DOCTORAL D I S S E R T A T I O N SERIES Studies Of The Cafolase Activity Of Hemophilus Pertussis And Antigenic ally Hehted Organisms DATE / W AUTHOR Incite M Toriwood UNIVERSITY Michigan State College TITLE PUBLICATION NO. DEGREE 69 ? l ^ UNIVERSITY MICROFILMS M ANN ARBOR • MICHIGAN A b s tra c t STUDIES OF THE CATALASE ACTIVITY OF HBKOPHILUS PERTUSSIS AND ANTIGENICALLY RELATED ORGANISES By L u c ile M. Portw ood F i f t y - f i v e s t r a i n s o f smooth Hamophilus p e r t u s s i s , f o u r s t r a i n s o f rough H. p e r t u s s i s , 10 s t r a i n s o f th e p a r a p e r t u s s i s b a c i l l u s and 10 s t r a i n s o f B r u c e lla b ro n ch i s e p ti c a were examined f o r c a t a la s e a c t i v i t y . I n d e v e lo p in g a te c h n ic f o r q u a n t i t a t i v e measurement o f c a t a la s e a c t i v i t y , i t was found t h a t in a given i n i t i a l c o n c e n tra tio n o f HgOg, th e c a t a l a s e a c t i v i t y o f a c u l t u r e was p r o p o r tio n a l to th e b a c t e r i a l c o n c e n tra ­ ti o n w ith in a range o f one to seven b i l l i o n o rg an ism s p e r m l ., and t h a t th e m easured c a t a l a s e a c t i v i t y o f a given su sp en sio n v a r ie d w ith th e i n i t i a l c o n c e n tra tio n o f HgOg* The c o n d itio n s o f growth t h a t were s tu d ie d in r e l a t i o n to t h e i r e f f e c t on c a t a l a s e a c t i v i t y w ere c u ltu r e m edia, te m p e ra tu re o f in c u b a tio n , and age o f c u l t u r e . 1/hen c u ltu r e s were compared on d i f f e r e n t m edia, th e h ig h e s t a c t i v i t y o f th e p a r a p e r t u s s i s b a c i llu s and B r. b r o n c h is e p tio a was o b ta in e d i n T ry p to se -g lu c o s e b r o th and t h e lo w e st on v e a l in f u s io n a g a r . c u ltu r e d on B ordet Gengou a g a r gave in te n n e d ia te v a lu e s . S tr a in s The in c u b a tio n te m p e ra tu re f o r optimum a c t i v i t y o f H. p e r t u s s i s was 33°C. There was a g r e a t e r d e c re a se in v a lu e s a t h ig h e r te m p e ra tu re s than a t lo w e r o n e s. The age o f th e c u ltu r e a t which maximum a c t i v i t y was re a c h e d and th e d u ra tio n o f maximum a c t i v i t y w ere n o t th e same f o r a l l c u l t u r e s . C u ltu re s o f each o f th e t h r e e s p e c ie s u s u a l l y showed maximum a c t i v i t y a f t e r in c u b a tio n f o r two days. S ix te e n p e r can t o f th e s t r a i n s o f Hj_ p e r t u s s i s exam ined showed no c a t a l a s e a c t i v i t y but m a in ta in e d a l l th e c h a r a c t e r i s t i c s o f smooth s t r a i n s . From, a g g lu tin a tio n t e s t s perform ed w ith ad so rb ed s e r a , th e r e was no i n d ic a tio n o f any d if f e r e n c e in th e a n tig e n ic s tr u c t u r e o f th e groups o f s t r a i n s w ith and w ith o u t c a t a la s e a c t i v i t y . The s t r a i n s which showed no c a t a l a s e a c t i v i t y were k i l l e d more r e a d ily by HgOg th an w ere th o s e w