o m p o u n d s w e r e d e s c r i b e d b y 1 9 8 1 ( 6 8 ) . T h e y h a v e b e e n s u c c e s s f u l l y u s e d i n t h e t r e a t m e n t o f c a n d i d i a s i s ( 2 3 , 4 2 ) . T h e i r m o d e o f a c t i o n i s t o b i n d p r e f e r e n t i a l l y t o e r g o s t e r o l m o l e c u l e s t h a t r e i n f o r c e t h e c e l l m e m b r a n e r e s u l t i n g i n a l o s s o f t h e m e m b r a n e ’ s s t r u c t u r a l i n t e g r i t y w i t h s u b s e q u e n t l e a k a g e o f c r i t i c a l i o n s f r o m w i t h i n t h e c e l l ( 4 1 , 4 2 ) . N o m a c r o l i d e p r o d u c t s h a v e b e e n d e v e l o p e d f o r u s e o n p l a n t s ( 4 4 ) . T h e o t h e r t h r e e g r o u p s a r e c o l l e c t i v e l y k n o w n a s “ s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r ” ( S B I ) f u n g i c i d e s ( 1 1 , 4 4 , 7 1 , 7 6 ) , “ s t e r o l i n h i b i t o r ” ( S I ) f u n g i c i d e s ( 6 4 , 6 5 ) a n d “ e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r ” ( E B I ) f u n g i c i d e s ( 2 0 , 7 2 ) : A l l t h r e e t e r m s a r e s y n o n y m o u s . T h e i r m o d e o f a c t i o n i s t o i n t e r f e r e w i t h e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s , t h e r e b y a f f e c t i n g c e l l - m e m b r a n e m a i n t e n a n c e a n d f o r m a t i o n ( 7 3 ) . T h e e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s p a t h w a y i s h i g h l y c o n s e r v e d ( 4 4 ) a n d c a n b e s e g m e n t e d i n t o t h r e e p a r t s . T h e f i r s t i s t h e f o r m a t i o n o f s q u a l e n e ; t h i s i s c o m m o n t o a l l 4 3 s t e r o l p r o d u c t i o n i n a n i m a l s , p l a n t s , a n d f u n g i ( 1 2 ) . T h e s y n t h e s i s o f s q u a l e n e b e g i n s w i t h a c e t y l - C o A a n d i n v o l v e s t e n e n z y m a t i c s t e p s w i t h f a r n e s y l d i p h o s p h a t e b e i n g t h e i m m e d i a t e p r e c u r s o r t o s q u a l e n e ( 4 4 ) . T h e s e c o n d p a r t c o n t a i n s t h e c o n v e r s i o n o f s q u a l e n e i n t o l a n o s t e r o l ( 5 7 ) . A n e s s e n t i a l s t e p w i t h i n t h i s s e g m e n t i s t h e f o r m a t i o n o f s q u a l e n e e p o x i d e ( 6 6 ) . T h e n e w e s t c l a s s o f S B I f u n g i c i d e s , t h e a l l y l a m i n e s , i n h i b i t s s q u a l e n e e p o x i d a s e , t h u s l e a d i n g t o a n a c c u m u l a t i o n o f s q u a l e n e a n d a s u b s e q u e n t d e f i c i e n c y o f l a n e s t e r o l ( 6 7 ) . T h e a l l y l a m i n e s a r e s t i l l r e s t r i c t e d t o t h e c h e m o t h e r a p e u t i c t r e a t m e n t o f h u m a n m y c o s e s ; n o u s e s o n p l a n t p a t h o g e n i c f u n g i h a v e b e e n r e p o r t e d ( 4 4 ) . T h e t h i r d s e g m e n t o f t h e e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s p a t h w a y i s c a t a l y z e d b y m e m b r a n e - b o u n d e n z y m e s a n d i n v o l v e s t h e c o n v e r s i o n o f l a n o s t e r o l i n t o e r g o s t e r o l ( 5 9 ) . A c t i o n s i t e s o f t h e o t h e r t w o c l a s s e s o f S B I f u n g i c i d e s , t h e a z o l e f u n g i c i d e s a n d t h e m o r p h o l i n e f u n g i c i d e s , o c c u r w i t h i n t h i s f i n a l s e g m e n t . T h e a z o l e s w e r e i n t r o d u c e d i n t h e l a t e 1 9 6 0 5 a n d w e r e r o u t i n e l y s c r e e n e d f o r p o t e n t i a l a s p e s t i c i d e s a s w e l l a s d r u g s ( 4 4 ) . T h e a z o l e s a r e s t r u c t u r a l l y d i v e r s e ( 9 7 ) b u t s h a r e a c o m m o n s i t e o f a c t i o n . 4 4 S p e c i f i c a l l y , t h e y i n t e r f e r e w i t h d e m e t h y l a t i o n a t t h e C - 1 4 p o s i t i o n o f l a n o s t e r o l b y o u t c o m p e t i n g 2 4 - m e t h y l e n e d i h y d r o l a n o s t e r o l t o b i n d w i t h i t s r e s p e c t i v e e n z y m e , t h e 1 4 a — s t e r o l d e m e t h y l a s e . T h i s r e s u l t s i n a n a c c u m u l a t i o n o f l a n e s t e r o l , a n d e r g o s t e r o l i s n o t s u b s e q u e n t l y s y n t h e s i z e d ( 1 3 , 4 5 ) . A c c o r d i n g l y , t h i s c l a s s w a s c a l l e d t h e s t e r o l C - 1 4 - d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r f u n g i c i d e s , o r S D I s , b y B u c h e n a u e r ( 1 4 ) a n d L y r ( 5 3 ) i n 1 9 8 7 . S c h e i n p f l u g a n d K u c k r e f e r r e d t o t h e m m o r e c o n c i s e l y i n t h e s a m e m o n o g r a p h a s t h e d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) f u n g i c i d e s ( 4 7 ) , a n d t h i s n a m e b e c a m e c o m m o n l y u s e d ( 2 7 , 2 8 , 3 1 , 7 1 , 7 5 , 8 9 , 9 1 ) . T h e m o r p h o l i n e s w e r e f i r s t u t i l i z e d i n a g r i c u l t u r e b e f o r e l a t e r b e i n g d e v e l o p e d a s a n t i m y c o t i c p h a r m a c e u t i c a l s ( 4 4 ) . I t s f i r s t m e m b e r , d o d e m o r p h , w a s i n t r o d u c e d i n 1 9 6 5 a s t h e f i r s t p l a n t - p r o t e c t i v e S B I ( 6 3 ) , a l t h o u g h i t s s p e c i f i c m o d e o f a c t i o n w a s n o t u n d e r s t o o d a t t h e t i m e ( 9 7 ) . M o r p h o l i n e s h a v e d u a l a c t i o n s i t e s t h a t a r e b o t h w i t h i n t h e l a n o s t e r o l t o e r g o s t e r o l s e g m e n t o f t h e e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s p a t h w a y ( 4 0 ) . B o t h s i t e s o c c u r a f t e r t h e C - 1 4 d e m e t h y l a t i o n ( 5 8 ) a n d i n v o l v e e n z y m a t i c m e c h a n i c s t h a t a r e v e r y s i m i l a r t o e a c h o t h e r ( 4 4 ) . S p e c i f i c a l l y , t h e y b l o c k 2 9 4 d o u b l e — b o n d r e d u c t i o n 4 5 a n d [ 1 & 1 3 7 - i s o m e r i z a t i o n . T h e s e a c t i o n s h a v e t h e l e t h a l e f f e c t o f i n h i b i t i n g m y c e l i a l g r o w t h a s c h i t i n b e c o m e s i r r e g u l a r l y d i s t r i b u t e d i n t h e c e l l ( 5 8 ) . T h e s t e r o l — b i o s y n t h e s i s p a t h w a y h a s b e e n a p r o d u c t i v e m e t a b o l i c a r e a i n t e r m s o f r e s e a r c h , d e v e l o p m e n t , a n d p r o d u c t i o n o f p h y t o f u n g i c i d e s . T h e 8 8 1 5 c o n s t i t u t e t h e l a r g e s t a n d m o s t i m p o r t a n t g r o u p o f t h e s e ( 2 4 ) . T h e m o s t c o m m e r c i a l l y v i a b l e g r o u p h a s b e e n t h e D M I s ( 3 5 ) . I t i s a l s o t h e l a r g e s t . A l l p r o d u c t s i n u s e t o d a y w e r e d e s c r i b e d a s e a r l y a s 1 9 9 2 w h e n K O l l e r l i s t e d 4 0 D M I f u n g i c i d e s a n d a n t i m y c o t i c d r u g s w i t h 2 3 o f t h e m t h e n u s e d i n a g r i c u l t u r e ( 4 4 ) . T h e r e l a t i v e e a s e o f p a t e n t a b i l i t y c a n b e a t t r i b u t e d s o m e w h a t t o t h e d i v e r s e — s t r u c t u r a l d i f f e r e n c e s a m o n g m o l e c u l e s t h a t c a n i n h i b i t C - l 4 d e m e t h y l a t i o n . T h e c h e m i s t r y o f t h e D M I s w o u l d h a v e b e e n b r o a d e n e d m u c h e a r l i e r h a d b i o c h e m i s t s r e c o g n i z e d t h i s s o o n e r ( 1 3 ) . D M I F u n g i c i d e s — P r o d u c t D e v e l o p m e n t T h e D M I s a r e u s e d t o m a n a g e a b r o a d s p e c t r u m o f p l a n t d i s e a s e s . S c h u l z a n d S c h e i n p f l u g ( 7 4 ) i t e r a t e d s e v e r a l a d v a n t a g e s : ( a ) T h e y c a n b e u s e d i n a p r o p h y l a c t i c , c u r a t i v e , o r e r a d i c a t i v e m a n n e r . 4 6 ( b ) T h e y c a n b e a p p l i e d a s s p r a y s , g r a n u l a r s , o r s e e d t r e a t m e n t s . ( c ) T h e y c o n t r o l n o t o n l y i n d i v i d u a l p a t h o g e n s b u t o f t e n w h o l e d i s e a s e c o m p l e x e s . ( d ) T h e y c a u s e p h y t o t o x i c i t y l e s s f r e q u e n t l y b e c a u s e o f t h e i r s y s t e m i c n a t u r e a n d s p e c i f i c m e c h a n i s m o f a c t i o n . ( e ) T h e y m a k e p o s s i b l e l o w a p p l i c a t i o n r a t e s b e c a u s e o f t h e i r h i g h f u n g i c i d a l p o t e n c y . T h e D M I - f u n g i c i d e c l a s s c a n b e f u r t h e r d i v i d e d i n t o s u b - g r o u p s b a s e d o n s t r u c t u r a l d i f f e r e n c e s t h a t m a y a c c o u n t f o r t h e i r s e l e c t i v i t y a n d v a r i a t i o n a m o n g t h e m s e l v e s . T h e s e g r o u p s a r e t h e p i p e r a z i n e s , i m i d a z o l e s , p y r i d i n e s , t r i a z o l e s , a n d p y r i m i d i n e s . T h e f i r s t D M I t o b e i n t r o d u c e d w a s t h e p i p e r a z i n e t r i f o r i n e l a u n c h e d i n 1 9 6 9 b y B o e h r i n g e r S o h n C o m p a n y ( 7 4 ) . I t c o n t r o l s p o w d e r y m i l d e w a n d r u s t s a n d i s t h e s o l e p i p e r a z i n e u s e d i n p l a n t p r o t e c t i o n ( 7 2 ) . T h e f i r s t i m i d a z o l e , i m i z a l i l , w a s p r e s e n t e d b y J a n s s e n i n 1 9 7 2 f o r u s e a s a s e e d t r e a t m e n t t o i n h i b i t s o i l — b o r n e p a t h o g e n s o f c e r e a l s ( 7 2 , 7 4 ) . T h e o n l y c o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e p y r i d i n e i s b u t h i o b a t e l a u n c h e d a s D e n m e r t b y S u m i t o m o i n 1 9 7 5 ( 7 2 ) . K a t o r e p o r t e d i t h a v i n g i n v i t r o e f f e c t i v e n e s s o n s e v e r a l a s c o m y c e t e s a n d d e u t e r o m y c e t e s ( 3 9 ) , b u t i n 4 7 p r a c t i c e i t h a s b e e n u s e d p r i m a r i l y o n p o w d e r y m i l d e w i n J a p a n ( 7 2 ) . I n 1 9 7 3 , G r e w e a n d B U c h e l ( 3 3 ) r e p o r t e d t h e e f f e c t i v e n e s s o f f l u o t r i m a z o l e o n p o w d e r y m i l d e w . B a y e r s u b s e q u e n t l y i n t r o d u c e d i t a s t h e f i r s t c o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e t r i a z o l e f u n g i c i d e ( 7 2 , 7 4 ) . S t e f f e n s a n d W i e n e k e l a t e r d o c u m e n t e d i t s s y s t e m i c a c t i v i t y ( 7 9 ) . H o w e v e r , n o r e c o r d c o u l d b e f o u n d o f i t h a v i n g b e e n r e g i s t e r e d f o r u s e i n t h e U . S . ( 9 2 , 9 3 , 9 4 ) . T r i a d i m e f o n , a n o t h e r B a y e r t r i a z o l e , w a s i n t r o d u c e d i n t h e s a m e y e a r a n d w a s t h e f i r s t t o h a v e b r o a d - s p e c t r u m a c t i v i t y o n a n u m b e r o f a s c o m y c e t e s , b a s i d i o m y c e t e s , a n d d e u t e r o m y c e t e s ( 7 2 , 7 4 ) . I t r e c e i v e d U . S . E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y ( E P A ) r e g i s t r a t i o n a s B a y l e t o n i n 1 9 8 0 ( 9 4 ) . T r i a d i m e f o n s e t n e w s t a n d a r d s f o r c h e m i c a l c o n t r o l o f p l a n t d i s e a s e s ( 9 7 ) a n d b e c a m e t h e f i r s t D M I l a b e l e d f o r u s e o n t u r f ( 3 8 ) . R e g i s t r a t i o n o f t h e p r o d u c t w a s p a s s e d o n f r o m M o b a y t o M i l e s a n d t o B a y e r C r o p P r o t e c t i o n , w h i c h w e r e a l l s u b s i d i a r i e s o f t h e B a y e r C o r p o r a t i o n ( 9 ) . I t s c u r r e n t r e g i s t r a n t i s B a y e r C r o p S c i e n c e . T h e p y r i m i d i n e s w e r e d e v e l o p e d f r o m t h e p y r i d i n e s a s p l a n t - p r o t e c t i o n f u n g i c i d e s ( 9 7 ) . T h e E l i L i l y C o r p o r a t i o n d e v e l o p e d t h e o n l y c o m m e r c i a l p r o d u c t s , 4 8 t r i a m i r o l a n d f e n a r i m o l ( 4 4 ) . T h e l a t t e r h a s b e e n t h e m o s t s u c c e s s f u l h a v i n g b e e n l a u n c h e d i n t o t h e c r o p s m a r k e t i n 1 9 7 5 a s R u b i g a n E C b y i t s a g r i c u l t u r a l s u b s i d i a r y a t t h e t i m e , t h e E l a n c o P r o d u c t s C o m p a n y ( 3 ) . R u b i g a n A S w a s l a b e l e d f o r t u r f i n 1 9 8 3 ( 6 1 ) . T h e p r o d u c t w a s p a s s e d o n t o D o w E l a n c o i n 1 9 8 9 a n d D o w A g r i S c i e n c e s i n 1 9 9 7 b e f o r e b e i n g s o l d t o t h e G o w a n C o m p a n y o f Y u m a , A r i z o n a , i n 2 0 0 1 ( 8 ) . R u b i g a n h a s p r o v e n t o b e a n e f f e c t i v e f u n g i c i d e o n m a n y t u r f d i s e a s e s . H o w e v e r , i t i s u n i q u e i n t h a t 7 5 % o f i t s s a l e s i n r e c e n t y e a r s h a v e b e e n a s a n i c h e - m a r k e t , p r e e m e r g e n c e h e r b i c i d e ( S . F a r r i n g t o n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) t h a t c a n s u p p r e s s t h e g e r m i n a t i o n o f a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) i n b e r m u d a g r a s s ( C y n a d o n d a c t y l o n [ L . ] P e r s . ) g o l f - c o u r s e g r e e n s a n d t e e s o v e r s e e d e d w i t h p e r e n n i a l r y e g r a s s ( L o l i u m p e r e n n e L . ) , r o u g h b l u e g r a s s ( P o a t r i v i a l i s L . ) , o r c r e e p i n g b e n t g r a s s ( A g r o s t i s s t o l o n i f e r a L . ) ( 8 8 ) . C u r r e n t r e g i s t r a n t D o w A g r i s c i e n c e ’ s S u p p l e m e n t a l L a b e l D O 6 — 0 2 7 - 0 0 1 i s s u e d b y t h e E P A s t i p u l a t e s t w o a p p l i c a t i o n s s p a c e d 1 4 d a y s a p a r t a t l e a s t 1 4 - d a y s p r i o r t o o v e r s e e d i n g w i t h p e r e n n i a l r y e g r a s s . R o u g h b l u e g r a s s o r c r e e p i n g b e n t g r a s s s h o u l d r e c e i v e t h r e e a p p l i c a t i o n s a t 1 4 - d a y - s p r a y i n t e r v a l s ( 5 ) . 4 9 T h e t o t a l d o s a g e o f a c t i v e i n g r e d i e n t ( A I ) f o r b o t h p r o g r a m s i s 3 7 0 g 1 0 0 m 4 . M e n n a n d B e a r d a c h i e v e d e x c e l l e n t c o n t r o l w i t h s i m i l a r t i m i n g s u s i n g m a x i m u m t o t a l d o s a g e s o f o n l y 9 0 g A I 1 0 0 m " 2 w i t h h i g h e r r a t e s c a u s i n g d i s c o l o r a t i o n o f T i f g r e e n a n d T i f d w a r f b e r m u d a g r a s s ( C y n o d o n d a c t y l o n ( L . ) P e r s . x C . t r a n s v a a l e n s i s B u r t - D a v y ( 5 4 , 5 5 , 5 6 ) . N o o t h e r f u n g i c i d e s w e r e t e s t e d i n t h e s e s t u d i e s a n d n o d o l l a r s p o t w a s e v i d e n t ( W . M e n n , P e r s o n a l C o m m u n i c a t i o n ) . T h e l a c k o f d o l l a r - s p o t i n c i d e n c e i s u n d e r s t a n d a b l e s i n c e t h e m a x i m u m — a p p l i c a t i o n r a t e o f f e n a r i m o l f o r d o l l a r s p o t i s l e s s t h a n 5 0 g A I 1 0 0 I n ’ 2 e v e r y 1 4 d a y s ( 7 ) . N o r e p o r t s o f a n y t e s t i n g w i t h o t h e r D M I s h a v e b e e n f o u n d . T h e u n i q u e n e s s o f f e n a r i m o l f o r t h i s u s e m a y b e b e c a u s e i t i s t h e o n l y p y r i m i d i n e l a b e l e d f o r t u r f . O t h e r t r i a z o l e s b e s i d e s t r i a d i m e f o n h a v e b e e n s h o w n t o b e e f f e c t i v e t u r f f u n g i c i d e s . P r o p i c o n a z o l e w a s o r i g i n a l l y d i s c o v e r e d a n d p a t e n t e d b y J a n s e n P h a r m a c e u t i c a l s ( 7 2 , 7 4 ) . C i b a G e i g y t h e n a c q u i r e d t h e c o m p o u n d ’ s a g r i c u l t u r a l - u s e r i g h t s a n d i n t r o d u c e d i t i n 1 9 7 9 a s T i l t . T h e c o m p a n y a c q u i r e d E P A r e g i s t r a t i o n n u m b e r s f o r s e v e r a l m o r e f o r m u l a t i o n s d i r e c t e d t o w a r d d i f f e r e n t m a r k e t s e g m e n t s . T h e p r o d u c t l a b e l e d f o r t u r f a n d o r n a m e n t a l s w a s r e l e a s e d i n 1 9 8 7 a n d t r a d e - n a m e d 5 0 B a n n e r ( 4 ) . C i b a - G e i g y b e c a m e k n o w n a s C i b a i n 1 9 9 2 b e f o r e i t m e r g e d w i t h S a n d o z i n 1 9 9 6 t o f o r m N o v a r t i s , w h i c h i n t u r n j o i n e d w i t h A s t r a Z e n e c a t o f o r m S y n g e n t a , w h i c h e x i s t s t o d a y ( 9 ) . C y p r o c o n a z o l e w a s r e g i s t e r e d a s S e n t i n e l 1 9 9 4 b y S a n d o z C r o p P r o t e c t i o n , b u t i t w a s s o l d t o B a y e r t o m e e t a n t i t r u s t r e q u i r e m e n t s s e t f o r t h b y t h e E u r o p e a n C o m m i s s i o n t h a t a l l o w e d t h e f o r m a t i o n o f S y n g e n t a ( 6 ) . T h e m o s t r e c e n t t r i a z o l e t u r f - f u n g i c i d e i s t r a d e - n a m e d E a g l e . I t c o n t a i n s m y c l o b u t a n i l a n d w a s r e g i s t e r e d i n 1 9 9 7 b y R o h m a n d H a a s , w h i c h w a s a c q u i r e d b y D o w A g r i S c i e n c e s i n 2 0 0 1 . T r i t o n w i t h A I t r i t i c o n a z o l e w a s e x p e c t e d t o b e r e g i s t e r e d b y B a y e r f o r t u r f u s e i n 2 0 0 4 ( 9 6 ) . H o w e v e r , i t a n d t e t r a b u t r a z o l e h a v e b e e n d e l a y e d i n d e f i n i t e l y d u e t o r e c e n t E P A c o n c e r n s w i t h t h e e n v i r o n m e n t a l f a t e o f D M I m e t a b o l i t e s ( R . H a n r a h a n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . N o o t h e r D M I s a r e b e i n g d e v e l o p e d f o r u s e o n t u r f b y S y n g e n t a ( J . D i P a o l a , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) , B a y e r ( R . H a n r a h a n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) , D o w ( F . P r e t z e r , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) , o r G o w a n ( S . F a r r i n g t o n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) , a t t h i s t i m e . C u r r e n t p r o d u c t s l a b e l e d f o r u s e o n U . S . g o l f c o u r s e s a r e s h o w n i n T a b l e 2 . 1 . T h e y m a y h a v e i d e n t i c a l 5 1 o r d i f f e r e n t t r a d e n a m e s w h e n s o l d e l s e w h e r e d e p e n d i n g u p o n t h e p r o d u c t a n d t h e c o u n t r y . T h e U . S . p a t e n t s f o r t r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , a n d p r o p i c o n a z o l e h a v e e x p i r e d r e s u l t i n g i n s i m i l a r p r o d u c t s b e i n g o f f e r e d b y m o r e t h a n o n e c o m p a n y . D M I - F u n g i c i d e F o r m u l a t i o n s a n d E f f i c a c i e s T h e D M I f u n g i c i d e s a r e a c l a s s o f s o m e o f t h e m o s t s y s t e m i c a l l y f u n g i s t a t i c c o m p o u n d s a v a i l a b l e f o r u s e o n p l a n t d i s e a s e s ( 7 4 ) . D e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s t r a n s l o c a t e p r i m a r i l y i n t h e a p o p l a s t b u t s o m e s y m p l a s t i c t r a n s p o r t d o e s o c c u r ( 7 2 ) . F o r m u l a t i o n s c o n t a i n i n g D M I s f o r s p r a y a p p l i c a t i o n s i n d i l u t e d f o r m s i n c l u d e w e t t a b l e p o w d e r s , w a t e r - d i s p e r s i b l e g r a n u l e s , d r y f l o w a b l e s , a q u e o u s s u s p e n s i o n s , m i c r o e m u l s i o n s , g e l s , a n d e m u l s i f i a b l e c o n c e n t r a t e s . D r y a p p l i c a t i o n s c a n b e m a d e a s g r a n u l a r s o r c o m b i n e d w i t h f e r t i l i z e r s . T h e D M I s a r e t y p i c a l l y a p p l i e d a t l o w e r q u a n t i t i e s o f A I p e r u n i t a r e a w h e n c o m p a r e d t o t h e b e n z i m i d a z o l e s a n d d i c a r b o x i m i d e s . T h e D M I s a r e s i n g l e — s i t e ( S S ) f u n g i c i d e s u n d e r m u l t i g e n i c c o n t r o l ( 8 5 , 8 7 ) . T h i s a c t i o n s i t e i s w i t h i n t h e s t e r o l b i o s y n t h e s i s p a t h w a y , w h i c h i s c r i t i c a l t o a h i g h e r f u n g i m e t a b o l i s m . A s c o m y c e t e s , b a s i d i o m y c e t e s , a n d d e u t e r o m y c e t e s p r o d u c e e r g o s t e r o l a n d o o m y c e t e s d o n o t , 5 2 w h i c h e x p l a i n s t h e i r r e s p e c t i v e s e n s i t i v i t i e s a n d t o l e r a n c e s t o D M I s ( 4 3 ) . D M I U s e o n D o l l a r S p o t T h o s e D M I s l a b e l e d f o r u s e o n t u r f h a v e b e e n e f f e c t i v e i n s u p p r e s s i n g R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m , t h e c a u s a l p a t h o g e n o f d o l l a r s p o t . M o s t p r o d u c t l a b e l s r e c o m m e n d a p p l i c a t i o n i n t e r v a l s o f u p t o 2 8 d a y s . G o l f - c o u r s e s u p e r i n t e n d e n t s i n t h e U p p e r M i d w e s t r e p o r t e d r e d u c e d c o n t r o l o f d o l l a r s p o t i n t h e l a t e 1 9 9 0 5 w h e n u s i n g D M I s ( 3 8 , 8 9 ) . S h o r t e n e d l e n g t h s o f s u p p r e s s i o n w e r e o b s e r v e d a n d c o u l d o n l y b e r e s t o r e d b y i n c r e a s i n g a p p l i c a t i o n r a t e s . T h i s w a s c o n s i s t e n t w i t h D M I r e s i s t a n c e s h o w n w i t h o t h e r p l a n t d i s e a s e s ( 2 6 , 4 6 ) . G o l e m b i e w s k i e t a l . d o c u m e n t e d R . f l o c c o s u m c r o s s - r e s i s t a n c e t o t h e D M I s i n 1 9 9 5 ( 3 1 ) . D M I - S E N S I T I V E R . F L O C C O S U M S T U D Y C o m b i n i n g o r a l t e r n a t i n g d i f f e r e n t c l a s s e s o f f u n g i c i d e s h a s l o n g b e e n t o u t e d a s a m e a n s o f p r e v e n t i n g o r r e t a r d i n g t h e s h i f t t o w a r d a f u n g a l p o p u l a t i o n d o m i n a t e d b y t h o s e r e s i s t a n t t o a t l e a s t o n e o f t h e c l a s s e s h a v i n g b e e n a p p l i e d ( 7 7 , 7 8 ) . T u r f g r a s s p a t h o l o g i s t s h a v e o f t e n r e c o m m e n d e d e d t a n k - m i x i n g o r 5 3 a l t e r n a t i n g s y s t e m i c - a n d c o n t a c t - t y p e f u n g i c i d e s ( 1 6 , 2 2 , 9 0 ) . H o w e v e r , V a r g a s h a s c o n t e n d e d t h a t c o m b i n i n g o r a l t e r n a t i n g d i f f e r e n t S S - f u n g i c i d e c l a s s e s r e s u l t s i n m u l t i r e s i s t a n c e t o t h o s e c l a s s e s ; t h e r e f o r e , i t i s n o t a v i a b l e s t r a t e g y f o r d e l a y i n g R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e ( 8 4 , 8 6 , 8 7 , 8 8 ) . T h e o b j e c t i v e o f t h e e x p e r i m e n t p r e s e n t e d h e r e w a s t o d e t e r m i n e i f a D M I — s e n s i t i v e p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m c o u l d b e s h i f t e d t o a p r e d o m i n a n t l y D M I — r e s i s t a n t p o p u l a t i o n b y t h e d i r e c t i o n a l - s e l e c t i o n p r e s s u r e o f r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f a D M I f u n g i c i d e . A n o t h e r g o a l w a s t o d e t e r m i n e a n y d i f f e r e n c e s t h a t o c c u r r e d a m o n g a p p l i c a t i o n s m a d e s o l e l y w i t h a D M I , a D M I c o m b i n e d w i t h a f u n g i c i d e o f a d i f f e r e n t c l a s s , o r a D M I a l t e r n a t e d w i t h s u c h . A s u b s e q u e n t o b j e c t i v e w a s t o d e t e r m i n e t h e n u m b e r o f a p p l i c a t i o n s n e e d e d t o e f f e c t a n y s u c h s h i f t s . A g r o n o m i c P r a c t i c e s a n d S i t e A s s e s s m e n t T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d a t t h e H a n c o c k T u r f R e s e a r c h C e n t e r a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y ( M S U ) i n E a s t L a n s i n g , M i c h i g a n . T h e e x p e r i m e n t a l a r e a w a s p r i m a r i l y a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) w i t h s o m e c r e e p i n g b e n t g r a s s . T h e s o i l w a s a s i l t y c l a y l o a m . S u p p l e m e n t a l i r r i g a t i o n t o p r e v e n t v i s u a l w i l t w a s a p p l i e d i n e a r l y e v e n i n g e x c e p t 5 4 f o l l o w i n g s i g n i f i c a n t r a i n f a l l e v e n t s a f t e r w h i c h t h e s o i l w a s a l l o w e d t o d r y d o w n . T h e t u r f r e c e i v e d n i t r o g e n 2 a n n u a l l y v i a f i v e a p p l i c a t i o n s t o t a l i n g 1 9 t o 2 9 k g 1 0 0 m ' t o e i g h t f e r t i l i z e r a p p l i c a t i o n s . O t h e r p l a n t — a v a i l a b l e n u t r i e n t s w e r e a d e q u a t e a c c o r d i n g t o s o i l t e s t s c o n d u c t e d b y t h e M S U S o i l a n d P l a n t N u t r i e n t l a b . T h e t u r f w a s m o w e d a t a 1 3 - m m h e i g h t w i t h c l i p p i n g s c o l l e c t e d a n d r e m o v e d f r o m t h e s i t e . T h e m o w i n g f r e q u e n c y w a s t w o t o t h r e e t i m e s w e e k l y d u r i n g t h e g r o w i n g s e a s o n , a n d t h e d i r e c t i o n w a s p a r a l l e l t o t h e l o n g i t u d i n a l a x i s o f e a c h p l o t . T h e r e m o v a l o f a n y c l i p p i n g s t h a t r e m a i n e d w a s a t t e m p t e d u s i n g a l a w n s w e e p e r . T h e p l o t s w e r e a r r a n g e d i n a r a n d o m i z e d - c o m p l e t e - b l o c k d e s i g n w i t h f o u r b l o c k s . E a c h p l o t m e a s u r e d 2 . 1 m b y 8 . 4 m o r 1 7 . 6 m 2 ( S e e F i g u r e 2 . 1 ) . D o l l a r — s p o t i n c i d e n c e i n c r e a s e d i n l a t e J u l y 1 9 9 4 u n t i l t h e e n t i r e p l o t a r e a w a s s e v e r e l y d i s e a s e d . A 2 5 - m m — d i a m e t e r s o i l - p r o b e w a s u s e d t o c o l l e c t p l u g s t h a t i n c l u d e d d i s e a s e d t i s s u e f r o m t h e m i d d l e o f e a c h p l o t . T h i s a r e a m e a s u r e d 1 . 2 m b y 3 m ( 3 . 6 m 2 ) . T h e e n d - t o - e n d a n d s i d e - t o - s i d e d i s t a n c e s b e t w e e n t h e s a m p l i n g a r e a s i n a d j a c e n t p l o t s w e r e 4 . 2 m a n d 5 . 8 m r e s p e c t i v e l y . T e n o r m o r e s u b s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m e a c h p l o t . T h e s a m p l e s 5 5 w e r e t h e n s t o r e d i n a f r e e z e r u n t i l t h e y c o u l d b e a n a l y z e d i n t h e l a b . S a m p l e s w e r e r e m o v e d f r o m t h e f r e e z e r a s n e e d e d a n d a l l o w e d t o t h a w a t r o o m t e m p e r a t u r e . T h r e e d i s e a s e d l e a v e s f r o m e a c h s a m p l e w e r e t h e n p l a c e d o n p l a s t i c P e t r i p l a t e s c o n t a i n i n g a u t o c l a v e d p o t a t o - d e x t r o s e a g a r ( P D A ) ( D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t M I ) t h a t h a d b e e n c o o l e d t o 5 0 C b e f o r e b e i n g a m e n d e d w i t h 1 0 u g m 1 4 ' p e n i c i l l i n a n d p g 4 s t r e p t o m y c i n . M y c e l i a w e r e a l l o w e d t o g r o w f o r o n e m l w e e k a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 1 C ) . T h e p u r e c u l t u r e w a s r e - i s o l a t e d o n P D A a n d g r o w n f o r t h r e e d a y s . A 1 0 , 0 0 0 - p p m s t o c k - s o l u t i o n o f c o n c e n t r a t e d f u n g i c i d e w a s p r e p a r e d b y s u s p e n d i n g 1 g o f t h e D M I B a y l e t o n 2 5 ( 0 . 2 5 g t r i a d i m e f o n ) i n 2 5 m l o f w a t e r t h a t h a d b e e n p u r i f i e d v i a r e v e r s e o s m o s i s a n d t h e n a u t o c l a v e d . O n e 1 o f P D A w a s a u t o c l a v e d a n d a l l o w e d t o c o o l t o 5 0 C b e f o r e 0 . 2 m l o f t h o r o u g h l y — a g i t a t e d s t o c k - s o l u t i o n w a s s l o w l y s t i r r e d i n t o t h e m e d i a . T h e r e s u l t i n g c o n c e n t r a t i o n o f t r i a d i m e f o n w a s 2 u g m l i . P l a t e s w e r e f i l l e d w i t h 1 5 m l e a c h o f t h i s a m e n d e d - P D A m e d i a . S e v e n — m m — d i a m e t e r p l u g s o f e a c h i s o l a t e w e r e p l a c e d o n t w o d i f f e r e n t 8 8 — m m - d i a m e t e r p l a t e s w i t h o n e c o n t a i n i n g P D A a n d t h e o t h e r h a v i n g t h e t r i a d i m e f o n - a m e n d e d P D A . E a c h p l a t e c o n t a i n e d a s i n g l e p l u g . T h e c u l t u r e s w e r e 5 6 a l l o w e d t o g r o w a t r o o m t e m p e r a t u r e u n t i l t h e m y c e l i a h a d c o v e r e d t h e e n t i r e o r n e a r l y t h e e n t i r e s u r f a c e o f t h e u n a m e n d e d p l a t e ; t h i s u s u a l l y t o o k f o u r d a y s . T h e c o l o n y d i a m e t e r s w e r e m e a s u r e d i n t w o p e r p e n d i c u l a r d i r e c t i o n s u s i n g a m e t r i c r u l e r . T h e 7 - m m d i a m e t e r o f t h e p l u g w a s s u b t r a c t e d f r o m t h e s e v a l u e s . T h e e f f e c t i v e d i a m e t e r s o f t h e u n a m e n d e d c o l o n i e s r a n g e d f r o m 7 2 t o 8 1 m m . T h e a v e r a g e - c o l o n y d i a m e t e r w a s t h e n c a l c u l a t e d . T h e a v e r a g e - c o l o n y d i a m e t e r o n t h e a m e n d e d p l a t e w a s d i v i d e d b y t h e a v e r a g e d i a m e t e r o f t h e u n a m e n d e d c o l o n y . T h i s v a l u e w a s e x p r e s s e d a s a p e r c e n t a g e . T h e p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r a n i s o l a t e w a s z e r o i f n o m y c e l i a w e r e o b s e r v e d g r o w i n g f r o m t h e p l u g . T h e a v e r a g e o f t w o r e p l i c a t e s d e t e r m i n e d t h e a v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h i s o l a t e . T h e s e v a l u e s f o r e a c h i s o l a t e w e r e a v e r a g e d t o c a l c u l a t e t h e m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h p l o t . T r i a d i m e f o n c o m p l e t e l y i n h i b i t e d 2 1 1 o f t h e 5 6 0 i s o l a t e s t e s t e d f o r t h i s s u r v e y ( s e e T a b l e 2 . 2 ) . S l i g h t g r a d a t i o n s i n t h e d e g r e e s o f s e n s i t i v i t i e s w e r e f o u n d a m o n g t h e r e s t o f t h e i s o l a t e s . T h e g r e a t e s t a v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h m e a s u r e m e n t s w e r e 3 . 9 % w i t h o n e i s o l a t e a n d 3 . 8 % w i t h t w o . T h e s e t h r e e i s o l a t e s w e r e t h e 5 7 o n l y o n e s t o h a v e 3 . 0 % o r g r e a t e r a v e r a g e — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h . N o n e o f t h e i s o l a t e s w e r e n e a r l y a s i n s e n s i t i v e a s t h o s e r e p o r t e d b y G o l e m b i e s k i ( 3 0 ) n o r G i l s t r a p ( 2 8 ) o n i s o l a t e s c o l l e c t e d f r o m t u r f s i t e s d o m i n a t e d b y D M I — r e s i s t a n t R . f l o c c o s u m . A n a n a l y s i s o f v a r i a n c e ( A O V ) w a s p e r f o r m e d t h a t c o m p a r e d t h e p l o t s w h e r e t h e e n s u i n g t r e a t m e n t s ( s e e b e l o w ) w o u l d b e a p p l i e d . A P - v a l u e o f 0 . 5 9 5 w a s i n s u f f i c i e n t e v i d e n c e t o r e j e c t t h e n u l l — h y p o t h e s i s t h a t o b s e r v a t i o n s w e r e a r e s u l t p u r e l y o f c h a n c e . T h e r e f o r e , i t w a s c o n c l u d e d t h a t t h e e x p e r i m e n t a l s i t e a t t h e H T R C h a d a R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n s e n s i t i v e t o D M I f u n g i c i d e s . F u n g i c i d e T r e a t m e n t s T r e a t m e n t 1 w a s t h e c o n t r o l o r c h e c k t r e a t m e n t w i t h n o f u n g i c i d e s a p p l i e d t o i t . T h e r e m a i n i n g t r e a t m e n t s w e r e d i f f e r e n t f u n g i c i d e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s ( s e e T a b l e 2 . 3 ) . C h a n g e s i n t h e f o r m u l a t i o n s u s e d a n d t h e i r s u p p l i e r s c h a n g e d o v e r t h e c o u r s e o f t h e s t u d y . C h l o r o t h a l o n i l a p p l i e d a s D a c o n i l 2 7 8 7 4 . 1 7 F L w a s o b t a i n e d e a r l y o n f r o m I S K B i o t e c h C o . i n M e n t o r , O h i o , a n d l a t e r f r o m Z e n e c a A g P r o d u c t s i n W i l m i n g t o n , D e l a w a r e . I p r o d i o n e ( C h i p c o 2 6 0 1 9 2 F L ) w a s s u p p l i e d b y R h o n e - 5 8 P o u l e n c A g . C o . i n R e s e a r c h T r i a n g l e P a r k , N o r t h C a r o l i n a . T r i a d i m e f o n w a s p r o v i d e d a s B a y l e t o n . F e n a r i m o l ( R u b i g a n 1 A S ) w a s p r o v i d e d b y D o w E l a n c o o f I n d i a n a p o l i s , I n d i a n a . P r o p i c o n a z o l e w a s a p p l i e d f i r s t a s B a n n e r 1 . 1 E C ( C i b a C o . , G r e e n s b o r o , N o r t h C a r o l i n a ) a n d l a t e r a s B a n n e r M a x x 1 . 3 M E ( N o v a r t i s , G r e e n s b o r o , N o r t h C a r o l i n a ) . T r e a t m e n t 2 r e c e i v e d o n l y c h l o r o t h a l o n i l , a c o n t a c t o r m u l t i s i t e ( M S ) f u n g i c i d e . T r e a t m e n t 3 r e c e i v e d o n l y i p r o d i o n e , a S S f u n g i c i d e o f t h e d i c a r b o x i m i d e c l a s s . T r e a t m e n t s 4 , 5 , a n d 7 w e r e t r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , a n d p r o p i c o n a z o l e r e s p e c t i v e l y , a l l a t r a t e s a n d i n t e r v a l s t y p i c a l l y u s e d o n d o l l a r s p o t . T r e a t m e n t 6 w a s a t t h e s a m e p r o p i c o n a z o l e r a t e a s T r e a t m e n t 7 b u t a t 1 4 — d a y i n s t e a d o f 2 1 - d a y i n t e r v a l s . T r e a t m e n t 9 w a s p r o p i c o n a z o l e a t f o u r t i m e s t h e t y p i c a l d o l l a r - s p o t r a t e , w h i c h w a s t h e m a x i m u m s p e c i f i e d t o c o n t r o l e c t o t r o p h i c - r o o t d i s e a s e s ( s e e b e l o w ) . T r e a t m e n t s 1 0 a n d 1 1 w e r e i n t e n d e d t o t e s t t h e e f f e c t s o f a D M I - a n d a n M S - f u n g i c i d e i n c o m b i n a t i o n a n d a l t e r n a t i o n r e s p e c t i v e l y . T r e a t m e n t s l 2 a n d 1 3 w e r e t o t e s t t h e s a m e t h e o r y e x c e p t w i t h a D M I a n d a d i c a r b o x i m i d e . T r e a t m e n t 1 4 i n c o r p o r a t e d t h e u s e o f a D M I a p p l i e d a s a p r e v e n t a t i v e t o s u p p r e s s s u m m e r p a t c h c a u s e d b y M a g n a p o r t h e p o a e , L a n d s c h o o t & J a c k s o n a n d / o r t a k e - a l l 5 9 p a t c h c a u s e d b y G a e u m a n n o m y c e s g r a m i n i s ( S a c c . ) A r x & O l i v . v a r . a v e n a e ( E . M . T u r n e r ) D e n n i s . , w h i c h a r e b o t h e c t o t r o p h i c - r o o t d i s e a s e s f o u n d o n m a n y M i c h i g a n g o l f c o u r s e s . T h e f i r s t a p p l i c a t i o n o f p r o p i c o n a z o l e o c c u r r e d w h e n s o i l t e m p e r a t u r e s a t a 5 0 - m m d e p t h r e a c h e d 2 4 C f o r f i v e c o n s e c u t i v e d a y s . A s e c o n d a p p l i c a t i o n w a s t h e n m a d e 2 8 d a y s l a t e r . T h e s e a n n u a l a p p l i c a t i o n s o f p r o p i c o n a z o l e w e r e f o l l o w e d i n y e a r s 1 a n d 4 w i t h p r o p i c o n a z o l e o n l y , y e a r 2 w i t h c h l o r o t h a l o n i l o n l y , a n d y e a r 3 w i t h i p r o d i o n e o n l y . T h i s t r e a t m e n t s i m u l a t e d t h e “ Y e a r l y R o t a t i o n T h e o r y ” r e c o m m e n d e d b y V a r g a s a t t h e t i m e ( 8 5 ) . T r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d i n e a c h o f t h r e e - s e q u e n t i a l — g r o w i n g s e a s o n s . T r e a t m e n t s 1 , 2 , 3 , 4 , a n d 5 r e c e i v e d n o p r o p i c o n a z o l e . T h e t o t a l n u m b e r o f p r o p i c o n a z o l e a p p l i c a t i o n s w i t h t h e o t h e r t r e a t m e n t s f r o m 1 9 9 4 t h r o u g h 1 9 9 7 r a n g e d f r o m s i x ( t r e a t m e n t 1 3 ) t o 2 0 ( t r e a t m e n t s 6 a n d 1 0 ) a s s h o w n i n T a b l e 2 . 4 . T h e t o t a l a m o u n t o f p r o p i c o n a z o l e a p p l i e d t o t h e s e t r e a t m e n t s v a r i e d f r o m 2 5 . 2 g 1 0 0 m 2 ( t r e a t m e n t s 1 1 a n d 1 3 ) t o 2 3 5 . 2 g 1 0 0 m ' 2 ( t r e a t m e n t 9 ) , a g r e a t e r t h a n n i n e - f o l d i n c r e a s e ( s e e T a b l e 2 . 5 ) . 6 0 F u n g i c i d e - A p p l i c a t i o n T e c h n i q u e s T h e f u n g i c i d e s w e r e d i l u t e d w i t h w a t e r a n d a p p l i e d u n d e r C O i j r e s s u r e u s i n g a h a n d - p u s h e d , r o l l i n g b o o m - s p r a y e r . A l l p a s s e s a c r o s s t h e p l o t s w i t h t h e s p r a y e r w e r e m a d e w i t h a s p r a y - v o l u m e r a t e o f 4 . 1 l 1 0 0 m ” % T r e a t m e n t 8 w a s a t t w o t i m e s t h e p r o p i c o n a z o l e r a t e s o f T r e a t m e n t s 6 a n d 7 ; t h e r e f o r e , t w o p a s s e s w e r e m a d e a n d t h e r e s u l t i n g s p r a y v o l u m e a p p l i e d w a s e q u i v a l e n t t o 8 . 2 l 1 0 0 n f z . T h e f o u r p a s s e s n e e d e d t o a p p l y t h e 4 x p r o p i c o n a z o l e r a t e s c a l l e d f o r i n T r e a t m e n t s 9 a n d 1 4 r e s u l t e d i n a n e q u i v a l e n t s p r a y — v o l u m e r a t e o f 1 6 . 4 1 1 0 0 I n f . T h e s a m e a p p l i c a t i o n m e t h o d r e s u l t e d i n e q u i v a l e n t s p r a y - v o l u m e r a t e s o f 8 . 2 1 1 0 0 m " 2 w i t h t r e a t m e n t s 1 0 a n d 1 2 . F u n g i c i d e t r e a t m e n t s w e r e i n i t i a t e d i n e a r l y A u g u s t 1 9 9 4 a n d r e a p p l i e d a c c o r d i n g t o e x p e r i m e n t a l p r o t o c o l u n t i l e a r l y S e p t e m b e r . S a m p l e C o l l e c t i o n T h e c o l l e c t i n g a n d h a n d l i n g o f t h e s a m p l e s w e r e t h e s a m e a s t h a t d e s c r i b e d a b o v e . O n 1 4 O c t o b e r 1 9 9 4 , t e n i s o l a t e s w e r e t a k e n f r o m e a c h p l o t i f t e n i n f e c t i o n c e n t e r s w e r e p r e s e n t ; o t h e r w i s e , t h e n u m b e r o f i s o l a t e s w a s t h e s a m e a s t h e n u m b e r o f i n f e c t i o n c e n t e r s p r e s e n t . M o r e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d o n 1 4 J u l y 1 9 9 5 . T r e a t m e n t s 6 1 w e r e t h e n r e s u m e d u n t i l e a r l y S e p t e m b e r . D o l l a r - s p o t i n c i d e n c e i n c r e a s e d u n t i l a t l e a s t t e n d o l l a r s p o t s w e r e p r e s e n t i n e a c h p l o t . I s o l a t e s w e r e c o l l e c t e d i n t h e s a m e m a n n e r a s a b o v e o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 . D o l l a r - s p o t i n c i d e n c e h a d b e e n m i n i m a l d u e t o u n u s u a l l y c o o l w e a t h e r w h e n a r e d u c e d n u m b e r o f s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d o n 1 2 J u l y 1 9 9 6 . T r e a t m e n t s w e r e r e s u m e d o n t h e f o l l o w i n g d a y . M o r e f a v o r a b l e c o n d i t i o n s f o r d o l l a r - s p o t a c t i v i t y o c c u r r e d i n l a t e s u m m e r a n d e a r l y f a l l . T r e a t m e n t s c o n t i n u e d t h r o u g h m i d O c t o b e r i n a n a t t e m p t t o m a x i m i z e s e l e c t i o n p r e s s u r e . I s o l a t e s w e r e n e x t c o l l e c t e d o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 f o l l o w e d b y a r e s u m p t i o n o f t r e a t m e n t s t h a t c o n t i n u e d t h r o u g h m i d O c t o b e r . T h e n e x t a n d f i n a l s a m p l i n g o c c u r r e d o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 . I n V i t r o S e n s i t i v i t y A s s e s s m e n t s a n d S t a t i s t i c a l A n a l y s i s T e n i s o l a t e s o r f e w e r f r o m e a c h p l o t w i t h e a c h s a m p l i n g w e r e a s s a y e d f o r D M I r e s i s t a n c e a s d e s c r i b e d a b o v e . T e n 4 - m m p l u g s f r o m a n u n a m e n d e d p l a t e o f e a c h i s o l a t e w e r e s t o r e d i n i n d i v i d u a l 1 . 5 m i c r o f u g e t u b e s w i t h 1 m l o f m i n e r a l o i l . A n A O V t a b l e f o r e a c h o b s e r v a t i o n w a s c a l c u l a t e d u s i n g M i c r o s o f t O f f i c e E x c e l s o f t w a r e . 6 2 A c c u r a c y w a s c h e c k e d u s i n g t h e G L M f u n c t i o n o f S A S a n d m i n o r e r r o r s w e r e c o r r e c t e d o n t h e E x c e l s p r e a d s h e e t s S e n s i t i v i t y D i f f e r e n t i a t i o n U s i n g A F L P M a r k e r s A s t u d y w a s c o n d u c t e d i n 2 0 0 2 w i t h D r s . K u r t L a m o u r , B r a n d o n H o r v a t h , M a r y H a u s b e c k a n d J o s e p h V a r g a s , J r . u s i n g t h e r e s o u r c e s o f t h e H a u s b e c k l a b a t M S U . T h e o b j e c t o f t h i s c o l l a b o r a t i o n w a s t o d e t e r m i n e i f A F L P m a r k e r s c o u l d b e u s e d e f f e c t i v e l y t o d i f f e r e n t i a t e D M I - s e n s i t i v e a n d D M I — r e s i s t a n t i s o l a t e s o f R . f l o c c o s u m . S i x i s o l a t e s a l r e a d y d e t e r m i n e d t o b e D M I s e n s i t i v e a n d t e n i s o l a t e s k n o w n t o b e D M I r e s i s t a n t i n a n o t h e r s t u d y ( s e e C h a p t e r 3 ) w e r e a n a l y z e d u s i n g a c o m m o n l y u s e d D N A - e x t r a c t i o n a n d A F L P - f i n g e r p r i n t i n g m e t h o d o l o g y d e s c r i b e d f u l l y b y L a m o u r ( 4 9 ) . A n A F L P fl ‘ N u c r o b i a l F i n g e r p r i n t i n g K i t ( P e r k i n — E l m e r C o r p . , F o s t e r C i t y , C a l i f o r n i a ) s u p p l i e d t h e P C R - c o r e m i x , c o r e - p r i m e r s e q u e n c e s , a d a p t o r s e q u e n c e s , a n d f l o r e s c e n c e . A n M J R e s e a r c h M i n i c y c l e r ( M J R e s e a r c h I n c . , W a l t h a m , M a s s . ) w a s u s e d t o p e r f o r m a l l P C R r e a c t i o n s . T h e s e l e c t i v e p r i m e r s E c o R I - A A , - A C , - A G , a n d - A T , w e r e u s e d i n a l l 1 6 c o m b i n a t i o n s w i t h M s e l - C A , - C C , - C G , a n d - C T s e l e c t i v e p r i m e r s t o p e r f o r m t h e P C R a m p l i f i c a t i o n s . T h i s s t u d y w a s o f a l a r g e r i n v e s t i g a t i o n , a n d f u r t h e r 6 3 i n f o r m a t i o n i n c l u d i n g a d e s c r i p t i o n o f t h e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s u s e d t o i n t e r p r e t t h e d a t a h a s b e e n p r o v i d e d b y H o r v a t h ( 3 6 ) . R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n T h e m e a n — p e r c e n t — r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s f o r e a c h b l o c k a n d t r e a t m e n t a t e a c h o b s e r v a t i o n a r e s h o w n i n T a b l e s 2 . 6 — 2 . 1 1 . T h e e f f e c t i v e d i a m e t e r s o f t h e u n a m e n d e d c o l o n i e s r a n g e d f r o m 7 0 t o 8 1 m m . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r a n y i s o l a t e d i d n o t e x c e e d 1 0 % u n t i l 1 A u g u s t 1 9 9 7 w h e n t w o i s o l a t e s e a c h m e a s u r e d 1 0 . 6 % i n t h e f o u r t h b l o c k o f T r e a t m e n t s 4 a n d 1 0 . I s o l a t e s i n T r e a t m e n t s 2 a n d 4 o f b l o c k 4 m e a s u r e d 1 4 . 7 a n d 2 7 . 5 a v e r a g e — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h r e s p e c t i v e l y o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 . A n A O V s h o w e d s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g t r e a t m e n t s o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 ( P S 0 . 0 3 9 ) , 1 A u g u s t 1 9 9 7 ( P S 0 . 0 6 8 ) , a n d 2 1 O c t o b e r 1 9 9 8 ( P S 0 . 0 2 9 ) . T h e r e l a t i v e r a n k i n g o f t r e a t m e n t s o n t h o s e d a t e s i s s h o w n o n T a b l e s 2 . 1 2 — 1 4 . N o n e o f t h e b l o c k o r t r e a t m e n t m e a n s a p p r o a c h e d t h o s e t h a t h a v e b e e n f o u n d e a r l i e r w i t h D M I - r e s i s t a n t p o p u l a t i o n s o f R . f l o c c o s u m ( 2 8 , 3 1 ) . T h e r e f o r e , t h e r e s u l t s a r e b e s t p r e s e n t e d a n d d i s c u s s e d i n t e r m s o f r e l a t i v e s e n s i t i v i t i e s . S e v e r a l t e r m s w i l l b e u s e d a s 6 4 d e f i n e d b e l o w . M e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h i s t r u n c a t e d t o ‘ r e l a t i v e g r o w t h ’ . T h e t e r m ‘ g r o u p ’ d e n o t e s a c l u s t e r o f t r e a t m e n t s s e p a r a t e d b y v a l u e s l e s s t h a n t h e L S D . T h e w o r d ‘ h i g h e r ’ s i g n i f i e s g r e a t e r R . f l o c c o s u m s e n s i t i v i t y t o D M I s a n d ‘ l o w e r ’ i n d i c a t e s l e s s e r s u c h s e n s i t i v i t y w h e n c o m p a r i n g t w o t r e a t m e n t s , t w o g r o u p s , o r a t r e a t m e n t a n d a g r o u p . T h e w o r d s ‘ h i g h e s t ’ a n d ‘ l o w e s t ’ d e s i g n a t e s i m i l a r r e l a t i o n s h i p s e x c e p t t h a t t h e c o m p a r i s o n s i n v o l v e t h r e e o r m o r e g r o u p s , t r e a t m e n t s , o r a n y c o m b i n a t i o n s t h e r e o f . T h e u s e o f ‘ t o p ’ o r ‘ b o t t o m ’ r e f e r s t o t h e r e l a t i v e r a n k i n g o f a n y o f t h e a b o v e . ‘ D o l l a r - s p o t r a t e ' m e a n s t h e r a t e o r a r a t e i n d i c a t e d o n t h e r e s p e c t i v e — f u n g i c i d e - p r o d u c t ’ s l a b e l f o r d o l l a r s p o t . T h e w o r d s ‘ o b s e r v a t i o n ’ a n d ‘ d a t e ’ r e f e r t o t h o s e t i m e p o i n t s h a v i n g s i g n i f i c a n c e . C o m p a r i s o n s o n t h e f i r s t a n d t h i r d d a t e s w e r e m a d e u s i n g a n L S D v a l u e a t P S 0 . 0 5 . C o m p a r i s o n s a t t h e s e c o n d o b s e r v a t i o n w e r e m a d e u s i n g a n L S D v a l u e a t P S 0 . 1 0 . T r e a t m e n t 4 w i t h t r i a d i m e f o n o n l y a n d T r e a t m e n t 7 w i t h p r o p i c o n a z o l e o n l y ( s e e T a b l e 2 . 3 ) w e r e i n t h e l o w e s t g r o u p o n t h e f i r s t t w o d a t e s . B o t h o f t h e s e t r e a t m e n t s w e r e a t d o l l a r — s p o t r a t e s a p p l i e d e v e r y 2 1 d a y s . T r e a t m e n t 4 w a s a m o n g t h e s e c o n d h i g h e s t g r o u p o n t h e l a s t d a t e . T r e a t m e n t 6 ( p r o p i c o n a z o l e a t t h e d o l l a r - s p o t r a t e e v e r y 2 1 d a y s ) h a d l o w e r r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s t h a n 6 5 T r e a t m e n t s 4 a n d 7 b u t t h e d i f f e r e n c e s w e r e n o t s i g n i f i c a n t . T r e a t m e n t 5 , ( f e n a r i m o l a t t h e d o l l a r — s p o t r a t e e v e r y 2 1 d a y s ) w a s t h e h i g h e s t r a n k i n g m e m b e r o f t h e l o w e s t g r o u p o n t h e f i r s t o b s e r v a t i o n a n d o f t h e s e c o n d - l o w e s t g r o u p o n t h e s e c o n d d a t e . P r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s a t h i g h e r r a t e s e v e r y 2 1 d a y s ( T r e a t m e n t s 8 a n d 9 ) w e r e r a n k e d b e l o w a l l o f t h e a b o v e t r e a t m e n t s o n a l l d a t e s b u t n o t d i f f e r e n t t h a n t h e m . T h e s e t r e n d s l e n d c r e d e n c e t o t h e p r i n c i p l e t h a t a s D M I r e s i s t a n c e i n c r e a s e s i n a p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m , h i g h e r r a t e s a n d / o r s h o r t e r i n t e r v a l s o f a D M I f u n g i c i d e a r e n e e d e d t o a c h i e v e t h e s a m e r e s u l t s s e e n e a r l i e r w i t h t h e s a m e f u n g i c i d e w h e n t h e p o p u l a t i o n w a s D M I s e n s i t i v e . T r e a t m e n t 1 0 ( p r o p i c o n a z o l e a t t h e s a m e r a t e a s T r e a t m e n t s 6 a n d 7 p l u s c h l o r o t h a l o n i l o n 1 4 - d a y i n t e r v a l s ) w a s r a n k e d i n t h e s e c o n d - l o w e s t g r o u p a n d a m o n g t h e t o p g r o u p o n t h e f i r s t d a t e . T r e a t m e n t 1 0 h a d t h e h i g h e s t r a n k i n g a t t h e s e c o n d a n d t h i r d o b s e r v a t i o n s . T h e s e m e a s u r e m e n t s i n c r e a s e d a l m o s t 5 0 % b e t w e e n t h e f i r s t a n d s e c o n d d a t e a n d 3 5 % b e t w e e n t h e s e c o n d a n d t h i r d d a t e s r e p r e s e n t i n g a t w o — f o l d d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e f i r s t a n d t h i r d d a t e s ( s e e F i g u r e 2 . 2 ) . C h l o r o t h a l o n i l a l o n e e v e r y 1 4 d a y s ( T r e a t m e n t 2 ) w a s a m o n g t h e t r e a t m e n t s i n t h e h i g h e r g r o u p a s w e l l a s t h e 6 6 l o w e r g r o u p o n t h e f i r s t d a t e s . I t w a s i n t h e h i g h e r g r o u p a n d n o t d i f f e r e n t t h a n T r e a t m e n t s 4 , 7 , a n d 1 0 o n t h e s e c o n d d a t e . I t w a s i n t h e h i g h e s t g r o u p a n d n o t d i f f e r e n t t h a n T r e a t m e n t 1 0 a t t h e l a s t o b s e r v a t i o n w h e r e i t w a s a l s o a t t h e t o p o f t h e s e c o n d h i g h e s t g r o u p o n t h e l a s t o b s e r v a t i o n a n d n o t d i f f e r e n t t h a n T r e a t m e n t s 4 , 5 , 6 , 7 , 1 1 , a n d 1 4 . I n c r e a s e d R . f l o c c o s u m s e n s i t i v i t i e s t o t h e D M I s o v e r t i m e i n t r e a t m e n t s t h a t u t i l i z e d c h l o r o t h a l o n i l h a v e b e e n n o t e d i n e a r l i e r s m a l l — p l o t s t u d i e s b y G o l e m b i e s k i e t a 1 . ( 3 1 ) a n d G i l s t r a p e t a 1 . ( 2 8 ) . B o t h p h e n o m e n a w e r e e x p l a i n e d b y t h e p o s s i b l e o c c u r r e n c e o f m i g r a t i o n e v e n t s o f r e s i s t a n t f u n g i f r o m a d j a c e n t o r n e a r b y D M I - t r e a t m e n t p l o t s . H o w e v e r , c h a n c e s o f s u c h i n f l u x w e r e l e s s e n e d h e r e b e c a u s e t h i s l a r g e - p l o t e x p e r i m e n t w a s d e s i g n e d t o m i n i m i z e p l o t - t o - p l o t m o v e m e n t o f d i s e a s e d c l i p p i n g s ( s e e F i g u r e 2 . 1 ) . I s o l a t e s w i t h d e c r e a s e d D M I s e n s i t i v i t i e s w e r e d e t e c t e d i n B l o c k 4 o f T r e a t m e n t 2 , t h e c h l o r o t h a l o n i l o n l y t r e a t m e n t , o n 1 A u g u s t 9 7 ( s e e T a b l e 2 . 1 0 ) . I s o l a t e s t a k e n t h e n e x t y e a r h a d s i m i l a r l e v e l s o f r e s i s t a n c e e x c e p t f o r o n e t h a t h a d a n a v e r a g e - p e r c e n t - r a d i a l - g r o w t h v a l u e o f 1 4 . 7 , w h i c h w a s n e x t t o g r e a t e s t v a l u e d e t e c t e d a t t h a t o b s e r v a t i o n o r i n t h e e x p e r i m e n t , o v e r a l l . T h i s 6 7 i s o l a t e c o u l d h a v e b e e n t h e r e s u l t o f a m u t a t i o n t h a t h a d o c c u r r e d o r i t c o u l d h a v e b e e n a m i g r a n t , w h i c h w a s u n l i k e l y ( s e e a b o v e ) . A s n o t e d , o t h e r i s o l a t e s w i t h d e c r e a s e d D M I s e n s i t i v i t i e s w e r e d e t e c t e d . T h i s l e a d s t o s p e c u l a t i o n t h a t t h i s s u b p o p u l a t i o n u n d e r w e n t p h y s i o l o g i c a l c h a n g e s d u r i n g t h i s e x p e r i m e n t . O n e s u c h h y p o t h e s i s i s t h a t r e p e a t e d e x p o s u r e s t o t h e M S - f u n g i c i d e c h l o r o t h a l o n i l c a n e n h a n c e R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o D M I s a n d p e r h a p s o t h e r S S — f u n g i c i d e c l a s s e s . P u j l s a n d S h a w m a d e s i n g l e a p p l i c a t i o n s o f t h e D M I f l u t r i a f o l a n d c h l o r o t h a l o n i l e a c h a l o n e a n d i n c o m b i n a t i o n o r i n a l t e r n a t i o n t o t h r e e s u c c e s s i v e p l a n t i n g s o f w h e a t e a c h h a v i n g a D M I - s e n s i t i v e p o p u l a t i o n o f S e p t o r i a t r i t i c i R o b . e x D e s m . , t h e c a u s a l o r g a n i s m o r w h e a t b l o t c h . I n v i t r o d i f f e r e n c e s i n D M I t o l e r a n c e s w e r e n o t f o u n d t o b e s i g n i f i c a n t . H o w e v e r , a f u l l r a t e o f f l u t r i a f o l c o m b i n e d w i t h a f u l l r a t e o f c h l o r o t h a l o n i l s h o w e d t h e g r e a t e s t s h i f t s t o w a r d s l e s s s e n s i t i v e i s o l a t e s ( 6 2 ) . K o l l e r a n d W i l c o x r e p o r t e d i n c r e a s e d r e s i s t a n c e t o b o t h t h e D M I s a n d b e n z i m i d a z o l e s i n v e n t u r i a i n a e q u a l i s ( C o o k ) G . p o p u l a t i o n s a l r e a d y r e s i s t a n t t o d o d i n e , a l s o a n M S f u n g i c i d e ( 2 5 ) , a s c o m p a r e d t o t h o s e d o d i n e s e n s i t i v e ( 4 7 ) . T h e g r e a t e s t a n d m o s t s i g n i f i c a n t i n c r e a s e s t o b o t h 6 8 t h e D M I s a n d b e n z i m a d a z o l e s o c c u r r e d w i t h t h o s e i s o l a t e s t h a t w e r e a l r e a d y m u l t i r e s i s t a n t t o b o t h c l a s s e s p r i o r t o f u r t h e r e x p o s u r e s . D o d i n e w a s o n e o f t h e f i r s t M S f u n g i c i d e s t o w h i c h f i e l d r e s i s t a n c e d e v e l o p e d ( 8 2 ) . A n i l a z i n e i s a l s o a n M S f u n g i c i d e , a n d r e s i s t a n c e t o i t b y R . f l o c c o s u m w a s r e p o r t e d b y N i c h o l s o n e t a l . i n 1 9 7 1 ( 6 0 ) . R e d u c e d s e n s i t i v i t y o f C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s ( P e n z . ) P e n z . & S a c c . t o t h e M S f u n g i c i d e c h l o r o t h a l o n i l h a s b e e n s h o w n i n v i t r o ( 4 8 ) . K O l l e r a n d W i l c o x s p e c u l a t e d t h a t a m e m b r a n e - t r a n s p o r t s y s t e m e n a b l e d t h e a c t i v e o u t f l u x o f u n r e l a t e d f u n g i c i d e s a n d c o u l d h a v e b e e n r e s p o n s i b l e f o r t h e i r f i n d i n g s ( 4 7 ) . S u c h p h y s i o l o g y h a s b e e n s u g g e s t e d a s a p o s s i b l e m e c h a n i s m t h a t c o u l d f a c i l i t a t e s u c h m u l t i r e s i s t a n c e ( 1 7 , 1 9 ) . M u l t i d r u g r e s i s t a n c e ( M D R ) h a s b e e n l i n k e d t o a n i n c r e a s e d e x p r e s s i o n o f t r a n s p o r t e r g e n e s t h a t p r o d u c e t r a n s p o r t e r p r o t e i n s b e l o n g i n g t o t h e u b i q u i t o u s s u p e r f a m i l y o f A T P - b i n d i n g c a s s e t t e ( A B C ) t r a n s p o r t e r s ( 2 ) , w h i c h i s o n e o f t h e l a r g e s t k n o w n p r o t e i n c l a s s e s ( 5 1 ) . T h e s e p r o t e i n s u s e e n e r g y p r o d u c e d v i a A T P h y d r o l y s i s t o t r a f f i c m o l e c u l e s a c r o s s b i o l o g i c a l m e m b r a n e s ( 8 1 ) . S i n g l e p r o t e i n s c a n f a c i l i t a t e a d i v e r s i t y o f s u b s t r a t e s 6 9 ( 8 3 ) . T h e y a r e k n o w n t o c o n f e r M D R t o a n t i - t u m o r d r u g s ( 3 7 ) a n d a r e a m a j o r c o n c e r n f o r c a n c e r t h e r a p y ( 7 0 ) . A n o v e r - e x p r e s s i o n o f s o m e o f t h e s e t r a n s p o r t e r s h a s b e e n l i n k e d t o M D R i n l a b o r a t o r y - i n d u c e d m u t a n t s o f f i l a m e n t o u s f u n g i ( 2 , 8 0 ) . T h e s e p h e n o m e n a h a v e a l s o b e e n d o c u m e n t e d w i t h f i e l d i s o l a t e s o f B o t r y t i s c e n e r e a ( 5 0 ) a n d M y c o s p h a e r e l l a g r a m i n i c o l a ( 8 1 ) . I t i s c o n c e i v a b l e t h a t A B C t r a n s p o r t e r s i n R . f l o c c o s u m c o n t r i b u t e d t o t h e p a t h o g e n ’ s i n c r e a s e d - D M I s e n s i t i v i t y s h o w n w i t h T r e a t m e n t 2 a n d T r e a t m e n t 1 0 , b o t h o f w h i c h i n v o l v e d s e q u e n t i a l a p p l i c a t i o n s t o c h l o r o t h a l o n i l , c o m p a r e d t o o t h e r t r e a t m e n t s a s d e s c r i b e d a b o v e . T r e a t m e n t 1 1 t h a t a l t e r n a t e d p r o p i c o n a z o l e a n d c h l o r o t h a l o n i l w a s a m o n g t h e l o w e s t g r o u p s a t a l l t h r e e o b s e r v a t i o n s . T h i s w a s m o s t l i k e l y b e c a u s e o f t h e f e w e r n u m b e r o f e x p o s u r e s a s w e l l a s t h e o v e r a l l l o w e r a m o u n t o f t h e D M I a p p l i e d c o m p a r e d t o t h e o t h e r p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s , a n d p e r h a p s t h e o t h e r c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s a s w e l l ( s e e T a b l e s 2 . 4 a n d 2 . 5 ) . T h e s e r e s u l t s s u p p o r t t h e a l t e r n a t i o n o f D M I s w i t h c h l o r o t h a l o n i l a s a n e f f e c t i v e s t r a t e g y t o d e l a y D M I r e s i s t a n c e . T h e t r e a t m e n t s u s i n g i p r o d i o n e ( T r e a t m e n t s 3 , 1 2 , a n d 1 3 ) a l s o r a n k e d s i m i l a r l y a t t h e b o t t o m . I m p l e m e n t i n g o n e 7 0 o r m o r e o f t h e s e f o u r t r e a t m e n t s i n t o a d o l l a r - s p o t m a n a g e m e n t p r o g r a m a p p e a r s t o h a v e m e r i t . H o w e v e r , q u e s t i o n s c o n c e r n i n g R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o i p r o d i o n e a n d w h e t h e r o r n o t i t o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t a r e v a l i d . T h a t i s s u e w a s b e y o n d t h e s c o p e o f t h i s e x p e r i m e n t , b u t i t c o u l d b e i n v e s t i g a t e d a s l o n g a s t h e i s o l a t e s f r o m t h o s e i p r o d i o n e p l o t s c o u l d b e g r o w n a g a i n f r o m s t o r e d s a m p l e s . T h e t r e a t m e n t e f f e c t s w i t h t h e y e a r l y - r o t a t i o n t h e o r y a r e d i f f i c u l t t o i n t e r p r e t i n r e l a t i o n t o t h e o t h e r t r e a t m e n t s s i n c e i t w a s t h e o n l y o n e h a v i n g t w o D M I a p p l i c a t i o n s a n n u a l l y p r i o r t o t h e a d v e n t o f d o l l a r - s p o t t r e a t m e n t s . T h e f a c t t h a t i t w a s a m o n g t h e s e c o n d a n d t h i r d g r o u p s o n t h e s e c o n d a n d t h i r d o b s e r v a t i o n s i s r e a s o n t o c o n s i d e r i t s u t i l i t y . A n a t t r i b u t e i s t h a t i t a l l o w s t h r e e - y e a r i n t e r v a l s b e t w e e n i p r o d i o n e t r e a t m e n t s . T h i s r e s p i t e c o u l d a l l o w t i m e d u r i n g w h i c h d i c a r b o x i m i d e - s e n s i t i v e c o u l d r e g a i n d o m i n a n c e a s t h e d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t i s o l a t e s f a i l t o s u r v i v e d u e t o t h e i r p o o r e n v i r o n m e n t a l f i t n e s s ( 3 2 , 5 2 ) . H o w t h e r e s u l t s w o u l d h a v e c h a n g e d h a d t h e o t h e r t r e a t m e n t s i n c l u d e d e a r l y D M I a p p l i c a t i o n s w e r e n o t a n s w e r e d d u e t o a r e a a n d r e s o u r c e l i m i t a t i o n s o f t h i s e x p e r i m e n t . 7 1 p r e s e n t e d h e r e a r e e v i d e n c e t h a t r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f T h e f e w e r n u m b e r s o f i s o l a t e s c o l l e c t e d i n T r e a t m e n t 1 0 i n t h e t h i r d a n d f o u r t h b l o c k s a t t h e l a s t o b s e r v a t i o n w e r e a r e s u l t o f f e w e r d o l l a r s p o t s b e i n g p r e s e n t a t t h e t i m e w h e n a f u l l c o n t i n g e n t o f i s o l a t e s w e r e c o l l e c t e d f r o m 4 6 o f t h e 5 4 p l o t s . T h i s s u g g e s t s t h a t t h e r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f p r o p i c o n a z o l e i n c o m b i n a t i o n w i t h c h l o r o t h a l o n i l e l i m i n a t e d s e n s i t i v e s t r a i n s . T h i s w o u l d r e d u c e t h e c o m p e t i t i o n i n t h e i n f e c t i o n c o u r t s o t h a t a r e s i s t a n t s t r a i n c o u l d b e g i n t o f l o u r i s h . T h i s p r o c e s s a p p e a r s t o h a v e s t a r t e d i n B l o c k 4 a n d t o a l e s s e r d e g r e e i n b l o c k B i n T r e a t m e n t 1 0 . T h i s r e a s o n i n g s u g g e s t s t h a t a s h i f t c o u l d h a v e b e g u n i n T r e a t m e n t 1 2 s i n c e o n l y f o u r i s o l a t e s w e r e c o l l e c t e d i n e a c h o f i t s b l o c k s a s w e l l a s i n b l o c k 2 o f T r e a t m e n t 6 . B u r p e e c h a l l e n g e d t w o p r o p i c o n a z o l e - s e n s i t i v e s t r a i n s t o s e r i e s o f 1 0 i n - v i t r o e x p o s u r e s t o p r o p i c o n a z o l e c o n c e n t r a t i o n s o f 0 . 2 u g m l ’ 1 a n d 0 . 3 u g m l " 1 a n d o b s e r v e d o n l y s l i g h t b u t s i g n i f i c a n t ( P S 0 . 0 5 ) d e c r e a s e s i n s e n s i t i v i t i e s t h a t d i d n o t a p p r o a c h n e a r l y t h e l a c k o f s e n s i t i v i t y d e m o n s t r a t e d b y a n i s o l a t e k n o w n t o b e D M I r e s i s t a n t ( 1 5 ) . D e W a a r d a n d V a n N i s t e l r o o y a l s o s h o w e d i n v i t r o l o s s o f s e n s i t i v i t y w i t h P e n i c i l l i u m i t a l i c u m W e h m e r . t o D M I s u s i n g s i m i l a r m e t h o d o l o g y ( 1 8 ) . R e s u l t s 7 2 D M I s t o f i e l d p o p u l a t i o n s o f R . f l o c c o s u m m a y c a u s e s i m i l a r d e c r e a s e s i n D M I s e n s i t i v i t y i n p l a n t a . T h e r e d u c e d D M I s e n s i t i v i t y w i t h T r e a t m e n t 1 0 o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 ( s e e T a b l e 2 . 1 3 ) o c c u r r e d a f t e r 1 4 a p p l i c a t i o n s o f a D M I ( s e e T a b l e 2 . 4 ) . T h e f u r t h e r r e d u c t i o n o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 f o l l o w e d s i x m o r e D M I a p p l i c a t i o n s . T h i s e v i d e n c e s u p p o r t s V a r g a s ’ e s t i m a t e t h a t b e t w e e n 2 0 a n d 3 0 a p p l i c a t i o n s o f a D M I c a n b e m a d e b e f o r e r e s i s t a n t i s o l a t e s b e g i n t o e m e r g e ( 8 6 , 8 7 ) . O p p o r t u n i t i e s t o e x t e n d t h i s r a n g e m a y e x i s t b y l i m i t i n g t h e l o n g — d i s t a n c e , i n w a r d m i g r a t i o n o f l e a f t i s s u e , s o m e o f w h i c h c o u l d i n f l u x D M I - r e s i s t a n t i s o l a t e s o f R . f l o c c o s u m . T h i s m a y b e p a r t i c u l a r l y t r u e f o r n e w g o l f c o u r s e s w h e r e t h e t u r f w a s e s t a b l i s h e d s o l e l y f r o m s e e d . G r e a t e r a t t e n t i o n t o w a r d t h e s a n i t a t i o n o f g o l f c l u b s , g o l f s h o e s , a n d t u r f — m a i n t e n a n c e e q u i p m e n t t h a t c o m e s f r o m o t h e r g o l f c o u r s e s m a y b e s t r a t e g i c a l l y b e n e f i c i a l . T h e g o a l s o f t h i s s t u d y c o u l d p r o b a b l y h a v e b e e n a d d r e s s e d m o r e e f f i c i e n t l y i f e a c h p l o t ' s s a m p l i n g a r e a h a d b e e n i n o c u l a t e d i n i t i a l l y a n d e q u a l l y w i t h a D M I - r e s i s t a n t s t r a i n . A s u i t a b l e a m o u n t o f i n o c u l u m w o u l d h a v e b e e n t h a t n e e d e d t o b e d e t e c t e d i n a p p r o x i m a t e l y 2 0 % o f t h e b a s e l i n e s a m p l e s . A l s o , t h e u s e o f a s i n g l e D M I a t i t s r e s p e c t i v e d o l l a r - s p o t r a t e w o u l d h a v e r e d u c e d t h e 7 3 t o t a l n u m b e r o f t r e a t m e n t s . A n e x a m p l e o f s u c h a t r e a t m e n t r e g i m e i s s h o w n i n T a b l e 2 . 1 6 . T h e A F L P a n a l y s i s w a s i n c o n c l u s i v e . T h e m a r k e r s u s e d w e r e l i n k e d t o r a n d o m b a s e p a i r s a n d d i d n o t p r o v i d e a d e q u a t e r e s o l u t i o n . I d e n t i f i c a t i o n o f a D N A s e q u e n c e o r s e q u e n c e s t h a t c o u l d b e u s e d t o d i f f e r e n t i a t e D M I - r e s i s t a n t a n d D M I - s e n s i t i v e R . f l o c c o s u m w o u l d h a v e b e e n a s e r e n d i p i t o u s d i s c o v e r y . H o w e v e r , i t m i g h t b e a t t a i n e d u s i n g a d d i t i o n a l s e t s o f m a r k e r s d i f f e r e n t t h a n t h o s e u s e d h e r e . C o m p a r i s o n s o f r a d i a l g r o w t h o n P D A o n l y a n d P D A a m e n d e d w i t h f u n g i c i d e s c o n t i n u e t o b e t h e m o s t e f f i c i e n t a n d d i s c r i m i n a t e m e t h o d f o r a s s e s s i n g t h e r e l a t i v e - f u n g i c i d e s e n s i t i v i t i e s o f R . f l o c c o s u m s t r a i n s . T h e e x p e r i m e n t a l o b j e c t i v e o f d e t e r m i n i n g i f a D M I - s e n s i t i v e p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m c o u l d b e s h i f t e d t o a p r e d o m i n a n t l y D M I - r e s i s t a n t p o p u l a t i o n b y t h e d i r e c t i o n a l - s e l e c t i o n p r e s s u r e o f r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f a D M I f u n g i c i d e w a s n o t a c h i e v e d . H o w e v e r , a p o p u l a t i o n w i t h r e d u c e d s e n s i t i v i t y w a s d e t e c t e d f o l l o w i n g r e p e a t e d a p p l i c a t i o n s o f p r o p i c o n a z o l e w h e n c o m b i n e d w i t h c h l o r o t h a l o n i l ( T r e a t m e n t 1 0 ) . T h i s o c c u r r e d a f t e r 2 0 a p p l i c a t i o n s o f a D M I . D e t e r m i n i n g t h i s n u m b e r o f a p p l i c a t i o n s w a s a n a i m o f t h i s s t u d y . 7 4 R e d u c e d D M I s e n s i t i v i t y w i t h t h e R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n t h a t o c c u r r e d w i t h T r e a t m e n t 1 0 w a s g r e a t e r t h a n t h a t d e t e c t e d w h e n p r o p i c o n a z o l e w a s a l t e r n a t e d w i t h c h l o r o t h a l o n i l ( T r e a t m e n t 1 1 ) . T h i s f i n d i n g a d d r e s s e d o n e o f t h e q u e s t i o n s c o n c e r n i n g t h e e f f e c t s o f a D M I c o m b i n e d w i t h a f u n g i c i d e o f a d i f f e r e n t c l a s s , o r a D M I a l t e r n a t e d w i t h s u c h . T h e R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n s a s s o c i a t e d w i t h s e v e r a l o f t h e o t h e r D M I t r e a t m e n t s a p p e a r e d t o b e o n t h e v e r g e o f s h i f t i n g t o w a r d r e d u c e d D M I s e n s i t i v i t i e s w h e n t h e e x p e r i m e n t w a s t e r m i n a t e d . T h e r e l a t i v e l a c k o f d o l l a r - s p o t i n c i d e n c e i n s o m e o f t h o s e t r e a t m e n t s i n d i c a t e d t h a t t h e c o m m o n s t r a i n s o f R . f l o c c o s u m w e r e b e i n g e l i m i n a t e d d u e t o r e p e a t e d e x p o s u r e s t o a D M I f u n g i c i d e . I t i s s u s p e c t e d t h a t s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n s i n t h e D M I s e n s i t i v i t i e s o f t h e s e p o p u l a t i o n s w o u l d h a v e o c c u r r e d h a d t h e e x p e r i m e n t b e e n e x t e n d e d f o r s e v e r a l m o r e y e a r s . 7 5 T a b l e 2 . 1 . C o m m o n n a m e s , c h e m i c a l n a m e s , t r a d e n a m e s , a n d c u r r e n t r e g i s t r a n t s o f d e m e t h y l a t i o n - i n h i b i t o r f u n g i c i d e s l a b e l e d f o r u s e o n c o m m e r c i a l t u r f i n t h e U . S . C o m m o n N a m e C h e m i c a l N a m e T r a d e N a m e R e g i - s t r a n t t r i a d i m e f o n 1 - ( 4 — c h l o r o — B a y l e t o n 5 0 B a y e r l p h e n o x y ) - 3 , 3 - d i m e t h y l ) - 1 — ( 1 H - G r a n u l a r T u r f L e s c o 2 1 , 2 , 4 - t r i a z o l - 1 - F u n g i c i d e y l ) - 2 — b u t a n o n e F u n g i c i d e V I I A n d e r s o n s : 1 % B a y l e t o n A c c o s t V e r d i c o n 4 f e n a r i m o l d - ( 2 - R u b i g a n A . S . G o w a n 5 c h l o r o p h e n y l ) - a - ( 4 - c h l o r o — T w o s o m e L e s c o p h e n y l ) - 5 - p y r i m i - d i n e — m e t h a n o l ) p r o p i c o n a z o l e 1 - [ [ 2 ( 2 , 4 - d i c h l o — B a n n e r G L S y n g e n t a 6 r o p h e n y l ) - 4 - B a n n e r M a x x p r o p y l — 1 , 3 - d i o x o l a n - 2 — y l ] S p e c t a t o r L e s c o m e t h y l ] 1 - H - 1 , 2 , 4 - t r i a z o l e ) P r o p i c o n a z o l e B A S F 7 P r o m y c l o b u t a n i l 2 — ( 4 — c h l o r o - E a g l e D o w 8 p h e n y l ) - 2 - ( 1 H - 1 , 2 , 4 - t r i a z o l - 1 — M a n h a n d l e L e s c o y l m e t h y l ) h e x a n e - n i t r i l e G o l d e n E a g l e A n d e r s o n s 1 B a y e r C r o p S c i e n c e , K a n s a s C i t y M O 2 L e s c o , I n c . , R o c k y R i v e r O H 3 A n d e r s o n s G o l f P r o d u c t s , M a u m e e O H 4 V e r d i c o n , I n c . , S i o u x F a l l s I A S G o w a n C o m p a n y , Y u m a A Z 6 S y n g e n t a P r o f e s s i o n a l P r o d u c t s , G r e e n s b o r o N C 7 B A S F P r o f e s s i o n a l T u r f , R e s e a r c h T r i a n g l e P a r k N C 8 D o w A g r o S c i e n c e s , I n d i a n a p o l i s I N T a b l e 2 . 