ith c a ta la s e a c tiv ity . S t r a i n s o f H. p e r t u s s is which r e ta in e d a l l c h a r a c te r is ­ t i c s o f smooth s t r a i n s th ro u g h a number o f s u b c u ltu re s had no s ig n i f i c a n t v a r i a t io n in c a t a l a s e a c t i v i t y . T hree c u l tu r e s which lo s t th e a b i l i t y to decompose HgOg showed c o n c u rre n tly a lo s s in c h a r a c t e r i s t i c s which ty p if y smooth s t r a i n s . Except f o r th e 16 p e r cent o f auo o th s t r a i n s o f H. p e r t u s s i s which showed no a c t i v i t y , «nooth s t r a i n s had a h ig h e r c a ta la s e a c t i v i t y th a n rough o n es. D e te c tio n o f d is s o c ia tio n by a g g lu tin a tio n i n th e p re se n c e o f t r y p a f la v in e was n o t a p p lic a b le to H. p e r t u s s i s s in c e b o th smooth and rough s t r a i n s a g g lu tin a te d . F or r e t a i n i n g c a t a l a s e a c t i v i t y o f c e l l s d u rin g a p e rio d o f s to r a g e , a low te m p e ra tu re and a h ig h c o n c e n tra tio n o f c e l l s o f f e r e d th e b e s t c o n d itio n s . Phenyl m e rc u ric b o ra te was t h e m ost s a t i s f a c t o r y p r e s e r v a tiv e . The c a ta la s e a c t i v i t y o f snooth s t r a i n s o f th e s e t h r e e s p e c ie s was n o t s ig n ific a n tly d iffe re n t. T here was some v a r ia tio n in c a ta la s e a c t i v i t y w ith in each s p e c ie s b u t th e s e d if f e r e n c e s were n o t c o r r e la t e d w ith any o th e r c h a r a c t e r i s t i c . ■J,,I , i:.- oGJiVrij O' 0.L.L. . f.JfjTu.. Lu0 . O.L JO tv :■.) H 'Tf -•t . ’. i l w i t t o o . co uio .-r- j . i j t o o c f o o i o f . i c u i ^ o n .v ; J j C'vliv- o o f Av t i c u l t u r e ■ ’'■'■uiod : c i o n o e i;) oarotif.i I ' l i l j i l ■eci as in cci' H-K.iit t e o .'.3ci 3s s in ce i t one t.,r;i) ire;-. ranorbie each ocher. Its onr vertus.yic; 0'c.cilli;s .•■ttr.ck c: roohy..cr boa, ■•rociuco innol our redone o il ro ves. 0 0 as not ■jibe t'he other t'v.’j s p e c i e s i t siio’.vs c; t n lv s e a c t i v i t y . V'-1 cotaj.ore ; e t l v l t y o i j r e e l i n m s morn. to m ui recti;, pro-* ••iortion; 1 to tin v i r u l e u c s o! the svraim; b;, I t '..O; Iv .j o i v:...Live to too .umieson i i t., io mlr-vtiomhi.j uu irtohl ( d ) . i s t s tor om ■mm o. 3:vie m y m i m s ore il' lu cr e 1.3 :,oiy : o ccif-Tlor o i m 1 rmio io, i c c l ahonot.enn. i t i s necarmr;. to shor whether tho c r t o l m e o c t i v i t V o f m ,Je r t n s s i o rev.oius coiismnt unpin. uncer too w 3 co n d it io n s . ii a s e r i e s o.t wo i ml ors cuitu rad to.are uro v a r i a t i o n s in wfcda.se t c t i v i t y , i t i s i portrait to net or In <3 oncor - i t the;- ..re associate;.’ .oi t - any cb 11 c 01 hi t i e r s too. occur on C. w e t h e r as in cu lt u ra l , . orn. oio.. i c o l , SOPOlO/ - i c c l , bioche i c t d , it wiolo ic> i or ’o tooio .icoi w , rr c t e r i s t i c s .. the t r a n s i t i o n .trey smooth to rou h Wu 3 Ii in aceo .' rw i m or 'ro r ]_t, QT-r: tion in o w n w s e a c t i v i t y , xbere conic - a a v a il a b l e on -.c.dtion;-- 1 s im il e • jo.fi ut'dl’u l uoo.L 1 or me bioio, i c v l chim c t e r i : s.tion 01' cu ltu re s. nit. ::L .m ■■ o 1 ;■)10! n m ve . du rro i-or. 1 ciO':; e i ■! r*’s> bin-iioe . o oooi:: hi to c o o ou t t: i t i.o o;■' ■oooo y o t o e o t o d ■. j t o o t e i o (I-") .it • :U:. o'-uoriiuu.' olive, Ituc ini; ot i.ih :.'..jo.rin, ■clot '.o :- n onion-j.i O' U'O m 1 '01, 0 ) 0 0 to ot 1 iV'" li y o r 1 oroluu: t o uoi.i ■ • t: or hoi o r u m i e mi t i c e . otic £. . .. rii. o ' ( : ) rod . - t i t m ■ ■■ oxc.Lj oci.Lo.iu., —m i r h i -'it oc o. ) 0 . ,10 i :! toe v ir u le n t oi.. i t to t LOU •C'livit.V 1:1 i o c o c 'Uu ; ).■; 0.10.. 1,0 l)0 CCO. tto so.; i t or t h e m io ti t o o Ml .. 1.1 1 f :t S £-7 Iio round n o n e (It) ohserved 'Jt1 It 0 ^-Ju r i m e d x i l b i o 0) tioL-uto t c x i v i t y e i t h e r i n e l u t e o r Mlxe'tun t o o ;. g t n c c i r s . m c t er i ; -. : , , c rot : oc. ei ■ o]i' i s o x r i m trot1 ' l i t tore o t r ; i i m . u, ntio-.Jmten (•.!) •"ctivitiofi. Minted m m ( l y !;o:'on- t:0 To ivere mm .T-morce o t c; m i t e . i i i i r r ’ i. .n n:! M.o;MT'ictitu x o t m i . 1 :^ i.t u m n h o m ed to o ■,ct o r i :. ;.ia .■■ot:'- um t'oLro o-ooert;; oi en f i orfc i'o'o e ■ ■ot. or too u n t o i - i - to:1',,iioto’. c t e r i uit i i t h t d e i l t m u in o i o c r . i u r oitd.or m e l h 9 h obeorYed r u m r t o o ■■i. c:o cco n t:r- U0 .; , V ‘ Or molt!. ( 0 0 j OT.'oioU erm ott b i i i ty o t r:x.t;:u o i t o i otiit’c'l ;nc ■>. . ro lort;.- oi' i l l or: y u m . ?t M ir 't tm t oot t t i o ■hi.Lit, oi t c r -t c t e r i o t i . e t u t - o m coii. ’" i l l r i y •T'o■' too j j o r e oyOy i .■n ■,i1: ■ our,-'! (1) in io h h ooiuj' 70'-V, ■h or enuyte vide i t v mol .t-tiot luc'dinm ;■ v.aoe vuriot;. o i sum in s oi von-j.--tin m i c o: " t ; i o r . n or. ed no c t n i t s e o c t i v i t y . cue to mi endo-enuyue ",n:: ’tie .0 ■ n-.ciiLtu'-tive or o b li u t o e ''nterooes e concluded t i n t the " c t i r i t v tins eromrfcy ot the l i v i n coll.. 'i'• -3 l l r e t . a .m t it n t i' v e o.erer i n e t i o n s or tin? ext-xlx re r e k i v i t y oi' [-■ ci,c}'ifi cere race cy ix" reach L.ro o x y eu ii;. er; t a o of. ;.\o;:cii ( / / ) in v. hen. h y O (; cie ec to a 1707. c e rin ite They noesnree. cei.cht uT eso teric. In i.3sc3'i0.i:i,- o r t e r ot t h e i r c c t s l n s e ocui.vitv, core oi the s i - n i s n i s m e y .Lintoe v.ere: 'Vs rein e _2.» ooo1i :o cocoa,a irLar.jcna-jer, i t r o t y l o c o cers snre'cc, cTOC.i.oioGtis, .■ cuerin. .< ,/, ooycn eus, cc'ceriuo c o i l , ~hx ct,. pints, i •• c i l l ’as _cjyo_s1j:-i-' tue h n ^ ' i e r , . c t e rlun typhi" or ■'.o :_!• erooot: ciU_ .otu i i nxr: liiio r.. xl . roin- ; yecioo oi vi b r i o , t o t - r i xvore t i e ,,.'!i;; o 'o c io c '.rich i,o .ho.. cot:-;j.: ,:;.3 . e b i v i i y . h) . r e i n : 0 ; Ox J ' C J ; . C 311 E l CUO 3 '.. iO 0 e to .'in .1 ii j o t vi:ich '..o tlv itV . ; cT.iv-ity oh : ’iU’" 0 ]' o:i m i ■1 (;■:>} ,n.