2 . o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 2 9 J u l y 1 9 9 4 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h t r e a t m e n t . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k T r e a t m e n t x D a y s y I I I I I I I V M e a n 1 . c o n t r o l 0 . 9 1 0 . 8 9 1 . 1 7 0 . 7 7 0 . 9 4 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 1 . 1 7 0 . 8 9 1 . 0 2 1 . 3 2 1 . 1 0 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 0 . 7 5 0 . 7 6 0 . 5 0 0 . 6 5 0 . 6 7 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 0 . 6 4 0 . 9 0 0 . 4 1 0 . 7 6 0 . 6 8 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 0 . 7 8 0 . 3 7 0 . 7 7 0 . 9 1 0 . 7 1 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 . 2 8 0 . 8 8 0 . 8 8 1 . 0 3 1 . 0 2 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 1 . 6 8 0 . 5 2 1 . 0 3 1 . 0 3 1 . 0 6 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 1 . 0 2 1 . 4 0 0 . 9 0 1 . 2 8 1 . 1 5 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 0 . 7 8 1 . 4 3 0 . 6 3 0 . 7 5 0 . 9 0 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 1 . 0 1 0 . 6 4 1 . 1 5 0 . 7 7 0 . 8 9 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . l 4 a l t . 0 . 0 0 1 . 3 0 1 . 2 8 1 . 3 9 0 . 9 9 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 0 . 6 3 0 . 7 5 0 . 9 1 1 . 1 8 0 . 8 7 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 6 4 1 . 6 4 0 . 8 9 0 . 7 7 0 . 9 9 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d . 0 . 6 5 0 . 8 9 1 . 2 7 1 . 1 5 0 . 9 9 p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 X R a t e s i n g A I 1 0 0 m ' . Y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . 2 T a b l e 2 . 3 . A p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t r e a t m e n t s u s i n g o n e o r m o r e f u n g i c i d e s a s s h o w n . T r e a t m e n t R a t e ( g 1 0 0 m 7 ” I n t e r v a l ( d a y s ) 1 . c o n t r o l 2 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 1 4 3 . i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 4 . t r i a d i m e f o n 7 . 6 2 1 5 . f e n a r i m o l 6 . 7 2 1 6 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 1 4 7 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 8 . p r o p i c o n a z o l e 8 . 4 2 1 9 . p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 2 1 1 0 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 9 5 . 5 1 4 c h l o r o t h a l o n i l 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l a l t . 9 5 . 5 a l t . w / 4 . 2 1 4 a l t . w / 2 1 w / p r o p i c o n a z o l e 1 2 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 1 5 . 3 2 1 i p r o d i o n e 1 3 i p r o d i o n e a l t . 1 5 . 3 a l t . w / 4 . 2 2 1 w / p r o p i c o n a z o l e 1 4 . Y r 1 a n d 4 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 T a b l e 2 . 4 . N u m b e r o f p r o p i c o n a z o l e a p p l i c a t i o n s a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . T m t . 1 3 T m t . 1 4 T m t s . 7 a , ’ D n t s . 6 & 1 1 8 , 9 , & 1 2 & 1 0 1 9 9 4 1 3 3 4 1 9 9 5 1 2 3 4 1 9 9 6 2 2 4 6 1 9 9 7 2 3 4 6 T o t a l 6 1 0 1 4 2 0 a T r i a d i m e f o n a n d f e n a r i m o l t r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d a t e q u i v a l e n t r a t e s o n t h e s a m e d a y s a s T m t . 7 . T a b l e 2 . 5 . P r o p i c o n a z o l e a m o u n t s i n g 1 0 0 ' 2 a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . T m t s . 1 1 T m t s . 7 , T m t s . T m t . T m t . 9 & 1 3 8 , & 1 2 6 & 1 0 1 4 1 9 9 4 4 . 2 1 2 . 6 1 6 . 8 4 2 . 0 5 0 . 4 1 9 9 5 4 . 2 1 2 . 6 1 6 . 8 3 7 . 8 5 0 . 4 1 9 9 6 8 . 4 1 6 . 8 2 5 . 2 3 7 . 8 6 7 . 2 1 9 9 7 8 . 4 1 6 . 8 2 5 . 2 4 2 . 0 6 7 . 2 T o t a l 2 5 . 2 5 8 . 8 8 4 . 0 1 5 9 . 6 2 3 5 . 2 7 9 'E T a b l e 2 . 6 . o f t e n s u b s a m p l e s ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) c o l l e c t e d o n 1 4 O c t o b e r 1 9 9 4 a n d m e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k t r e a t m e n t . T r e a t m e n t x D a y s y I I I I I I I V ’ M e a n 1 . c o n t r o l 1 . 0 1 0 . 5 1 1 . 1 7 1 . 1 5 0 . 9 6 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 0 . 5 1 1 . 0 4 0 . 8 1 b 0 . 5 3 0 . 7 2 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 1 . 0 5 0 . 2 5 0 . 6 4 0 . 3 8 0 . 5 8 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 0 . 9 0 0 . 7 7 1 . 0 5 0 . 7 9 0 . 8 8 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 1 . 0 3 0 . 9 0 0 . 9 0 1 . 4 2 1 . 0 6 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 . 1 7 0 . 7 5 1 . 0 3 0 . 7 7 0 . 9 3 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 0 . 5 2 0 . 7 7 0 . 5 2 0 . 7 9 0 . 6 5 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 1 . 4 1 1 . 3 9 0 . 6 3 1 . 0 4 1 . 1 1 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 0 . 9 0 1 . 2 8 0 . 9 0 0 . 7 8 0 . 9 7 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 1 . 0 5 1 . 0 5 0 . 7 6 1 . 1 3 1 . 0 0 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 0 . 2 5 1 . 0 0 1 . 1 3 1 . 1 4 0 . 8 8 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 0 . 7 8 1 . 2 7 1 . 0 2 1 . 4 3 a 1 . 1 3 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 7 8 1 . 0 3 1 . 2 8 1 . 4 5 1 . 1 4 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 0 . 2 9 a 1 . 4 2 1 . 0 4 1 . 5 6 1 . 0 8 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 x R a t e s i n g A I 1 0 0 m 4 . Y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . a N i n e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . 0 i g h t s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . T a b l e 2 . 7 . o f t e n s u b s a m p l e s t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) c o l l e c t e d o n 1 4 J u l y 1 9 9 5 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t . T r e a t m e n t x D a y s y I I I ‘ I I I I V ’ M e a n 1 . c o n t r o l 1 1 5 0 . 7 5 1 . 1 8 0 . 7 5 0 . 9 6 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 0 . 6 5 0 . 6 5 1 . 3 0 1 . 6 0 1 . 0 5 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 o 6 4 0 . 7 8 0 . 6 4 1 ” 0 . 7 8 0 . 7 1 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 1 . 2 8 1 . 0 4 1 . 1 8 1 . 1 7 1 . 1 7 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 0 9 0 0 . 1 3 1 . 2 9 1 . 1 4 0 . 8 7 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 0 . 6 3 0 . 9 0 1 . 0 1 1 . 5 4 1 . 0 2 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 0 . 8 9 1 . 1 6 0 . 5 2 0 . 3 9 0 . 7 4 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 0 . 9 1 1 . 0 3 0 . 9 0 1 . 0 1 0 . 9 6 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 1 . 1 3 0 . 7 6 1 . 2 6 0 . 5 1 0 . 9 1 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 0 . 9 1 1 . 7 8 0 . 6 3 2 . 0 6 1 . 3 5 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 0 . 3 9 1 . 0 3 0 . 9 1 0 . 3 8 0 . 6 8 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 1 . 2 9 3 1 . 5 5 1 . 4 2 0 . 5 7 1 . 2 1 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 7 7 0 . 9 0 1 . 5 5 0 . 6 4 0 . 9 6 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 0 . 5 7 1 . 6 6 1 . 1 6 1 . 1 5 1 . 1 4 a p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 x R a t e s i n g 1 0 0 m ' . y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . 2 a N i n e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . b E i g h t s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . T a b l e 2 . 8 . o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 a n d m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h t r e a t m e n t . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k T r e a t m e n t x D a y s y I I I I I I V M e a n 1 . c o n t r o l 0 . 3 8 1 . 0 1 0 . 7 7 1 . 1 6 0 . 8 3 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 0 . 7 9 0 . 5 0 0 . 5 1 2 . 0 0 0 . 9 5 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 0 . 6 4 0 . 2 6 0 . 5 3 1 . 3 0 0 . 6 8 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 0 . 7 6 1 . 9 6 1 . 5 6 1 . 0 6 1 . 3 3 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 0 . 7 8 1 . 6 6 1 . 5 3 1 . 9 3 1 . 4 7 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 . 2 5 1 . 8 4 0 . 5 3 1 . 6 5 1 . 3 2 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 1 . 5 5 0 . 5 1 1 . 0 3 2 . 5 6 1 . 4 1 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 1 . 5 4 0 . 6 5 0 . 8 9 1 . 1 6 1 . 0 6 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 0 . 5 2 1 . 4 1 1 . 0 1 1 . 9 1 1 . 2 1 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 1 . 1 6 0 . 8 9 1 . 5 6 1 . 9 4 1 . 3 9 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 0 . 5 1 0 . 7 7 0 . 3 8 1 . 1 3 0 . 7 0 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 0 . 6 5 1 . 0 4 0 . 5 1 0 . 7 8 0 . 7 4 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 6 4 0 . 9 1 0 . 6 6 0 . 5 1 0 . 6 8 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 1 . 2 8 1 . 7 8 0 . 7 8 1 . 5 4 1 . 3 4 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 x R a t e s i n g 1 0 0 m ' . y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . 2 T a b l e 2 . 9 . ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h A v e r a g e - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d o n 1 2 J u l y 1 9 9 6 t r e a t m e n t . T r e a t m e n t x D a y s y I I I . I I I I V ’ M e a n 1 . c o n t r o l 0 . 4 4 g 2 . 8 7 f 1 . 6 6 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 1 . 3 5 f 1 . 3 5 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 o 9 3 ‘ 5 . 6 2 ‘ 4 . o 1 ‘ 1 . 2 9 e 2 . 9 7 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 1 . 2 8 ° 1 . 4 2 d 1 . 3 5 s . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 1 . 3 9 b 2 . 3 4 ° 1 . 8 7 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 . 3 3 ° o . 4 8 9 2 . 9 4 ‘ 3 . 1 2 ‘ 1 . 9 7 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 2 . 2 0 ‘ 1 . 7 5 " 4 . 9 4 ° 2 . 9 3 b 2 . 9 6 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 2 . 5 0 “ 1 . 7 1 d 1 . 3 6 d 4 . 4 o c 2 . 4 9 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 1 . 6 4 “ 1 . 1 7 ‘ 2 . 4 2 ° 1 . 7 4 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 . 8 3 e 3 . 6 9 e l . 8 3 ° 2 . 5 1 C 2 . 4 7 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 1 . 3 8 d 2 . 4 7 ‘ 1 . 3 3 d o 6 3 f 1 . 4 5 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 1 5 2 C 1 2 0 ‘ 4 0 1 ‘ 2 6 2 b 2 3 4 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 1 5 6 e 2 2 6 d 1 6 9 d 1 . 8 4 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 0 . 9 0 ° 1 . 8 4 e l . 6 9 c 2 . 2 6 d 1 . 6 8 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 x R a t e s i n g 1 0 0 m 4 . y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . a N i n e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . b E i g h t s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . C S e v e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . 8 3 S i x s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . e F i v e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . f F o u r s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . g T h r e e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . h T w o s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . T a b l e 2 1 0 . A v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h t r e a t m e n t . T r e a t m e n t x D a y s y I I I I I I I V ' M e a n 1 . c o n t r o l 1 0 6 1 . 0 7 0 . 7 5 0 . 5 9 ‘ 0 . 8 7 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 0 . 8 4 1 . 3 4 1 . 5 1 2 . 9 8 1 . 6 7 I 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 1 1 6 ‘ 1 2 7 0 . 8 5 0 . 7 5 ‘ 1 . 0 1 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 0 8 9 0 . 7 4 1 . 7 3 2 . 9 3 1 . 5 7 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 1 0 5 0 . 6 3 2 . 0 6 1 . 4 0 1 . 2 9 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 1 9 3 1 . 6 0 1 . 7 6 0 . 8 4 1 . 5 3 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 1 2 . 0 5 1 . 1 6 2 . 1 9 1 . 5 1 1 . 7 3 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 0 . 9 2 1 . 1 4 1 . 4 8 1 . 6 0 1 . 2 9 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 0 . 9 0 1 . 2 3 1 . 6 9 0 . 8 7 ° 1 . 1 8 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 0 . 7 9 1 . 9 9 2 . 1 9 3 . 8 4 2 . 2 0 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 0 . 7 9 0 . 9 9 1 . 3 9 1 . 3 9 1 . 1 4 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 1 . 0 8 0 . 7 9 1 . 0 7 0 . 6 6 b 0 . 9 0 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 6 2 0 . 6 2 0 . 9 9 1 . 0 5 ° 0 . 8 2 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d , 1 . 2 3 1 . 0 3 1 . 5 1 1 . 0 2 c 1 . 2 0 p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 x R a t e s i n g 1 0 0 m 4 . E i g h t s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . C S e v e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . a N i n e s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . 8 4 T a b l e 2 . 1 1 . A v e r a g e - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h b l o c k o f t e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d ( o r f e w e r w h e r e n o t e d ) o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 a n d m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h f o r e a c h t r e a t m e n t s h o w n a l o n g w i t h t h e f u n g i c i d e s f o r e a c h t r e a t m e n t . T r e a t m e n t x D a y s y I I I I I I I V ’ M e a n 1 . c o n t r o l 0 . 8 6 0 . 8 6 0 . 5 0 1 . 0 0 0 8 1 2 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 1 . 1 1 1 . 4 2 1 . 2 9 4 . 1 5 1 . 9 9 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 0 . 8 6 0 . 4 2 0 . 8 0 0 . 7 5 0 7 1 4 . t r i a d i m e f o n ( 7 . 6 ) 2 1 0 . 3 7 0 . 9 0 0 6 4 4 . 6 6 1 6 4 5 . f e n a r i m o l ( 6 . 7 ) 2 1 0 . 8 6 0 . 5 0 1 . 2 8 3 . 1 5 1 . 4 5 6 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 2 . 4 8 0 . 9 7 d 1 . 1 3 0 . 6 3 1 3 0 7 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 2 ) 2 1 1 . 0 1 0 . 7 7 1 . 2 1 3 . 1 3 1 . 5 3 8 . p r o p i c o n a z o l e ( 8 . 4 ) 2 1 0 . 7 6 0 . 2 6 1 . 0 0 1 . 2 7 0 . 8 2 9 . p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 1 1 . 3 8 0 . 2 5 0 . 2 5 1 . 3 6 0 . 8 1 1 0 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 1 4 2 . 0 2 2 . 7 0 2 . 5 3 b 4 . 6 0 c 2 . 9 6 c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) a l t . 1 4 a l t . 1 . 0 0 1 . 2 6 1 . 4 5 a 1 . 8 9 1 . 4 0 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) w / 2 1 1 2 . p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) + 2 1 0 . 7 8 0 . 8 0 0 . 6 2 0 . 7 5 0 . 7 4 i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 1 3 . i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) a l t . 2 1 0 . 8 8 0 . 1 3 0 . 0 0 2 . 8 9 0 . 9 7 w / p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 1 4 . Y r 1 a n d 4 1 . 2 9 d 0 . 6 9 d 1 . 6 3 d 1 . 2 8 d 1 . 2 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d p r o p i c o n a z o l e ( 4 . 2 ) 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d c h l o r o t h a l o n i l ( 9 5 . 5 ) 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e ( 1 6 . 8 ) 2 4 C & 2 8 d i p r o d i o n e ( 1 5 . 3 ) 2 1 — . — - _ — - I — _ - — r — — _ — — x R a t e s i n g 1 0 0 m 2 . S e v e n s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . C S i x s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . a E i g h t s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . d F o u r s u b s a m p l e s c o l l e c t e d . 8 5 T a b l e 2 . 1 2 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 2 0 O c t o b e r 1 9 9 5 . R a t e M e a n - N o . T r e a t m e n t ( g 1 0 0 1 0 2 ) I n § : r : a l R e l a t i v e y G r o w t h 5 . f e n a r i m o l 6 . 7 2 1 1 . 4 8 A X 1 0 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 1 4 1 . 4 0 A B c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 7 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 1 . 4 0 A B 4 . t r i a d i m e f o n 7 . 6 2 1 1 . 3 8 A B 1 4 . Y r 1 a n d 4 1 . 3 5 A B C D p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 8 d , 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 2 8 d , 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 8 d , 2 1 6 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 1 4 1 3 0 A B C D E 9 . p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 2 1 1 2 0 A B C D E 8 . p r o p i c o n a z o l e 8 . 4 2 1 1 0 8 A B C D E 2 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 1 4 0 9 5 A B C D E 1 . c o n t r o l 0 8 5 B C D E 1 2 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 2 1 0 7 3 C D E i p r o d i o n e 1 5 . 3 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 a l t . 1 4 a l t . 0 . 7 0 E a l t . w / w / 4 . 2 w / 2 1 p r o p i c o n a z o l e 3 . i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 0 . 6 8 E 1 3 . i p r o d i o n e a l t . 1 5 . 3 a l t . 2 1 0 . 6 8 E w / p r o p i c o n a z o l e w / 4 . 2 L S D a t P S 0 . 0 5 0 . 6 2 x M e a n s f o l l o w e d b y t h e s a m e l e t t e r a r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m e a c h o t h e r . T a b l e 2 . 1 3 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 1 A u g u s t 1 9 9 7 . R a t e M e a n - N o . T r e a t m e n t ( g 1 0 0 1 0 2 ) I n g : r : a l R e l a t i v e y G r o w t h 1 0 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 1 4 2 . 2 0 A x c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 7 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 1 . 7 3 A B 2 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 1 4 1 . 6 7 A B C 4 . t r i a d i m e f o n 7 . 6 2 1 1 . 5 7 A B C 6 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 1 4 1 . 5 3 B C D 5 . f e n a r i m o l 6 . 7 2 1 1 . 4 5 B C D E 8 . p r o p i c o n a z o l e 8 . 4 2 1 1 . 2 9 B C D E 1 4 . Y r 1 a n d 4 1 . 2 0 B C D E p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 8 d , 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 2 8 d , 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 8 d , 2 1 9 . p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 2 1 1 . 1 8 B C D E 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 a l t . 1 4 a l t . 1 . 1 4 B C D E a l t . w / w / 4 . 2 w / 2 1 p r o p i c o n a z o l e 3 . i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 1 . 0 1 C D E 1 2 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 2 1 0 . 9 0 D E i p r o d i o n e 1 5 . 3 1 . c o n t r o l 0 . 8 7 1 3 . i p r o d i o n e a l t . 1 5 . 3 a l t . 2 1 0 . 8 2 w / p r o p i c o n a z o l e w / 4 . 2 L S D a t P S 0 . 1 0 0 . 6 6 W M f r o m e a c h o t h e r . 8 7 e a n s f o l l o w e d b y t h e s a m e l e t t e r a r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t T a b l e 2 . 1 4 . T r e a t m e n t m e a n s o f p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s o f f o u r r e p l i c a t i o n s c o l l e c t e d o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 . R a t e M e a n — N o . T r e a t m e n t ( g I O O I N Q ) I n § : r : a l R e l a t i v e y G r o w t h 1 0 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 1 4 2 . 9 6 A X c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 2 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 1 4 1 . 9 9 A B 4 . t r i a d i m e f o n 7 . 6 2 1 1 . 6 4 B C 7 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 1 . 5 3 B C 5 . f e n a r i m o l 6 . 7 2 1 1 . 4 5 B C 1 1 . c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 a l t . 1 4 a l t . 1 . 4 0 B C a l t . w / w / 4 . 2 w / 2 1 p r o p i c o n a z o l e 6 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 1 4 1 . 3 0 B C 1 4 . Y r 1 a n d 4 1 . 2 2 B C p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 8 d , 2 8 Y r 2 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 2 8 d , 1 4 Y r 3 p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 a t 2 4 C & i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 8 d , 2 1 1 3 . i p r o d i o n e a l t . 1 5 . 3 a l t . 2 1 0 . 9 7 B C w / p r o p i c o n a z o l e w / 4 . 2 8 . p r o p i c o n a z o l e 8 . 4 2 1 0 . 8 2 C 9 . p r o p i c o n a z o l e 1 6 . 8 2 1 0 . 8 1 C 1 . c o n t r o l 0 . 8 1 C 1 2 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 2 1 0 . 7 4 C i p r o d i o n e 1 5 . 3 3 . i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 0 . 7 1 C L S D a t P S 0 . 0 5 1 . 1 1 x M e a n s f o l l o w e d b y t h e s a m e l e t t e r a r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m e a c h o t h e r . 8 8 T a b l e 2 . 1 5 . N u m b e r o f c h l o r o t h a l o n i l a p p l i c a t i o n s a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . T m t . 2 T m t . 1 1 ( C h l o r o t h a l o n i l a l o n e ) Y e a r ( p r o p i c o n a z o l e a l t . a n d T m t . 1 0 w / c h l o r o t h a l o n i l ) ( P r o p i c o n a z o l e + c h l o r o t h a l o n i l ) 1 9 9 4 2 4 1 9 9 5 2 4 1 9 9 6 3 6 1 9 9 7 3 6 T o t a l 1 0 2 0 8 9 T a b l e 2 . 1 6 . C h l o r o t h a l o n i l a m o u n t s i n g 1 0 0 m " 2 a p p l i e d i n 1 9 9 4 , 1 9 9 5 , 1 9 9 6 , a n d 1 9 9 7 . T m t . 2 T m t . 1 1 ( C h l o r o t h a l o n i l a l o n e ) Y e a r ( p r o p i c o n a z o l e a l t . a n d T m t . 1 0 w / c h l o r o t h a l o n i l ) ( p r o p i c o n a z o l e + c h l o r o t h a l o n i l ) 1 9 9 4 1 9 1 3 8 2 1 9 9 5 1 9 1 3 8 2 1 9 9 6 2 8 7 5 7 3 1 9 9 7 2 8 7 5 7 3 T o t a l 9 5 5 1 9 1 0 9 0 T a b l e 2 . 1 7 . A n e x a m p l e o f a p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t r e a t m e n t s f o r a s t u d y t h a t w o u l d h a v e h a d g r e a t e r e f f i c i e n c y t h a n t h e o n e c o n d u c t e d a n d p r e s e n t e d i n C h a p t e r 2 . T r e a t m e n t R a t e ( g 1 0 0 : m 4 ) I n t e r v a l ( d a y s ) 1 . c o n t r o l 2 . c h l o r o t h a l o n i l 4 5 . 3 1 0 a l t 1 1 3 . p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 4 . i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 5 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 4 5 . 3 2 1 c h l o r o t h a l o n i l 6 . p r o p i c o n a z o l e a l t . 4 . 2 a l t . 2 1 a l t . w / w / c h l o r o t h a l o n i l w / 4 5 . 3 1 0 o r 1 1 7 . i p r o d i o n e + 1 5 . 3 + 4 5 . 3 2 1 c h l o r o t h a l o n i l 8 . i p r o d i o n e a l t . 1 5 . 3 a l t . 2 1 a l t . w / w / c h l o r o t h a l o n i l w / 4 5 . 3 1 0 o r 1 1 9 . p r o p i c o n a z o l e + 4 . 2 + 1 5 . 3 2 1 i p r o d i o n e 1 0 . p r o p i c o n a z o l e a l t . 4 . 2 a l t . 2 1 w / i p r o d i o n e w / 1 5 . 3 9 1 l l 1 4 1 2 " " " " " " " " " " " " " " " " 1 3 1 0 M a p o f B l o c k 4 w i t h t r e a t m e n t n u m b e r s a b o v e o r b e l o w e a c h 2 . 1 m b y 8 . 4 m ( 1 7 . 6 n ? ) p l o t w i t h 1 . 2 m b y 3 m ( 3 . 6 n ? ) s a m p l i n g a r e a s o u t l i n e d a n d m o w i n g d i r e c t i o n s i n d i c a t e d b y p a r a l l e l a r r o w s i n o p p o s i t e d i r e c t i o n s . F i g u r e 2 . 1 . 9 2 2 0 O c t 9 5 1 A u g 9 7 2 1 A u g 9 8 P S 0 . 0 5 P S 0 . 1 0 P S 0 . 0 5 M i n t 1 1 — c h l o r o t h a l o n i l a l t . p r o p i c o n a z o l e E q w m 2 - c h l o r o t h a l o n i l I T n m 1 0 — p r o p i c o n a z o l e + c h l o r o t h a l o n i l , , l X T r e a t m e n t s s h a r i n g t h e s a m e l e t t e r a r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t . F i g u r e 2 . 2 . M e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h o f t h r e e t r e a t m e n t s w i t h f o u r r e p l i c a t i o n s a t t h r e e — o b s e r v a t i o n d a t e s w i t h e a c h o f t h e t r e a t m e n t s t h a t a p p l i e d c h l o r o t h a l o n i l . 9 3 1 0 . 1 1 . L i s t o f R e f e r e n c e s A g r i o s , G . N . 1 9 9 7 . P l a n t P a t h o l o g y . 4 t h e d . S a n D i e g o : A c a d e m i c P r e s s . 6 3 5 p . A n d r a d e , A . C . , D e l S o r b o , G . , V a n N i s t e l r o o y , J . G . M . , a n d D e W a a r d , M . A . 2 0 0 0 . T h e A B C t r a n s p o r t e r A t r B f r o m A s p e r g i l l u s n i d u l a n s m e d i a t e s r e s i s t a n c e t o a l l m a j o r c l a s s e s o f f u n g i c i d e s a n d s o m e n a t u r a l t o x i c c o m p o u n d s . M i c r o b i o l o g y - U k 1 4 6 : 1 9 8 7 - 1 9 9 7 . A n o n m y m o u s . 1 9 8 5 . F e n a r i m o l ( R u b i g a n ) C h e m i c a l F a c t S h e e t 2 / 8 5 . P e s t . M g t . E d u . P r o g . , C o r n e l l U n i v / 2 5 M a y 2 0 0 4 . A n o n m y m o u s . 1 9 9 2 . P r o p i c o n a z o l e f u n g i c i d e . ( i n t e r n a l - c o r p o r a t e d o c u m e n t ) C i b a C r o p P r o t e c t i o n . A n o n m y m o u s . 1 9 9 4 . S u p p l e m e n t a l L a b e l i n g : R u b i g a n A . S . T u r f a n d O r n a m e n t a l ( E P A R e g . N o . 6 2 7 1 9 - 1 4 2 ) P o a a n n u a M a n a g e m e n t P r o g r a m f o r O v e r s e e d e d B e r m u d a g r a s s G r e e n s a n d T e e s . D o w A g r i S c i e n c e s . A n o n m y m o u s . 2 0 0 0 . S y n g e n t a m e r g e r g e t s g r e e n l i g h t f r o m E u r o p e a n C o m m i s s i o n . S y n g e n t a / 2 J u n e 2 0 0 4 . A n o n m y m o u s . 2 0 0 0 . S p e c i m e n L a b e l : R u b i g a n A . S . T u r f a n d O r n a m a n t a l S p e c i a l t y F u n g i c i d e . D o w A g r o S c i e n c e s L L C . A n o n m y m o u s . 2 0 0 2 . C h e m i c a l l y s p e a k i n g ; M a r c h 2 0 0 2 . F l a . P e s t i c i d e I n f o . O f f i c e / 0 3 c m s p 0 2 2 5 M a y 2 0 0 4 . A p p l e b y , A . P . 2 0 0 2 . H e r b i c i d e C o m p a n y G e n e a l o g y . D e p t . o f C r o p S c i . , O r e g o n S t . U n i v . / 2 5 M a y 2 0 0 4 . B e n v e n i s t e , P . a n d R a h i e r , A . 1 9 9 2 . T a r g e t s i t e s o f s t e r o l b o i s y n t h e s i s i n h i b i t o r s i n p l a n t s . p . 2 0 7 - 2 2 6 . I n T a r g e t S i t e s o f F u n g i c i d e A c t i o n , e d i t e d b y W . K O l l e r . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . B e r g , D . a n d P l e m p e l , M . 1 9 8 8 . P r e f a c e . p . 1 5 — 1 6 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I : C h e m i s t r y , . M O d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l 9 4 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 1 6 . 1 7 . 1 8 . 1 9 . B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d , L t d . a n d V C H . B o s s c h e , H . V . 1 9 8 8 . M o d e o f a c t i o n o f p y r i d i n e , p y r i m i d i n e , a n d a z o l e f u n g i c i d e s . p . 7 9 - 1 1 9 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I : C h e m i s t r y , M a d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d , L t d . a n d V C H . B o s s c h e , H . V . a n d J a n s s e n , P . A . 1 9 9 2 . T a r g e t s i t e s o r s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s : S e c o n d a r y a c t i v i t i e s o n c y t o c h r o m e P - 4 5 0 — d e p e n d e n t r e a c t i o n s . p . 2 2 7 - 2 5 4 . I n T a r g e t S i t e s o f F u n g i c i d e A c t i o n , e d i t e d b y W . K é l l e r . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . B u c h e n a u e r , H . 1 9 8 7 . M e c h a n i s m o f a c t i o n o f t r a z o l y l f u n g i c i d e s a n d r e l a t e d c o m p o u n d s . p . 2 0 5 — 2 3 2 . I n . M o d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . B u r p e e , L . L . 2 0 0 1 . G r o w t h o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a a s a f f e c t e d b y r e p e a t e d e x p o s u r e t o p r o p i c o n a z o l e . I n t l . T u r f g r a s s S o c . R e s . J . 9 : 6 4 5 - 6 4 8 . C o u c h , H . B . 2 0 0 3 . S t r a t e g i e s f o r p r e v e n t i n g a n d m a n a g i n g f u n g i c i d e r e s i s t a n c e : R o t a t i n g f u n g i c i d e s w i t h d i f f e r e n t b i o c h e m i c a l m o d e s o f a c t i o n a n d u s i n g f u n g i c i d e m i x t u r e s a r e t h e t w o p r i m a r y s t r a t e g i e s f o r m a n a g i n g f u n g i c i d e r e s i s t a n c e . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , 7 1 ( 5 ) , p . 1 1 1 - 1 1 5 . d e W a a r d , M . A . 1 9 9 7 . S i g n i f i c a n c e o f A B C t r a n s p o r t e r s i n f u n g i c i d e s e n s i t i v i t y a n d r e s i s t a n c e . P e s t i c . S c i . 5 1 : 2 7 1 - 2 7 5 . d e W a a r d , M . A . a n d V a n N i s t e l r o o y , J . G . M . 1 9 9 0 . S t e p w i s e d e v e l o p m e n t o f l a b o r a t o r y r e s i s t a n c e t o D M I - f u n g i c i d e s i n P e n i c i l l i u m i t a l i c u m . N e t h . J . P l a n t P a t h o l . 9 6 : 3 2 1 - 3 2 9 . d e W a a r d , M . A . , V a n N i s t e l r o o y , J . G . M . , L a n g v e l d , C . R . , V a n K a n , J . A . L . , a n d D e l S o r b o , G . 1 9 9 6 . M u l t i d r u g r e s i s t a n c e i n f i l a m e n t o u s f u n g i . p . 2 9 3 - 3 0 0 . I n M b d e r n A n t i f u n g a l C o m p o u n d s , e d i t e d b y H . 9 5 2 0 . 2 1 . 2 2 . 2 3 . 2 4 . 2 5 . L y r , P . E . R u s s e l a n d H . D . S i s l e r . A n d o v e r , E n g l a n d : I n t e r c e p t P r e s s . D e b i e u , D . , B a c h , J . , A r n o l d , A . , B r o u s s e t , S . , G r e d t , M . , T a t o n , M . , R a h i e r , A . , M a l o s s e , C . , a n d L e r o u x , P . 2 0 0 0 . I n h i b i t i o n o f e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s b y m o r p h o l i n e , p i p e r i d i n e , a n d s p i r o k e t a l a m i n e f u n g i c i d e s i n . M i c r o d o c h i u m n i v a l e : E f f e c t o n s t e r o l c o m p o s i t i o n a n d s t e r o l D e l t a ( 8 ) - > D e l t a ( 7 ) - i s o m e r a s e a c t i v i t y . P e s t i c . B i o c h e m . P h y s i o l . 6 7 : 8 5 - 9 4 . D e B o n o , M . , A b b o t t , B . J . , T u r n e r , J . R . , H o w a r d , L . C . , G o r d e e , R . 8 . , H u n t , A . S . , B a r n h a r t , M . , M o l l o y , R . M . , W i l l a r d , K . E . , F u k u d a , D . , B u t l e r , T . F . , a n d Z e c k n e r , D . J . 1 9 9 8 . S y n t h e s i s a n d e v a l u a t i o n o f L Y 1 2 1 0 1 9 : a m e m b e r o f a s e r i e s o f s e m i s y n t h e t i c a n a l o g u e s o f t h e a n t i f u n g a l l i p o p e p t i d e e c h i n o c a n d i n B . p . 1 5 2 - 1 6 7 . I n A n t i f u n g a l D r u g s : P a r t I I : S t r u c t u r a l S l u c i d a t i o n , S y n t h e s i s , a n d A n t i f u n g a l A c t i v i t y o f N a t u r a l P r o d u c t s a n d R e l a t e d D e r i v a t i v e s : , e d i t e d b y V . S t . G e o r g i e v . N e w Y o r k : N . Y . A c a d . S c i . D e r n o e d e n , P . H . 1 9 9 5 . T u r f g r a s s d i s e a s e s a n d t h e i r m a n a g e m e n t . p . 8 7 - 1 7 0 . I n M a n a g i n g T u r f g r a s s P e s t s , e d i t e d b y T . L . W a t s c h k e , P . H . D e r n o e d e n a n d D . J . S h e t l a r . B o c a R a t o n F L : L e w i s P u b . D i s m u k e s , W . E . , W a d e , J . S . , L e e , J . Y . , D o c k e r y , B . K . , a n d H a i n , J . D . 1 9 9 0 . A r a n d o m i z e d , d o u b l e - b l i n d t r i a l o f n y s t a t i n t h e r a p y f o r t h e c a n d i d i a s i s h y p e r s e n s i t i v i t y s y n d r o m e . N . E n g l . J . M e d . 3 2 3 : 1 7 1 7 - 1 7 2 5 . F l e t c h e r , R . A . a n d H o f s t r a , G . 1 9 8 8 . T r i a z o l e s a s p o t e n t i a l p l a n t p r o t e c t a n t s . p . 3 2 1 — 3 3 1 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s ; P a r t I I : S t e r o l S y n t h e s i s I n h i b i t o r s I n P l a n t P r o t e c t i o n . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . G a s z t o n y i , M . a n d L y r , H . 1 8 8 7 . O t h e r f u n g i c i d e s . p . 3 0 9 - 3 2 4 . I n M O d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . 9 6 2 6 . 2 7 . 2 8 . 2 9 . 3 0 . 3 1 . 3 2 . 3 3 . 3 4 . 3 5 . G e o r g o p o u l u s , S . G . 1 9 8 8 . G e n e t i c s a n d p o p u l a t i o n d y n a m i c s . p . 1 2 - 1 3 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , S c h a b e n b e r g e r , 0 . , a n d G o l e m b i e w s k i , R . 1 9 9 8 . F u n g i c i d e u s e o n D M I - r e s i s t a n t d o l l a r s p o t . 7 0 t h A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , V o l . 2 7 , p . 1 3 7 - 1 3 9 . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , J o n e s , A . , a n d S c h a b e n b e r g e r , O . 1 9 9 7 . F u n g i c i d e e f f i c a c y o n d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t i o n ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . R e s . J . I n t . T u r f g r a s s S o c . 8 : 8 7 5 - 8 8 1 . G o l d , W . , S t a u t , H . A . , P a g a n o , J . F . , a n d D o n o v i c k , R . 1 9 5 6 . A m p h o t e r i c i n s A a n d B : A n t i f u n g a l a n t i b i o t i c s p r o d u c e d b y a S t r e p t o m y c e t e . p . 5 7 9 - 5 8 6 . I n A n t i b i o t i c s A n n u a l , 1 9 5 5 - 1 9 5 6 . N e w Y o r k : M e d i c a l E n c y c l o p e d i a . G o l e m b i e w s k i , R . C . 1 9 9 4 . C h a r a c t e r i z a t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . T h e s i s ( M . S . ) , M i c h . S t . U n i v . , 7 4 p . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s J r . , J . M . , J o n e s , A . L . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 5 . D e t e c t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n c e i n S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a p o p u l a t i o n s . P l a n t D i s . 7 9 : 4 9 1 - 4 9 3 . G o u o t , J . - M . 1 9 8 8 . C h a r a c t e r i s t i c s a n d p o p u l a t i o n d y n a m i c s o f B o t r y t i s c i n e r e a a n d o t h e r p a t h o g e n s r e s i s t a n t t o d i c a r b o x i m i d i e s . p . 5 3 - 5 5 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . G r e w e , F . a n d B a c h e l , K . H . 1 9 7 3 . E i n n e u e s M e h l t a u f u n g i z i d a u s d e r K l a s s e d e r T r i t y l t r i a z o l e . M i t t . B i o l . B u n d e s a n s t . 1 5 1 : 2 0 8 - 2 0 9 . H a z e n , E . L . a n d B r o w n , R . 1 9 5 0 . T w o a n t i f u n g a l a g e n t s p r o d u c e d b y a s o i l a c t i n o m y c e t e . S c i e n c e 1 1 2 : 4 2 3 . H e w i t t , H . G . 