>:r.us Oi'i rcchu e-c... ■ r.r.ninec, ( . '.’ ) , e rr . . V • " L S !5 O ' O m in .art eox-cm; 00 0 ociiv '... ., . (■. o.l 01 ' ... ■■o x 00 j* ,...ii-X'.ylyi.'■* ^ : non o n ;li r m j _ r is oi. io.o rocr COibUl'OG co t r i - n e ; c t i v i t y ^n, — 1...X-yG.■ v. ■OG3.C,. G0X.3,. ■X X3 ■..IXX,. C...GuyX.X.v,y■y.OX. . S'XXy.j.- G*.. * C'.;ltures shov.lu ori.eh, 0 .010 COn.r.0' I,. si' .000 i. ...... Vm X..oij:' Vhi. 7 ■: i , h i iomr.. tort me .Loriec ; v e r 01 tbrou Leone-.me i r e- i.mmo o c c i v i t y . ■J- eoby ( ‘ i ) ;..txu:im Lm e. t o i c c o x h t i v i v :■■■Cm ;C'Lc '-.hi.'. ei m l s s e t i n t r str; in .0 o i m H-DO.irciL? bobslxxe xti c s ir cro- c e i ir v ir ule nce chon . m m . m.hi i t t:, on;. mo.mi cir 0 . oro sooroo t ' /:.. rooo ovorvoi . ; 3 vron .nn-O--; ;v s xoxxo n r i e a b i r i 0 core boirx.c, th ■ e; ox lo se a c t i v i t y or.g rerrcect Ojxou. h cox. xexncroyoc. e n t i r e l y . C -llox (ei) o ..; rineci i xiic.crooxG cxxri ii . eroioc. ill the coroiDC cleroxrrcrr.ton cxtnlrno cctivit„. xxrceyt too i oyecioo o i h t reotococcos; none o:i the irintieiobos sliowed t n i e .nnoerty. . I'oth conttaniny cc-talase aid not x;uy,)ort , rov.tr. o f .-inae.ro ce.t culti-rec. nncer aerobic condition a. ,:.he not eb th at aero roe •tov.Ti cn aero bier 11 y cx-ocuceu le a n c a t a l a s e than .men ;.rov.n x. erobically. irerrxan (46) cclloi; a t t e n t io n to the i ct - tor t not r11 anaerobes were devoid oi' catalano sin ce so ..10 st ra in s of irooio’'io acid o o c i e r ia vhlof V'j o s t r i c t roicoTolo;shov.-ed h f .h :. chi vi ty . . '••e.i-tus, i s n o s e d s t i ’o n . c a t a la s e a c t i v i t y os coo pared to a nui'ior o i rm n y t r o e a nec./ruin. im e com-. ■■•;,;? ■feed to the cul tu re r e a l s i. v.Yicb 1b . v y f i c s p and Vibrio con p- ’. .ere rosm, f l a i r c; ta.L;;:se n c l i f i t y sr s rot in flu ancsd. i. t" >'■'• ( ,!7) ,Ot ;C uO <'•" '■ ;.roiJ ■) o.'.‘ o t ;f.i.Ct On i m IS V isSO :.:iiO :' lirtsner a ; ot . -Ixcsii ho-- o l o ; .ous to r r i s u s o (AO). " o r' t, v y •■'■slrd: (:0) b. ctarfa-i- r. 0:1 s l i p ■no o. "• t . i-Ot vioo I the '0">'0 xi SlSS f t*. :> o.- , :1..to_oO j a Cil V i t i OS or u-v." oc, Ida d ire ct c e l l cooni; • :/ a Giancana ~r as.' 00 t :.a cots I.use a c t i v i t y isano .iorrcla 1. = v-0 - c t i u u v e l o c i t ■ c o n s i s t :ia.r,'0 3r of' c e i l s '_:do; ono' od dr.t i r e neco ; ic sif ion o f fyOv o.: ■■'io;;s i s a f i r s t re a c t io n . .irts se :. a s . i n t e r (ol) ro a r i a e t a c t the .ocir.Ge in oor sir. so • cr-ivit; vt.ic occnm to :1 ?■1L1. (df) r i m o f too csjJ iso y i . vrriod solviesn for drain;-, o f v.iti. s iron in 1 r a t e r x-i o f the n r i ii to t i e a.ci c: rounsoc. f.- °-r ;1 n c o r of s .acics o f 1 cue:!;.;, r 10~C1 fo r .. coii_. .yiios in cnorrhosr.-s, order an: ■,'i.vin j. on if 0 iln os ac i n i _•.fo,..rf.ijei to O.OOi -O.Of r 10“ "’ the forr. il s of tintm.on, dircdner s u a ' n n . e l l ( ‘ o) fouin tin; c s i n a s e s c t i i t ; if ot o f .yoissoris on » o of I t s i . or.'i’i.i le.