1 9 9 8 . F u n g i c i d e s i n C r o p P r o t e c t i o n . N e w Y o r k : C A B I n t e r n a t i o n a l . 2 2 1 p . 9 7 3 6 . 3 7 . 3 8 . 3 9 . 4 0 . 4 1 . 4 2 . 4 3 . H o r v a t h , B . J . 2 0 0 3 . E p i d e m i o l o g y o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a i n M i c h i g a n : G e o s t a t i s t i c a l a n d P o p u l a t i o n B i o l o g i c a l A p p r o a c h e s . D i s s . ( P h . D . ) , M i c h . S t . U n i v . , 5 8 p . I z q u i e r d o , M . A . , N e e f j e s , J . J . , M a t h a r i , A . E . L . , F l e n s , M . J . , S c h e f f e r , G . L . , a n d S c h e p e r , R . J . 1 9 9 6 . O v e r e x p r e s s i o n o f t h e A B C t r a n s p o r t e r T A P i n m u l t i d r u g - r e s i s t a n t h u m a n c a n c e r c e l l l i n e s . B r i t . J . C a n c e r 7 4 : 1 9 6 1 — 1 9 6 7 . K a n e , R . T . a n d W i l k i n s o n , H . T . 1 9 9 2 . D e v e l o p m e n t o f r e s i s t a n c e a n d / o r t o l e r a n c e t o f u n g i c i d e s b y t u r f p a t h o g e n s o n I l l i n o i s g o l f c o u r s e s . 1 9 9 1 I l l i n o i s T u r f g r a s s R e s e a r c h R e p o r t , M a r c h 1 9 9 2 , p . 1 1 4 — 1 1 9 . K a t o , T . , Y a m a m o t o , S . , K a w a s e , Y . , a n d U e d a , M . 1 9 7 5 . F u n g i t o x i c p r o p e r t i e s o f a N - 3 p y r i d y l i m i d a d i t h i o c a r b o n a t e d e v i v a t i v e . A n n . P h y t o p a t h o l . S o c . o f J a p a n 4 1 : 1 - 8 . K e r k e n a a r , A . 1 9 8 7 . M e c h a n i s m o f a c t i o n o f m o r p h o l i n e f u n g i c i d e s . p . 1 5 9 — 1 7 1 . I n . M b d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d . M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . K e r r i d g e , D . a n d W h e l e n , W . L . 1 9 8 4 . T h e p o l y e n e m a c r o l i d e a n t i b i o t i c s a n d 5 - f l u o r o c y t o s i n e : m o l e c u l a r a c t i o n s a n d i n t e r a c t i o n s . p . 4 0 5 . I n . M b d e o f A c t i o n o f A n t i f u n g a l A g e n t s , e d i t e d b y A . P . J . T r i n c i a n d J . F . R y l e y . C a m b r i d g e a n d N e w Y o r k : C a m b r i d g e U n i v . P r e s s . K e r r i d g e , D . , F a s o l i , M . , a n d W a y m a n , F . 1 9 8 8 . D r u g r e s i s t a n c e i n C a n d i d a a l b i c a n s a n d C a n d i d a g l a b r a t a . p . 2 4 5 - 2 5 9 . I n A n t i f u n g a l D r u g s : P a r t I I I . B i o c h e m i c a l S t u d i e s a n d . M e c h a n i s m o f A c t i o n o f A n t i f u n g a l A g e n t s , e d i t e d b y V . S t . G e o r g i e v . N e w Y o r k : N Y A c a d . S c i . K é l l e r , W . 1 9 8 8 . S t e r o l d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s : m e c h a n i s m o f a c t i o n a n d r e s i s t a n c e . p . 7 9 — 8 8 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n . N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . 9 8 4 4 . 4 5 . 4 6 . 4 7 . 4 8 . 4 9 . 5 0 . 5 1 . 5 2 . K é l l e r , W . 1 9 9 2 . A n t i f u n g a l a g e n t s w i t h t a r g e t s i t e s i n s t e r o l f u n c t i o n s a n d b i o s y n t h e s i s . p . 1 1 9 - 2 0 6 . I n T a r g e t S i t e s o f F u n g i c i d e A c t i o n , e d i t e d b y W . K o l l e r . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . K o l l e r , W . 1 9 9 2 . T a r g e t r e s e a r c h i n t h e d i s c o v e r y a n d d e v e l o p m e n t o f a n t i f u n g a l i n h i b i t o r s . p . 2 5 5 - 3 1 1 . I n T a r g e t S i t e s o f F u n g i c i d e A c t i o n , e d i t e d b y W . K o l l e r . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . K o l l e r , W . a n d S c h e i n p f l u g , H . 1 9 8 7 . F u n g a l r e s i s t a n c e t o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s . P l a n t D i s . 7 1 : 1 0 6 6 - 1 0 7 4 . K o l l e r , W . a n d W i l c o x , W . F . 2 0 0 1 . E v i d e n c e f o r t h e p r e d i s p o s i t i o n o f f u n g i c i d e - r e s i s t a n t i s o l a t e s o f V e n t u r i a i n a e q u a l i s t o a p r e f e r e n t i a l s e l e c t i o n f o r r e s i s t a n c e t o o t h e r f u n g i c i d e s . P h y t o p a t h o l o g y 9 1 : 7 7 6 - 7 8 1 . L a M o n d i a , J . A . 2 0 0 1 . R e s i s t a n c e o f t h e E u o n y m o u s a n t h r a c n o s e p a t h o g e n , C o l l e t o t r i c h u m g l o e o s p o r i o i d e s , t o s e l e c t e d f u n g i c i d e s . J . E n v i r o n . H o r t . 1 9 : 4 7 - 5 0 . L a m o u r , K . H . , D a u g h t r e y , M . L . , B e n s o n , D . M . , H w a n g , J . , a n d H a u s b e c k , M . K . 2 0 0 3 . E t i o l o g y o f P h y t o p h t h o r a d r e c h s l e r i a n d P . n i c o t i a n a e ( = P . p a r a s i t i c a ) d i s e a s e s a f f e c t i n g f l o r i c u l t u r e c r o p s . P l a n t D i s . 8 7 : 8 5 4 - 8 5 8 . L e r o u x , P . , F r i t z , R . , D e b i e u , D . , A l b e r t i n i , C . , L a n e n , C . , B a c h , J . , G r e d t , M . , a n d C h a p e l a n d , F . 2 0 0 2 . M e c h a n i s m s o f r e s i s t a n c e t o f u n g i c i d e s i n f i e l d s t r a i n s o f B o t r y t i s c i n e r e a . P e s t M a n a g e . S c i . 5 8 : 8 7 6 - 8 8 8 . L i t m a n , T . , D r u l e y , T . E . , S t e i n , W . D . , a n d B a t e s , S . E . 2 0 0 1 . F r o m M D R t o M X R : N e w u n d e r s t a n d i n g o f m u l t i d r u g r e s i s t a n c e s y s t e m s , t h e i r p r o p e r t i e s a n d c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e . C e l l . M o l e c u l . L i f e S c i . 5 8 : 9 3 1 - 9 5 9 . L o u c h e r , F . 1 9 8 8 . S t r a t e g i e s t o c o n t r o l d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t s t r a i n s o f p l a n t p a t h o g e n s . p . 5 6 — 5 7 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n . N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . 9 9 5 3 . 5 4 . 5 5 . 5 6 . 5 7 . 5 8 . 5 9 . 6 0 . 6 1 . L y r , H . 1 9 8 7 . M e c h a n i s m o f a c t i o n o f t r i a z o l y l f u n g i c i d e s a n d r e l a t e d c o m p o u n d s . p . 2 0 5 - 2 3 1 . I n . M O d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d . M e c h a n i s m s o f . A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . M e n n , W . G . 1 9 8 5 . A n e v a l u a t i o n o f f e n a r i m o l f o r p r e - a n d p o s t - e m e r g e n t c o n t r o l o f a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) i n o v e r s e e d e d b e r m u d a g r a s s g r e e n s . T e x a s T u r f g r a s s R e s e a r c h - 1 9 8 5 , A u g u s t 1 9 8 5 , p . 7 9 - 8 5 . M e n n , W . G . 1 9 8 6 . U s e o f f e n a r i m o l f o r s e l e c t i v e l y c o n t r o l l i n g P o a a n n u a i n a n o v e r s e e d e d b e r m u d a g r a s s g o l f g r e e n . U S G A G r e e n S e c t i o n R e c o r d , 2 4 ( 5 ) S e p t e m b e r / O c t o b e r , p . 1 1 - 1 2 . M e n n , W . G . a n d B e a r d , J . B . 1 9 8 4 . U s e o f f e n a r i m o l f o r c o n t r o l l i n g a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) i n o v e r s e e d e d b e r m u d a g r a s s g r e e n s . A g r o n . A b s t r . ( 1 9 8 4 ) : 1 5 3 . M e r c e r , E . I . 1 9 9 1 . S t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s : T h e i r c u r r e n t s t a t u s a n d m o d e s o f a c t i o n . L i p i d s 2 6 : 5 8 4 - 5 9 7 . M e r c e r , E . J . 1 9 8 8 . T h e m o d e o f a c t i o n o f m o r p h o l i n e s . p . 1 2 0 - 1 5 0 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I : C h e m i s t r y , M b d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d , L t d . a n d V C H . N e s , W . D . 2 0 0 3 . E n z y m e m e c h a n i s m s f o r s t e r o l C m e t h y l a t i o n s . P h y t o c h e m i s t r y 6 4 : 7 5 - 9 5 . N i c h o l s o n , J . F . , M e y e r , W . A . , S i n c l a i r , J . B . , a n d B u t l e r , J . D . 1 9 7 1 . T u r f i s o l a t e s o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o l e r a n t t o D y r e n e . P h y t o p a t h o l o g i s c h e Z e i t s c h r i f t 7 2 : 1 6 9 — 1 7 2 . P e t z o l d t , C . H . a n d P e r k i n s , A . T . 1 9 8 3 . N e w t u r f g r a s s f u n g i c i d e s : R u b i g a n . P r o c . 3 7 t h A n n l . N . Y . S t . T u r f g r a s s C o n f . , V o l . 7 , p . 2 6 . 1 0 0 6 2 . 6 3 . 6 4 . 6 5 . 6 6 . 6 7 . 6 8 . 6 9 . 7 0 . P i j l s , C . F . N . a n d S h a w , M . W . 1 9 9 7 . W e a k s e l e c t i o n b y f i e l d s p r a y s f o r f l u t r i a f o l r e s i s t a n c e i n S e p t o r i a t r i t i c i . P l a n t P a t h o l . 4 6 : 2 4 7 - 2 6 3 . P o m m e r , E . - H . 1 9 8 7 . M o r p h o l i n e f u n g i c i d e s . p . 1 4 3 - 1 7 1 . I n . M O d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d . M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . R e u v e n i , M . a n d S h e g l o v , D . 2 0 0 2 . E f f e c t s o f a z o x y s t r o b i n , d i f e n o c o n a z o l e , p o l y o x i n B ( p o l a r ) a n d t r i f l o x y s t r o b i n o n g e r m i n a t i o n a n d g r o w t h o f A l t e r n a r i a a l t e r n a t a a n d d e c a y i n r e d d e l i c i o u s a p p l e f r u i t . C r o p P r o t e c t . 2 1 : 9 5 1 - 9 5 5 . R o s e n b e r g , K . A . , C a r u s o , F . L . , a n d Z u c k , M . G . 1 9 8 6 . S y n e r g i s t i c i n t e r a c t i o n b e t w e e n s t e r o l - i n h i b i t o r a n d p r o t e c t a n t f u n g i c i d e s i n t h e t r e a t m e n t o f v e n t u r i a - I n a e q u a l i s . P h y t o p a t h o l o g y 7 6 : 6 5 8 — 6 5 8 . R y d e r , N . S . 1 9 8 8 . M o d e o f a c t i o n o f a l l y l a m i n e s . p . 1 5 1 - 1 6 7 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s ; P a r t I : C h e m i s t r y , . M b d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . R y d e r , N . S . 1 9 8 8 . M e c h a n i s m o f a c t i o n a n d b i o c h e m i c a l s e l e c t i v i t y o f a l l y l a m i n e a n t i m y c o t i c a g e n t s . p . 2 0 8 - 2 2 0 . I n A n t i f u n g a l D r u g s : P a r t I I I . B i o c h e m i c a l S t u d i e s a n d M e c h a n i s m o f A c t i o n o f A n t i f u n g a l A g e n t s , e d i t e d b y V . S t . G e o r g i e v . N e w Y o r k : N . Y . A c a d e m y o f S c i e n c e s . R y l e y , J . F . , W i l s o n , R . G . , G r a v e s t o c k , M . B . , a n d P o y s e r , J . P . 1 9 8 1 . E x p e r i m e n t a l a p p r o a c h e s t o a n t i f u n g a l t h e r a p y . A d v . P h a r m a c o l . C h e m o t h e r . 1 8 : 4 9 - 1 7 6 . S a b i n e , J . R . 1 9 7 7 . C h o l e s t e r o l . N e w Y o r k : M . D e k k e r . 4 8 9 p . S a w i c k a , M . , K a l i n o w s k a , M . , S k i e r s k i , J . , a n d L e w a n d o w s k i , W . 2 0 0 4 . A r e v i e w o f s e l e c t e d a n t i - t u r n o u r t h e r a p e u t i c a g e n t s a n d r e a s o n s f o r m u l t i d r u g 1 0 1 7 1 . 7 2 . 7 3 . 7 4 . 7 5 . 7 6 . 7 7 . r e s i s t a n c e o c c u r r e n c e . J . P h a r m . P h a r m a c o l . 5 6 : 1 0 6 7 - 1 0 8 1 . S c h e i n p f l u g , H . 1 9 8 8 . H i s t o r y o f D M I f u n g i c i d e s a n d m o n i t o r i n g f o r r e s i s t a n c e . p . 7 6 - 7 8 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N b r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . S c h e i n p f l u g , H . a n d K u c k , K . H . 1 9 8 7 . S t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t i n g p i p e r a z i n e , p y r i d i n e , p y r i m i d i n e , a n d a z o l e f u n g i c i d e s . p . 1 7 3 - 2 0 4 . I n M b d e r n S e l e c t i v e F u n g i c i d e s : P r o p e r t i e s , A p p l i c a t i o n s , a n d M e c h a n i s m s o f A c t i o n , e d i t e d b y H . L y r . E s s e x , E n g l a n d : L o n g m a n S c i e n t i f i c T e c h . S c h l u t e r , G . a n d S c h m i d t , U . 1 9 8 8 . T o x i c o l o g y o f a z o l e s . p . 1 8 5 - 2 0 9 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I : C h e m i s t r y , . M o d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . S c h u l z , U . a n d S c h e i n p f l u g , H . 1 9 8 8 . S t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t i n g f u n g i c i d e s : A n t i f u n g a l p r o p e r t i e s a n d a p p l i c a t i o n i n c e r e a l s . p . 2 1 1 — 2 6 1 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I I : S t e r o l S y n t h e s i s I n h i b i t o r s I n P l a n t P r o t e c t i o n , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . S c h u m a n n , G . L . , C l a r k , J . M . , D o h e r t y , J . J . , a n d C l a r k e , B . B . 2 0 0 0 . A p p l i c a t i o n o f D M I f u n g i c i d e s t o t u r f g r a s s w i t h t h r e e d e l i v e r y s y s t e m s . p . 1 5 0 - 1 6 3 . I n F a t e a n d M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s C h e m i c a l s , e d i t e d b y J . M . C l a r k a n d M . P . K e n n a . W a s h i n g t o n D . C . : A m e r i c a n C h e m i c a l S o c i e t y . S c h w i n n , F . J . 1 9 8 4 . E r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s : A n o v e r v i e w o f t h e i r h i s t o r y a n d c o n t r i b u t i o n t o m e d i c i n e a n d a g r i c u l t u r e . P e s t i c . S c i . 1 5 : 4 0 - 4 7 . S t a u b , T . 1 9 9 1 . F u n g i c i d e r e s i s t a n c e : P r a c t i c a l e x p e r i e n c e w i t h a n t i r e s i s t a n c e s t r a t e g i e s a n d t h e r o l e o f i n t e g r a t e d u s e . A n n l . R e v . P h y t o p a t h o l . 2 9 : 4 2 1 - 4 4 2 . 1 0 2 7 8 . 7 9 . 8 0 . 8 1 . 8 2 . 8 3 . 8 4 . 8 5 . 8 6 . 8 7 . S t a u b , T . a n d S o z z i , D . 1 9 8 4 . F u n g i c i d e r e s i s t a n c e : A c o n t i n u i n g c h a l l e n g e . P l a n t D i s . 6 8 : 1 0 2 6 - 1 0 3 1 . S t e f f e n s , W . a n d W i e n e c k e , J . 1 9 8 1 . B e h a v i o r a n d f a t e o f t h e C 1 4 - l a b e l l e d m i l d e w f u n g i c i d e f l u o t r i m a z o l e i n p l a n t a n d s o i l . Z . P f l a n z e n k r a n k h 8 8 : 3 4 3 - 3 5 4 . S t e r g i o p o u l o s , I . , Z w i e r s , L . H . , a n d D e W a a r d , M . A . 2 0 0 2 . S e c r e t i o n o f n a t u r a l a n d s y n t h e t i c t o x i c c o m p o u n d s f r o m f i l a m e n t o u s f u n g i b y m e m b r a n e t r a n s p o r t e r s o f t h e A T P - b i n d i n g c a s s e t t e a n d m a j o r f a c i l i t a t o r s u p e r f a m i l y . E u r . J . P l a n t P a t h o l . 1 0 8 : 7 1 9 - 7 3 4 . S t e r g i o p o u l o s , I . , v a n N i s t e l r o o y , J . G . M . , K e m a , G . H . J . , a n d D e W a a r d , M . A . 2 0 0 3 . M u l t i p l e m e c h a n i s m s a c c o u n t f o r v a r i a t i o n i n b a s e — l i n e s e n s i t i v i t y t o a z o l e f u n g i c i d e s i n f i e l d i s o l a t e s o f . M y c o s p h a e r e l l a g r a m i n i c o l a . P e s t M a n a g . S c i . 5 9 : 1 3 3 3 — 1 3 4 3 . S z k o l n i k , M . a n d G i l p a t r i c k , J . D . 1 9 6 9 . A p p a r e n t r e s i s t a n c e o f v e n t u r i a i n a e q u a l i s t o d o d i n e i n N e w Y o r k a p p l e o r c h a r d s . P l a n t D i s . R e p . 5 3 : 8 6 1 - 8 6 5 . v a n d e n B r u l e , S . , M u l l e r , A . , F l e m i n g , A . J . , a n d S m a r t , C . C . 2 0 0 2 . T h e A B C t r a n s p o r t e r S p T U R 2 c o n f e r s r e s i s t a n c e t o t h e a n t i f u n g a l d i t e r p e n e s c l a r e o l . P l a n t J . 3 0 : 6 4 9 — 6 6 2 . V a r g a s , J . M . 1 9 9 8 . M a n a g i n g r e s i s t a n c e : P a r t I . F u n g i c i d e s : T h e s t r a t e g y o f p r e v e n t i n g t u r f g r a s s - p a t h o g e n r e s i s t a n c e b y a l t e r n a t i n g f u n g i c i d e s i s i n e f f e c t i v e . G r o u n d s M a i n t e n a n c e , 3 3 , p . 1 8 - 2 4 . V a r g a s , J . M . , J r . 1 9 9 4 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 2 n d e d . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . 2 9 4 p . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 2 . T o r o t a t e o r n o t t o r o t a t e ? : S u p e r i n t e n d e n t s m a y n o t f u l l y u n d e r s t a n d t h e r a t i o n a l e f o r r o t a t i n g f u n g i c i d e s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , 7 0 ( 4 ) , p . 5 3 - 5 6 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 5 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 3 r d e d . H o b o k e n N J : W i l e y . 3 2 2 p . 1 0 3 8 8 . 8 9 . 9 0 . 9 1 . 9 2 . 9 3 . 9 4 . 9 5 . 9 6 . 9 7 . V a r g a s , J . M . , J r . a n d T u r g e o n , A . J . 2 0 0 4 . P o a a n n u a : P h y s i o l o g y , C u l t u r e , a n d C o n t r o l o f A n n u a l B l u e g r a s s . H o b o k e n N J : W i l e y . 1 6 5 p . V a r g a s , J . M . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 2 . D o l l a r s p o t r e s i s t a n c e t o D M I f u n g i c i d e s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , M a r c h , p . 5 0 - 5 4 . V i n c e l l i , P . 1 9 9 7 . M i x i n g f u n g i c i d e s c o n t r o l s d i s e a s e o n b e n t g r a s s g r e e n s : S o m e t a n k m i x e s a r e m o r e e f f e c t i v e t h a n o t h e r s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , 6 5 ( 9 ) , p . 4 9 - 5 5 . V i n c e l l i , P . 2 0 0 2 . N e w c a s e s o f D M I r e s i s t a n t d o l l a r s p o t . C o l l e g e o f A g r i c u l u t u r e , U n i v e r s i t y o f K e n t u c k y . K e n t u c k y P e s t N e w s / p n 0 2 0 6 0 3 2 7 M a y 2 0 0 4 . W a r e , G . W . 1 9 7 8 . T h e P e s t i c i d e B o o k . S a n F r a n c i s c o : W . H . F r e e m a n . 1 9 7 p . W a r e , G . W . 1 9 9 4 . T h e P e s t i c i d e B o o k . 4 t h e d . F r e s n o C A : T h o m s o n . 3 8 6 p . W a r e , G . W . 2 0 0 0 . T h e P e s t i c i d e B o o k . 5 t h e d . B a k e r s f i e l d C A : K o v a k B o o k s . 4 1 8 p . W e e t e , J . D . 1 9 8 9 . S t r u c t u r e a n d F u n c t i o n o f S t e r o l s i n F u n g i . A d v . L i p i d R e s . 2 3 : 1 1 5 - 1 6 7 . W o n g , F . 2 0 0 2 . N e w f u n g i c i d e s f o r C a l i f o r n i a t u r f , 2 0 0 2 - 2 0 0 4 . B e t t e r T u r f T h r o u g h A g r o n o m i c s , D e c . , p . 4 . W o r t h i n g t o n , P . A . 1 9 8 8 . C h e m i s t r y o f s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n h i b i t o r s : P i p e r a z i n e s , p y r i d i n e s , p y r i m i d i n e s , i m i d a z o l e s , 1 , 2 , 4 - t r i a z o l e s , m o r p h o l i n e s , p i p e r i d i n e s , a l l y l a m i n e s . p . 1 9 - 5 5 . I n S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s : P h a r m a c e u t i c a l a n d A g r o c h e m i c a l A s p e c t s : P a r t I : C h e m i s t r y , . M b d e o f A c t i o n , T o x i c o l o g y a n d G e n e r a l A s p e c t s o f S t e r o l B i o s y n t h e s i s I n h i b i t o r s , e d i t e d b y D . B e r g a n d M . P l e m p e l . N e w Y o r k : E l l i s H o r w o o d L T D a n d V C H . 1 0 4 l i l l l l l l l l fl L l l l l l l l l l j l l fl l l W i l l !w ; . 3 . . . . . . ( . 1 3 5 a . 4 I . . . 1 3 } i . . . . 9 3 . 4 . R } . . . . . ” m « B u K £ . . 3 . . 3 1 . . _ 1 . ? . . | . i . s ‘ . u 3 i s . , . 1 . . . ” . » . a . z ‘ n . x . . s n , . o . y . w " a . y . I : n m n u 2 . 1 4 " . f . . ‘ s 1 . i ‘ i l n ‘ a . s . . a l . . I . f u n g i ! a l t . v 7 _ . 3 . u 9 . " 1 . 1 w e N . a . n — . . . v u . . v 9 u 3 : h u . w 5 h u . u w i fi . t : n d 4 5 . . . . . V . . . . . : . 3 . . . . . 2 $ \ . r 3 5 “ . . . u T c r i . < . 5 . m . . . » . . . “ . . a w ~ 1 ; ; 0 \ ? . E W ? : u , . m é 1 4 . i V : m . . . A # 3 H . u ~ i . . i . V . . ( ; . . . { . 1 . . . , 3 . \ . . . w » w I w ; f i h n J a m - u . 9 : n g 1 0 0 9 ! . # 1 . v m . . . . a . . . . . . u : ¢ m u n - 9 0 . ! ! ! “ v 4 t h . a . . 3 . : i : . : i b : _ . T . . A H m m ” : r 3 . 1 3 . 3 . . . . : 1 5 . ‘ 9 . . n z a : . i . n ( 1 l i t . . . e s . . . . I ? . . 5 : 5 5 . . . . 1 . . . . . . - v fi a 2 ‘ 5 3 . r . ‘ 2 I : . . . u : 0 : P . : b u . . . 1 4 u , v - . . . 3 2 ; ; . . - V 2 . 7 0 , 1 : . 3 1 - . . . a m . . . 3 1 , . ’ v ! ; ’ 9 3 . 9 i . w . a “ . . . 3 % . . . . 1 0 0 6 9 + 1 / 3 7 5 4 0 b . - < - ‘ ’ L I B R A R I E S M I C H I G A N S T A T E U N I V E R S I T Y E A S T L A N S I N G , M I C I - I 4 8 8 2 4 - 1 0 4 8 P L A C E I N R E T U R N B O X t o r e m o v e t h i s c h e c k o u t f r o m y o u r r e c o r d . T O A V O I D F I N E S r e t u r n o n o r b e f o r e d a t e d u e . M A Y B E R E C A L L E D w i t h e a r l i e r d u e d a t e i f r e q u e s t e d . ' D A T E D U E D A T E D U E D A T E D U E J A N 1 7 2 6 0 7 2 / 0 5 c m T a c m a m . m 1 5 C H A P T E R 3 E F F E C T S O F R E P E A T E D T R E A T M E N T S O F D E M E T H Y L A T I O N - I N H I B I T O R ( D M I ) F U N G I C I D E S O N D M I - R E S I S T A N T P O P U L A T I O N S O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M 1 0 5 L I T E R A T U R E R E V I E W A p r e v a i l i n g t h e o r y f o r m a n a g i n g r e s i s t a n c e t o f u n g i c i d e s h a s b e e n p u t f o r t h b y t h e F u n g i c i d e R e s i s t a n c e A c t i o n C o m m i t t e e ( F R A C ) , a s s t a t e d b y B r e n t i n 1 9 9 5 ( 3 ) : “ D o n o t u s e t h e p r o d u c t i n i s o l a t i o n . A p p l y i t a s a m i x t u r e w i t h o n e o r m o r e f u n g i c i d e s o f a d i f f e r e n t t y p e , o r a s o n e c o m p o n e n t i n a r o t a t i o n o r a l t e r n a t i o n o f d i f f e r e n t f u n g i c i d e t r e a t m e n t s . " H o w e v e r , r e p o r t e d r e s e a r c h t h a t d i r e c t l y c o m p a r e s v a r i o u s c h e m o t o x i c a n t r e g i m e s a n d t h e i r e f f e c t s o n r e s i s t a n c e i s r a r e f o r a n y p a t h o s y s t e m ( 5 ) . T h e n u m b e r o f f i n d i n g s t h a t c o n t r a d i c t t h e t e n e t s a b o v e i n s o m e r e g a r d i s a p p r e c i a b l e . H u m a n S y s t e m s G u i d e l i n e s f o r t h e t r e a t m e n t o f b a c t e r i a l i n f e c t i o n s i n h u m a n s h a v e o f t e n i n v o l v e d t h e c o m b i n a t i o n , r o t a t i o n , o r a l t e r n a t i o n o f d r u g s ( 1 3 , 1 9 ) . S t u d i e s h a v e b e e n u s u a l l y p e r f o r m e d i n i n t e n s i v e - c a r e u n i t s a n d h a v e o f t e n b e e n u n c l e a r a s t o w h e t h e r r o t a t i n g h a s o c c u r r e d b e t w e e n c l a s s e s o r w i t h i n c l a s s e s o f a n t i b i o t i c s ; a n d i f w i t h i n , w h e t h e r o r n o t t h e d r u g s h a v e s i m i l a r o r d i f f e r e n t m o d e s o f a c t i o n ( 1 6 ) . N o n e w c l a s s e s o f d r u g s h a v e b e e n i n t r o d u c e d s i n c e t h e 1 9 6 0 s , o n l y m o r e p o w e r f u l v e r s i o n s o f t h e s a m e t y p e s o f d r u g s a l r e a d y i n e x i s t e n c e ( 1 ) . 1 0 6 D r u g r e c o m m e n d a t i o n s t y p i c a l l y f o l l o w t h e “ u n i f o r m t r e a t m e n t p o l i c y " , w h i c h m e a n s t h a t t h e l e a s t e x p e n s i v e c l a s s o f m e d i c a t i o n i s u s e d u n t i l i n c r e a s i n g r e s i s t a n c e a n d c o r r e s p o n d i n g l y i n c r e a s i n g d o s a g e s m a k e s a n o t h e r d r u g m o r e e c o n o m i c a l ( 2 2 ) . R e c o m m e n d a t i o n s a r e r e v i s e d a n d w h a t w a s t h e s e c o n d — m o s t e x p e n s i v e c l a s s o f m e d i c a t i o n s i s p r e s c r i b e d f o r n e w c a s e s . T h i s o c c u r s r e g a r d l e s s o f w h e t h e r o r n o t p a t i e n t s h a v e e v e r r e c e i v e d t h e e a r l i e r - p r e s c r i b e d d r u g a n d w h e t h e r o r n o t i t w o u l d s t i l l b e e f f e c t i v e f o r t h e m . R e p o r t s o f r e s i s t a n c e o f t e n c r e a t e n e w r e c o m m e n d a t i o n s f o r a n i n c r e a s i n g l y m o r e e x p e n s i v e d r u g c l a s s u n t i l t h e u s e o f t h e s e c o s t l y d r u g s i s c u r t a i l e d . T h i s r e d u c e s t h e i r s e l e c t i o n p r e s s u r e u p o n t h e p a t h o g e n , a n d t h e r e s i s t a n c e b u i l d — u p t o t h e m i s s l o w e d . O l d e r , l e s s e x p e n s i v e d r u g s m a y s t i l l h a v e u t i l i t y i f r e s i s t a n c e t o t h e m i s n o t w i d e s p r e a d . I n c o r p o r a t i o n o f m o r e t h a n o n e d r u g i n a t r e a t m e n t r e g i m e n t y p i c a l l y i n v o l v e s r o t a t i n g o r c y c l i n g d i f f e r e n t m e d i c a t i o n s o t h a t t h e d r u g s a r e a d m i n i s t e r e d s e q u e n t i a l l y ( 1 1 ) . T h e b e n e f i t s o f c y c l i n g d r u g s w e r e c o n t e s t e d i n 2 0 0 2 b y T o l t z i s e t a l . w h o e x a m i n e d t h e e f f e c t s o f s u c h o n 1 0 6 2 i n f a n t s ( 2 6 ) . N o d e t e c t a b l e e f f e c t s w e r e f o u n d o n t h e l o w e r i n g o f t h e r e s e r v o i r o f g r a m — n e g a t i v e b a c t e r i a . T h e y 1 0 7 d i s c o v e r e d a p r e p o n d e r a n c e o f 3 0 - d i f f e r e n t s p e c i e s h a v i n g M D R t h a t c o r r e l a t e d p o s i t i v e l y t o t h e r e s p e c t i v e d r u g s p r e s c r i b e d t o e a c h g r o u p o f p a t i e n t s . T h e a u t h o r s c o n c l u d e d b y s t a t i n g , “ i t i s p o s s i b l e t h a t t h e c o n c e p t o f a n t i b i o t i c r o t a t i o n i s i n t r i n s i c a l l y f l a w e d ” . T h e i r f i n d i n g s r e i n f o r c e d a r e p o r t b y B o n h o e f f e r , e t a l . w h o m a t h e m a t i c a l l y m o d e l e d p a t t e r n s o f a n t i b i o t i c u s e t o a p p r a i s e t h e i r p r o p e n s i t y t o d e l a y a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e ( 2 ) . R o t a t i n g d r u g s w a s i n f e r i o r t o t h o s e s a m e d r u g s w h e n p r e s c r i b e d a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n s o r r o t a t i o n s i n a l m o s t a l l s c e n a r i o s . A n i m a l S y s t e m s H u m a n i t a r i a n c o n c e r n s o f t e n l i m i t t h e d e p t h s o f d r u g - r e s p o n s e s t u d i e s , w h e r e a s a n i m a l e x p e r i m e n t s h a v e r e g u l a r l y o f f e r e d m o r e c o n c l u s i v e r e s u l t s . M a t h e w e t a 1 c o n d u c t e d t w o — r e p l i c a t e t r i a l s w i t h s w i n e i n w h i c h 4 8 w e a n e d p i g s i n e a c h r e p l i c a t e w e r e c h a l l e n g e d w i t h S a l m o n e l l a s e r o v a r T y p h i m u r i u m , a g r a m — n e g a t i v e b a c t e r i a ( 1 7 ) . T h e s u b j e c t s w e r e s e p a r a t e d b y g r o u p s i n t o n e w h o u s i n g a n d a d m i n i s t e r e d d i f f e r e n t t r e a t m e n t s n i n e d a y s a f t e r c h a l l e n g e f o r 1 4 d a y s : a p r a m y c i n a d m i n i s t e r e d a t a c o n s t a n t l e v e l ; g r a d i e n t i n c r e a s e s o f t h r e e d o s a g e s o f a p r a m y c i n a t n e a r l y e q u a l i n t e r v a l s ; p u l s e t r e a t m e n t o f 1 0 8 a p r a m y c i n f o r t h r e e d a y s t h e n t h r e e d a y s w i t h o u t t h e d r u g ; r o t a t i o n o f d i s s i m i l a r a n t i b i o t i c s w i t h a p r a m y c i n , s u f a m e t h a z i n e , a n d c a r b a d o x ; r o t a t i o n o f s i m i l a r m i c r o b i a l s w i t h a p r a m y c i n , g e n t a m i c i n a n d n e o m y c i n a t n e a r l y e q u a l i n t e r v a l s ; a n d a c o n t r o l . F e c a l s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m e a c h p i g a t t h r e e , s e v e n , 1 0 , 1 4 , a n d 2 8 d a y s a f t e r a d v e n t o f a n t i b i o t i c t r e a t m e n t . I s o l a t e s o f t h e c h a l l e n g e o r g a n i s m a n d n o n — p a t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i , a l s o a g r a m — n e g a t i v e b a c t e r i u m , w e r e i s o l a t e d i n t o p u r e c u l t u r e s . S u b s e q u e n t r e s i s t a n c e s c r e e n i n g w i t h a l l o f t h e a n t i b i o t i c s a d m i n i s t e r e d s h o w e d t h a t t h e p u l s e t r e a t m e n t h a d E . c o l i s e n s i t i v i t i e s t h a t w e r e n o t d i f f e r e n t t h a n t h e c o n t r o l ( P S 0 . 0 5 ) a n d h a d t h e l e a s t r e s i s t a n c e t o e a c h o f t h e a n t i b i o t i c s c r e e n s e x c e p t f o r c a r b a d o x f o r w h i c h n o d i f f e r e n c e s w e r e f o u n d . T h e r o t a t i o n a l t r e a t m e n t w i t h s i m i l a r a n t i b i o t i c s g e n e r a l l y r e s u l t e d i n t h e g r e a t e s t r e s i s t a n c e l e v e l s t o a l l t h r e e a n t i b i o t i c s c o m p r i s i n g t h e r e g i m e n , f o l l o w e d i n o r d e r b y a p r a m y c i n a l o n e , r o t a t i o n o f d i s s i m i l a r a n t i b i o t i c s , a n d t h e g r a d i e n t . R e s i s t a n c e t o a l l t h r e e o f t h e d r u g s u s e d i n t h e s i m i l a r - r o t a t i o n t r e a t m e n t a b o v e d e m o n s t r a t e d c r o s s - r e s i s t a n c e w i t h i n a n a n t i b i o t i c c l a s s . I t w a s n o t s t a t e d w h e t h e r o r n o t t h e s e s i m i l a r d r u g s 1 0 9 s h a r e d a c o m m o n m o d e o f a c t i o n . T h e s e r e s u l t s a g r e e d w i t h a n e a r l i e r r e p o r t i n 1 9 9 9 b y M a t h e w e t a l . ( 1 8 ) . I n t h e 2 0 0 2 s t u d y , M a t h e w e t a l . p o o l e d d a t a f o r a l l s a m p l i n g d a y s s h o w e d t h e g r e a t e s t E . c o l i r e s i s t a n c e t o s u l f a m e t h a z i n e w i t h t h e t w o r o t a t i o n a l t r e a t m e n t s , e v e n t h o u g h t h e o n e w i t h s i m i l a r a n t i b i o t i c s d i d n o t i n c l u d e t h e d i s s i m i l a r s u l f a m e t h a z i n e ( 1 7 ) . N o e x p l a n a t i o n f o r t h i s w a s o f f e r e d . T r e a t m e n t d i f f e r e n c e s w i t h r e g a r d t o a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e b y S a l m o n e l l a s e r o v a r T y p h i m u r i u m w e r e n o t s i g n i f i c a n t . T h i s d i f f e r e d f r o m a n e a r l i e r s t u d y w h e r e t h e p i g s w e r e n o t m o v e d t o n e w h o u s i n g ( 7 ) . P l a n t S y s t e m s C u l b r e a t h e t a l . r e p o r t e d n o d e l a y i n t h e i n c r e a s e i n t h e p e r c e n t a g e o f b e n o m y l — r e s i s t a n t c o n i d i a o f C e r c o s p o r a a r a c h i d i c o l a ( S . H o r i ) o r C e r c o s p o r i d i u m p e r s o n a t u m , t h e c a u s a l o r g a n i s m s o f l a t e - l e a f s p o t o f p e a n u t , a m o n g t r e a t m e n t s c o n t a i n i n g b e n o m y l , e i t h e r a l o n e o r i n c o m b i n a t i o n o r a l t e r n a t i o n w i t h c h l o r o t h a l o n i l ( 5 ) . P e r n e z n y e t a l . f o u n d n o d i f f e r e n c e i n p e r c e n t — l e a f d e f o l i a t i o n w i t h t o m a t o t a r g e t s p o t , c a u s e d b y C o r y n e s p o r a c a s s i i c o l a ( B e r k . & C u r t . ) W e i . , b e t w e e n t h e u n t r e a t e d c o n t r o l a n d c h l o r o t h a l o n i l r o t a t e d w i t h a z o x y s t r o b i n e v e r y s e v e n d a y s ( 2 1 ) . A c c o r d i n g t o N o r t h o v e r a n d M a t t e o n i , 1 1 0 c a p t a n a p p l i e d i n c o m b i n a t i o n w i t h b e n o m y l o r i p r o d i o n e f o r o n e y e a r f a i l e d t o m i t i g a t e t h e r e s i s t a n c e i n c r e a s e t o e i t h e r b e n o m y l o r i p r o d i o n e b y B o t r y t i s c i n e r e a ( t h e c a u s e o f n o b l e r o t i n g r a p e s ) ( 2 0 ) . V a l i a n d M o o r m a n r e p o r t e d t h a t m i x t u r e s o f v i n c l o z o l i n a n d c h l o r o t h a l o n i l d i d n o t d e l a y f r e q u e n c y a m p l i f i c a t i o n o f v i n c l o z o l i n - r e s i s t a n t c o n i d i a i n B . c i n e r e a o n c u t f l o w e r s g r o w n i n g r e e n h o u s e s ( 2 7 ) . I n a n M . S . t h e s i s , L a r s o n a s s e s s e d c h a n g e s i n f u n g i c i d e s e n s i t i v i t i e s o f C e r c o s p o r a b e t i c o l a S a c c . , t h e c a u s a l o r g a n i s m o f C e r c o s p o r a l e a f s p o t o f s u g a r b e e t , t o t h r e e — f u n g i c i d e c l a s s e s i n a t h r e e - y e a r f i e l d — s t u d y ( 2 0 0 1 - 3 ) w i t h s i x b l o c k s ( 1 5 ) . A n a s s o r t m e n t o f f u n g i c i d e r e g i m e s w e r e a p p l i e d i n l 4 - d a y i n t e r v a l s b e g i n n i n g i n J u l y o f e a c h y e a r . I s o l a t e s w e r e t a k e n e a c h y e a r f r o m a h a r v e s t e d s u g a r - b e e t v a r i e t y s u s c e p t i b l e t o t h e p a t h o g e n . T h e m a j o r i t y o f i s o l a t e s r e s i s t a n t t o o n e o r m o r e o f t h e b e n z i m i d a z o l e s , D M I s , a n d Q o I s c a m e f r o m t h o s e t r e a t m e n t s h a v i n g t h r e e o r f o u r f u n g i c i d e s a p p l i e d i n a r o t a t i o n . T r e a t m e n t s w i t h t h i o p h a n a t e — m e t h y l w e r e c e a s e d a f t e r 2 0 0 1 d u e t o t h e r a p i d o n s e t o f b e n z i m i d a z o l e r e s i s t a n c e . S i g n i f i c a n t i n c r e a s e s ( P S 0 . 