-c in on ro st er than th at of J. c o l l . , nrtoa ot nl (17) ao:. yn red. tail, propart;. wits other sivysioso. i c 1en r c t e v i r c i of strains, of ,..]:i^3 l.ir Dot fovru i t oi l i t t l e n i n e in dilToreiitiatiny, th es e o or si! i s ' S. erndntier arc n r oitoi;: (10) ii v s s t i i toe the e f f e c t oi' ccandniry v a r io u s a y y r s an. ajnino ■'cid.s in i r e : .ediitt aid found n i c e v a r i e t y i n Catalans a c t i v i t y cep ermine upon t h e s e c o n s t i t u e n t s . 6. I Ujig a d ca.iiix_ ( £;.) studied u .j e: igxooc o c f i v i t y oi' 0i__. tjwrro- rnoxi.'.or theiT'iopniiic celliuor: e - f o r mtiif; ox ; n i f f . they noted bh: t too cutr.info r c t i v i t y o si uoti. t i e r oyhil'.., oiiovoo 'in optivru s. c x i v i t y : t 60° C. ..olfson stmbiod xue im'luence e l uyeo on or. i,r i n s e o c x i v i t y o f f ;:erno..or.;.s .. n x ; i- ooo. e f f e c t ..:,o iTOoocou u. or too n no dyes studied, fine . y e c t e s t . exf■I t.'ho bloc v.hicJr, ■lien oreoont ia 'ion c i l t u r e -■eoiv;" in coiicenxr'-tion c i O.Oi ov cent, 1 ocfes. nod t'.-.o n v . s o : o f i v i t y ■.. :. I f . ho Oofn 3C 1. j t iv i f X 0 . 0 oOloCXeb i f o ", I : j f f i i n s v ere vnyonoeu in ;:■ :joj.l. lion o f n o y o . no x ntod, funk oi, c i . f ''/) foun .i tuc t the a; l . l r s e i f .' io to n eton or ::: o cf iv e : t r: y.: "f If" : C b- ' X X set n t Ox \5 f :. X, -0 0 Of il ° C . for several eonrs ons re. tree f m i x s c o ^ t r c l i o n . omrl'ioe a c t i v i t y of y r ot if ncmynrr. ( i f ) inere. seo the on cl cm; f e ' . x i i m res t or iuec. \ it h 1: :3 x i. IVt :.;li OCi-i'iji.'T'G. .-it cheer ( I f ) ooociuuec. o n oyrvrLnoo .1.1 for;.inf oi f fo tifs )ro •.'ionic ;.ci:. n .c te ri n end iii n o j.nce • u i i \ L f ' ' ..ere inhere t yr-on-.ovties ■of ■the ■culture. e r e . not b;,cociox«b nitic my ..other. ;n v t i o i a E,iouL cruy'fcteri t i cs . fi.o c o xo i fs e : c t i v i t y ..itiliyn n : net .vet:-- vena co r.d tf.3 ;rr anie o x i u i f i r oooc if yrooerti or o f tre hriKlfnen ( r' f ) . ijt.ro so- lpr- s vershed f r e e o f n i t r i t e s skov.ed no enfceieso a c t i v i t y . ; ore ( f ? ) any. .ssted ti.e oca of cetoi?:oe a c t i v i t y os a neono o f o l f ..erc:.ixietirr o i ’ recall;... the ryociot i -cl oin.eeUir;; (~.5) a oounf L-rated i. e . t the VV-rbriy; •,j s e r a t u s vf.r; u s e f u l i f fC fd /i f Lie c:;t:iL;:fe ..AT0RSO11 r nrii i.JIB!feld (49) ucec c t i v i t y o f I'-vincu.- i- ctenir,. rr o t e vc vi’ir/.d'is C f i t f j e of >.iji "■ctivity to ctuc'y .active end ifo.cxive c"tt:._BSe. ucii!. count i s the ooois o f 1 cterio.l ctoncl.rdination, the; fin v ic c ie cell eov.noreu the ?. ■■ctivit-y o f c r t r i m e eed'ore emu ;. i'ter s e l a t i o n oi' c u if -h o or t m t r m t or f o i r e r u r t l y i . : oth incro* set m e a c t i v i t y . .iLoven m e c i e ? of _ ce t o o o c te r v;oi*e examinee; by : rilr-ov nu- . o f: i. 6 (ml) sodium a s i