0 5 ) t o e a c h o f t h e t h r e e c l a s s e s o c c u r r e d i n 2 0 0 2 w i t h t h o s e t r e a t m e n t s c o n s i s t i n g o f t h r e e - a n d f o u r - f u n g i c i d e r o t a t i o n s c o m p a r e d 1 1 1 t o t h o s e t r e a t m e n t s h a v i n g a s i n g l e f u n g i c i d e o r a t w o — f u n g i c i d e a l t e r n a t i o n . T h e h i g h e s t r e s i s t a n c e t o a l l t h r e e c l a s s e s o c c u r r e d w i t h a t h r e e — f u n g i c i d e r o t a t i o n o f t e t r a c o n a z o l e ( D M I ) , t r i f l o x y s t r o b i n ( Q o I ) , t r i p h e n y l t i n h y d r o x i d e ( a n o r g a n o - m e t a l c o n t a c t f u n g i c i d e ) , a n d t r i f l o x y s t r o b i n . T u r f S y s t e m s T h e s e c o n v e n t i o n a l c o n c e p t s t h a t f u n g i c i d e r e s i s t a n c e c a n b e p r e v e n t e d o r d e l a y e d b y a p p l y i n g c o n t a c t a n d s y s t e m i c f u n g i c i d e s e i t h e r i n c o m b i n a t i o n o r b y a l t e r n a t i n g t h e m a r e e c h o e d b y m a n y t u r f g r a s s p a t h o l o g i s t s ( 4 , 6 , 2 5 ) d e s p i t e a l a c k o f e v i d e n c e ( 2 4 , 3 0 , 3 1 ) . H o w e v e r , V a r g a s h a s c o n t e n d e d t h a t s u c h p r a c t i c e s n e v e r p r e v e n t r e s i s t a n c e , a n d i t i s o n l y d e l a y e d w h e n a s y s t e m i c f u n g i c i d e i s r o t a t e d w i t h a c o n t a c t f u n g i c i d e ( 2 8 , 3 0 ) . F u r t h e r m o r e , h e h a s a s s e r t e d t h a t c o m b i n i n g o r a l t e r n a t i n g t w o o r m o r e c l a s s e s o f f u n g i c i d e s r e s u l t s i n a p r e p o n d e r a n c e o f m u l t i r e s i s t a n t s t r a i n s ( 2 9 , 3 0 ) . S a n d e r s a n d G i l b r i d e a p p l i e d b e n o m y l a n d c h l o r o t h a l o n i l e a c h a l o n e , i n a l t e r n a t i o n , o r i n c o m b i n a t i o n a t 1 4 — d a y i n t e r v a l s t o a p o p u l a t i o n o f R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m t h a t w a s h i g h l y b e n z i m i d a z o l e t o l e r a n t ( 2 3 ) . N i n e t y - f o u r p e r c e n t o f t h e 4 0 5 2 i s o l a t e s r e c o v e r e d d u r i n g t h e o n e — y e a r 1 1 2 e x p e r i m e n t w e r e r e s i s t a n t t o b e n o m y l r e g a r d l e s s o f f u n g i c i d e r e g i m e . I N V E S T I G A T I O N O F R E P E A T E D F U N G I C I D E A P P L I C A T I O N S T O D M I - R E S I S T A N T R . F L O C C O S U M L o c h m o o r C l u b i n G r o s s e P o i n t , M i c h i g a n i s o n e s i t e t h a t h a s D M I — r e s i s t a n t d o l l a r s p o t ( 1 0 ) , a n d h a s b e e n t h e s i t e o f e x t e n s i v e f u n g i c i d e — r e s e a r c h t r i a l s ( 9 ) . T h e s t u d y p r e s e n t e d h e r e i n c l u d e d a v a r i e t y o f f u n g i c i d e s a p p l i e d a l o n e , i n d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s , a n d i n a l t e r n a t i o n w i t h o n e a n o t h e r . A w i d e r a n g e o f r a t e s a t v a r i o u s a p p l i c a t i o n i n t e r v a l s w a s e v a l u a t e d . T h e o b j e c t i v e o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o i d e n t i f y f u n g i c i d e s t r a t e g i e s t h a t w e r e e f f e c t i v e i n m a n a g i n g d o l l a r s p o t w h e r e D M I — r e s i s t a n t s t r a i n s d o m i n a t e t h e R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n . E x p e r i m e n t a l A r e a a n d A g r o n o m i c P r a c t i c e s T h e e x p e r i m e n t a l a r e a w a s l o c a t e d o n t h e f i f t e e n t h f a i r w a y o f t h e g o l f c o u r s e a t L o c h m o o r C l u b . T h e t u r f c o n t a i n e d a m i x t u r e o f c r e e p i n g b e n t g r a s s ( A g r o s t i s s t o l o n i f e r a L . ) a n d a n n u a l b l u e g r a s s ( P o a a n n u a L . ) . T h e m o w i n g h e i g h t w a s 1 3 m m w i t h c l i p p i n g s r e m o v e d ; t h e f r e q u e n c y w a s t w o t o t h r e e t i m e s w e e k l y d u r i n g t h e g r o w i n g 1 1 3 s e a s o n . O t h e r c u l t u r a l p r a c t i c e s w e r e t h e s a m e a s t h o s e u s e d i n t h e r e s t o f t h e f a i r w a y e x c e p t t h a t n o f u n g i c i d e s w e r e u s e d e x c e p t f o r t h o s e a p p l i e d a s p a r t o f t h e e x p e r i m e n t . T h e p l o t s w e r e a r r a n g e d i n a r a n d o m i z e d - c o m p l e t e — b l o c k d e s i g n w i t h t h r e e b l o c k s . E a c h p l o t m e a s u r e d 1 . 8 m b y 1 . 8 m ( 3 . 4 m 2 ) . S a m p l e C o l l e c t i o n a n d D a t e s o f S a m p l i n g A n n u a l t r e a t m e n t s b e g a n e a c h y e a r d u r i n g J u l y a n d t h e f i r s t y e a r o f t r e a t m e n t w a s 1 9 9 1 . D i s e a s e d — t i s s u e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m e a c h p l o t u s i n g a 2 5 - c m - d i a m e t e r s o i l p r o b e . T h e f i r s t s a m p l i n g t o o k p l a c e i n J u l y 1 9 9 2 a f t e r d o l l a r s p o t b e c a m e a c t i v e , b u t b e f o r e a n n u a l - t r e a t m e n t i n i t i a t i o n . T h e s e c o n d c o l l e c t i o n o c c u r r e d i n O c t o b e r 1 9 9 2 w h e n t h e f u n g i c i d a l s u p p r e s s i o n h a d d i s s i p a t e d , a n d t h e d i s e a s e w a s r e g a i n i n g a c t i v i t y . A d d i t i o n a l c o l l e c t i o n s w e r e m a d e i n J u l y 1 9 9 3 , O c t o b e r 1 9 9 3 , a n d J u l y 1 9 9 4 . C o l l e c t i n g t e n s a m p l e s f r o m e a c h p l o t w a s t h e g o a l a t e a c h s a m p l i n g t i m e , b u t t h i s w a s n o t a l w a y s a c h i e v e d , I n t h i s c a s e , t h e n u m b e r o f s a m p l e s a p p r o x i m a t e d t h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s . T h e s a m p l e s w e r e s t o r e d i n a f r e e z e r a n d l a t e r t h a w e d f o r l a b a n a l y s i s o f t h e p o p u l a t i o n s e n s i t i v i t y t o a D M I f u n g i c i d e . T h e l a b - 1 1 4 a n a l y s i s f o l l o w e d t h e s a m e m e t h o d o l o g y a s d e s c r i b e d i n C h a p t e r 2 . T r e a t m e n t s F u n g i c i d e p r o d u c t s u s e d i n t h i s e x p e r i m e n t w e r e t h o s e w i d e l y u s e d t o c o n t r o l s p o t . B a y l e t o n 2 5 [ a c t i v e i n g r e d i e n t ( A I ) t r i a d i m e f o n ] w a s s u p p l i e d b y B a y e r C o r p o r a t i o n S p e c i a l t y P r o d u c t s l o c a t e d i n K a n s a s C i t y , M i s s o u r i . R u b i g a n A S ( f e n a r i m o l ) w a s p r o v i d e d b y D o w E l a n c o i n I n d i a n a p o l i s , I n d i a n a . B a n n e r ( p r o p i c o n a z o l e ) c a m e c o u r t e s y o f C i b a C r o p P r o t e c t i o n ( G r e e n s b o r o , N o r t h C a r o l i n a ) . C h i p c o 2 6 0 1 9 ( i p r o d i o n e ) w a s s u p p l i e d b y R h o n e — P o u l e n c h e a d q u a r t e d i n R e s e a r c h T r i a n g l e , N o r t h C a r o l i n a . D a c o n i l 2 7 8 7 F l o w a b l e ( c h l o r o t h a l o n i l ) w a s p r o v i d e d b y I S K B i o s c i e n c e s i n M e n t o r , O h i o . T r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , a n d p r o p i c o n a z o l e a r e D M I f u n g i c i d e s w i t h w h i c h m u l t i r e s i s t a n c e h a s b e e n s h o w n ( 1 0 , 1 2 , 1 4 ) . I p r o d i o n e i s a d i c a r b o x i m i d e f u n g i c i d e a n d c h l o r o t h a l o n i l i s a m u l t i s i t e ( M S ) , o r c o n t a c t , f u n g i c i d e . T h e f u n g i c i d e t r e a t m e n t s , r a t e s , a n d i n t e r v a l s f o r e a c h t r e a t m e n t a r e s h o w n i n T a b l e 3 . 1 . T h e t r e a t m e n t s r e f l e c t d i f f e r e n t f u n g i c i d e s t r a t e g i e s f o r m a n a g i n g d o l l a r — s p o t 1 1 5 r e s i s t a n c e . S o m e t r e a t m e n t s w e r e a n a v e r a g e e f f e c t t h u s r e f l e c t i n g a v a r i e t y o f p r o d u c t s . S t a t i s t i c a l A n a l y s i s . T r e a t m e n t c o m p a r i s o n s a t e a c h o b s e r v a t i o n w e r e m a d e u s i n g a n a l y s i s o f v a r i a n c e . S u b s e q u e n t s t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s b a s e d o n a l i n e a r — m i x e d m o d e l s i m i l a r t o a u n i v a r i a t e r e p e a t e d — m e a s u r e s a n a l y s i s i n w h i c h c o r r e l a t i o n s a m o n g m e a s u r e m e n t s i n t i m e w e r e s u b j e c t e d t o m o d e l i n g . T h e b e s t f i t w a s o b t a i n e d w i t h a n u n s t r u c t u r e d c o r r e l a t i o n m o d e l o f o r d e r t w o , s i n c e m e a s u r e m e n t s m o r e t h a n t w o s a m p l i n g t i m e s a p a r t w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y c o r r e l a t e d . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s w e r e a v e r a g e d f o r e a c h g r o u p . S a m p l e s w e r e n o t t a k e n f r o m T r e a t m e n t F i v e d u r i n g t h e f i r s t o b s e r v a t i o n p e r i o d s i n c e v e r y f e w d o l l a r s p o t s w e r e p r e s e n t . V a l u e s f o r t h e b l o c k s a s s o c i a t e d w i t h t h i s t r e a t m e n t a n d t i m e w e r e c a l c u l a t e d b y a v e r a g i n g t h e v a l u e s o f t h e r e s p e c t i v e b l o c k s f o r a l l o t h e r t r e a t m e n t s a t t h a t t i m e . N o d o l l a r s p o t w a s o b s e r v e d w i t h T r e a t m e n t T h r e e a t t h e t w o f a l l c o l l e c t i o n s . V a l u e s f o r e a c h b l o c k f o r t h i s t r e a t m e n t w e r e t h e a v e r a g e v a l u e s o f t h e r e s p e c t i v e p r e v i o u s a n d s u b s e q u e n t b l o c k s f o r t h a t p a r t i c u l a r t r e a t m e n t a n d t i m e . O t h e r m i s s i n g 1 1 6 d a t a p o i n t s w e r e d e r i v e d u s i n g t h e a v e r a g e o f t h e i r n e a r e s t n e i g h b o r s . R e s u l t s T h e t r e a t m e n t m e a n s f o r t h e p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h m e a s u r e m e n t s a t t h e f i v e o b s e r v a t i o n s a r e s h o w n i n T a b l e 3 . 2 . M e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s w i t h t h e D M I - A l o n e , D M I + N o n - D M I , a n d t h e C o n t a c t T r e a t m e n t s w e r e g r e a t e r a t e a c h s u b s e q u e n t o b s e r v a t i o n . V a l u e s f o r t h e D M I - A l o n e T r e a t m e n t a n d t h e N o n — D M I T r e a t m e n t i n c r e a s e d a p p r o x i m a t e l y 5 5 . 3 % a n d 5 5 % r e s p e c t i v e l y a t t h e l a s t o b s e r v a t i o n o n 2 5 J u l y 1 9 9 4 c o m p a r e d t o t h e f i r s t o b s e r v a t i o n o n 1 3 J u l y 1 9 9 2 . A l i k e c o m p a r i s o n w i t h t h e C o n t r o l T r e a t m e n t s h o w e d a n i n c r e a s e o f 3 0 . 3 % . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s w i t h t h e t r e a t m e n t h a v i n g a D M I a l t e r n a t i n g w i t h n o n - D M I w e r e g r e a t e r a t t h e O c t o b e r d a t e s c o m p a r e d t o t h e o n e s t a k e n i n t h e p r e v i o u s s u m m e r s . H o w e v e r , t h e m e a s u r e m e n t s t a k e n i n J u l y o f 1 9 9 3 a n d 1 9 9 4 h a d m e a n s t h a t w e r e l e s s t h a n t h o s e o f e a c h p r e v i o u s O c t o b e r . T h e m e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e a t t h e l a s t o b s e r v a t i o n w a s 3 0 . 3 % g r e a t e r t h a n t h e m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e a t t h e f i r s t o b s e r v a t i o n . 1 1 7 T h e d i c a r b o x i m i d e t r e a t m e n t h a d m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s t h a t w e r e g r e a t e r a t t h e e n d o f t h e f i r s t s e a s o n o f t r e a t m e n t ( O c t o b e r 1 9 9 2 ) t h a n a t t h e b e g i n n i n g . T h o s e m e a n s t h e n d e c r e a s e d s l i g h t l y a t e a c h s u c c e s s i v e o b s e r v a t i o n . A c o m p a r i s o n b e t w e e n m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s a t t h e l a s t o b s e r v a t i o n a n d t h e f i r s t o b s e r v a t i o n s h o w e d a n 1 1 . 5 % d i f f e r e n c e b e t w e e n t h o s e t w o t i m e p o i n t s . M e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s f o r t h e c o n t r o l t r e a t m e n t i n c r e a s e d s l i g h t l y b e t w e e n t h e J u l y a n d O c t o b e r 1 9 9 2 d a t e s . I n J u l y 1 9 9 3 , t h e y w e r e a p p r o x i m a t e l y t h e s a m e a s t h e p r e v i o u s s u m m e r . H o w e v e r , t h e m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s i n c r e a s e d d r a m a t i c a l l y a t e a c h o f t h e t w o s u c c e s s i v e o b s e r v a t i o n s . T h e m e a n — p e r c e n t — r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e a t t h e f i n a l o b s e r v a t i o n w a s 3 9 . 7 % g r e a t e r t h a n t h a t a t t h e f i r s t o b s e r v a t i o n . A n a l y s i s o f v a r i a n c e f o r e a c h o b s e r v a t i o n d e t e c t e d s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s a m o n g t r e a t m e n t s o n t h e s e c o n d o b s e r v a t i o n ( P S 0 . 0 2 2 ) a n d a t t h e f o u r t h o b s e r v a t i o n ( P S 0 . 0 1 9 ) a s s h o w n i n T a b l e 3 . 2 . T h e s t a t i s t i c a l r a n k i n g s a n d g r o u p i n g s o f t r e a t m e n t s d i f f e r e d a t t h e s e t w o t i m e p o i n t s . T r e a t m e n t e f f e c t w a s n o t s i g n i f i c a n t a t a n y o t h e r o b s e r v a t i o n ( P S 0 . 0 5 ) . 1 1 8 T h e d a t a w e r e p o o l e d o v e r t r e a t m e n t s , a n d t h e r e s u l t i n g P — v a l u e s f o r t i m e t r e n d s f o r l i n e a r , q u a d r a t i c , c u b i c , a n d q u a r t i c e f f e c t s w e r e 0 . 0 0 0 1 , 0 . 1 4 1 0 , 0 . 0 0 0 5 , a n d 0 . 0 0 0 3 r e s p e c t i v e l y . T h i s i n d i c a t e s s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n . T h e r e f o r e , l i n e a r t r e n d s o v e r t i m e w e r e e x a m i n e d s e p a r a t e l y f o r e a c h t r e a t m e n t . T h e t r e n d o f t h e t r e a t m e n t - t i m e i n t e r a c t i o n w a s n o t s i g n i f i c a n t a t a n a l p h a l e v e l o f 0 . 0 5 . T h e e s t i m a t e d s l o p e s o f l i n e a r t r e n d s f o r e a c h t r e a t m e n t , w i t h t i m e m e a s u r e d i n t e r m s o f m o n t h s s i n c e 1 5 J u l y 1 9 9 2 , a r e s h o w n i n T a b l e 3 . 2 a l o n g w i t h t h e P — v a l u e s . T h e e s t i m a t e d l i n e a r t r e n d s b y t r e a t m e n t a r e a l s o d e p i c t e d i n F i g u r e 3 . 2 . A l l t r e n d s w e r e s i g n i f i c a n t e x c e p t f o r d i c a r b o x i m i d e a n d c o n t r o l , w h i c h e x p l a i n s t h e l a c k o f a l i n e a r t r e a t m e n t - t i m e i n t e r a c t i o n w h e n a l l s i x t r e a t m e n t s w e r e c o m b i n e d . D i s c u s s i o n T h e c o n t i n u e d u s e o f D M I s i n a n y s t r a t e g y r e s u l t e d i n s l o p e s t h a t i n d i c a t e d a n i n c r e a s e i n f u n g i c i d e r e s i s t a n c e t o D M I s . T h e s e s l o p e s s i g n i f i e d t h a t r e s i s t a n c e a p p e a r e d t o i n c r e a s e a t t h e g r e a t e s t r a t e w h e n a D M I w a s u s e d a l o n e , f o l l o w e d i n o r d e r b y a D M I u s e d w i t h a n o n - D M I a n d a D M I u s e d i n a l t e r n a t i o n w i t h a n o n — D M I . T h e i n c l u s i o n 1 1 9 o f a D M I i n a n y f u n g i c i d e r e g i m e n t w o u l d n o t b e a p r u d e n t s t r a t e g y t o d e l a y o r r e d u c e t h e r e s i s t a n c e o f R . f l o c c o s u m t o D M I f u n g i c i d e s . T h e u s e o f a d i c a r b o x i m i d e a l o n e a l s o s h o w e d v i a b i l i t y a s a s t r a t e g y f o r m a n a g i n g D M I — f u n g i c i d e r e s i s t a n c e . I p r o d i o n e u s e d i d n o t s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e D M I r e s i s t a n c e o v e r t h e t h r e e - y e a r p e r i o d . T h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y s h o w e d n o t h i n g s i g n i f i c a n t t o c o n t r a d i c t t h e t h e o r y t h a t t h e M S — f u n g i c i d e c h l o r o t h a l o n i l a p p l i e d a l o n e a t a d e q u a t e r a t e s a t t i m e l y i n t e r v a l s i s a n e f f e c t i v e s t r a t e g y t o p r e v e n t a n i n c r e a s e i n R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o D M I f u n g i c i d e s . H o w e v e r , t h i s p r a c t i c e i s c o s t l y a s d i s c u s s e d i n C h a p t e r 4 . T h i s e x p e r i m e n t w a s c o n f o u n d e d b y t h e s m a l l s i z e o f t h e p l o t s a n d t h e f a c t t h a t t h e r e w e r e n o b u f f e r s t r i p s b e t w e e n p l o t s . M i g r a t i o n o f m y c e l i u m f r o m D M I — t r e a t e d p l o t s i n t o n o n — D M I - t r e a t e d p l o t s o c c u r r e d a s e v i d e n c e d b y t h e f a c t t h a t t h e s l o p e o f t h e c o n t a c t t r e a t m e n t a l s o w a s u p w a r d a n d s i g n i f i c a n t . T h e s e e v e n t s t o o k p l a c e e v e n t h o u g h c l i p p i n g s w e r e r e m o v e d d u r i n g m o w i n g . A d d i t i o n a l s t u d i e s a r e n e e d e d w i t h l a r g e f i e l d p l o t s t h a t h a v e b u f f e r s t r i p s b e t w e e n s a m p l i n g a r e a s . 1 2 0 T a b l e 3 . 1 . T r e a t m e n t s w i t h f u n g i c i d e s , r a t e s , a n d i n t e r v a l s . T r e a t m e n t . . g A I I n t e r v a l N O N a m e F u n g l C l d e 1 0 0 m ' 2 ( d a y s ) 1 D M I A l o n e t r i a d i m e f o n 7 . 6 2 1 D M I A l o n e f e n a r i m o l 6 . 7 2 1 D M I A l o n e p r o p i c o n a z o l e 4 . 2 2 1 2 D l I a n O X — i p r o d i o n e 1 5 . 3 2 1 i m i d e 3 C o n t a c t c h l o r o t h a l o n i l 4 . 2 1 0 o r 1 1 4 D M I + t r i a d i m e f o n + 4 . 2 + 2 1 N o n - D M I i p r o d i o n e 1 5 . 3 D M I + t r i a d i m e f o n + 7 . 6 + 2 1 N o n — D M I c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 5 D M I a l t a t r i a d i m e f o n a l t 7 . 6 a l t 2 1 N o n - D M I i p r o d i o n e 1 5 . 3 D M I a l t t r i a d i m e f o n a l t 7 . 6 a l t N o n - D M I c h l o r o t h a l o n i l 9 5 . 5 2 1 a l t 1 0 6 C o n t r o l a A l t e r n a t i n g 1 2 1 t a t e s w e f s % n % % y % % % a k 3 0 6 3 5 7 e r e c c . . . . . . r o 3 r 5 5 0 1 9 c l 3 3 1 3 e 5 5 b t P n I s e r e i r f y h t o 4 l 4 7 7 0 3 0 u 8 3 S 3 0 5 1 e v . . d 5 e e c 0 t n . n i 0 u s o S c t n P e e t 9 r t m J . . . . . . e t a h t d 9 1 3 4 9 8 5 1 N a w 5 4 3 3 3 4 4 e r i e 2 w r a s p t m ' s e r t h t o t p o r s a r A A A % l h . . B . A 1 r u c m 3 y o t n t 9 3 0 0 7 3 9 a c o 9 7 3 1 9 8 9 O . . . 1 . . . a c a l i e l t o r m d a o p r n o e c e b e i r t t 8 a v 1 x r i e 1 0 1 7 7 2 w f 4 4 4 3 3 3 e t f a t h n y t e r r s e r s e b y ' f o l 3 2 f 7 0 0 7 3 v f o f o 9 u 8 5 5 2 0 4 J . . . . . . l 9 s a 1 9 4 5 7 7 9 2 3 3 3 2 3 3 e n 1 u i l f a v f r Z o C e C C h b B B B B A A A e i c d s n k i c y s o l l t n b n o a i c t t i n a f e v i u r q n t e o 2 . A . . e e g w s t . 9 s s i o a c 9 Y r e O 1 8 5 2 7 7 0 g r 7 3 4 4 7 4 — c 2 . . . . . . b b s o u s t t o a d n e 1 n h n 5 3 8 3 8 2 v i i t t a n 3 3 3 3 3 3 t a e t s a r ’ a u y x o r l e l 3 6 7 0 3 s i e 2 3 e c 9 4 u 4 4 2 5 4 t v t S r r 9 . J t . n e . . . . - e 1 9 8 9 9 1 9 N t 2 p 2 3 2 3 2 2 e r e m p l t n a 1 e h c t r i e w p - s n n a o ) t c a I t M n e e . e h m d r t a e t s t f n e e o u v h o i t e c f g a y e r r r b e o i I e D e e e M t c h v d w M - d . i D n ( t a e n m - o o w s e t o a v r . t e n o n l e i f o h 2 e . s 3 b o i n n o t x t e o n t i o l a l m l s b o v a + t a i r r o p t l s o e f f g o r a a s e r a t n t a r l n l e e e I c n I I l b v s a b i T o f r M M M u i o T D D D D C M e a a l v e e o A M M d x y z 1 2 2 1 : 3 0 0 . 0 5 3 . 5 6 N S 4 . 7 8 T a b l e 3 . 3 . S l o p e s o f l i n e a r t r e n d s o f t r e a t m e n t s o v e r t i m e a n d a s s o c i a t e d P — v a l u e s . T r e a t m e n t S l o p e e s t i m a t e P - v a l u e D M I a l o n e 0 . 6 4 5 3 8 0 0 . 0 0 0 1 D M I + n o n - D M I 0 . 5 5 4 9 6 9 0 . 0 0 0 1 C o n t a c t ( M S ) 0 . 4 4 6 6 1 8 0 . 0 0 0 7 D M I a l t n o n - D M I 0 . 3 2 0 5 1 0 0 . 0 0 0 6 D i c a r b o x i m i d e 0 . 1 4 0 0 3 4 0 . 2 7 9 2 C o n t r o l 0 . 1 2 0 6 0 0 0 . 3 5 0 9 4 5 . 0 - D M I + N o n — D M I g D M I A l o n e g 4 2 . 5 . 8 C o n t a c t ( 9 m 4 0 . 0 . > D M I a l t N o n - D M I - H 3 . C o n t r o l H 3 7 . 5 . w ‘ 1 ‘ g 3 5 . 0 . D i c a r b o x i m i d e 8 0 $ 3 2 . 5 . C . m g 3 0 . 0 . 2 7 . 5 J u l y 9 2 O c t 9 2 J u l y 9 3 O c t 9 3 J u l y 9 4 F i g u r e 3 . 1 . M e a n — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h v a l u e s w i t h s i x t r e a t m e n t s a t f i v e o b s e r v a t i o n d a t e s [ f r o m G i l s t r a p e t a l . ( 8 ) ] . 1 2 4 4 5 . 0 p D M I A l o n e ' 5 4 2 . 5 . . D M I + N o n - D M I 3 § _ C o n t a c t x 0 4 0 . 0 . . - D M I a l t . N o n - D M I > . ‘ H ’ o o 0 I n ; 3 . 7 . 5 . . ’ , D i c a r b o x m l d e H C a d , . 1 I ‘ 3 3 5 . 0 . . I G 0 o 3 3 2 . 5 . . _ _ _ . C o n t r o l " Q t _ . . - " ' I . — _ . . — " " . ‘ é - - " " ' a ) 3 0 0 0 1 ! — ' fl 2 " . 2 7 . : J u l y 9 2 0 c t 9 2 J u l y 9 3 O c t 9 3 J u l y 9 4 x N o t s i g n i f i c a n t a t P S 0 . 0 5 . F i g u r e 3 . 2 . E s t i m a t e d l i n e a r t r e n d s o f m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f s i x t r e a t m e n t s a c r o s s f i v e - o b s e r v a t i o n d a t e s [ f r o m G i l s t r a p e t a l . ( 8 ) ] . 1 2 5 1 0 . L i s t o f R e f e r e n c e s A m y e s , S . G . B . 2 0 0 1 . M a g i c B u l l e t s L o s t H o r i z o n s : T h e R i s e a n d F a l l o f A n t i b i o t i c s . L o n d o n a n d N e w Y o r k : T a y l o r a n d F r a n c i s , I n c . 2 6 2 p . B o n h o e f f e r , S . , L i p s i t c h , M . , a n d L e v i n , B . R . 1 9 9 7 . E v a l u a t i n g t r e a t m e n t p r o t o c o l s t o p r e v e n t a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e . P r o c e e d . N a t . A c a d . S c i . U S A 9 4 : 1 2 1 0 6 — 1 2 1 1 1 . B r e n t , K . J . 1 9 9 5 . F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n C r o p P a t h o g e n s : H o w C a n I t B e M a n a g e d ? B r u s s e l s : G l o b a l C r o p P r o t e c t i o n F e d e r a t i o n . 5 2 p . C o u c h , H . B . 1 9 9 5 . D i s e a s e s o f T u r f g r a s s e s . 3 r d e d . M a l a b a r F L : K r i e g e r P u b . 4 2 1 p . C u l b r e a t h , A . K . , S t e v e n s o n , K . L . , a n d B r e n n e m a n , T . B . 2 0 0 2 . M a n a g e m e n t o f l a t e l e a f s p o t o f p e a n u t w i t h b e n o m y l a n d c h l o r o t h a l o n i l : A s t u d y i n p r e s e r v i n g f u n g i c i d e u t i l i t y . P l a n t D i s . 8 6 : 3 4 9 - 3 5 5 . D a n n e b e r g e r , T . K . 1 9 9 3 . T u r f g r a s s E c o l o g y & M a n a g e m e n t . C l e v e l a n d : F r a n z a k & F o s t e r . 2 0 1 p . E b n e r , P . D . a n d M a t h e w , A . G . 2 0 0 0 . E f f e c t s o f a n t i b i o t i c r e g i m e n s o n t h e f e c a l s h e d d i n g p a t t e r n s o f p i g s i n f e c t e d w i t h S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m . J . F o o d P r o t e c t . 6 3 : 7 0 9 — 7 1 4 . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , J o n e s , A . , a n d S c h a b e n b e r g e r , O . 1 9 9 7 . F u n g i c i d e e f f i c a c y o n d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t i o n ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . R e s . J . I n t . T u r f g r a s s S o c . 8 : 8 7 5 - 8 8 1 . G o l e m b i e w s k i , R . C . 1 9 9 4 . C h a r a c t e r i z a t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . T h e s i s ( M . S . ) , M i c h . S t . U n i v . , 7 4 p . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s J r . , J . M . , J o n e s , A . L . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 5 . D e t e c t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n c e i n S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a p o p u l a t i o n s . P l a n t D i s . 7 9 : 4 9 1 - 4 9 3 . 1 2 6 1 1 . 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 1 6 . 1 7 . 1 8 . 1 9 . 2 0 . G o u l d , I . M . 1 9 9 9 . A r e v i e w o f t h e r o l e o f a n t i b i o t i c p o l i c i e s i n t h e c o n t r o l o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e . J . A n t i m i c r o b . C h e m o t h . 4 3 : 4 5 9 — 4 6 5 . H e r m a n n , D . a n d G i s i , U . 1 9 9 4 . C r o s s — r e s i s t a n c e a m o n g D M I f u n g i c i d e s a n d s e n s i t i v i t y d i s t r i b u t i o n s o f S e p t o r i a t r i t i c i p o p u l a t i o n s . B r i g h t o n C r o p P r o t e c t . C o n f . , P e s t s a n d D i s . , p . 4 8 7 - 4 9 2 . J o h n , J . F . 2 0 0 0 . A n t i b i o t i c c y c l i n g : I s i t r e a d y f o r p r i m e t i m e ? I n f e c t . C o n t r . H o s p . E p i d e m i o l . 2 1 : 9 - 1 1 . K o l l e r , W . , P a r k e r , D . M . , a n d R e y n o l d s , K . L . 1 9 9 1 . B a s e l i n e s e n s i t i v i t i e s o f v e n t u r i a i n a e q u a l i s t o s t e r o l d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r s . P l a n t D i s . 7 5 : 7 2 6 — 7 2 8 . L a r s o n , B . J . 2 0 0 4 . I n t e g r a t e d M a n a g e m e n t o f C e r c o s p o r a L e a f S p o t o n S u g a r B e e t . T h e s i s ( M . S . ) . B o z e m a n M T : M o n t . S t . U n i v . 1 2 1 p . M a s t e r t o n , R . G . 2 0 0 5 . A n t i b i o t i c c y c l i n g : M o r e t h a n i t m i g h t s e e m ? J . A n t i m i c r o b . C h e m o t h e r . 5 5 : 1 - 5 . M a t h e w , A . G . , J a c k s o n , F . , a n d S a x t o n , A . M . 2 0 0 2 . E f f e c t s o f a n t i b i o t i c r e g i m e n s o n r e s i s t a n c e o f E s c h e r i c h i a c o l i a n d S a l m o n e l l a s e r o v a r T y p h i m u r i u m i n s w i n e . J . S w i n e H e a l t h P r o d u c t . 1 0 : 7 - 1 3 . M a t h e w , A . G . , S a x t o n , A . M . , U p c h u r c h , W . G . , a n d C h a t t i n , S . E . 1 9 9 9 . M u l t i p l e a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e p a t t e r n s o f E s c h e r i c h i a c o l i i s o l a t e s f r o m s w i n e f a r m s . A p p l i e d E n v i r o n . M i c r o b i o l . 6 5 : 2 7 7 0 - 2 7 7 2 . N i e d e r m a n , M . S . 1 9 9 7 . I s c r o p r o t a t i o n o f a n t i b i o t i c s t h e s o l u t i o n t o a r e s i s t a n t p r o b l e m i n t h e I C U ? A m e r . J . R e s p . C r i t . C a r e M e d . 1 5 6 : 1 0 2 9 — 1 0 3 1 . N o r t h o v e r , J . a n d M a t t e o n i , J . 1 9 8 6 . R e s i s t a n c e o f B o t r y t i s c i n e r e a t o b e n o m y l a n d i p r o d i o n e i n v i n e y a r d s a n d g r e e n h o u s e s a f t e r e x p o s u r e t o t h e f u n g i c i d e s a l o n e o r m i x e d w i t h c a p t a n . P l a n t D i s . 7 0 : 3 9 8 - 4 0 2 . 1 2 7 2 1 . 2 2 . 2 3 . 2 4 . 2 5 . 2 6 . 2 7 . 2 8 . P e r n e z n y , K . , S t o f f e l l a , P . , C o l l i n s , J . , C a r r o l l , A . , a n d B e a n e y , A . 2 0 0 3 . C o n t r o l o f t a r g e t s p o t o f t o m a t o w i t h f u n g i c i d e s , s y s t e m i c a c q u i r e d r e s i s t a n c e a c t i v a t o r s , a n d a b i o c o n t r o l a g e n t . P l a n t P r o t e c t . S c i . 3 8 : 8 1 - 8 8 . ' S a l a n t , S . W . 2 0 0 3 . S a m e i n f e c t i o n , s a m e t i m e , s a m e a n t i b i o t i c ? p . 3 7 5 . I n B a t t l i n g R e s i s t a n c e t o A n t i b i o t i c s a n d P e s t i c i d e s , e d i t e d b y R . L a x m i n a r a y a n . W a s h i n g t o n , D . C . : R e s o u r c e s f o r t h e F u t u r e . S a n d e r s , P . L . a n d G i l b r i d e , E . P . 1 9 8 1 . T h e e f f e c t o f s i n g l e a n d c o m b i n a t i o n a p p l i c a t i o n s o f b e n o m y l a n d c h l o r o t h a l o n i l o n t h e l e v e l o f b e n o m y l t o l e r a n c e i n a n a t u r a l p o p u l a t i o n o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a a n d o n t h e a t t e n d a n t d e v e l o p m e n t o f t u r f g r a s s d o l l a r s p o t . N e t h . J . P l a n t P a t h o l . 8 7 : 2 5 2 . S c h u m a n n , G . L . a n d W i l k i n s o n , H . T . 1 9 9 2 . R e s e a r c h m e t h o d s a n d a p p r o a c h e s t o t h e s t u d y o f d i s e a s e s i n t u r f g r a s s e s . p . 6 5 3 — 6 8 8 . I n T u r f g r a s s , e d i t e d b y D . v . W a d d i n g t o n , R . N . C a r r o w a n d R . C . S h e a r m a n . M a d i s o n W I : A m e r . S o c . A g r o n . , C r o p S c i . S o c . A m e r . a n d S o i l S c i , S o c . A m e r . S e t t l e , D . , F r y , J . , a n d T i s s e r a t , N . 2 0 0 1 . D o l l a r s p o t a n d b r o w n p a t c h f u n g i c i d e m a n a g e m e n t s t r a t e g i e s i n f o u r c r e e p i n g b e n t g r a s s c u l t i v a r s . C r o p S c i . 4 1 : 1 1 9 0 — 1 1 9 7 . T o l t z i s , P . , D u l , M . J . , H o y e n , C . , S a l v a t o r , A . , W a l s h , M . , Z e t t s , L . , a n d T o l t z i s , H . 2 0 0 2 . T h e e f f e c t o f a n t i b i o t i c r o t a t i o n o n c o l o n i z a t i o n w i t h a n t i b i o t i c - r e s i s t a n t b a c i l l i i n a n e o n a t a l i n t e n s i v e c a r e u n i t . P e d i a t r i c s 1 1 0 : 7 0 7 - 7 1 1 . V a l i , R . J . a n d M o o r m a n , G . 1 9 9 2 . I n f l u e n c e o f s e l e c t e d f u n g i c i d e r e g i m e s o n f r e q u e n c y o f d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t a n d d i c a r b o x i m i d e - s e n s i t i v e s t r a i n s o f B o t r y t i s c i n e r e a . P l a n t D i s . 7 6 : 9 1 9 - 9 2 4 . V a r g a s , J . M . 1 9 9 8 . M a n a g i n g r e s i s t a n c e : P a r t I . F u n g i c i d e s : T h e s t r a t e g y o f p r e v e n t i n g t u r f g r a s s — p a t h o g e n r e s i s t a n c e b y a l t e r n a t i n g f u n g i c i d e s i s i n e f f e c t i v e . G r o u n d s M a i n t e n a n c e , 3 3 , p . 1 8 - 2 4 . 1 2 8 2 9 . 3 0 . 3 1 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 2 . T o r o t a t e o r n o t t o r o t a t e ? : S u p e r i n t e n d e n t s m a y n o t f u l l y u n d e r s t a n d t h e r a t i o n a l e f o r r o t a t i n g f u n g i c i d e s . G o l f C o u r s e M a n a g e m e n t , 7 0 ( 4 ) , p . 5 3 - 5 6 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 5 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 3 r d e d . H o b o k e n N J : W i l e y . 3 2 2 p . W a l s h , B . , I k e d a , S . , a n d B o l a n d , G . 1 9 9 9 . B i o l o g y a n d m a n a g e m e n t o f d o l l a r s p o t ( S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a ) ; a n i m p o r t a n t d i s e a s e o f t u r f g r a s s . H o r t S c i . 3 4 : 1 3 — 2 0 . 1 2 9 C H A P T E R 4 I N V E S T I G A T I O N O F R U T S T R O E M I A F L O C C O S U M S E N S I T I V I T Y T O B O S C A L I D 1 3 0 B o s c a l i d ( E m e r a l d F u n g i c i d e ) i s a n e w f u n g i c i d e b e i n g s o l d b y B A S F P r o f e s s i o n a l T u r f , a d i v i s i o n o f t h e B A S F C o r p o r a t i o n . T h e p r o d u c t i s f o r u s e p r i m a r i l y t o c o n t r o l d o l l a r s p o t ( 5 , 5 7 ) . I t h a s b e e n a n o u t s t a n d i n g p e r f o r m e r i n d o l l a r - s p o t t r i a l s b e g i n n i n g i n 2 0 0 1 a t t h e H a n c o c k T u r f g r a s s R e s e a r c h C e n t e r ( H T R C ) a t M i c h i g a n S t a t e U n i v e r s i t y ( M S U ) i n E a s t L a n s i n g ( 5 0 , 5 3 ) a n d e l s e w h e r e i n t h e U n i t e d S t a t e s ( 1 4 , 3 6 , 4 0 , 4 1 , 6 5 ) . I t i s l a b e l e d f o r u s e a l s o o n b e n t g r a s s d e a d s p o t , a r e l a t i v e l y n e w t u r f d i s e a s e ( 1 1 , 1 5 ) c a u s e d b y O p h i o s p h a e r e l l a a g r o s t i s s p n o v D e r n o e d e n , M . P . S . C a m a r a , N . R . O ’ N e i l l , v a n B e r k u m e t M . E . P a l m ( 3 2 ) . L I T E R A T U R E R E V I E W P r o d u c t D e v e l o p m e n t , R e g i s t r a t i o n , a n d F o r m u l a t i o n T h e a c t i v e i n g r e d i e n t ( A I ) w a s d e s i g n a t e d B A S 5 1 0 F d u r i n g p r o d u c t d e v e l o p m e n t , a n d t h e p r o p o s e d c o m m o n n a m e w a s n i c o b i f e n ( 4 3 ) . H o w e v e r , n i c o f i b e n c l o s e l y r e s e m b l e d t h e n a m e o f a h e r b i c i d e u s e d i n E u r o p e s o t h e c o m p o u n d w a s r e n a m e d b o s c a l i d ( 6 6 ) . I t h a d a l r e a d y r e c e i v e d E P A d e s i g n a t i o n a s a “ r e d u c e d — r i s k " c a n d i d a t e ( 1 0 ) , t h u s a l l o w i n g i t t o b e “ f a s t t r a c k e d " ( 7 , 6 4 ) , a n d i t r e c e i v e d E P A r e g i s t r a t i o n n u m b e r 0 0 7 9 6 9 - 0 0 1 9 6 ( 1 ) f o r E m e r a l d F u n g i c i d e ( E m e r a l d ) i n J u l y 2 0 0 3 ( 6 ) . T h e p r o d u c t i s s o l d 1 3 1 a s a 7 0 W D G , w h i c h m e a n s i t c o n t a i n s 7 0 % A I b y w e i g h t a n d t h e f o r m u l a t i o n i s a w e t t a b l e — d i s p e r s i b l e g r a n u l e d e s i g n e d f o r s p r a y a p p l i c a t i o n s . E m e r a l d F u n g i c i d e w a s c o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e a n d w i d e l y u s e d i n 2 0 0 4 . B A S F a l s o f o r m u l a t e s t h e A I a s E n d u r a F u n g i c i d e f o r u s e o n m a n y v e g e t a b l e d i s e a s e s ( 6 1 ) . P r i s t i n e F u n g i c i d e i s a n o t h e r B A S F p r o d u c t i n w h i c h b o s c a l i d i s c o m b i n e d w i t h p y r a c l o s t r o b i n f o r u s e o n s e v e r a l d i s e a s e s o f f r u i t s a n d n u t s . U p t o t h r e e m o r e b o s c a l i d - b a s e d f u n g i c i d e s a r e t o b e r e l e a s e d b y B A S F i n t h e n e a r f u t u r e ( 6 0 ) . M o d e o f A c t i o n a n d A c t i v i t y B o s c a l i d i s a c a r b o x i m i d e , o r c a r b o x a n i l i d e , a n d a s s u c h i s t h e s o l e r e p r e s e n t a t i v e o f t h e n e w e s t c l a s s o f f u n g i c i d e s t o b e u s e d t o s u p p r e s s t h e d o l l a r - s p o t p a t h o g e n R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m . I t i s a s y s t e m i c f u n g i c i d e t h a t h a s a c r o p e t a l m o v e m e n t w i t h i n t h e x y l e m a s w e l l a s t r a n s l a m i n a r p e n e t r a t i o n t h r o u g h t h e l e a v e s ( 6 ) . B o s c a l i d ’ s s i t e o f a t t a c k a n d m o d e o f a c t i o n a r e d i f f e r e n t t h a n o t h e r f u n g i c i d e s u s e d t o m a n a g e d o l l a r s p o t ( 4 ) . T h e p u n i t i v e a c t i o n o c c u r s s p e c i f i c a l l y w i t h i n t h e f u n g a l — c e l l ' s m i t o c h o n d r i a — r e s p i r a t i o n - c o m p l e x I I w h e r e i t r e d u c e s t h e p r o d u c t i o n o f s u c c i n a t e d e h y d r o g e n a s e n e e d e d f o r t h e o x i d a t i o n o f s u c c i n a t e t o f u m a r a t e ( 3 8 ) . 