d e . bone o f to.; t e c h n i c s a ’;>loyon m r c m a ' f i e i e n t l y s e n s i t i v e to d e t e c t up0o ir oei'obic cm. fe r e s . miorl ason -fid otnnl ( f l ) c o n err ten c:r f o r m e a c t i v i t y e i t h t];e v ir u l e n c e of each o f fr o three s ecfes: of i roc e l l or f e l l into three rones or a c t i v i t y , i.n t n i o re s t . me omrt or decreased as the i.e. row of 3; mmse s mcie s ■r. rr.is. in the rir iie st one. f r . obortus o . f o e a c t i v i t y m. mu . iven. culture f m o d ; . cion ircre; s o d m::.e ro r■. cu lt u re s G) : f . - o l italic i s shores, mo mv e a c t i v i t y m nid Guootii c u lt u re s of hr. abo r t u s , but i t vms .. os si b le to d i f f e r e n t i a t e n*. s. i s iron the otiior tv.'o s u e c ie s re; ■ruioso o f d m . cu lt u r e s of p r u c e i lp v.r-.s o i r e c t i y .•.0 thorp found ih; t d i e cu tor a so a c t i v i t y of smooth •rooorticrml to tuej.r v i r u l e n c e , flume rowin.y the o r m n i m s under an incra; sen. CO;; ten sio n c t i c v ol i t 32- too c;r.u:-;i- • ei i v i . , u.d rov/in; tber on niiTerent eni_• c id rosni't in oi;;:']. tie; ii I. oic'teroooei:;. mo .;ur.iu;,e o i Ioio i.nv onii .oiden ii. m .iton;-- oil..: co'Colose octivit; too oi . ,_j_ ^e_-’_tu r-;.:i_c, ; nc too cnti: onic J..L; rol; .o«m on; ;r oia :o, ro ■onrki.0 .0 . i s o; ci'i.iuo oo: v. . . i on cni eooticc.. (1 . W l_r 1 iJ J ■eteriolo._ic.vl .its C"ito res ‘.ore by the r o w or o w e t veri!:iou reuiuv (■') vs vow riled i c h i v.vn veo; rt. wit o f . r r i l . f o r v-icuire rocurtion. wV l o r 'o. lo : reeled viicev v l v i o e s . I y c e o l ‘10, orch' e ror 1 : 1 . U L.. iC.O 1. out ■c to ; . • I1 iroieore-vvtoue 10.0 s.. 10.0 d.h . . . 1000.0 : 1. hOO.C r l . .'- C l . i. .veil.!, or v o t e r : t e r i l o ; o i l Oil;:-, t O'., w e e y flo o d -■ot.vtoes were boiled iw o n e - m i r the v o lo - e of d is til ? .e h water ;Wd yjy’cer ino v n t i l so I t , settle. o t v i r o a t :ro,y i; v o w e ii.I w . vox - v l o ’ .so. to ho too w i r - c t v s vv.ee, w i t , yen dove, v...or wo d i s t i l Lied v o t e r to v o l u v e . vivo ■>.. ‘ vs vd.irvt.rl to 7.1 - 7.-'. w toclaved v.iu. ixLvv :..o ed. w e ..ticvl-Ly. '■"ill 03 r e f w r r e l to w w e 03cbi.LV w o t v . t v i thovt . or ..o i . esvoo vo.ceiiie > .w u iw vI v .olOu . ci "Cv’ ..vis wedi..;: co..rtvioii;■■ ..3:1 tore yopt one ?s w i v e t tov:.ov rie.v.oFtic . w h i m . "OVxew....ofcitler o r . dxxe vedivv . I n o e ti.e i s o l a t e d call R tve w sotQ de, i X A W t , o . v v k; , o i i . v i : V; ~T't 0 ve d io r w s used h,v v i a b i l i t . ; 1- covvw v c o i l e r ysiryos.vx v; von ids3 n v s b o r Ou' o o i l s. v s s s r t s low. iwlwwes. .. i f i y - f i v e vsroiws of s cod: : . ports s.-is, v s r. i. is of io S ; . h j... pe r t u s s i s , 10 strviws ox' jovo wrtosols_, vie 10 srr,..i'i3 of _w . urondits ep ti c a were i n d u c e d in t h e stud;-', re _.-ertnssis s i r v i n s whicji owe prefixed by the l e t t e r L were i&eJv ted in iv i is iu v on? st ra in -I o.0h v. i) s rece ive d Iron l e v dor.: ..vote L3yvrt sent of . w i t h . jr. 