1 3 2 B o s c a l i d ’ s n o v e l a c t i o n — s i t e i s t h o u g h t t o b e s i n g u l a r l y w i t h i n t h e l p s u b u n i t w h e r e i t b l o c k s r e o x i d a t i o n o f F e - r e d o x c e n t e r s t h u s h a l t i n g t h e t r a n s f e r o f e l e c t r o n s f r o m s u c c i n a t e t o u b i q u i n o n e ( 4 4 ) . T h e e n d r e s u l t i s a d e c r e a s e o r c e s s a t i o n o f A T P p r o d u c t i o n b y t h e m i t o c h o n d r i a t h e r e b y d e p r i v i n g e n e r g y n e e d e d b y t h e f u n g a l c e l l . B o s c a l i d h a s b r o a d - s p e c t r u m a c t i v i t y o n a s c o m y c e t e s a n d d e u t e r o m y c e t e s . T h e o t h e r c a r b o x i m i d e u s e d o n t u r f i s f l u t o l a n i l s o l d b y B a y e r a s P r o S t a r , w h i c h i s n o t l a b e l e d f o r d o l l a r s p o t ( 5 7 ) . C a r b o x i m i d e R e s i s t a n c e A r t i f i c i a l l y i n d u c e d m u t a n t s o f s e v e r a l p a t h o g e n s d e m o n s t r a t i n g r e s i s t a n c e t o o t h e r c a r b o x i m i d e s h a v e b e e n r e p o r t e d ( 1 9 , 2 0 , 4 4 ) . F i e l d r e s i s t a n c e t o c a r b o x i n , t h e f i r s t c a r b o x i m i d e l a u n c h e d i n 1 9 6 6 a s t h e s e e d t r e a t m e n t V i t a v a x ( 5 8 ) , h a s b e e n d o c u m e n t e d w i t h U S t i l a g o m a y d i s D C ( C o r d a ) ( 2 1 ) a n d U S t i l a g o n u d a ( J e n s . ) R o s t r . ( 3 7 ) , b a s i d i o m y c e t e s t h a t c a u s e c o r n s m u t a n d b a r l e y l o o s e s m u t r e s p e c t i v e l y . A t t e m p t s t o d o c u m e n t c r o s s — r e s i s t a n c e w i t h s t r u c t u r a l a n a l o g u e s o f c a r b o x i n h a v e y i e l d e d h i g h l y v a r i a b l e r e s u l t s ( 6 2 , 6 3 ) . G e o r g o p o u l o s s t a t e d t h a t t h i s l a c k o f c r o s s - r e s i s t a n c e w i t h i n t h e c a r b o x i m i d e c l a s s i s a d i s t i n c t i o n t h a t “ i s p r o b a b l y u n i q u e a m o n g t h e f u n g i c i d e s " 1 3 3 ( 1 8 ) . T h e F u n g i c i d e R e s i s t a n c e A c t i o n C o m m i t t e e ( F R A C ) h a s d e s i g n a t e d t h e c a r b o x i m i d e s ( F R A C C o d e 7 ) a s “ m e d i u m r i s k " f u n g i c i d e s , w h i c h i s a r e l a t i v e t e r m f o r t h e i r i n t r i n s i c r i s k r e g a r d i n g r e s i s t a n c e d e v e l o p m e n t ( 8 ) . F u n g a l r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d h a s n o t b e e n r e p o r t e d p r i o r t o t h i s d a t e ( 3 9 ) . L A B E L D I R E C T I O N S A N D P R E C A U T I O N S D o l l a r s p o t c a n b e s u p p r e s s e d w i t h b o s c a l i d a p p l i e d a t v e r y l o w r a t e s o f 1 . 9 2 t o 3 . 8 5 g 1 0 0 m ' 2 i n a s p r a y - v o l u m e r a t e o f 8 . 1 t o 1 6 . 3 1 1 0 0 n f z . T h e l a b e l r e c o m m e n d s a p p l i c a t i o n b e f o r e o r a t t h e o n s e t o f d i s e a s e d e v e l o p m e n t ( 1 ) . T h e r e a p p l i c a t i o n i n t e r v a l i s 1 4 t o 2 8 d a y s w i t h t h e s h o r t e r i n t e r v a l b e i n g r e c o m m e n d e d u n d e r p r o l o n g e d c o n d i t i o n s f a v o r i n g t h e d o l l a r - s p o t p a t h o g e n . B o s c a l i d c a n b e u s e d s a f e l y o n a l l t u r f g r a s s s p e c i e s , b u t t h e l a b e l l i m i t s i t s u s e t o g o l f c o u r s e s o n l y . O v e r t i m e R . f l o c c o s u m , h a s d e v e l o p e d s o m e d e g r e e o f r e s i s t a n c e t o a l l p r e v i o u s l y i n t r o d u c e d s i n g l e - s i t e f u n g i c i d e s ( s e e C h a p t e r 1 ) . U n d e r t h e s e c t i o n t i t l e d ‘ R e s i s t a n c e M a n a g e m e n t ’ t h e E m e r a l d l a b e l w a r n s t h a t a “ r e d u c t i o n o f d i s e a s e c o n t r o l " m a y o c c u r “ i f b o s c a l i d i s u s e d p r e d o m i n a n t l y a n d r e p e a t e d l y i n t h e s a m e t u r f g r a s s a r e a i n s u c c e s s i v e y e a r s a s t h e p r i m a r y m e t h o d o f c o n t r o l 1 3 4 f o r t h e t a r g e t e d p a t h o g e n s p e c i e s ” ( 1 ) . T h e l a b e l a l s o s t a t e s , “ I f E m e r a l d a p p e a r s t o b e l e s s e f f e c t i v e a g a i n s t a p a t h o g e n t h a t i t p r e v i o u s l y c o n t r o l l e d o r s u p p r e s s e d , c o n t a c t a B A S F r e p r e s e n t a t i v e o r l o c a l t u r f g r a s s e x p e r t f o r f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n . D o n o t a p p l y m o r e t h a n t w o s e q u e n t i a l a p p l i c a t i o n s o f E m e r a l d . T h e n a l t e r n a t e w i t h a n o t h e r e f f e c t i v e f u n g i c i d e b e f o r e r e a p p l y i n g E m e r a l d . " A L A R M I N G R E P O R T S Q u e s t i o n s c o n c e r n i n g t h e p o s s i b l e e x i s t e n c e o f b o s c a l i d - r e s i s t a n t s t r a i n s o f R . f l o c c o s u m w e r e r a i s e d i n c l o s e s u c c e s s i o n b y t h e s u p e r i n t e n d e n t s o f t h e L o c h m o o r C l u b a n d t h e R e d R u n G o l f C l u b , b o t h i n s o u t h e a s t M i c h i g a n . E a c h o f t h e m r e p o r t e d u n s a t i s f a c t o r y s u p p r e s s i o n o f d o l l a r s p o t f o l l o w i n g a m i d - J u l y a p p l i c a t i o n o f b o s c a l i d t o t h e i r f a i r w a y s . C l o s e s i m i l a r i t i e s e x i s t e d b e t w e e n t h e s e i n c i d e n t s a n d r e s u l t i n g r e m e d i a l a c t i o n s b y t h e s u p e r i n t e n d e n t s w e r e v e r y s i m i l a r a s d e s c r i b e d h e r e : 1 ) T h e f a i r w a y s h a d b e e n t r e a t e d w i t h t h e c o n t a c t ( m u l t i s i t e ) f u n g i c i d e c h l o r o t h a l o n i l 1 3 5 ( D a c o n i l U l t r e x ) w i t h i n a w e e k p r i o r t o a f i r s t - t i m e a p p l i c a t i o n o f b o s c a l i d i n l a t e J u l y . 2 ) D o l l a r s p o t s b e g a n t o a p p e a r a f e w d a y s a f t e r b o s c a l i d a p p l i c a t i o n . 3 ) A “ r e s c u e t r e a t m e n t ” o f c h l o r o t h a l o n i l w a s a p p l i e d s i x d a y s a f t e r b o s c a l i d a p p l i c a t i o n . A s m a l l a r e a o f a f a i r w a y w a s n o t s p r a y e d w i t h c h l o r o t h a l o n i l a n d l e f t a s a c h e c k a r e a a t t h e L o c h m o o r C l u b ( s e e b e l o w ) . 4 ) T h e s u p e r i n t e n d e n t s m a d e n o f u r t h e r a p p l i c a t i o n s o f b o s c a l i d . T h e s e c o u r s e s w e r e b o t h w i t h i n t h e m e t r o p o l i t a n a r e a o f D e t r o i t a n d h a d b o t h b e e n d i a g n o s e d i n t h e e a r l y 1 9 9 0 5 a s b e i n g t w o o f t h e f i r s t c o u r s e s h a v i n g d o c u m e n t e d D M I — r e s i s t a n t p o p u l a t i o n s o f R . f l o c c o s u m ( 2 6 ) . T h e L o c h m o o r C l u b g o l f c o u r s e s u p e r i n t e n d e n t c o m m e n t e d t h a t i n h i s c h e c k a r e a h e h a d c a s u a l l y o b s e r v e d t h a t t h e s p o t s d i s a p p e a r e d a f t e r a f e w d a y s f o l l o w i n g t h e b o s c a l i d a p p l i c a t i o n e v e n t h o u g h h e h a d n o t a p p l i e d c h l o r o t h a l o n i l t o t h a t a r e a ( 3 1 ) . I N I T I A L A S S E S S M E N T S I N V I T R O S y m p t o m a t i c l e a v e s f r o m 2 0 d o l l a r s p o t s w i t h i n t h e c h e c k a r e a a s w e l l a s o t h e r f r o m o t h e r f a i r w a y t u r f w e r e 1 3 6 c o l l e c t e d i n e a r l y A u g u s t o f 2 0 0 4 . T h e s e s a m p l e s w e r e t a k e n t o t h e t u r f g r a s s p a t h o l o g y l a b a t M S U f r o m w h i c h i s o l a t e s o f R . f l o c c o s u m w e r e g r o w n f r o m l e a v e s f r o m e a c h o f t e n s p o t s . T h e l a b - a n a l y s i s m e t h o d o l o g y w a s s i m i l a r t o t h a t d e s c r i b e d i n C h a p t e r 2 . A 1 0 u g m l " 1 c o n c e n t r a t i o n o f b o s c a l i d w a s u s e d b e c a u s e t h e s a m e c o n c e n t r a t i o n o f t h i o p h a n a t e — m e t h y l a n d i p r o d i o n e h a s b e e n u s e d e x t e n s i v e l y w h e n s c r e e n i n g f o r b e n z i m i d a z o l e a n d d i c a r b o x i m i d e r e s i s t a n c e r e s p e c t i v e l y ( 1 6 ) . A m a j o r i t y o f t h e i s o l a t e s g r e w w e l l o n t h e b o t h t h e a m e n d e d a n d u n a m e n d e d p l a t e s . N o m e a s u r e m e n t s w e r e t a k e n a n d t h e s e s c r e e n i n g s w e r e n o t r e p l i c a t e d . T h e i s o l a t e t h a t d e m o n s t r a t e d t h e m o s t r o b u s t g r o w t h a t t h i s c o n c e n t r a t i o n ( L F - 7 ) w a s t r a n s f e r r e d t o p l a t e s c o n t a i n i n g p o t a t o - d e x t r o s e a g a r ( P D A ) a m e n d e d w i t h b o s c a l i d a t t h e f o l l o w i n g c o n c e n t r a t i o n s , w i t h e a c h c o n c e n t r a t i o n r e p l i c a t e d t h r e e t i m e s : 0 , 5 , 1 0 , 2 0 , 4 0 , 8 0 , a n d 1 6 0 u g m l “ . M e a s u r e m e n t s w e r e p e r f o r m e d i n t h e s a m e m a n n e r a s d e s c r i b e d i n C h a p t e r 2 . T h e a v e r a g e - e f f e c t i v e d i a m e t e r o f e a c h c o l o n y g r o w i n g a t 0 u g m l ' 1 c o n c e n t r a t i o n o f b o s c a l i d s e r v e d a s t h e u n a m e n d e d - p l a t e v a l u e s f o r t h e c a l c u l a t i o n o f a v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h f o r t h a t r e s p e c t i v e i s o l a t e a t t h e o t h e r c o n c e n t r a t i o n s . 1 3 7 F i g u r e 4 . 1 s h o w s t h e d o s e - r e s p o n s e c u r v e f o r L F — 7 a t a l l c o n c e n t r a t i o n s . T h e a v e r a g e - p e r c e n t — r e l a t i v e - g r o w t h r a t e s a t 8 0 a n d 1 6 0 p g m l " 1 w e r e a b o u t t h e s a m e a n d a p p r o x i m a t e l y 5 0 % g r e a t e r t h a n t h a t a t 4 0 u g m l d p S u c h r e s p o n s e h a s n o t b e e n r e p o r t e d p r e v i o u s l y w i t h R . f l o c c o s u m w h e n e x p o s e d t o a p r o g r e s s i v e r a n g e o f o t h e r f u n g i c i d e c o n c e n t r a t i o n s . T h e s e p h e n o m e n a l e d t o a f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n ( s e e i n - v i t r o S t u d i e s I a n d I I b e l o w ) . A v e r a g e — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s w e r e r e g r e s s e d a g a i n s t t h e b a s e - 1 0 l o g a r i t h m s o f t h e f u n g i c i d e c o n c e n t r a t i o n s ( s e e F i g u r e 4 . 2 ) . T h e e f f e c t i v e d o s e ( E D m ) o r c o n c e n t r a t i o n w a s c a l c u l a t e d a s t h e a n t i l o g o f t h e v a l u e t h a t e q u a t e d t o 5 0 % o f t h e a v e r a g e - r a d i a l g r o w t h o f t h e u n a m e n d e d p l a t e s ( 3 0 ) . T h e E D m ) o f L F — 7 w a s 1 6 . 9 u g 8 . T h e l e a s t r a d i a l g r o w t h w a s m e a s u r e d a t 4 0 u g m l j , m l a n d t h i s c o n c e n t r a t i o n w a s c h o s e n a s a d i s c r i m i n a t e d o s e t o a s s e s s b o s c a l i d s e n s i t i v i t y i n a f i e l d s t u d y l a u n c h e d i n l a t e A u g u s t w h i l e w e a t h e r c o n d i t i o n s w e r e s t i l l c o n d u c i v e t o d o l l a r - s p o t a c t i v i t y ( s e e b e l o w ) . A n a b s t r a c t b y S c h e i d e g g e r , e t . a l . r e p o r t e d E D “ ) v a l u e s r a n g i n g f r o m 0 . 0 1 8 t o 0 . 9 4 u g m l ‘ 1 w i t h R . f l o s s o s u m g r o w n i n w a t e r - a g a r o n l y a n d b o s c a l i d - a m e n d e d - w a t e r a g a r ( 4 3 ) . E i g h t y — t w o i s o l a t e s w e r e i n c l u d e d i n t h e i r s t u d y . 1 3 8 T h e i s o l a t e s w e r e a l s o c h e c k e d f o r b e n z i m i d a z o l e a n d D M I r e s i s t a n c e , a n d a l l o f t h e i s o l a t e s w e r e f o u n d t o b e s e n s i t i v e t o b o t h f u n g i c i d e c l a s s e s . T h e s t u d y w a s f u n d e d b y B A S F C o r p o r a t i o n , a n d t h r e e o f t h e f i v e c o a u t h o r s w e r e e m p l o y e e s o f t h e c o m p a n y . T w o o f t h e c o a u t h o r s u r g e d t h e u s e o f w a t e r a g a r i n s t e a d o f P D A i n t h e i n v e s t i g a t i o n t h a t w a s b e i n g c o n d u c t e d h e r e ( J . B a r n e s a n d F . W o n g , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n s ) . T h e i r o p i n i o n s w e r e t h a t t h e h i g h - n u t r i t i v e c o n t e n t o f t h e l a t t e r w a s i n a p p r o p r i a t e f o r u s e i n c h a l l e n g i n g t h i s f u n g u s w i t h b o s c a l i d . S u b s e q u e n t e f f o r t s u s i n g w a t e r a g a r i n d e t e r m i n i n g E D fl , v a l u e s w e r e a b a n d o n e d b e c a u s e t h e m y c e l i a l g r o w t h w a s v e r y s p a r s e a n d i t w a s t o o d i f f i c u l t t o a c c u r a t e l y m e a s u r e r a d i a l - g r o w t h d i a m e t e r s . S a l i c y l h y d r o x a m i c a c i d ( S H A M ) a s a n a d d i t i o n a l P D A a m e n d m e n t w a s c o n s i d e r e d b a s e d o n r e p o r t s c o n c e r n i n g i n V i t r o t e s t i n g w i t h Q o I f u n g i c i d e s . T h r e e o f t h e i s o l a t e s t e s t e d a b o v e w e r e r a n d o m l y s e l e c t e d a n d p l a c e d o n P D A a m e n d e d w i t h 2 5 , 5 0 a n d 1 0 0 u g m l S H A M p u r c h a s e d f r o m A l d r i c h C o . ( M i l w a u k e e , W I ) . T h e y d i d n o t g r o w w e l l , i f a t a l l , c o m p a r e d t o t h e i r g r o w t h o n u n a m e n d e d P D A . S u b s e q u e n t i n - v i t r o t e s t i n g d i d n o t i n c l u d e S H A M a s a n 1 3 9 a m e n d m e n t . F u r t h e r e x p l a n a t i o n i s f o u n d l a t e r i n t h e D i s c u s s i o n s e c t i o n i n B r o a d e n e d D o s e R e s p o n s e S t u d y I I . F I E L D E X P E R I M E N T I S e v e r a l i s o l a t e s o f R . f l o c c o s u m f r o m t h e L o c h m o o r C l u b g o l f c o u r s e h a d s h o w n i n d i c a t i o n s o f b e i n g r e s i s t a n t t o b o s c a l i d i n V i t r o ( s e e a b o v e ) . A e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d o n t h e f i f t e e n t h f a i r w a y o f t h e g o l f c o u r s e . T h e o b j e c t i v e o f t h e s t u d y w a s t o s e e w h a t h a p p e n e d a s f a r a s d o l l a r - s p o t i n c i d e n c e f o l l o w i n g a n a p p l i c a t i o n o f b o s c a l i d . O f p a r t i c u l a r i n t e r e s t w a s t h e f i r s t 1 4 d a y s f o l l o w i n g a p p l i c a t i o n s i n c e t h e l a b e l s t a t e d a d o l l a r — s p o t - c o n t r o l p e r i o d o f 1 4 t o 2 8 d a y s ( 1 ) . I f a n y d o l l a r s p o t s a p p e a r e d , t h e n a s e c o n d a r y g o a l w a s t o d e t e r m i n e i f i s o l a t e s t a k e n f r o m t h o s e s p o t s a s s a y e d p o s i t i v e l y f o r i n V i t r o r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d . M a t e r i a l s a n d M e t h o d s T h e e x p e r i m e n t a l h a d r e c e i v e d a n a p p l i c a t i o n o f c h l o r o t h a l o n i l a w e e k e a r l i e r . N o i n c i d e n c e s o f d o l l a r — s p o t w e r e s e e n i n t h e p l o t a r e a p r i o r t o t h e i n i t i a t i o n o f t r e a t m e n t s . T h e e x p e r i m e n t a l d e s i g n w a s a r a n d o m i z e d - c o m p l e t e - b l o c k ( R C B ) w i t h f o u r b l o c k s . T h e t r e a t m e n t s w e r e a p p l i e d o n 3 0 A u g u s t 2 0 0 4 a n d i n c l u d e d b o s c a l i d 1 4 0 ( E m e r a l d ) a t t h e h i g h e s t l a b e l e d r a t e a s w e l l a s t h i o p h a n a t e - m e t h y l ( C l e a r y ' s 3 3 3 6 ) , i p r o d i o n e ( C h i p c o 2 6 G T ) , a n d p r o p i c o n a z o l e ( B a n n e r M a x x ) , a l l a t t y p i c a l r a t e s f o r d o l l a r s p o t . D i m o x y s t r o b i n ( H o n o r ) , a n u n r e l e a s e d Q o I ( s t r o b i l u r i n ) f u n g i c i d e f r o m B A S F , w a s a l s o a p p l i e d a t t h e h i g h e s t r a t e i n d i c a t e d o n i t s e x p e r i m e n t a l l a b e l . T h e s e a r e a l l s i n g l e - s i t e ( S S ) f u n g i c i d e s . T h e r e m a i n i n g t r e a t m e n t s w e r e c h l o r o t h a l o n i l a p p l i e d w e e k l y a t a l o w r a t e a n d a n u n s p r a y e d c o n t r o l ( s e e T a b l e 4 . 1 ) . C h l o r o t h a l o n i l i s a c o n t a c t , o r m u l t i s i t e ( M S ) , f u n g i c i d e o f t h e n i t r i l e c l a s s . T h e a p p l i c a t i o n s w e r e m a d e i n a s i m i l a r m a n n e r t o t h a t d e s c r i b e d i n C h a p t e r 3 . T h e s p r a y - v o l u m e r a t e o f 1 0 l 1 0 0 : m 4 w a s w i t h i n t h e l a b e l s p e c i f i c a t i o n s . W a t e r o n l y w a s a p p l i e d t o t h e c o n t r o l p l o t s a t t h e s a m e s p r a y — v o l u m e r a t e . A l m o s t d a i l y , t h e s u p e r i n t e n d e n t , M i c h a e l J o n e s , c o u n t e d a n d r e c o r d e d t h e n u m b e r o f i n f e c t i o n c e n t e r s i n e a c h o f t h e 1 . 8 m b y 2 . 7 m p l o t s . T h e w e a t h e r d u r i n g t h e f i r s t t h r e e w e e k s g e n e r a l l y f a v o r e d d o l l a r - s p o t a c t i v i t y w i t h a p r e p o n d e r a n c e o f w a r m d a y s a n d c o o l h u m i d n i g h t s . T h e t r e a t m e n t s w e r e r e a p p l i e d a t 2 1 d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) . I s o l a t e s w e r e c o l l e c t e d f r o m s e l e c t e d p l o t s p r i o r t o r e t r e a t m e n t , b u t t h e y w e r e n o t a n a l y z e d d u e t o t i m e a n d 1 4 1 l a b o r r e s t r i c t i o n s . T h e s e c o n d a p p l i c a t i o n o f b o s c a l i d i n t h i s e x p e r i m e n t w a s i n p o i n t o f f a c t t h e t h i r d s i n c e t h e g e n e r a l a r e a h a d a l r e a d y r e c e i v e d a n a p p l i c a t i o n i n J u l y ( s e e a b o v e ) . T h e d o l l a r — s p o t — c o u n t d a t a w a s a n a l y z e d u s i n g S A S s o f t w a r e . R e s u l t s T h e c o n t r o l p l o t h a d t h e m o s t d o l l a r s p o t s a n d t h e b o s c a l i d a n d t h i o p h a n a t e - m e t h y l t r e a t m e n t s h a d t h e s e c o n d m o s t a t 3 a n d 4 D A T . T h e o t h e r t r e a t m e n t s h a d v e r y f e w s p o t s ( s e e F i g u r e 4 . 3 ) . A t 5 D A T t h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s h a d d e c r e a s e d o n t h e b o s c a l i d p l o t s a n d i n c r e a s e d o n b o t h t h e t h i o p h a n a t e - m e t h y l a n d c o n t r o l p l o t s . T h e s u p e r i n t e n d e n t s t a t e d t h a t t h e s p o t s a p p e a r e d t o b e s m a l l e r i n t h e b o s c a l i d p l o t s t h a n t h o s e i n o t h e r p l o t s ( M . J o n e s , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . T h e b o s c a l i d p l o t s w e r e a l m o s t d e v o i d o f d o l l a r — s p o t s y m p t o m s a t 8 D A T . P r o p i c o n a z o l e p r o t e c t i o n f a i l e d a t a p p r o x i m a t e l y 1 7 D A T a n d t h e o t h e r S S f u n g i c i d e s b e g a n t o w e a k e n a s w e l l . T h e n u m b e r o f s p o t s i n a l l b u t t h e c h l o r o t h a l o n i l p l o t s i n c r e a s e d f r o m 1 7 D A T u n t i l 2 1 D A T w h e n a l l o f t h e o t h e r f u n g i c i d e s w e r e r e a p p l i e d . A n a l y s i s o f v a r i a n c e ( A O V ) w a s p e r f o r m e d u s i n g l o g - b a s e — 1 0 t r a n s f o r m e d d o l l a r - s p o t d a t a a t 5 D A T . T h i s 1 4 2 t r a n s f o r m a t i o n w a s a p p r o p r i a t e b e c a u s e t h e s t a n d a r d d e v i a t i o n s f o r e a c h t r e a t m e n t w e r e i n a p p r o x i m a t e p r o p o r t i o n t o t h e i r m e a n s ( 3 4 ) . T h i s a l l o w e d f o r a n A O V o f d a t a t h a t w a s m o r e n o r m a l l y d i s t r i b u t e d c o m p a r e d t o t h e n o n - t r a n s f o r m e d d a t a s e t . T h e m e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s i n t h e c o n t r o l t r e a t m e n t w e r e s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r ( P S 0 . 0 5 ) t h a n t h e i p r o d i o n e , c h l o r o t h a l o n i l , d i m o x y s t r o b i n , a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s ( s e e T a b l e 4 . 2 ) . T h e t h i o p h a n a t e — m e t h y l a n d b o s c a l i d t r e a t m e n t s w e r e n o t d i f f e r e n t a n d h a d m o r e s p o t s t h a n t h e i p r o d i o n e , c h l o r o t h a l o n i l , d i m o x y s t r o b i n , a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s . T h e c o n t r o l , t h i o p h a n a t e - m e t h y l , a n d b o s c a l i d t r e a t m e n t s w e r e n o t d i f f e r e n t . N o d i f f e r e n c e s w e r e i n d i c a t e d a m o n g t h e i p r o d i o n e , c h l o r o t h a l o n i l , d i m o x y s t r o b i n , a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s . A l i k e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s o f 2 1 — D A T c o u n t s s h o w e d t h e c o n t r o l h a v i n g a s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r ( P S 0 . 0 5 ) m e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t t h a n t h e d i m o x y s t r o b i n , i p r o d i o n e , b o s c a l i d , a n d c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s . T h e c o n t r o l , t h i o p h a n a t e - m e t h y l , a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s w e r e n o t d i f f e r e n t f r o m e a c h o t h e r . T h e t h i o p h a n a t e - m e t h y l , p r o p i c o n a z o l e , a n d d i m o x y s t r o b i n t r e a t m e n t s d i d n o t d i f f e r a m o n g t h e m s e l v e s w i t h a l l h a v i n g m o r e d o l l a r s p o t s t h a n 1 4 3 t h e i p r o d i o n e , b o s c a l i d , a n d c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s . T h e r e w e r e n o d i f f e r e n c e s i n m e a n — d o l l a r - s p o t c o u n t s a m o n g t h e p r o p i c o n a z o l e , d i m o x y s t r o b i n , a n d i p r o d i o n e t r e a t m e n t s , a n d a s a g r o u p t h e y h a d m o r e s p o t s t h a n t h e b o s c a l i d a n d c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s . T h e b o s c a l i d t r e a t m e n t h a d t h e n e x t f e w e s t d o l l a r s p o t s w i t h c h l o r o t h a l o n i l h a v i n g v i r t u a l l y n o i n c i d e n c e s o f t h e d i s e a s e . M e a n — d o l l a r — s p o t c o u n t s i n c r e a s e d a t 1 7 D A T w i t h a n o t i c e a b l e o u t b r e a k i n t h e p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t . F r o m 1 7 t o 2 1 D A T t h e r a t e o f i n c r e a s e i n t h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s a p p e a r e d t o b e t h e s a m e w i t h p r o p i c o n a z o l e , t h i o p h a n a t e - m e t h y l , a n d t h e c o n t r o l ( s e e F i g u r e 4 . 3 ) a l t h o u g h t h i s w a s n o t c o n f i r m e d s t a t i s t i c a l l y . A t 2 1 D A T t h e t h r e e t r e a t m e n t s w e r e n o t d i f f e r e n t a t a n a l p h a l e v e l o f 0 . 5 . T h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s i n a l l t r e a t m e n t s d e c r e a s e d i n t h e d a y s f o l l o w i n g t h e r e a p p l i c a t i o n o f t r e a t m e n t s a t 2 1 D A T e x c e p t f o r t h e t h i o p h a n a t e - m e t h y l a n d t h e c o n t r o l t r e a t m e n t s i n w h i c h d i s e a s e i n c i d e n c e c o n t i n u e d t o i n c r e a s e . T h e n u m b e r o f d o l l a r s p o t s b e g a n t o d e c r e a s e i n t h e c o n t r o l a n d t h i o p h a n a t e — m e t h y l p l o t s a t 2 7 D A T a n d 3 1 D A T r e s p e c t i v e l y w i t h t h e o n s e t o f c o o l e r t e m p e r a t u r e s o v e r a l l . I t i s o f n o t e t h a t f o l l o w i n g t h i s 1 4 4 b o s c a l i d a p p l i c a t i o n t h e r e w e r e n o s h o r t — t e r m i n c i d e n c e s o f d o l l a r s p o t a s h a d b e e n o b s e r v e d p r e v i o u s l y a t 3 - 5 D A T . V e r y f e w d o l l a r s p o t s w e r e o b s e r v e d i n a l l b u t t h e c o n t r o l a n d t h i o p h a n a t e - m e t h y l t r e a t m e n t s p a s t 3 2 D A T t h r o u g h 4 6 D A T w h e n t h e e x p e r i m e n t e n d e d . T h i s w a s m o s t l i k e l y d u e t o t h e e f f e c t i v e f u n g i c i d e s p e r f o r m i n g w e l l a s t h e e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s b e c a m e l e s s f a v o r a b l e f o r t h e d i s e a s e a s s u m m e r s u b s i d e d . D o l l a r s p o t s a p p e a r e d a f e w d a y s f o l l o w i n g b o s c a l i d a p p l i c a t i o n a n d t h e n t h e y d i s a p p e a r e d . T h i s d e t e r m i n a t i o n s a t i s f i e d a p r i m a r y g o a l o f t h i s e x p e r i m e n t ( s e e a b o v e ) . H o w e v e r , i s o l a t e s f r o m t h o s e d o l l a r s p o t s w e r e n o t c o l l e c t e d , a n d t h e r e f o r e t h e s e c o n d a i m w a s n o t a c h i e v e d . F I E L D — E X P E R I M E N T I I A s e c o n d f i e l d e x p e r i m e n t w a s l a u n c h e d o n t h e s a m e d a y t h a t t h e t r e a t m e n t s i n F i e l d E x p e r i m e n t I w e r e r e a p p l i e d . T h e g o a l s w e r e t h e s a m e a s a b o v e . T h i s e x p e r i m e n t h a d f e w e r t r e a t m e n t s t o a l l o w f o r m o r e p r e c i s e d e t e c t i o n o f a n y t r e a t m e n t e f f e c t s ( 3 4 ) . M a t e r i a l s a n d M e t h o d s T h i s s t u d y w a s i n i t i a t e d o n a n a d j a c e n t a r e a i n t h e s a m e f a i r w a y o n 2 0 S e p t e m b e r 2 0 0 4 , o r a p p r o x i m a t e l y t w o 1 4 5 m o n t h s s i n c e b o s c a l i d h a d b e e n a p p l i e d o n c e t o t h e g e n e r a l a r e a . T h e e x p e r i m e n t a l d e s i g n w a s a n R C B w i t h f o u r b l o c k s . T h i s e x p e r i m e n t h a d t h r e e t r e a t m e n t s : b o s c a l i d , c h l o r o t h a l o n i l , a n d a c o n t r o l . T h e f u n g i c i d e s w e r e a p p l i e d a t t h e s a m e r a t e s a s i n F i e l d E x p e r i m e n t I . T h e s u p e r i n t e n d e n t c o u n t e d a n d r e c o r d e d t h e n u m b e r o f s p o t s o n t h e s a m e d a y s h e w a s t a k i n g s i m i l a r d a t a f o r F i e l d E x p e r i m e n t I . R e s u l t s A r e p e a t e d — m e a s u r e s a n a l y s i s o f 5 - D A T t h r o u g h 1 2 — D A T c o u n t s s h o w e d s i g n i f i c a n c e ( P S 0 . 5 ) a t a l l s i x t i m e - p o i n t s ( s e e F i g u r e 4 . 5 ) . T h e b o s c a l i d a n d t h e c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s h a d f e w e r s p o t s t h a n t h e c o n t r o l a n d w e r e n o t d i f f e r e n t f r o m e a c h o t h e r a t 5 , 7 , a n d 1 4 D A T . T h e t h r e e t r e a t m e n t s d i f f e r e d f r o m e a c h o t h e r a t 9 a n d 1 2 D A T w i t h t h e c o n t r o l h a v i n g t h e m o s t s p o t s , a n d t h e c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t h a v i n g t h e f e w e s t s p o t s w i t h t h e b o s c a l i d t r e a t m e n t r a n k i n g b e t w e e n t h e m . D o l l a r s p o t s a p p e a r e d i n t h e b o s c a l i d p l o t s b e g i n n i n g a t 4 D A T a n d h a d d i s a p p e a r e d b y 1 4 D A T ( s e e F i g u r e 4 . 4 ) . M e a s u r e m e n t s o f t h e s e s p o t s ’ d i a m e t e r s s h o w e d t h e m t o b e g e n e r a l l y s m a l l e r t h a n t h o s e i n o t h e r p l o t s a l t h o u g h n o s t a t i s t i c a l c o m p a r i s o n s w e r e m a d e . 1 4 6 T h e g r e a t e s t n u m b e r s o f d o l l a r s p o t s i n t h e b o s c a l i d p l o t s w e r e c o u n t e d o n 8 D A T . L e a f — t i s s u e s a m p l e s f r o m t e n — d o l l a r s p o t s i n t h e b o s c a l i d - t r e a t m e n t p l o t s w e r e c o l l e c t e d d u r i n g t h i s b r i e f p e r i o d o f a c t i v i t y . T h e f u n g i f r o m s i x o f t h e l e a f - t i s s u e s a m p l e s w e r e i s o l a t e d i n t o p u r e c u l t u r e s . A c t i v e g r o w t h w a s a l s o i n d u c e d w i t h f o u r a d d i t i o n a l s t r a i n s i n V i t r o t h a t h a d b e e n p r e s e r v e d a s p a r t o f t h e s t o r e d c o l l e c t i o n o f P r o f e s s o r J o s e p h M . V a r g a s , J r . , a t M S U . T h e s e s t r a i n s w e r e t h e n i s o l a t e d i n t o p u r e c u l t u r e a n d r e p r e s e n t e d a “ w i l d - t y p e " o r c o m m o n s t r a i n ( V - C S ) , a b e n z i m i d a z o l e — r e s i s t a n t s t r a i n ( V — B R S ) , a n i p r o d i o n e - r e s i s t a n t s t r a i n ( V — I R S ) , a n d a D M I - r e s i s t a n t s t r a i n ( V - D R S ) . T h e s e s t r a i n s a r e r o u t i n e l y u s e d a s ‘ t e s t e r s ' t o c h e c k f o r ‘ f a l s e p o s i t i v e s ’ w h e n p e r f o r m i n g c o m p r e h e n s i v e — r e s i s t a n c e s c r e e n i n g . A l s o , f i v e i s o l a t e s f r o m t h e i n i t i a l a s s e s s m e n t s ( s e e a b o v e ) w e r e t r a n s f e r r e d t o f r e s h P D A p l a t e s . I t o f n o t e t h a t t h e i s o l a t e s f r o m t h e b o s c a l i d t r e a t m e n t s ( p r e f i x L X ) h a d b e e n e x p o s e d t o t w o a p p l i c a t i o n s o f t h e f u n g i c i d e , t h e i s o l a t e s f r o m t h e f a i r w a y s o f t h e L o c h m o o r C l u b ( p r e f i x L F ) h a d r e c e i v e d o n e a p p l i c a t i o n o f b o s c a l i d , a n d t h e f o u r l a b — c o l l e c t i o n i s o l a t e s ( p r e f i x V ) h a d n o t b e e n e x p o s e d t o a n y a p p l i c a t i o n s o f b o s c a l i d . P l u g s o f t h e s e f i f t e e n i s o l a t e s 1 4 7 w e r e i n v e r t e d o n t o p l a t e s w i t h P D A o n l y . A n o t h e r s e t o f p l u g s w a s t r a n s f e r r e d t o P D A p l a t e s a m e n d e d w i t h a d i s c r i m i n a t e c o n c e n t r a t i o n o f 4 0 u g m l ’ 1 b o s c a l i d . T h i s e x p e r i m e n t w a s r e p l i c a t e d t h r e e t i m e s . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s a n d L S D c o m p a r i s o n s a r e s h o w n i n T a b l e 4 . 4 . T h e l a c k o f b o s c a l i d s e n s i t i v i t y i n t h e V - C S a n d V - I R S s t r a i n s c a u s e d c o n c e r n , a n d i t w a s d e c i d e d t h a t a m o r e i n - d e p t h i n v e s t i g a t i o n w a s w a r r a n t e d . B R O A D E N E D D O S E - R E S P O N S E S T U D Y I N V I T R O I M a t e r i a l s a n d M e t h o d s T h i s e x p l o r a t i o n i n c l u d e d t h e f o u r m o s t r o b u s t ( L X - l , L X — 2 , L F - 7 , a n d V - C S ) a n d t h e l e a s t r o b u s t ( V — B R S ) i s o l a t e s f r o m t h e a b o v e e x p e r i m e n t . I s o l a t e s L X - l a n d L X - 2 h a d b e e n c o l l e c t e d f r o m d i f f e r e n t b l o c k s . T h r e e i s o l a t e s c o l l e c t e d b y G i l s t r a p i n a n e a r l i e r s t u d y a t t h e H T R C ( s e e C h a p t e r 3 ) w e r e a l s o i n c l u d e d a n d l a b e l e d G - C S , G - B I R S , a n d G - M R A ( s e e b e l o w ) . E a c h o f t h e f i f t e e n i s o l a t e s w a s c h a l l e n g e d w i t h d i s c r i m i n a t e d o s e s o f t h r e e f u n g i c i d e s t h a t r e p r e s e n t e d t h e b e n z i m i d a z o l e - , t h e d i c a r b o x i m i d e - , a n d t h e D M I - f u n g i c i d e c l a s s e s . T h e f u n g i c i d e s a n d r e s p e c t i v e c o n c e n t r a t i o n s w e r e t h i o p h a n a t e - m e t h y l a t 1 0 u g m l N , i p r o d i o n e a t 1 0 u g m l d , a n d 1 4 8 t r i a d i m e f o n a t 2 u g m l fi . A l l f u n g i c i d e c o n c e n t r a t i o n s w e r e r e p l i c a t e d t h r e e t i m e s . A n A O V f o r e a c h o f t h e f u n g i c i d e — c l a s s s c r e e n i n g s w a s p e r f o r m e d u s i n g t h e G L M M o d e l o f S A S . M e a n s w e r e s e p a r a t e d a n d c o m p a r e d t o e a c h o t h e r a t a n a l p h a l e v e l o f 0 . 0 5 . T h o s e i s o l a t e s w i t h z e r o v a l u e s f o r a l l t h r e e r e p l i c a t i o n s w e r e n o t i n c l u d e d i n t h e A O V s s i n c e t h e y h a d n o v a r i a n c e f o r w h i c h t o t e s t ( 4 2 ) . R e s u l t s T h e m e a n - p e r c e n t — r a d i a l - g r o w t h v a l u e s f o r e a c h i s o l a t e a r e s h o w n i n T a b l e 4 . 5 . A l l t r e a t m e n t s a n a l y z e d h a d m e a n s t h a t e x c e e d e d z e r o b y a v a l u e g r e a t e r t h a t t h e c a l c u l a t e d L S D o fi s ‘ v a l u e . T h e r e f o r e , t r e a t m e n t s h a v i n g 0 . 0 0 v a l u e s a r e i n c l u d e d i n t h e c o m p a r i s o n s t h a t f o l l o w . I s o l a t e G — C S , G - B I R S , a n d G - M R A h a d b e e n p r e v i o u s l y s c r e e n e d f o r i n V i t r o s e n s i t i v i t y t o e a c h o f t h e s e t h r e e f u n g i c i d e s . T h e s e r e s u l t s r e c o n f i r m e d t h e i r e x p e c t e d l e v e l s o f f u n g i c i d e s e n s i t i v i t i e s . I s o l a t e G — C S w a s a c o m m o n s t r a i n . I s o l a t e G - B I R S w a s a b e n z i m i d a z o l e — r e s i s t a n t s t r a i n w i t h m o d e r a t e s e n s i t i v i t y t o t h e d i c a r b o x i m i d e s . I s o l a t e G - M R A h a d m o d e r a t e r e s i s t a n c e t o a l l t h r e e c l a s s e s . 1 4 9 I s o l a t e s G - B I R S a n d V - B R S w e r e v e r y m u c h m o r e r e s i s t a n t t o t h i o p h a n a t e - m e t h y l t h a n w e r e t h e o t h e r s i x i s o l a t e s a t P S 0 . 0 0 1 . R e s i s t a n c e t o i p r o d i o n e w a s g r e a t e s t w i t h L F - 7 , L X — 2 , L X - l , G - B I R S , a n d G - M R A ( P S 0 . 0 0 1 ) . A l l t h r e e o f t h e i s o l a t e s f r o m t h e L o c h m o o r C l u b ( L — F , L — 2 , a n d L - 1 ) w e r e m o r e r e s i s t a n t t o t r i a d i m e f o n t h a n w e r e t h e o t h e r f i v e i s o l a t e s ( P S 0 0 0 1 ) . T h e D M I r e s i s t a n c e o f G - M R A w a s g r e a t e r t h a n G - I B S , V - B R S , G - C S , a n d V - C S , w h i c h a l l h a d c o m p l e t e D M I s e n s i t i v i t y . B R O A D E N E D D O S E - R E S P O N S E S T U D Y I N V I T R O I I M a t e r i a l s a n d M e t h o d s T h e s e s a m e i s o l a t e s w e r e a l s o t e s t e d i n V i t r o w i t h t h e f o l l o w i n g w i d e r a n g e o f b o s c a l i d c o n c e n t r a t i o n s : 0 , 5 , 1 0 , 2 0 , 4 0 , 8 0 , 1 6 0 , 3 2 0 , 6 4 0 , a n d 1 2 8 0 p g m l J . T h e m e t h o d o l o g y u s e d w a s t h e s a m e a s d e s c r i b e d a b o v e i n I n i t i a l A s s e s s m e n t s i n V i t r o . E a c h c o n c e n t r a t i o n w a s r e p l i c a t e d t h r e e t i m e s . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s w e r e s u b j e c t e d t o r e p e a t e d — m e a s u r e s a n a l y s e s . D a t a a t 0 u g m l d ' w e r e n o t i n c l u d e d i n e a c h a n a l y s i s b e c a u s e a l l v a l u e s w e r e 1 0 0 % , a n d t h e r e f o r e n o v a r i a n c e s e x i s t e d ( 4 2 ) . G r o u p c o m p a r i s o n s w e r e p e r f o r m e d b e t w e e n L X - l , L X - 2 , L F — 3 , a n d V - C S ( G r o u p 1 ) a n d G - B I R S , G — C S , G — M R A , a n d V — B R S ( G r o u p 1 5 0 2 ) . I n a d d i t i o n , a n a l l - p a i r - w i s e c o m p a r i s o n w a s e x e c u t e d . R e s u l t s A l l i s o l a t e s g r e w w e l l a t 0 u g m l d u T h e f i r s t a n a l y s i s c o n f i r m e d t h a t G r o u p 1 w a s d i f f e r e n t t h a t G r o u p 2 a t a l l b u t t h e h i g h e s t c o n c e n t r a t i o n . T h e g r o w t h — r e s p o n s e c u r v e s a r e s h o w n i n F i g u r e 4 . 6 . T h e P — v a l u e s w e r e P S 0 . 0 0 0 1 a t 5 - 3 2 0 u g m l ‘ l , p 5 0 . 0 0 0 7 a t 6 4 0 u g m l ’ l , a n d p 3 0 . 1 5 1 8 a t 1 2 8 0 p g m l ' l . T h e a l l — p a i r — w i s e a n a l y s i s g e n e r a t e d a n L S D v a l u e a t a n a l p h a v a l u e o f 0 . 0 5 . T h i s w a s u s e d t o d i s t i n g u i s h s e p a r a t i o n o f m e a n s a t a l l b o s c a l i d c o n c e n t r a t i o n s 2 5 u g m l " 1 a s s h o w n i n T a b l e 4 . 7 . M e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h m e a s u r e m e n t s w e r e g r e a t e s t w i t h L X — l a t c o n c e n t r a t i o n s o f 5 - 1 6 0 u g m l fi . I s o l a t e L F — 7 s h o w e d t h e s i g n i f i c a n t l y g r e a t e s t ( P S 0 . 0 5 ) i n V i t r o r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d a t t h e 3 2 0 - 1 2 8 0 u g m l ’ 1 c o n c e n t r a t i o n s . I s o l a t e V - B R S h a d t h e l e a s t o r w a s a m o n g t h o s e h a v i n g t h e l e a s t m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e g r o w t h a t a l l c o n c e n t r a t i o n s 2 5 p g m l " 1 1 5 1 D I S C U S S I O N B e n z i m i d a z o l e F u n g i c i d e s T h e i n t e r m e d i a t e r e s i s t a n c e t o t h e b e n z i m i d a z o l e s s h o w n b y t h e L o c h m o o r C l u b i s o l a t e s ( L X - l , L X - 2 , a n d L F — 7 ) a s w e l l a s G - B I R S w a s s u r p r i s i n g s i n c e b e n z i m i d a z o l e r e s i s t a n c e i s k n o w n t o b e q u a l i t a t i v e . N o s u c h i n s t a n c e s o f s u c h l e s s t h a n c o m p l e t e r e s i s t a n c e t o t h e b e n z i m i d a z o l e s h a v e b e e n r e p o r t e d b e f o r e . I t i s p o s s i b l e t h a t t h e b e t a - t u b i l i n g e n e a s s o c i a t e d b e n z i m i d a z o l e r e s i s t a n c e ( 1 3 ) m a y n o t a c t i v a t e f u l l y u p o n t h e f i r s t i n - v i t r o e x p o s u r e t o a b e n z i m i d a z o l e a f t e r s u c h f u n g i c i d e s h a v e b e e n w i t h h e l d f o r l o n g p e r i o d s o f t i m e a s t h e y h a d b e e n a t t h e L o c h m o o r C l u b a n d t h e H T R C . I n - V i t r o - s e r i a l e x p o s u r e s t o t h i o p h a n a t e - m e t h y l m i g h t w e l l a c t i v a t e t h e q u i c k o n s e t o f q u a l i t a t i v e r e s i s t a n c e . T h e r e s u l t s h o w i n g t h a t t h e t h i o p h a n a t e - m e t h y l t r e a t m e n t s h a d l o w e r m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e s t h a n t h e c o n t r o l i n F i e l d S t u d y I ( s e e T a b l e s 4 . 2 , 4 . 3 , a n t h i g u r e 4 . 3 ) , w h i l e n o t b e i n g s i g n i f i c a n t , i n d i c a t e s t h a t s u c h p h e n o m e n a m a y b e o c c u r r i n g s o m e w h a t w i t h t h e p a t h o g e n i n p l a n t a f o l l o w i n g a n e x p o s u r e t o a b e n z i m i d a z o l e a f t e r a l o n g l a y o f f . T h e r e t r e a t m e n t a t 2 1 D A T a p p e a r e d t o h a v e n o f u n g i c i d a l e f f e c t s i n c e m e a n — 1 5 2 d o l l a r — s p o t c o u n t s c o n t i n u e d t o i n c r e a s e u n a b a t e d u n t i l 2 7 D A T ( S e e F i g u r e 4 . 3 ) . Q o I F u n g i c i d e s D i m o x y s t r o b i n p e r f o r m e d p o o r l y i n t h i s e x p e r i m e n t c o m p a r e d t o i t s h i g h a c h i e v e m e n t s i n t r i a l s i n 2 0 0 1 a n d 2 0 0 2 a t t h e H T R C w h e r e i t h a d b e e n t e s t e d a s B A S — 5 0 5 b e f o r e b e i n g n a m e d H o n o r ( 5 1 , 5 2 ) . T h e a m o u n t o f d i s e a s e i n c i d e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y t h e s a m e a m o n g t h e d i m o x y s t r o b i n , t h i o p h a n a t e — m e t h y l a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s . T h i s w a s q u i t e s u r p r i s i n g c o n s i d e r i n g t h a t d i m o x y s t r o b i n h a d n e v e r b e f o r e b e e n a p p l i e d t o t h i s R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n . T h e f a i l u r e w i t h d i m o x y s t r o b i n o c c u r r e d t o o r a p i d l y f o r i t t o b e c a u s e d b y s e l e c t i o n a l o n e . T h e r e f o r e , o n e m i g h t s u r m i s e t h a t t h e g e n e t i c m a k e u p o f t h e r e s i d e n t s t r a i n s o f m u l t i r e s i s t a n t R . f l o c c o s u m a l l o w e d t h e m t o a c t i v a t e a m e c h a n i s m t o o v e r c o m e t h e e f f e c t s o f f u n g i c i d e w i t h a m o d e o f a c t i o n t o w h i c h t h e y h a d n e v e r b e f o r e b e e n e x p o s e d . O n e s u c h m e c h a n i s m c o u l d h a v e b e e n t h e m e m b r a n e — t r a n s p o r t s y s t e m d i s c u s s e d i n C h a p t e r 2 . D i m o x y s t r o b i n i s a n S S f u n g i c i d e a n d a m e m b e r o f t h e Q 0 1 c l a s s o f f u n g i c i d e s , w h i c h i s a l s o k n o w a s t h e s t r o b i l u r i n s . I t s p u n i t i v e s i t e , l i k e b o s c a l i d , i s i n t h e 1 5 3 r e s p i r a t i o n p a t h w a y w i t h i n t h e m i t o c h o n d r i a . H o w e v e r , Q o I s h a v e a c t i v i t y s p e c i f i c a l l y a t t h e q u i n o l — o x i d i z i n g s i t e i n C o m p l e x I I I ; c a r b o x i m i d e s w o r k i n C o m p l e x I I . I n 2 0 0 3 , G i l s t r a p a n d V a r g a s t e s t e d R . f l o c c o s u m i s o l a t e s c o l l e c t e d a t t h e H T R C w i t h a n i n V i t r o c h a l l e n g e o f 1 0 u g m l " 1 d i m o x y s t r o b i n ( 2 2 ) . T h e r e s u l t s a p p e a r e d t o b e p o s i t i v e f o r f u n g i c i d e r e s i s t a n c e a n d a f i e l d e x p e r i m e n t w a s s u b s e q u e n t l y l a u n c h e d . I n f o r m a t i o n r e c e i v e d l a t e r c a s t d o u b t s o n t h e i r s u s p i c i o n s i n t h a t s o m e f u n g i c a n i n d u c t a n a l t e r n a t i v e — o x i d a s e p a t h w a y i n V i t r o w i t h i n C o m p l e x I I I t o c i r c u m v e n t e f f e c t s o f Q o I f u n g i c i d e s ( 4 5 , 5 6 ) . S a l i c y l h y d r o x a m i c a c i d ( S H A M ) h a s b e e n u s e d a s a g r o w t h - m e d i u m a m e n d m e n t t o p r e v e n t s u c h a l t e r n a t i v e o x i d a t i o n . ( 3 8 , 5 5 , 5 6 ) . T h e i s o l a t e s a s s a y e d i n t h e G i l s t r a p a n d V a r g a s s t u d y f a i l e d t o g r o w i n P D A a m e n d e d w i t h 1 0 u g m l d ' d i m o x y s t r o b i n a n d 1 0 0 u g m l J ’ S H A M , w h i c h i n d i c a t e d t h e y w e r e n o t r e s i s t a n t t o t h e f u n g i c i d e . T h e i r e x p e r i m e n t w a s s u b s e q u e n t l y a b o r t e d . Q u e s t i o n s c o n c e r n i n g R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o d i m o x y s t r o b i n b e c a m e m o o t i n l a t e 2 0 0 4 w h e n i t w a s l e a r n e d f r o m t h e d i r e c t o r o f f u n g i c i d e p r o j e c t s a t B A S F t h a t p r o d u c t d e v e l o p m e n t w i t h d i m o x y s t r o b i n h a d b e e n t e r m i n a t e d d u e t o t o x i c i t y c o n c e r n s r a i s e d b y t h e E P A ( J . B a r n e s , 1 5 4 p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . I t s p o o r e f f i c a c y i n F i e l d S t u d y I i n d i c a t e s t h a t t h i s t e r m i n a t i o n w a s p r o b a b l y a g o o d b u s i n e s s d e c i s i o n , a s w e l l . A z o x y s t r o b i n , t h e f i r s t Q o I o n t h e m a r k e t a n d s o l d a s H e r i t a g e b y S y n g e n t a , h a s f a i l e d t o c o n t r o l d o l l a r s p o t ( 4 7 , 4 9 ) a s h a s t r i f l o x y s t r o b i n ( C o m p a s s ) , a B a y e r p r o d u c t ( n e i t h e r i s l a b e l e d f o r d o l l a r — s p o t c o n t r o l ) . G r e a t e r d o l l a r — s p o t i n c i d e n c e h a s b e e n o b s e r v e d i n a z o x y s t r o b i n t r e a t e d p l o t s t h a n i n c o n t r o l p l o t s ( 4 6 ) P y r a c l o s t r o b i n ( B A S F ’ s I n s i g n i a ) i s l a b e l e d f o r d o l l a r - s p o t s u p p r e s i o n ( 3 ) . R e s i s t a n c e t o t h e 0 0 1 s a p p e a r s t o i n v o l v e f e w e r g e n e s t h a t d o e s D M I r e s i s t a n c e ( 2 4 ) , a n d t h e r e f o r e r e s i s t a n c e t o t h e Q o I s w o u l d b e e x p e c t e d t o o c c u r a t a f a s t e r r a t e t h a n r e s i s t a n c e t o t h e D M I s ( 1 2 ) . F R A C h a s d e s i g n a t e d t h e Q 0 1 f u n g i c i d e s a s h a v i n g a “ h i g h r i s k " f o r f u n g i c i d e r e s i s t a n c e ( 8 ) . I t r e m a i n s t o b e s e e n i f a n y n e w Q o I — f u n g i c i d e p r o d u c t s w i l l b e l a b e l e d f o r d o l l a r — s p o t c o n t r o l . T h i s s t u d y s u g g e s t s t h a t r e p o r t s o f R . f l o c c o s u m r e s i s t a n c e t o a n y s u c h p r o d u c t s w o u l d b e s u b s e q u e n t l y f o r t h c o m i n g . T h e p u t a t i v e - a c t i o n s i t e o f t h e Q 0 1 f u n g i c i d e s i s w i t h i n C o m p l e x I I I o f t h e e l e c t r o n - t r a n s p o r t p a t h w a y o f m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t i o n . T h e c a r b o x i m i d e s a c t a t C o m p l e x I I w h e r e a n a l t e r n a t i v e - o x i d a s e p a t h w a y i s n o t 1 5 5 k n o w n t o e x i s t . P r i o r s t u d i e s w i t h s e v e r a l c a r b o x i m i d e s h a v e n o t r e p o r t e d t h e u s e o f S H A M a s p a r t o f t h e i r m e t h o d o l o g i e s ( 2 0 , 2 1 , 3 7 , 6 3 ) . N e i t h e r d i d M a t h e r o n e t a l . w h o u s e d P D A t o a s s a y t h e r e l a t i v e s u p p r e s s i o n b y s e v e r a l n o n - Q o I f u n g i c i d e s o n S c l e r o t i n i a m i n o r J a g g e r a n d S . s c l e r o t i o r u m ( l i b . ) d e B a r y , t h e c a u s a l o r g a n i s m s o f l e t t u c e d r o p ( 3 5 ) . H o w e v e r , P a s c h e e t a l . d i d u s e S H A M i n t h e i r a s s a y s o f A l t e r n a r i a s o l a n i S o r a u e r ( E l l i s ) , a f o l i a r p a t h o g e n o f p o t a t o , u s i n g f o u r f u n g i c i d e s t h a t i n c l u d e d a z o x y s t r o b i n ( 3 8 ) . T h e q u e s t i o n o f w h e t h e r S H A M s h o u l d h a v e b e e n u s e d i n t h i s s t u d y w a s m o o t s i n c e R . f l o c c o s u m i s o l a t e s h a d g r o w n v e r y l i t t l e o r a t a l l i n P D A a m e n d e d w i t h 2 5 , 5 0 , a n d 1 0 0 u g m l d ' S H A M a s d e s c r i b e d e a r l i e r . T h i s f u n g i t o x i c e f f e c t w a s a c o n f i r m a t i o n o f i n f o r m a t i o n p r o v i d e d b y D r . F r a n k W o n g w h o w a s o n e o f t h e c o a u t h o r s o f t h e S c h e i d e g g e r e t a l r e p o r t ( 4 3 ) . T h e w a t e r a g a r u s e d i n t h e i r e x p e r i m e n t s w i t h b o s c a l i d w a s n o t a m e n d e d w i t h S H A M ( F . W o n g , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . D M I F u n g i c i d e s T h e a p p e a r a n c e o f a p p r e c i a b l e n u m b e r s o f d o l l a r s p o t s a t 1 7 D A T i n t h e p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t i n d i c a t e d t h a t t h e R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n w a s D M I r e s i s t a n t . I n V i t r o 1 5 6 a n a l y s i s o f t h r e e i s o l a t e s i n d i c a t e d t h a t t h e d e g r e e o f r e s i s t a n c e a t L o c h m o o r C l u b c o u l d b e e x t r e m e l y h i g h ( s e e T a b l e 4 . 5 ) . T a b l e 4 . 6 g i v e s a n i n d i c a t i o n o f t h e t r e n d o f i n c r e a s i n g r e s i s t a n c e o v e r t h e l a s t t h i r t e e n y e a r s . T h e f i r s t v a l u e i n t h e ‘ N o D M I s ’ c o l u m n i s t h e m e a n — p e r c e n t - r e l a t i v e — g r o w t h v a l u e o f 5 0 i s o l a t e s t a k e n a t s e l e c t e d l o c a t i o n s a r o u n d t h e g o l f c o u r s e d u r i n g a b a s e l i n e s u r v e y a t L o c h m o o r C l u b ( 2 8 ) . T h e o t h e r s u c h d e s i g n a t e d v a l u e s a r e t h e m e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h m e a s u r e m e n t f o r c o n t r o l t r e a t m e n t s o f e x p e r i m e n t s c o n d u c t e d t h e r e f r o m 1 9 9 2 - 9 5 ( u n p u b l i s h e d d a t a ) . T h e v a l u e s i n t h e ‘ D M I s ’ c o l u m n w e r e f o r t h e m e a n - p e r c e n t — r e l a t i v e - g r o w t h m e a s u r e m e n t s f o r t r i a d i m e f o n , f e n a r i m o l , a n d p r o p i c o n a z o l e t r e a t m e n t s a p p l i e d w i t h e q u i t a b l e a n d t y p i c a l r a t e s f o r d o l l a r s p o t a t 2 1 - d a y i n t e r v a l s d u r i n g t h o s e s a m e t r i a l s . T h e 2 0 0 4 v a l u e i s t h e m e a n s o f t h e t h r e e i s o l a t e s f r o m L o c h m o o r C l u b t h a t w e r e u s e d i n t h e B r o a d e n e d D o s e - R e s p o n s e S t u d y I d e t a i l e d e a r l i e r . T h e a p p a r e n t i n c r e a s e i n R . f l o c c o s u m D M I r e s i s t a n c e s i n c e 1 9 9 5 o c c u r r e d e v e n t h o u g h t h e n o D M I s h a d b e e n u s e d f o r d o l l a r - s p o t c o n t r o l a t t h e L o c h m o o r C l u b s i n c e 1 9 9 1 a s r e p o r t e d b y G o l e m b i e w s k i , e t a 1 ( 2 8 ) , n o r s i n c e a c c o r d i n g t o t h e g o l f c o u r s e s u p e r i n t e n d e n t ( M . J o n e s , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . A n e x p l a n a t i o n f o r s u c h a n i n c r e a s e i n 1 5 7 D M I r e s i s t a n c e o b s e r v e d h e r e w a s g i v e n b y H s i a n g e t a l w h o d o c u m e n t e d i n c r e a s e d v i r u l e n c e o f D M I - r e s i s t a n t s t r a i n s c o m p a r e d t o D M I - s e n s i t i v e s t r a i n s ( 2 9 ) . T h e y c o n c l u d e d t h a t e v e n i n t h e a b s e n c e o f D M I s a p o p u l a t i o n s h i f t t o w a r d g r e a t e r D M I r e s i s t a n c e c o u l d o c c u r . T h e d e g r e e o f i n V i t r o D M I r e s i s t a n c e m e a s u r e d w i t h t h e s e l a s t i s o l a t e s t a k e n f r o m t h e L o c h m o o r C l u b i s t h e g r e a t e s t e v e r r e p o r t e d . D i m e t h y l a t i o n - i n h i b i t o r f u n g i c i d e s h a v e b e e n , h o w e v e r , r o u t i n e l y u s e d t h e r e i n a p r e v e n t a t i v e — t r e a t m e n t p r o g r a m f o r e c t o t r o p h i c - r o o t d i s e a s e s . S u c h a p r o g r a m w a s d e s c r i b e d a n d u s e d i n T r e a t m e n t 1 4 i n C h a p t e r 2 . E a c h o f t h e t w o - D M I a p p l i c a t i o n s a p p l i e d e a c h s p r i n g w a s a t a s p e c i f i e d r a t e t h a t w a s f o u r t i m e s t h e t y p i c a l d o l l a r - s p o t r a t e f o r a n y D M I t h a t w a s u s e d . T h e h i g h d e g r e e o f i n c r e a s e d r e s i s t a n c e t h a t a p p e a r s t o h a v e o c c u r r e d a t L o c h m o o r C l u b w a s m o s t l i k e l y e x a c e r b a t e d v i a s e l e c t i o n p r e s s u r e b y t h e s e s p r i n g a p p l i c a t i o n s o f D M I s . S u p p o r t f o r t h i s c o n t e n t i o n c a n b e f o u n d i n a p r o c e e d i n g s a r t i c l e b y D w y e r a n d V a r g a s w h o t e s t e d t h e r e s i d u a l e f f e c t o f d o l l a r — s p o t f u n g i c i d e s o n e - t i m e a p p l i e d i n t h e s p r i n g ( 1 7 ) . A l l t r e a t m e n t s p r o v i d e d c o n t r o l t h r o u g h t h e e n d o f J u l y a n d t h e m i d d l e o f A u g u s t o f 2 0 0 2 a n d 2 0 0 3 r e s p e c t i v e l y . T r i a d i m e f o n a t 7 . 6 g 1 0 0 ' 1 a p p l i e d 1 5 8 i n e a r l y M a y w a s t h e m o s t e f f e c t i v e t r e a t m e n t . T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d a t t h e H T R C , w h i c h h a d a p o p u l a t i o n o f R . f l o c c o s u m r e l a t i v e l y s e n s i t i v e t o t h e D M I s . O n e w o u l d n o t e x p e c t a r e s i d u a l a c t i v i t y a s e n d u r i n g o n s i t e s h a v i n g D M I r e s i s t a n c e . A z o x y s t r o b i n a n d t r i f l o x y s t r o b i n ( s e e a b o v e ) c a n b e u s e d e f f e c t i v e l y a s w e l l f o r e c t o t r o p h i c — r o o t - d i s e a s e s u p p r e s s i o n a n d s h o u l d r e d u c e t h e d e g r e e o f s e l e c t i o n f o r D M I - r e s i s t a n t s t r a i n s . T h i s w o u l d a p p l y p a r t i c u l a r l y w h e r e t h e l e n g t h o f c o n t r o l f o r D M I s i s 2 1 d a y s o r l o n g e r m e a n i n g t h a t t h e R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n h a s a r e l a t i v e l y l o w l e v e l o f D M I r e s i s t a n c e . I f e i t h e r o f t h e s e 0 0 1 f u n g i c i d e s i s u s e d f o r t h e p r e v e n t i o n o f e c t o t r o p h i c — r o o t d i s e a s e s , o n e s h o u l d e x p e c t d o l l a r - s p o t s y m p t o m s t o o c c u r e a r l i e r t h a n w h e n a D M I i s u s e d f o r s u c h p u r p o s e . T h i s w o u l d p r o b a b l y n o t b e a g o o d s t r a t e g y a t L o c h m o o r C l u b s i n c e i t a p p e a r s t h a t t h e l e v e l o f D M I - r e s i s t a n c e a t L o c h m o o r C l u b m a y w e l l h a v e r e a c h e d i t s u p p e r l i m i t . T h e r e f o r e , a n y R . f l o c c o s u m s u p p r e s s i o n a f f o r d e d b y S p r i n g a p p l i c a t i o n s o f D M I s w o u l d h e l p d e l a y t h e a d v e n t o f c h l o r o t h a l o n i l t r e a t m e n t s ( s e e b e l o w ) . 1 5 9 D i c a r b o x i m i d e F u n g i c i d e s . I p r o d i o n e h a s b e e n e f f e c t i v e l y u s e d a t t h e L o c h m o o r C l u b p e r i o d i c a l l y s i n c e 1 9 9 3 t o p r o v i d e l a t e — s e a s o n c o n t r o l o f d o l l a r s p o t ( M . J o n e s , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . T h e s e a p p l i c a t i o n s h a v e o c c u r r e d i n l a t e S e p t e m b e r o r e a r l y O c t o b e r i n y e a r s w h e r e c o n d i t i o n s f a v o r i n g d i s e a s e a c t i v i t y h a d m o d e r a t e d . T a b l e s 4 . 1 a n d 4 . 2 p l a c e i p r o d i o n e i n t h e m i d — r a n g e o f f u n g i c i d e e f f e c t i v e n e s s . D i c a r b o x i m i d e r e s i s t a n c e w a s n o t a d d r e s s e d i n t h i s s t u d y , b u t c o m p a r i s o n s o f m e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s h e r e a n d m e a n — q u a l i t y r a t i n g s i n 1 9 9 2 ( 2 5 ) a n d 1 9 9 3 ( 2 5 , 2 7 ) s h o w e d n o c a s u a l d i f f e r e n c e s i n i p r o d i o n e e f f e c t i v e n e s s . A s i n g l e a p p l i c a t i o n o f a d i c a r b o x i m i d e a p p e a r s t o b e a g o o d s t r a t e g y a s t h e f i r s t d o l l a r — s p o t f u n g i c i d e a p p l i e d e a c h s e a s o n i f a z o x y s t r o b i n i s u s e d t o s u p p r e s s e c t o t r o p h i c — r o o t — d i s e a s e p a t h o g e n s a s s u g g e s t e d a b o v e . H o w e v e r , t h i s m i g h t w e l l d i m i n i s h i p r o d i o n e u t i l i t y l a t e r i n t h e s e a s o n . T h e d i c a r b o x i m i d e s a p p e a r t o b e g o o d c h o i c e s f o r a l t e r n a t i o n w i t h c h l o r o t h a l o n i l f o r t h e r e a s o n s p r e s e n t e d i n C h a p t e r s 2 a n d 3 , e s p e c i a l l y w h e r e D M I r e s i s t a n c e i s a n i n c r e a s i n g p r o b l e m . 1 6 0 C h l o r o t h a l o n i l F u n g i c i d e I n 1 9 9 9 , t h e E P A p l a c e d r e s t r i c t i o n s o n c h l o r o t h a l o n i l t h a t i n c l u d e d i t s u s e o n g o l f c o u r s e s d u e t o i t s h i g h t o x i c i t y t o f i s h a n d o t h e r a q u a t i c o r g a n i s m s c o u p l e d w i t h t h e o f t e n n e a r p r o x i m i t y o f g o l f c o u r s e s t o s u r f a c e w a t e r s a n d o t h e r a q u a t i c s y s t e m s ( 5 4 ) . T h e s e r e g u l a t i o n s l i m i t i t s a n n u a l u s e t o 2 9 1 . 5 , 5 8 3 . 2 , a n d 8 1 8 . 7 g 1 0 0 ' 1 o n p u t t i n g g r e e n s , t e e s , a n d f a i r w a y s r e s p e c t i v e l y ( 2 ) . C h l o r o t h a l o n i l h a s c o n s i s t e n t l y p r o v i d e d e x c e l l e n t c o n t r o l a t L o c h m o o r C l u b o n o n e o f t h e m o s t D M I - r e s i s t a n t p o p u l a t i o n s o f R . f l o c c o s u m e v e r f o u n d . I t s u s e o n f a i r w a y s i s t y p i c a l l y 1 7 . 6 t o 2 5 . 2 g 1 0 0 m d ' a p p l i e d w e e k l y w i t h t h e r a t e d i c t a t e d b y c u r r e n t w e a t h e r a n d s h o r t - t e r m f o r e c a s t s ( M . J o n e s , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . T h e s e r a t e s a r e a t o r b e l o w t h e l o w e s t r a t e s p e c i f i e d o n t h e l a b e l ( 2 ) . T h e u s e o f s u c h r e l a t i v e l y l o w r a t e s a l l o w s f o r 1 1 t o 1 6 w e e k s o f c o n t r o l d u r i n g t h e p e r i o d s o f g r e a t e s t d o l l a r — s p o t p r e s s u r e . T h e r e s o u r c e s n e e d e d t o m a k e s p r a y a p p l i c a t i o n s a r e s u b s t a n t i a l i n t e r m s o f q u a l i f i e d p e r s o n n e l a n d s p e c i a l i z e d e q u i p m e n t . T h e d e m a n d s a s s o c i a t e d w i t h w e e k l y a p p l i c a t i o n s a r e a p p r o x i m a t e l y t h r e e t i m e s g r e a t e r t h a n t h o s e i n v o l v e d w i t h s y s t e m i c — f u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s 1 6 1 o c c u r r i n g a t 2 1 — d a y i n t e r v a l s . I t i s i m p o r t a n t t o n o t e a n y d e c r e a s e i n t h e e f f e c t i v e n e s s o f c h l o r o t h a l o n i l o r a n y f u r t h e r r e s t r i c t i o n s o n i t s u s e w o u l d i m p e r i l t h e t u r f c o n d i t i o n s t h e r e a n d c o m p a r a b l e v e n u e s w h e r e s y s t e m i c - f u n g i c i d e — u s e o p t i o n s a r e l i m i t e d . B o s c a l i d F u n g i c i d e S h o r t - t e r m o c c u r r e n c e s o f a l i m i t e d n u m b e r o f d o l l a r s p o t s f o l l o w i n g b o s c a l i d a p p l i c a t i o n s a t t w o g o l f c o u r s e s w e r e d u p l i c a t e d i n t w o e x p e r i m e n t s a t o n e o f t h e s e v e n u e s . T h e m e a n - d o l l a r — s p o t c o u n t s w e r e s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r w i t h t h e b o s c a l i d t r e a t m e n t ( P S 0 . 0 5 ) t h a n w i t h t h e t h r e e s y s t e m i c - a n d o n e c o n t a c t — f u n g i c i d e t r e a t m e n t s a t 5 D A T i n F i e l d E x p e r i m e n t I ( s e e T a b l e 4 . 2 ) . F i e l d E x p e r i m e n t I I d e m o n s t r a t e d s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r m e a n — d o l l a r — s p o t c o u n t s w i t h b o s c a l i d t h a n w i t h c h l o r o t h a l o n i l o n t h r e e c o n s e c u t i v e o b s e r v a t i o n s : 7 , 9 , a n d 1 2 D A T . I n - V i t r o a s s a y s o f t w o i s o l a t e s c o l l e c t e d f r o m t w o o f t h e b o s c a l i d - t r e a t m e n t p l o t s i n F i e l d E x p e r i m e n t I I s h o w e d t h e m t o b e r e s i s t a n t t o b o s c a l i d o v e r a w i d e r a n g e o f c o n c e n t r a t i o n s . S i m i l a r m e t h o d o l o g y h a s b e e n u s e d s u c c e s s f u l l y t o v e r i f y t h e f i r s t r e p o r t e d i n s t a n c e s o f R . f l o c o s s u m r e s i s t a n c e t o t h r e e c l a s s e s o f s i n g l e — s i t e f u n g i c i d e s ( 1 6 , 2 8 , 5 9 ) . C o m p a r a b l e p r o c e d u r e s h a v e b e e n 1 6 2 u s e d t o a s s e s s t h e s e n s i t i v i t i e s o f o t h e r p a t h o g e n s t o b o s c a l i d ( 3 5 , 3 8 ) . T h e t y p e o f t w o — t i e r e d i n v e s t i g a t i o n c o n d u c t e d h e r e t h a t i n c l u d e d b o t h i n p l a n t a a n d i n V i t r o t e s t i n g h a s b e e n m a n d a t e d f o r a s s e s s i n g s u s p e c t e d f u n g i c i d e r e s i s t a n c e w i t h R . f l o c c o s u m ( 9 ) . T h e i n - v i t r o r e s i s t a n c e o f V — C S t o b o s c a l i d i s d i f f i c u l t t o e x p l a i n . E i t h e r i t h a d i n h e r e n t b o s c a l i d r e s i s t a n c e w h e n i t w a s c o l l e c t e d o v e r 2 0 y e a r s a g o , o r i t h a d u n d e r g o n e s o m e t y p e o f c h a n g e o v e r t h e c o u r s e o f t h o s e m a n y y e a r s d u r i n g w h i c h i t h a s b e e n p e r i o d i c a l l y c u l t u r e d f r o m l o n g - t e r m s t o r a g e a n d t h e n s t o r e d a g a i n . T h e f o r m e r i s p r o b a b l y a m o r e p l a u s i b l e e x p l a n a t i o n t h a n t h e l a t t e r s i n c e t h e s i m i l a r l y u s e d V - B R S w a s s e n s i t i v e t o b o s c a l i d . T a b l e 4 . 7 s h o w s t h a t t h e t h r e e L o c h m o o r C l u b i s o l a t e s a r e m u c h g r e a t e r i n V i t r o r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d t h a n t h e t h r e e i s o l a t e s f r o m t h e H T R C . N o c o m p a r i s o n s c a n b e m a d e b e t w e e n t h e p o p u l a t i o n s a t t h e t w o s i t e s s i n c e s o f e w s a m p l e s w e r e a n a l y z e d c o m p a r e d t o t h e a c c e p t e d s a m p l e s i z e o f 5 0 i s o l a t e s t h a t w o u l d r e p r e s e n t 9 5 % o f t h e p h e n o t y p e s o f a p a r t i c u l a r p o p u l a t i o n ( 3 3 ) . T h e s h o r t - l i v e d e x i s t e n c e o f L X — l a n d L X - 2 c o u p l e d w i t h t h e i r o b s e r v e d p r o d u c t i o n o f s m a l l i n f e c t i o n c e n t e r s a t y p i c a l o f d o l l a r s p o t s u g g e s t s t h a t e v e n t h e m o s t b o s c a l i d — r e s i s t a n t i s o l a t e s f o u n d t h e r e l a c k p a t h o g e n i c 1 6 3 a g g r e s s i v e n e s s . T h i s h a s a l s o b e e n o b s e r v e d w i t h d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t s t r a i n s t h a t a l s o l a c k e n v i r o n m e n t a l f i t n e s s ( 4 8 ) . T h e e n v i r o n m e n t a l f i t n e s s o f t h e b o s c a l i d — r e s i s t a n t i s o l a t e s w a s n o t a s s e s s e d i n t h i s s t u d y . W h e t h e r o r n o t t h e s e o r o t h e r r e s i s t a n t i s o l a t e s w o u l d i n c r e a s e i n n u m b e r s u n d e r s u b s e q u e n t b o s c a l i d - s e l e c t i o n p r e s s u r e c o u l d b e a n s w e r e d v i a f u t u r e e x p e r i m e n t s s i m i l a r t o t h o s e c o n d u c t e d i n t h i s i n v e s t i g a t i o n . A l l t h r e e b o s c a l i d — r e s i s t a n t i s o l a t e s s h o w e d v e r y h i g h r e s i s t a n c e t o t h e D M I s . A t h o r o u g h a s s e s s m e n t o f t h e L o c h m o o r C l u b R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n w o u l d m o s t l i k e l y s h o w i t t o h a v e a v e r y h i g h f r e q u e n c y o f D M I - r e s i s t a n t i s o l a t e s . S u c h c o n f i r m a t i o n w o u l d s u g g e s t t h a t a n y f u t u r e r e p o r t s o f b o s c a l i d r e s i s t a n c e m a y w e l l c o n c e r n s w a r d s h a v i n g R . f l o c c o s u m p o p u l a t i o n s t h a t a r e a l r e a d y D M I r e s i s t a n t . T h e f i n d i n g s d o c u m e n t e d h e r e s h o u l d b e o f c o n c e r n r e g a r d i n g a n y w i d e - s p r e a d a p p l i c a t i o n s o f b o s c a l i d t o t h i s g o l f c o u r s e i n t h e f u t u r e . H o w e v e r , b o s c a l i d d i d p e r f o r m s i g n i f i c a n t l y b e t t e r ( P S 0 . 0 5 ) t h a n a n y o t h e r s y s t e m i c f u n g i c i d e i n F i e l d E x p e r i m e n t I a f t e r t h e s h o r t - l i v e d i s o l a t e s d i s a p p e a r e d . A l s o , t h e s h o r t - t e r m - a p p e a r a n c e p h e n o m e n a d i d n o t o c c u r f o l l o w i n g t h e r e t r e a t m e n t a t 2 1 1 6 4 D A T , w h i c h i n r e a l i t y w a s t h e t h i r d e x p o s u r e t o b o s c a l i d . T h e e v e n t s t h a t o c c u r r e d a t b o t h t h e L o c h m o o r C l u b a n d t h e R e d R u n G o l f C l u b w e r e u n f o r t u n a t e a n d c o s t l y o c c u r r e n c e s . E v i d e n c e s h o w n h e r e i s j u s t i f i c a t i o n f o r t h e s u p e r i n t e n d e n t s ’ r e s c u e a p p l i c a t i o n s o f c h l o r o t h a l o n i l i n t h a t i t m i g h t w e l l h a v e a p p e a r e d t o e a c h o f t h e m t h a t t h e y h a d a p p l i e d a n i n e f f e c t i v e f u n g i c i d e f o r d o l l a r - s p o t c o n t r o l . E v e n s o , b o s c a l i d a p p e a r s t o b e a u s e f u l t o o l t o c o m b a t d o l l a r s p o t p a r t i c u l a r l y i n l i e u o f D M I f u n g i c i d e s u n t i l b o s c a l i d - r e s i s t a n t s t r a i n s o f R . f l o c c o s u m h a v i n g p a t h o g e n i c a g g r e s s i v e n e s s e v e n t u a l l y a r i s e , i n w h i c h c a s e c o n t i n u e d u s e o f t h e f u n g i c i d e w o u l d u n d o u b t e d l y r e d u c e i t s e f f e c t i v e n e s s a n d u t i l i t y . T h e s h o r t - l i v e d a p p e a r a n c e o f a s i g n i f i c a n t n u m b e r o f d o l l a r s p o t s f o l l o w i n g b o s c a l i d a p p l i c a t i o n i n t w o s u c c e s s i v e e x p e r i m e n t s s a t i s f i e d t h e p r i m a r y o b j e c t i v e o f t h e s t u d y . T h e s e c o n d a r y g o a l w a s t o d e t e r m i n e i f i s o l a t e s t a k e n f r o m t h o s e d o l l a r s p o t s a s s a y e d p o s i t i v e l y f o r i n V i t r o r e s i s t a n c e t o b o s c a l i d . T h i s a i m w a s a l s o a c c o m p l i s h e d . 1 6 5 T a b l e 4 . 1 . A p p l i c a t i o n r a t e s a n d t i m i n g i n t e r v a l s o f t h e s e v e n t r e a t m e n t s i n F i e l d E x p e r i m e n t I . T r e a t m e n t C l a s s R a t e x D a y s y 1 . c o n t r o l 2 . c h l o r o t h a l o n i l n i t r i l e 2 5 . 2 7 3 . b o s c a l i d c a r b o x i m i d e 3 . 8 2 1 4 . d i m o x y s t r o b i n Q o I 3 . 1 2 1 5 . t h i o p h a n a t e - m e t h y l b e n z i m i d a z o l e 1 5 . 3 2 1 6 . i p r o d i o n e d i c a r b o x i m i d e 1 5 . 3 2 1 7 . p r o p i c o n a z o l e D M I 5 . 0 2 1 y R a t e s i n 9 A I 1 0 0 m 2 . Y I n t e r v a l s b e t w e e n a p p l i c a t i o n s . 1 6 6 T a b l e 4 . 2 . M e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s o f s e v e n t r e a t m e n t s w i t h s i x f u n g i c i d e s r e p r e s e n t i n g d i f f e r e n t f u n g i c i d e c l a s s e s a t f i v e d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) w i t h l e a s t — s i g n i f i c a n t - d i f f e r e n c e ( L S D ) c o m p a r i s o n s ( P S 0 . 0 5 ) o f b a s e - 1 0 l o g — t r a n s f o r m e d c o u n t s . . . M e a n L o g F u n g 1 c 1 d e C l a s s ( 5 D A T ) ( 5 D A T ) c o n t r o l 2 0 . 0 2 . 9 1 2 A t h i o p h a n a t e - b e n z i m i d a z o l e 1 1 . 0 0 2 . 2 9 7 A B m e t h y l b o s c a l i d x c a r b o x i m i d e 7 . 2 5 1 . 9 3 8 A B i p r o d i o n e d i c a r b o x i m i d e 1 . 0 0 - 0 . 7 7 6 C c h l o r o t h a l o n i l n i t r i l e 0 . 2 5 - 1 . 3 0 5 C d i m o x y s t r o b i n y Q o I 0 . 2 5 - 1 . 3 0 5 C p r o p i c o n a z o l e D M I 0 . 2 5 - 1 . 3 0 5 C L S D m o s 1 . 2 1 4 x B A S 5 0 5 Y B A S 5 1 0 F 1 6 7 T a b l e 4 . 3 . M e a n — d o l l a r — s p o t c o u n t s o f s e v e n t r e a t m e n t s w i t h s i x f u n g i c i d e s r e p r e s e n t i n g d i f f e r e n t f u n g i c i d e c l a s s e s a t 2 1 d a y s a f t e r t r e a t m e n t ( D A T ) w i t h l e a s t - s i g n i f i c a n t — d i f f e r e n c e ( L S D ) c o m p a r i s o n s ( P = 0 . 0 5 ) o f l o g — t r a n s f o r m e d c o u n t s . . . M e a n L o g F u n g 1 c 1 d e C l a s s ( 2 1 D A T ) ( 2 1 D A T ) c o n t r o l 1 4 0 . 0 0 4 . 9 4 2 A t t h P h a n a t e ’ b e n z i m i d a z o l e 7 6 . 5 0 4 . 2 2 2 A B m e t h y l p r o p i c o n a z o l e D M I 4 9 . 2 5 3 . 8 9 1 A B C d i m o x y s t r o b i n x Q o I 3 2 . 2 5 2 . 8 9 1 B C D i p r o d i o n e d i c a r b o x i m i d e 1 4 . 2 5 2 . 3 8 1 C D b o s c a l i d y c a r b o x i m i d e 7 . 2 5 0 . 6 8 5 E c h l o r o t h a l o n i l n i t r i l e 0 . 2 5 - 1 . 3 0 5 F L S D 0 _ 0 5 1 6 4 7 X B A S 5 0 5 Y B A S 5 1 0 F I S L L L v L L L L L L O l X X F - X X x X F F I - D - B - F — F - - - — c — - — - _ - V L V L V t e R e l a t i v S O S l a R l R l l 2 7 s 4 5 6 3 9 8 R S G r o w t h e 9 7 7 0 9 7 2 0 4 3 1 8 7 5 4 6 6 6 6 5 5 5 5 4 4 4 3 3 3 2 . . . . - - . . - . . . . . - 7 7 3 0 7 0 7 0 7 7 7 3 0 3 0 A X B C C D E E E F T a b l e 4 . 4 . M e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f f i f t e e n i s o l a t e s i n t h r e e r e p l i c a t i o n s g r o w n o n P D A o n l y a n d P D A a m e n d e d w i t h 4 0 u g m l q ' b o s c a l i d . M e a n - P e r c e n t - L S D 0 _ 0 5 = 3 . 7 x M e a n s w i t h t h e s a m e l e t t e r a r e n o t d i f f e r e n t a t P S 0 . 0 5 . T a b l e 4 . 5 . o f d i f f e r e n t s i n g l e - s i t e f u n g i c i d e s w i t h t h r e e P e r c e n t - m e a n - r e l a t i v e - g r o w t h v a l u e s o f e i g h t i s o l a t e s g r o w n o n P D A o n l y a n d P D A a m e n d e d w i t h t h r e e s e t s r e p l i c a t i o n s . B e n Z é m i g z z o l e D 1 c a : § > : : ; m i d e D M I C l a s s t h i i z g i g i t e - i p r o d i o n e . t r i a d i m e f o n ( 1 0 n o r m l ‘ l ) ( 1 0 p g m l - ) ( 2 “ g “ 1 1 . 1 ) I s o l a t e % M e a n — R e l a t i v e G r o w t h L F - 7 4 5 . 3 2 4 . 2 A 9 5 . 3 A L X - 2 2 6 . 4 C 1 7 . 4 B 8 9 . 8 A L X — l 2 9 . 7 1 7 . 1 B 8 5 . 4 A G - M R A 1 1 . 9 C D 1 3 . 2 B 1 1 . 9 B G - B I R S 9 5 . 0 1 7 . 0 B 0 . 0 C V - B R S 8 9 . 2 0 . 0 0 . 0 C G - C S 0 . 0 D 0 . 0 0 . 0 C V — C S 0 . 0 D 0 . 0 0 . 0 C L S D o fl s 1 7 . 0 7 . 4 9 . 9 X M e a n s w i t h t h e s a m e l e t t e r a r e n o t d i f f e r e n t a t P S 0 . 0 5 . 1 7 0 T a b l e 4 . 6 . M e a n - p e r c e n t - r a d i a l — g r o w t h v a l u e s f r o m t h r e e e x p e r i m e n t s a t t h e L o c h m o o r C l u b f r o m 1 9 9 1 — 2 0 0 4 w i t h n o s t a t i s t i c a l i n f e r e n c e s n o t e d o r i m p l i e d . Y e a r N o D M I s D a t a S o u r c e ( 2 5 ) ( 2 3 ) ( 2 5 ) ( 2 3 ) S u m m e r 1 9 9 1 2 9 . 0 N A S u m m e r 1 9 9 2 2 9 . 4 2 8 . 2 F a l l 1 9 9 2 3 2 . 4 3 9 . 4 S u m m e r 1 9 9 3 2 9 . 5 N A 3 9 . 5 F a l l 1 9 9 3 3 2 . 9 3 9 . 0 4 1 . 8 S u m m e r 9 4 3 2 . 3 3 9 . 2 F a l l 9 4 2 9 . 4 4 1 . 8 S u m m e r 9 5 4 1 . 5 4 3 . 6 S u m m e r 2 0 0 4 ( D a t a f r o m C h a p t e r 3 ) + A m e n d e d - m e d i a c o n c e n t r a t i o n o f 2 u g m l d ' t r i a d i m e f o n . 1 7 1 9 0 . C C B B f o 7 1 0 0 6 5 6 e 4 0 . . 6 7 1 1 0 1 7 4 8 . . . . . 1 6 3 3 2 1 1 1 1 1 0 8 2 1 e e u l a v s o m D S L n a t a r a a v c s h o t b w o f r o g - s e n v o i i - t n a t r 8 9 1 0 8 3 6 7 h 5 2 6 4 5 5 4 3 6 . 8 1 . . . . . . 8 4 6 4 4 3 2 1 1 1 1 1 t h t i w s 4 3 4 e 5 5 t n 2 3 0 h 3 6 . . . t . . 7 3 0 7 o e 2 2 2 1 4 1 m t a e r t t h g i C B A 0 6 1 5 8 5 9 2 . . . . 2 8 1 5 3 2 3 2 h c a e m o r f t n e e r A f 1 ' f 0 3 4 8 5 9 e f o 9 4 l 9 5 6 0 1 m . 8 . . . . . s 9 . 3 4 3 3 2 1 0 6 5 5 0 7 e d 1 1 u i l i d y l t l n 9 4 . 4 2 a c i f i n g i s t o n 2 2 7 7 9 9 t t 6 2 5 6 2 7 7 6 . . . . 0 7 e . . r 0 1 a a a 3 2 5 5 4 4 l r e t r n - e t c n n 0 6 e o . c c r e n 1 6 p " e 5 5 . 5 4 r e t t e l e m a s e 7 5 . 3 2 A A B B h D E ‘ t e . a . . . . . M 8 0 7 2 4 5 1 8 9 3 5 1 6 8 1 2 9 7 y b 8 8 7 7 4 4 d s n o 7 i . t 4 a 0 0 0 1 1 0 0 c e e i l l b p a e t a l o s l 2 - - X X T r I L L e w o l l o f s S n . R a 8 B e 0 - M . 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R e g r e s s i o n l i n e o f t h r e e r e p l i c a t i o n s o f m e a n - p e r c e n t - r e l a t i v e - g r o w t h m e a s u r e m e n t s o f i s o l a t e L F - 7 a g a i n s t t h e b a s e - 1 0 l o g a r i t h m s o f f i v e - f u n g i c i d e c o n c e n t r a t i o n s r a n g i n g f r o m 5 t o 4 0 u g m l d u o \ \ R = = 0 8 0 \ 0 \ ! O y = - 2 2 . 2 2 2 x + 7 1 . 7 8 1 O ‘ \ \ \ \ \ \ \ \ ‘ I f 1 0 0 g M ) 3 a 8 0 ( D 2 W ) E 6 0 E ? 5 0 4 . ) g 4 0 8 m 3 0 C L . 5 ; 2 0 ( D x 1 0 0 - 1 . 0 0 T T I — 0 . 5 0 0 . 0 0 0 . 5 0 l x s x fl fl i u g m fl 1 7 3 1 0 0 J H S O 2 1 m ' 4 h n fl b d t c t r : i w s t n e m t a e r t n e v e s f & m O - t 6 s p e S - 9 2 y m p n b d - + - e l o z . a d n i o l c o a s n a / e \ - 2 e b r ‘ p 2 - t A - a t D fi 0 m ‘ - : p i F e S c s p . o o e h t \ z i / S f p l / e i S n / - o / f , 5 1 . o ) I s t t n n u e l a h t e n o o i r d o o l r h p c i - - I ° - - l y h m a n r x u w u o m / c i r t e o p p x E \ / p . 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M e a n - d o l l a r - s p o t c o u n t s o f t h e m e a n s o f t h r e e t r e a t m e n t s w i t h f o u r r e p l i c a t i o n s a t f i v e o b s e r v a t i o n s ( F i e l d E x p e r i m e n t I I ) . 9 O , C . c h l o r o t h a l c n l l _ 8 0 1 l t n s x d fl i U c a m z o l C - - 5 ( 0 1 ; 6 0 ~ : 3 O U ‘ 9 ; 5 0 ~ B " 3 W E B 3 4 0 f D ‘ 3 g 3 0 : 2 0 ‘ - B 1 0 B B + A A A A . 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I n T & O R 2 0 0 4 : T u r f & O r n a m e n t a l R e f e r e n c e f o r P l a n t P r o t e c t i o n P r o d u c t s . N e w Y o r k : C & P P r e s s . A n o n y m o u s . 2 0 0 4 . S p e c i m e n L a b e l : D a c o n i l U l t r e x . p . L 7 0 3 — 7 0 8 . I n T & O R 2 0 0 4 : T u r f & O r n a m e n t a l R e f e r e n c e . N e w Y o r k : C & P P r e s s . A n o n y m o u s . 2 0 0 4 . S p e c i m e n L a b e l : I n s i g n i a . p . 5 1 — 4 . I n T & O R 2 0 0 4 : T u r f & O r n a m e n t a l R e f e r e n c e f o r P l a n t P r o t e c t i o n P r o d u c t s . N e w Y o r k : C & P P r e s s . A n o n y m o u s . 2 0 0 5 . E m e r a l d s e t s a n e w s t a n d a r d f o r d o l l a r s p o t c o n t r o l . B A S F T u r f a n d O r n a m e n t a l / t u r f f a c t s 2 8 M a r c h 2 0 0 5 . B a r d i n e l l i , T . R . , Y p e m a , H . L . , B a r n e s , J . S . , W e t z e l , H . C . I . , a n d C h a p m a n , S . 2 0 0 2 . N i c o b i f e n ( B A S F 5 1 0 F ) : A n e w f u n g i c i d e f o r u s e o n v e g e t a b l e s , f i e l d c r o p s a n d t u r f g r a s s . P h y t o p a t h o l o g y ( A b s t r . ) 9 2 : 8 6 . B A S F ’ s E m e r a l d f u n g i c i d e f o r d o l l a r s p o t c o n t r o l g a i n s E P A a p p r o v a l . 2 0 0 3 . P R I M E D I A B u s i n e s s M a g a z i n e s & M e d i a I n c . / g r o u n d s — m a g . B l a i s , P . 2 0 0 3 . O n t h e h o r i z o n : B a s i c m a n u f a c t u r e r s p l a n t o b r i n g n e w f u n g i c i d e s t o m a r k e t s o o n a n d t o c o n t i n u e t h e i r R & D e f f o r t s . G o l f d o m , 5 9 ( 4 ) A p r i l 2 0 0 3 , p . 7 4 - 7 6 . B r e n t , K . J . 1 9 9 8 . F u n g i c i d e R e s i s t a n c e : T h e A s s e s s m e n t O f R i s k . B r u s s e l s : G l o b a l C r o p P r o t e c t . F e d . 4 9 p . B u r p e e , L . L . 2 0 0 1 . G r o w t h o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a a s a f f e c t e d b y r e p e a t e d e x p o s u r e t o p r o p i c o n a z o l e . I n t l . T u r f g r a s s S o c . R e s . J . 9 : 6 4 5 - 6 4 8 . C a l i f o r n i a D e p a r t m e n t o f P e s t i c i d e R e g u l a t i o n p u b l i c r e p o r t 2 0 0 3 - 8 : B o s c a l i d : T r a c k i n g I D 1 9 0 6 0 2 N . 2 0 0 3 . C a l i f o r n i a D e p a r t m e n t o f P e s t i c i d e R e g u l a t i o n / 5 7 9 0 . 1 7 8 1 1 . 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 1 6 . 1 7 . 1 8 . 1 9 . C a m a r a , M . P . S . , O ' N e i l l , N . R . , v a n B e r k u m , P . , D e r n o e d e n , P . H . , a n d P a l m , M . E . 2 0 0 0 . O p h i o s p h a e r e l l a a g r o s t i s s p n o v a n d i t s r e l a t i o n s h i p t o o t h e r s p e c i e s o f O p h i o s p h a e r e l l a . M y c o l o g i a 9 2 : 3 1 7 — 3 2 5 . C u l b r e a t h , A . K . , S t e v e n s o n , K . L . , a n d B r e n n e m a n , T . B . 2 0 0 2 . M a n a g e m e n t o f l a t e l e a f s p o t o f p e a n u t w i t h b e n o m y l a n d c h l o r o t h a l o n i l : A s t u d y i n p r e s e r v i n g f u n g i c i d e u t i l i t y . P l a n t D i s . 8 6 : 3 4 9 - 3 5 5 . D a v i d s e . 1 9 8 8 . B e n z i m a d a z o l e f u n g i c i d e s : M e c h a n i s m o f a c t i o n a n d r e s i s t a n c e . p . 2 5 - 3 0 . I n F u n g i c i d e R e s i s t a n c e i n N O r t h A m e r i c a , e d i t e d b y C . J . D e l p h . S t P a u l M N : A P S P r e s s . D e r n o e d e n , P . H . , K a m i n s k i , J . E . , a n d K r o u s e , J . M . 2 0 0 2 . D o l l a r s p o t c o n t r o l w i t h f u n g i c i d e s a n d b i o f u n g i c i d e s , 2 0 0 1 . A P S n e t a n d P l a n t M a n a g e m e n t N e t w o r k . F & . N T e s t s : F u n g i c i d e a n d . N e m a t i c i d e T e s t s / R e p o r t 5 7 / T 0 5 . D e r n o e d e n , P . H . , O ' N e i l l , N . R . , C a m a r a , M . P . S . , a n d F e n g , Y . 1 9 9 9 . A n e w d i s e a s e o f A g r o s t i s p a l u s t r i s i n c i t e d b y a n u n d e s c r i b e d s p e c i e s o f O p h i o s p h a e r e l l a . P l a n t D i s . 8 3 : 3 9 7 . D e t w e i l e r , R . , V a r g a s , J . M . , J r . , a n d D a n n e b e r g e r , T . K . 1 9 8 3 . R e s i s t a n c e o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o i p r o d i o n e a n d b e n o m y l . P l a n t D i s . 6 7 : 6 2 7 - 6 3 0 . D w y e r , P . J . a n d V a r g a s J r . , J . M . 2 0 0 4 . P r e v e n t a t i v e c o n t r o l o f d o l l a r s p o t . 7 4 t h A n n . . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . / [ 1 ] . G e o r g o p o u l o s , S . G . 1 9 8 2 . G e n e t i c a l a n d b i o c h e m i c a l b a c k g r o u n d o f f u n g i c i d e r e s i s t a n c e . p . 4 6 - 5 9 . I n F u n g a l R e s i s t a n c e i n C r o p P r o t e c t i o n , e d i t e d b y J . D e k k e r a n d S . G . G e o r g o p o u l u s . W e g e n i n g e n , T h e N e t h e r l a n d s : C e n t r e f o r A g r i c u l . P u b . D o c u m e n t . G e o r g o p o u l o s , S . G . a n d A . , W . G . 1 9 7 4 . M e c h a n i s m s o f r e s i s t a n c e t o s y s t e m i c f u n g i c i d e s w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o 1 , 4 - o x a t h i i n d e r i v a t i v e s . I U P A C 3 . I n t l . C o n g . P e s t i c . C h e m . , p . 4 1 4 — 4 1 5 . 1 7 9 2 0 . 2 1 . 2 2 . 2 3 . 2 4 . 2 5 . 2 6 . 2 7 . 2 8 . 2 9 . G e o r g o p o u l o s , S . G . a n d Z i o g a s , B . N . 1 9 7 7 . A n e w c l a s s o f c a r b o x i n r e s i s t a n t m u t a n t s o f U S t i l a g o m a y d i s . N e t h . J . P l a n t P a t h . 8 3 : 2 3 5 - 2 4 2 . G e o r g o p o u l o s , S . G . , C h r y s a y i , M . , a n d W h i t e , G . A . 1 9 7 5 . C a r b o x i n r e s i s t a n c e i n t h e h a p l o i d , t h e h e t e r o z y g o u s d i p l o i d a n d t h e p l a n t - p a r a s i t i c d i c a r y o t i c p h a s e o f U S t i l a g o m a y d i s . P e s t i c . B i o c h e m . P h y s i o l . 5 : 5 4 3 — 5 5 1 . G i l s t r a p , D . a n d V a r g a s , J . 2 0 0 3 . I n v e s t i g a t i o n o f s u s p e c t e d d o l l a r - s p o t r e s i s t a n c e t o a n e w f u n g i c i d e . p . 8 . I n 2 0 0 3 . M i c h i g a n T u r f g r a s s F i e l d D a y . E . L a n s i n g : M i c h . S t . U n i v . E x t e n s i o n . G i l s t r a p , D . , V a r g a s , J . , J r . , G o l e m b i e w s k i , R . , J o n e s , A . , a n d S c h a b e n b e r g e r , O . 1 9 9 7 . F u n g i c i d e e f f i c a c y o n d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t i o n ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . R e s . J . I n t . T u r f g r a s s S o c . 8 : 8 7 5 - 8 8 1 . G i s i , U . , C h i n , K . M . , K n a p o v a , G . , F a r b e r , R . K . , M o h r , U . , P a r i s i , S . , S i e r o t z k i , H . , a n d S t e i n f e l d , U . 2 0 0 0 . R e c e n t d e v e l o p m e n t s i n e l u c i d a t i n g m o d e s o f r e s i s t a n c e t o p h e n y l a m i d e , D M I a n d s t r o b i l u r i n f u n g i c i d e s . C r o p P r o t e c t i o n 1 9 : 8 6 3 - 8 7 2 . G o l e m b i e w s k i , R . C . 1 9 9 4 . C h a r a c t e r i z a t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n t S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a . T h e s i s ( M . S . ) , M i c h . S t . U n i v . , 7 4 p . G o l e m b i e w s k i , R . C . 1 9 9 5 . C h a r a c t e r i z a t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n t d o l l a r s p o t . A n n u . M e e t . A b s t r . : 1 4 9 . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s J r . , J . M . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 3 . 1 9 9 3 D M I R e s i s t a n t D o l l a r S p o t S t u d y , M i c h . S t . U n i v . 1 8 p . G o l e m b i e w s k i , R . C . , V a r g a s J r . , J . M . , J o n e s , A . L . , a n d D e t w e i l e r , A . R . 1 9 9 5 . D e t e c t i o n o f d e m e t h y l a t i o n i n h i b i t o r ( D M I ) r e s i s t a n c e i n S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a p o p u l a t i o n s . P l a n t D i s . 7 9 : 4 9 1 - 4 9 3 . H s i a n g , T . , Y a n g , L . , a n d B a r t o n , W . 1 9 9 8 . R e l a t i v e v i r u l e n c e o f i s o l a t e s o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a w i t h 1 8 0 3 0 . 3 1 . 3 2 . 3 3 . 3 4 . 3 5 . 3 6 . 3 7 . 3 8 . v a r y i n g s e n s i t i v i t y t o p r o p i c o n a z o l e . E u r o . J . P l a n t P a t h o l . 1 0 4 : 1 6 3 - 1 6 9 . I s h i i , H . 1 9 9 5 . M o n i t o r i n g o f f u n g i c i d e r e s i s t a n c e i n f u n g i : B i o l o g i c a l t o b i o t e c h n o l o g i c a l a p p r o a c h e s . p . 4 9 3 — 5 0 3 . I n . M b l e c u l a r . M e t h o d s i n P l a n t P a t h o l o g y , e d i t e d b y U . S . S i n g h a n d R . P . S i n g h . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . J o n e s , M . R . 2 0 0 4 . G o l f C o u r s e S u p t . , L o c h m o o r C l u b . F a c e - t o - f a c e c o n v e r s a t i o n . G r o s s e P t e . W o o d s M I , 9 A u g 2 0 0 4 . K a m i n s k i , J . E . a n d D e r n o e d e n , P . H . 2 0 0 2 . G e o g r a p h i c d i s t r i b u t i o n , c u l t i v a r s u s c e p t i b i l i t y , a n d f i e l d o b s e r v a t i o n s o n b e n t g r a s s d e a d s p o t . P l a n t D i s . 8 6 : 1 2 5 3 — 1 2 5 9 . L e u n g , H . , N e l s o n , R . J . , a n d L e a c h , J . E . 1 9 9 3 . P o p u l a t i o n s t r u c t u r e o f p l a n t p a t h o g e n i c f u n g i a n d b a c t e r i a . A d v . P l a n t P a t h o l . 1 0 : 1 5 7 - 2 0 5 . L i t t l e , T . M . a n d H i l l s , F . J . 1 9 7 8 . A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t a t i o n : D e s i g n a n d A n a l y s i s . N e w Y o r k : W i l e y . 3 5 0 p . M a t h e r o n , M . E . a n d P o r c h a s , M . 2 0 0 4 . A c t i v i t y o f b o s c a l i d , f e n h e x a m i d , f l u a z i n a m , f l u d i o x o n i l , a n d v i n c l o z o l i n o n g r o w t h o f S c l e r o t i n i a m i n o r a n d S . s c l e r o t i o r u m a n d d e v e l o p m e n t o f l e t t u c e d r o p . P l a n t D i s . 8 8 : 6 6 5 — 6 6 8 . M i t k o w s k i , N . , J o r d a n , K . , a n d B o e s c h , B . 2 0 0 4 . E v a l u a t i o n o f f u n g i c i d e s f o r p r e v e n t a t i v e c o n t r o l o f d o l l a r s p o t o n c r e e p i n g b e n t g r a s s , 2 0 0 3 . A P S n e t a n d P l a n t M a n a g e m e n t N e t w o r k . F & . N T e s t s : F u n g i c i d e a n d N e m a t i c i d e T e s t s / R e p o r t 5 9 / T 0 0 5 . N e w c o m b e , G . a n d T h o m a s , P . L . 1 9 9 1 . I n c i d e n c e o f c a r b o x i n r e s i s t a n c e i n U S t i l a g o n u d a . P h y t o p a t h o l o g y 8 1 : 2 4 7 - 2 5 0 . P a s c h e , J . S . , P i c h e , L . M . , a n d G u d m e s t a d , N . C . 2 0 0 5 . E f f e c t o f t h e F 1 2 9 L m u t a t i o n i n A l t e r n a r i a s o l a n i o n f u n g i c i d e s a f f e c t i n g m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t i o n . P l a n t D i s . 8 9 : 2 6 9 - 2 7 8 . 1 8 1 3 9 . 4 0 . 4 1 . 4 2 . 4 3 . 4 4 . 4 5 . 4 6 . 4 7 . 4 8 . P e n n i n g t o n , W . 2 0 0 4 . B A S F C o r p . e - m a i l r e s p o n s e t o e — m a i l q u e r y . E . L a n s i n g M I , 1 8 S e p 2 0 0 4 . P o w e l l , J . F . 2 0 0 2 . M a n a g e m e n t o f d o l l a r s p o t w i t h f u n g i c i d e s o n c r e e p i n g b e n t g r a s s , 2 0 0 1 . A P S n e t a n d P l a n t M a n a g e m e n t N e t w o r k . F & . N T e s t s : F u n g i c i d e a n d N e m a t i c i d e T e s t s / R e p o r t 5 7 / T 2 4 . R i m e l s p a c h , J . W . , H i c k s , T . E . , a n d B o e h m , M . J . 2 0 0 5 . C u r a t i v e m a n a g e m e n t o f d o l l a r s p o t i n f a i r w a y s . G o l f C o u r s e N e w s , 1 7 ( 2 ) , p . 5 9 . S c h a b e n b e r g e r , O . a n d P i e r c e , F . J . 2 0 0 2 . C o n t e m p o r a r y S t a t i s t i c a l M o d e l s f o r t h e P l a n t a n d S o i l S c i e n c e s . B o c a R a t o n F L : C R C P r e s s . 7 3 8 p . S c h e i d e g g e r , K . A . , W o n g , F . P . , B a r n e s , J . S . , Y p e m a , H . L . , a n d W e t z e l , H . C . I . 2 0 0 2 . B a s e l i n e s e n s i t i v i t y d i s t r i b u t i o n o f S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a ( d o l l a r s p o t ) t o t h e n o v e l f u n g i c i d e n i c o b i f e n ( B A S 5 1 0 F ) . ( A b s t r . ) P h y t o p a t h o l o g y 9 2 : 5 7 3 . S k i n n e r , W . , B a i l e y , A . , R e n w i c k , A . , K e o n , A . J . , G u r r , S . , a n d H a r g r e a v e s , J . 1 9 9 8 . A s i n g l e a m i n o — a c i d s u b s t i t u t i o n i n t h e i r o n - s u l p h u r p r o t e i n s u b u n i t o f s u c c i n a t e d e h y d r o g e n a s e d e t e r m i n e s r e s i s t a n c e t o c a r b o x i n i n . M y c o s p h a e r e l l a g r a m i n i c o l a . C u r r e n t G e n e t i c s 3 4 : 3 9 3 - 3 9 8 . S t e i n f e l d , U . , S i e r o t z k i , H . , P a r i s i , S . , P o i r e y , S . , a n d G i s i , U . 2 0 0 1 . S e n s i t i v i t y o f m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t i o n t o d i f f e r e n t i n h i b i t o r s i n v e n t u r i a i n a e q u a l i s . P e s t M a n a g e . S c i . 5 7 : 7 8 7 - 7 9 6 . U d d i n , W . a n d S o i k a , M . D . 2 0 0 0 . E v a l u a t i o n o f f u n g i c i d e s f o r c o n t r o l o f d o l l a r s p o t o n a p u t t i n g g r e e n . p . 4 9 - 5 0 . I n 2 0 0 0 A n n u a l R e s e a r c h R e p o r t 4 9 - 5 0 : C e n t e r f o r T u r f g r a s s S c i . , T h e P e n n . S t a t e U n i v . V a r g a s , J . M . , D e t w e i l e r , R . , D y k e m a , N . , a n d T a u b e , D . 1 9 9 8 . T u r f g r a s s d i s e a s e r e p o r t f o r 1 9 9 6 - 9 7 . 6 9 t h A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , p . 4 9 - 6 5 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 5 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 3 r d e d . H o b o k e n N J : J o h n W i l e y a n d S o n s . 3 2 2 p . 1 8 2 4 9 . 5 0 . 5 1 . 5 2 . 5 3 . 5 4 . 5 5 . 5 6 . 5 7 . 5 8 . 5 9 . V a r g a s , J . M . , J r . , D e t w e i l e r , A . R . , a n d D y k e m a , N . M . 1 9 9 9 . T u r f g r a s s d i s e a s e r e p o r t f o r 1 9 9 8 . 6 9 t h A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , p . 6 7 - 7 5 . V a r g a s , J . M . , J r . , D e t w e i l e r , A . R . , a n d D y k e m a , N . M . 2 0 0 2 . 2 0 0 0 - 2 0 0 1 t u r f g r a s s p a t h o l o g y r e p o r t : X I I . D o l l a r s p o t ( R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m ) . 7 2 n d A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , p . 4 5 - 4 7 . V a r g a s , J . M . , J r . , D e t w e i l e r , A . R . , a n d D y k e m a , N . M . 2 0 0 2 . 2 0 0 0 - 2 0 0 1 t u r f g r a s s p a t h o l o g y r e p o r t : X I I . D o l l a r s p o t ( R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m ) . 7 2 n d A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , V o l . 3 3 , p . 4 5 - 4 7 . V a r g a s , J . M . , J r . , D e t w e i l e r , A . R . , a n d D y k e m a , N . M . 2 0 0 3 . 2 0 0 1 - 2 0 0 2 f u n g i c i d e r e s e a r c h r e p o r t : I I . D o l l a r s p o t ( R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m ) . 7 3 r d A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , p . 8 0 - 8 3 . V a r g a s , J . M . , J r . , D y k e m a , N . M . , D e t w e i l e r , A . R . , C h e n g , P . , a n d H i l a s k i , R . 2 0 0 4 . 2 0 0 2 - 2 0 0 3 f u n g i c i d e r e s e a r c h r e p o r t : X . D o l l a r s p o t ( R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m ) . 7 4 t h A n n . M i c h . T u r f g r a s s C o n f . P r o c e e d . , 2 0 0 4 , p . 2 2 - 2 7 . V i n c e l l i , P . 2 0 0 3 . E P A r e s t r i c t i o n s o n c h l o r o t h a l o n i l m a k e s e n s e . T u r f G r a s s T r e n d s : 4 7 - 4 8 , 5 0 . V i n c e l l i , P . a n d D i x o n , E . 2 0 0 1 . R e s i s t a n c e t o Q o I ( = s t o b i l u r i n ) f u n g i c i d e s i n P y r i c u l a r i a g r i s e a f r o m p e r e n n i a l r y e g r a s s . ( A b s t r . ) P h y t o p a t h o l o g y 9 1 : 8 9 2 . V i n c e l l i , P . a n d D i x o n , E . 2 0 0 2 . R e s i s t a n c e t o Q o I ( s t r o b i l u r i n - l i k e ) f u n g i c i d e s i n i s o l a t e s o f P y r i c u l a r i a g r i s e a f r o m p e r e n n i a l r y e g r a s s . P l a n t D i s . 8 6 : 2 3 5 - 2 4 0 . W a l k e r , N . R . 2 0 0 3 . N e w t o o l s p r o m i s e h e l p i n d o l l a r - s p o t b a t t l e . T u r f G r a s s T R E N D S , 5 9 ( 7 ) J u l y , p . 4 6 , 4 8 , 4 9 . W a r e , G . W . 2 0 0 0 . T h e P e s t i c i d e B o o k . 5 t h e d . B a k e r s f i e l d C A : K o v a k B o o k s . 4 1 8 p . W a r r e n , C . G . , S a n d e r s , P . , a n d C o l e , H . 1 9 7 4 . S c l e r o t i n i a h o m o e o c a r p a t o l e r a n c e t o b e n z i m i d a z o l e 1 8 3 6 0 . 6 1 . 6 2 . 6 3 . 6 4 . 6 5 . 6 6 . c o n f i g u r a t i o n f u n g i c i d e s . P h y t o p a t h o l o g y 6 4 : 1 1 3 9 - 1 1 4 2 . W a t s o n , J . 2 0 0 3 . E P A r e g i s t r a t i o n s c o n t i n u e f u n g i c i d e s u c c e s s f o r B A S F . B A S F A g P r o d u c t s / A F N 0 3 - 1 0 — 1 5 6 — 4 0 0 1 A . W a t s o n , J . 2 0 0 3 . E P A r e g i s t e r s E n d u r a a n d P r i s t i n e f u n g i c i d e s . B A S F A g P r o d u c t s / A P N 0 3 - 1 0 — 1 5 6 - 4 0 0 1 . W h i t e , G . A . a n d T h o r n , G . D . 1 9 8 0 . T h i o p h e n e c a r b o x a m i d e f u n g i c i d e s - s t r u c t u r e - a c t i v i t y - r e l a t i o n s h i p s w i t h t h e s u c c i n a t e - d e h y d r o g e n a s e c o m p l e x f r o m w i l d - t y p e a n d c a r b o x i n - r e s i s t a n t m u t a n t s t r a i n s o f U S t i l a g o - m a y d i s . P e s t . B i o c h e m . P h y s i o l . 1 4 : 2 6 - 4 0 . W h i t e , G . A . , T h o r n , G . D . , a n d G e o r g o p o u l o s , S . G . 1 9 7 8 . O x a t h i i n c a r b o x a m i d e s h i g h l y a c t i v e a g a i n s t c a r b o x i n - r e s i s t a n t s u c c i n i c — d e h y d r o g e n a s e c o m p l e x e s f r o m c a r b o x i n - s e l e c t e d m u t a n t s o f U S t i l a g o - m a y d i s a n d A s p e r g i l l u s - n i d u l a n s . P e s t . B i o c h e m . P h y s i o l . 9 : 1 6 5 - 1 8 2 . W h i t f o r d , F . 2 0 0 2 . T h e C o m p l e t e B o o k o f P e s t i c i d e M a n a g e m e n t : S c i e n c e , R e g u l a t i o n , S t e w a r d s h i p , a n d C o m m u n i c a t i o n . N e w Y o r k : W i l e y - I n t e r s c i e n c e . 7 8 7 p . W o n g , F . P . , C a m p b e l l l , S . D . , a n d R i e s , S . B . 2 0 0 3 . E v a l u a t i o n o f f u n g i c i d e s f o r t h e c o n t r o l o f d o l l a r s p o t i n s o u t h e r n C a l i f o r n i a , 2 0 0 2 . A P S n e t a n d P l a n t M a n a g e m e n t N e t w o r k . F & N ' T e s t s : F u n g i c i d e a n d N e m a t i c i d e T e s t s / R e p o r t 5 8 / T 0 2 6 . Y p e m a , H . 2 0 0 5 . N o . A m e r . F R A C , B A S F r e p r e s e n t a t i v e . E - m a i l . E . L a n s i n g M I , 1 3 A p r i l 2 0 0 5 . 1 8 4 C H A P T E R 5 C O N C L U S I O N 1 8 5 T h e b e n e f i t s o f t u r f h a v e b e e n w e l l d o c u m e n t e d a s e n h a n c i n g t h e q u a l i t y o f l i f e a n d c o n t r i b u t i n g t o t h e m a i n t e n a n c e a n d i m p r o v e m e n t o f o u r e n v i r o n m e n t ( 1 ) . D i s e a s e c a n g r e a t l y d i m i n i s h t h e q u a l i t y o f t u r f g r a s s s t a n d s ( 2 ) . S u c c e s s f u l s u p p r e s s i o n o f d o l l a r s p o t c o n t i n u e s t o b e t h e m o s t e n d u r i n g t u r f g r a s s - d i s e a s e — m a n a g e m e n t a c t i v i t y . B R O A D E R I M P L I C A T I O N S F u n g a l p a t h o g e n s ' r e s i s t a n c e t o f u n g i c i d e s c o n t i n u e s t o b e o f g r a v e c o n c e r n . T h e l o n g - t i m e u s e o f a n a s s o r t m e n t o f f u n g i c i d e s t o m a n a g e d o l l a r s p o t h a s f a v o r e d t h e s e l e c t i o n o f s t r a i n s o f R u t s t r o e m i a f l o c c o s u m t h a t a r e r e s i s t a n t t o o n e o r m o r e o f t h e f u n g i c i d e c l a s s e s t o w h i c h t h e y w e r e e x p o s e d . T h e r e h a v e b e e n w i d e s p r e a d o c c u r r e n c e s o f t h e p a t h o g e n ' s r e s i s t a n c e t o t h r e e c l a s s e s o f s y s t e m i c f u n g i c i d e s . I s o l a t e s h a v e n o w b e e n i d e n t i f i e d a s h a v i n g r e s i s t a n c e t o a f o u r t h f u n g i c i d e c l a s s t h a t w a s r e c e n t l y i n t r o d u c e d . R e d u c e d s u p p r e s s i o n o f d o l l a r s p o t w a s d e t e c t e d w i t h a n a p p l i c a t i o n o f a n e x p e r i m e n t a l f u n g i c i d e i n a f i f t h c l a s s , a s w e l l . T h i s i n v e s t i g a t i o n h a s d o c u m e n t e d t h a t t h e p a t h o g e n ’ s r e s i s t a n c e t o D M I f u n g i c i d e s i n c r e a s e s w i t h a n y m a n n e r o f c o n t i n u e d e x p o s u r e t o t h i s f u n g i c i d e c l a s s . A p o s i t i v e 1 8 6 r e l a t i o n s h i p e x i s t s b e t w e e n t h e n u m b e r o f D M I - f u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s a n d t h e r a t e o f i n c r e a s e i n D M I r e s i s t a n c e . A l t e r n a t i o n o f D M I s w i t h a n o t h e r f u n g i c i d e c l a s s i s a s t r a t e g y f o r l i m i t i n g t h e n u m b e r o f D M I a p p l i c a t i o n s . I t i s i m p o r t a n t t o n o t e t h a t i f t h e a l t e r n a t i o n p a r t n e r i s a s y s t e m i c f u n g i c i d e o f a n o t h e r c l a s s , t h e n t h e e m e r g e n c e o f s t r a i n s m u l t i r e s i s t a n t t o b o t h c l a s s e s s h o u l d b e e x p e c t e d . S i m i l a r e x p e c t a t i o n s w o u l d a p p l y w i t h t h e u s e o f t h r e e o r m o r e s y s t e m i c c l a s s e s , a s w e l l . T w o m u l t i y e a r s t u d i e s s h o w e d t h a t D M I a l t e r n a t i o n w i t h a c o n t a c t f u n g i c i d e i s a g o o d s t r a t e g y f o r d e l a y i n g D M I r e s i s t a n c e ( b u t n o t p r e v e n t i n g i t ) . S o l e u s e o f c h l o r o t h a l o n i l i s t h e s u r e s t a v a i l a b l e - f u n g i c i d e r e g i m e n t h a t c a n b e u s e d t o l i m i t f u r t h e r i n c r e a s e s i n t h e f r e q u e n c y o f m u l t i r e s i s t a n t i s o l a t e s o f R . f l o c c o s u m . W h e t h e r o r n o t t h e p a t h o g e n e v e r d e v e l o p s r e s i s t a n c e t o c h l o r o t h a l o n i l r e m a i n s t o b e s e e n . I f s u c h i s o l a t e s a r i s e , t h e y w o u l d m o s t l i k e l y h a v e q u a n t i t a t i v e r e s i s t a n c e t o t h e f u n g i c i d e a n d p r o b a b l y b e m u l t i r e s i s t a n t t o a l l o t h e r d o l l a r - s p o t — f u n g i c i d e c l a s s e s a s w e l l . R e s i s t a n c e t o c h l o r o t h a l o n i l w o u l d m a k e d o l l a r s p o t m o r e d i f f i c u l t t o c o n t r o l s i n c e r e s i s t a n c e t o o t h e r f u n g i c i d e s a l r e a d y e x i s t s . T h i s w o u l d r e s u l t i n d i m i n i s h e d t u r f q u a l i t y a n d t h e a s s o c i a t e d l o s s o f b e n e f i t s . 1 8 7 F U T U R E R E S E A R C H T h e t i m e - a n d r e s o u r c e - c o n s u m i n g n a t u r e o f c o n t r o l l e d e x p e r i m e n t s a i m e d a t d e t e c t i n g t h e e f f e c t s o f r e p e a t e d f u n g i c i d e a p p l i c a t i o n s o n f u n g a l - p o p u l a t i o n s e n s i t i v i t i e s i s e v i d e n t i n t h i s d o c u m e n t . T h i s t y p e o f r e s e a r c h i s m o r e i n v o l v e d w h e n u s i n g f u n g i c i d e c l a s s e s w i t h w h i c h q u a n t i t a t i v e r e s i s t a n c e o c c u r s . T h e q u e s t s h o u l d c o n t i n u e f o r m o r e e f f i c i e n t m e t h o d s o f d e t e r m i n i n g f u n g i c i d e - r e s i s t a n c e . T h e b e s t a v e n u e t o a c c o m p l i s h t h i s a p p e a r s t o b e v i a t h e i d e n t i f i c a t i o n o f m o l e c u l a r m a r k e r s t h a t c a n e f f e c t i v e l y d i s t i n g u i s h f u n g i c i d e s e n s i t i v i t i e s , e v e n t h o u g h s u c h a t t e m p t s h e r e f a i l e d . F u t u r e e x p e r i m e n t s a r e n e e d e d t h a t f o c u s o n d i c a r b o x i m i d e - f u n g i c i d e u s e o n d o l l a r s p o t . H o w d i f f e r e n t r a t e s a n d t i m i n g s o f a p p l i c a t i o n s o f d i c a r b o x i m i d e s a f f e c t t h e e m e r g e n c e o f d i c a r b o x i m i d e - r e s i s t a n t i s o l a t e s o f R . f l o c c u s u m n e e d t o b e d e t e r m i n e d . S i n c e t h e s e i s o l a t e s l a c k p a t h o g e n i c a g g r e s s i v e n e s s a n d e n v i r o n m e n t a l f i t n e s s , i t w o u l d b e b e n e f i c i a l t o k n o w h o w l o n g i t t a k e s f o r t h e s e i s o l a t e s t o d i m i n i s h i n t h e p o p u l a t i o n s o t h a t d i c a r b o x i m i d e f u n g i c i d e s c a n a g a i n b e u s e d e f f e c t i v e l y f o r d o l l a r - s p o t c o n t r o l . 1 8 8 T h e p o s s i b i l i t y t h a t c e l l u l a r - t r a n s p o r t e r m e c h a n i s m s a f f e c t f u n g i c i d e r e s i s t a n c e i n R . f l o c c o s u m , a s s u g g e s t e d h e r e , n e e d s t o b e e x p l o r e d . T h e a v a i l a b i l i t y o f a n a s s o r t m e n t o f f u n g a l s t r a i n s h a v i n g v a r y i n g d e g r e e s a n d t y p e s o f f u n g i c i d e r e s i s t a n c e m a k e R . f l o c c o s u m a p a t h o g e n w o r t h y o f t h i s t y p e o f r e s e a r c h . S u c h s t u d i e s c o u l d a l s o b e c o u p l e d w i t h d e t e r m i n i n g i f m u l t i r e s i s t a n c e o c c u r s a s a s t e p — w i s e p r o g r e s s i o n w h e r e b y t h e f u n g a l p o p u l a t i o n b e c o m e s r e s i s t a n t t o a p a r t i c u l a r f u n g i c i d e c l a s s i n a g e n e t i c a l l y - e n c o d e d o r e n v i r o n m e n t a l l y — c o n d i t i o n e d o r d e r o f o c c u r r e n c e . T h e v o l u m e o f l i t e r a t u r e , m u c h o f w h i c h w a s r e v i e w e d h e r e , c o n c e r n i n g d o l l a r s p o t a n d i t s m a n a g e m e n t i s t h e l a r g e s t a s s o c i a t e d w i t h a n y t u r f g r a s s d i s e a s e . G o o d r e a s o n e x i s t s f o r t h e b e l i e f t h a t m u c h r e s e a r c h w i l l c o n t i n u e c o n c e r n i n g d o l l a r s p o t a n d i t s c a u s a l p a t h o g e n , R . f l o c c o s u m . T h i s d i s s e r t a t i o n s t a n d s a s a n a p p r e c i a b l e c o n t r i b u t i o n t o t h e s c i e n t i f i c l i t e r a t u r e a s s o c i a t e d w i t h t h e m a n a g e m e n t o f t h i s m o s t i m p o r t a n t d i s e a s e o f t u r f g r a s s e s . 1 8 9 L i s t o f R e f e r e n c e s B e a r d , J . B . 1 9 9 4 . T h e r o l e o f t u r f g r a s s e s i n e n v i r o n m e n t a l p r o t e c t i o n a n d t h e i r b e n e f i t s t o h u m a n s . J . E n v i r o n . Q u a l . 2 3 : 4 5 2 - 4 6 0 . V a r g a s , J . M . , J r . 2 0 0 5 . M a n a g e m e n t o f T u r f g r a s s D i s e a s e s . 3 r d e d . H o b o k e n N J : W i l e y . 3 2 2 p . 1 9 0 A P P E N D I X 1 9 1 « 3 6 1 1 3 3 2 7 6 « 6 1 1 « « n n n n n 0 0 « n « 0 0 1 « 2 4 U 4 n U v 4 U U U / 4 0 7 2 2 6 2 6 3 n 4 n n . 4 . . . . n . . . U n 2 5 1 3 2 n U . n U . U U U 5 n n . 5 U n U . 0 . 1 U v . 6 1 2 1 3 0 0 6 . 0 0 . 0 0 . n . . 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M e a n — p e r c e n t — r e l a t i v e g r o w t h o f e a c h s u b T a b l e A . 7 . s a m p l e c o l l e c t e d o n 2 1 A u g u s t 1 9 9 8 w i t h b l o c k m e a n s a n d ( T r t . ) m e a n s . t r e a t m e n t T r e a t m e n t s 1 4 1 3 1 2 1 1 1 0 E l k . - s u b s p l . n U . 6 3 n U . n v . 3 0 . n v . n u . r O . n v . 2 1 . n U . n v . 1 . n U . n v . n v . 2 a n Z Z A N n N E d a n n U . O . 2 1 1 . fl u . h v . z a l . n v . n u . 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 . . . . _ . . . _ . . B l o c k M e a n 0 . 9 1 . 1 0 . 9 0 . 4 0 . 9 2 . 5 1 . 0 0 . 8 1 . 4 2 . 0 1 . 0 0 . 8 0 . 9 1 . 3 4 n v . n u . 4 1 . 0 a n 0 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 n w n N B fl n w fi n a n a J n U . n u . n U . 1 . n U . n U . n U . O . n U . 1 . n U . 0 0 0 0 0 0 2 0 4 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 . n U . 4 n U . n U . 4 n U . n v . A H n U . n U . n U . 1 . n U . O . 1 . n U . O . 1 . n u . 3 0 8 6 6 0 6 0 2 0 1 0 3 2 2 0 2 0 1 0 fi 8 n U . 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A u g . M i n . M a x . R e l . W i n d P r e c i p . E T D a y T e m p . T e m p . H u m i d . R u n _ 1 ( m m ) ( m m d ) ( C ) ( C ) ( % ) ( k m d ) 1 1 5 . 3 2 9 . 3 9 2 4 7 0 5 2 1 9 . 9 3 1 . 6 9 0 2 7 0 5 3 1 9 . 3 3 1 . 8 9 9 3 8 2 3 5 4 1 5 . 7 3 0 . 4 8 3 3 2 2 2 2 5 1 4 . 8 2 3 . 0 9 4 2 6 0 4 6 1 0 . 0 2 4 . 4 8 6 4 3 0 4 7 9 . 8 2 6 . 3 9 4 1 5 0 4 8 1 3 . 8 2 6 . 6 9 4 1 2 0 4 9 1 5 . 0 2 6 . 9 9 6 2 4 0 4 1 0 1 9 . 0 2 7 . 1 8 4 7 3 0 4 1 1 1 5 . 1 2 4 . 8 9 1 9 7 0 3 1 2 1 0 . 9 2 2 . 1 8 2 4 8 0 3 1 3 1 2 . 0 2 1 . 3 9 2 5 O 2 1 4 1 2 . 0 2 1 . 3 9 7 2 2 0 3 1 5 1 3 . 1 2 3 . 0 9 6 2 4 0 3 1 6 1 0 . 2 2 3 . 9 9 7 1 6 0 3 1 7 1 4 . 2 2 5 . 7 9 7 3 0 0 3 1 8 1 7 . 4 2 5 . 8 8 8 3 6 0 3 1 9 1 6 . 0 2 6 . 3 8 3 6 1 0 3 2 0 1 2 . 9 2 2 . 8 7 6 1 2 2 2 2 1 1 1 . 5 2 1 . 5 9 9 2 1 1 3 2 2 9 . 2 2 5 . 6 9 7 3 4 0 4 2 3 1 9 . 1 2 7 . 0 7 9 4 7 O 3 2 4 1 6 . 5 2 5 . 6 9 5 5 8 6 3 2 5 2 0 . 8 3 0 . 0 9 4 6 1 0 4 2 6 2 0 . 8 3 0 . 2 9 9 4 2 4 4 2 7 2 2 . 7 3 0 . 7 9 2 4 1 0 3 2 8 1 9 . 8 2 8 . 5 9 8 2 0 1 9 2 2 9 1 6 . 4 2 3 . 2 9 6 6 9 1 3 0 1 1 . 9 2 3 . 4 9 6 1 3 0 3 3 1 1 2 . 3 2 5 . 0 9 8 1 7 0 3 W m 1 9 9