'i(?erirr , oh r e s t err Lchi.yr. i?r. l e n l r i c ?: aid ivlrio". irduo" t o r i eo oi' d o i Chi:;.on 10. J / e r t i - aut o f JuoAth, so.rlj.ou o i l other col turoo rid niso rnnae t i e i ■l LI;i ■ :1 c 'iro-' c‘ne ■:1 a ti o 11e. . . pertus s i s : ifitnros isolate _:.m v.JooMn ei ■■. cf stl’1 sxios of s. out, rcr: Luo ; £ u.eccri sea . i l x e r (.07). Colon! couyr pat ien ts rod uo o o u i r i c i , ir;j s o n ona. o r f o t uenyou cir,;n o e t i c -, ; r v.-ere t v j i c e i l y on srooif.L, no'oi.-bie m i our over i ■o.. i-. :.-I r, ater. ...j: tion of:; v i e - ... io.tiurciou crndoio : r' ' f r r y os is. os vrs ty p ic M . bite" i i t ; i 'Oci.fic ■ risers fouor ir. Cy Venariro: ( C) ■ d o t e c . v i e : G urea sort mud r e xiee:" V tie ti;.,or:"•, i . e . , i: i vOO. u o cM Ln.sos were v i r u l e n t j'or .-i ce. in i: ire f':voe b i l l i o n o r : n i y : so soon end s.cin ■or; i r j icxen i . r r . 'Srit'1 e .■d;;' n ;i i o 0! i . i t r i n f i v e f r o . 0. 1 uronueec ti.e t.yyicri. e':i. f ou rs , froo'ti: c t r . u r f i l i f r to i c to s c o n i c err,: in- - CO r.r cent of f i v e I. o" n 1 b i l l i o n sup r o e ion o f ire cultur es - e c r o e i e in m o l fi d rot , ron on r- Units o i t h i r -rS to 7? sri infu sion ■ roo on if in Mo; o 'f e d n s u i r : r s la n t s , ncre ot ef r: n i.n ut on iiou of roorfiiesc. ‘j.'f e too f s t r a in s f i . •. y a r n s s i s , off so I'v ■-A . {fO), rricr v.ere incitMed-vere. o. of i s o l a t e d In rovitu:; ■rf ,.o. Cl received fro s t r a i n s os sifvn l y . e i ; or - r f i i . r L e s l i e and. n r l i i e r r v apointed.•by-'fruv-oire- in. iff;-., - in 101 o, Jo. ;7 i s o l a t e d U roroot in 1911 Connor o f L .for; l o r i e s . r a m ertuSioi s cult::, re a: s Coen i e o l n t o f fro. ••■ ■ p v o i' one 10 strains: of rfoooino coo . orpfoio, o or yortu s. i s ocillns r t i a n t x ;oif vsere a l l smooth , colony >,;• m c e , i;e c l y s i s on ■orre t nf r :'rim t inn tion u i t r s p e c i f i c anti s era: f f f M i:rr;iicaf i s o l a t e d fro-1 n i n n Toe 10 r t r i i r i n s e:if r t £ r l of Jr. l_TOr.c'iii c e !;it i c e rore one s t ra in , l i o r a cLild. .. 11. ;' l i onrnins ty.iic I o-fnoio. y nun otnini' •. on in cterirxj.cs toi-e n;ti:o..enic '.'or : l e e ;.s be onvi r a t e f ];y i o t r e o e r i toue-.L in j action o f - 0 m i l l i o n ofuniKGS in m i : i . ’ ne her olyi.ie v r o n s i t i o o , u tility i-m.: C-.-i Oil., CU W ctS'l sti OG l.'nfof n e ll c c t o b i i . M (13) VC11 eC . the o ie e o t io n oi' ubmia v-39, a oo Hi .'■■?'•/ run. h Etrcij-iC. they r are noioi-unnc i.oi e w e b i ' f e between i t rein ree'enti; l u r i a iol...ovi]iy i ur: oerebini i.ij a cti on , yin iu-'itiu.: car: r iy. ;ic:l.L; ith ojcuv.;. e i lion n ouoe intcinud . o n i l i n y , be. ol t i c r, oola colon;; ■ ■w.ro.oco throe oh i ; nirioe. .'1 non iur tiuri. •vyln tin ctiou z:y a f m t' i in ;v3p%ics o r t r > n o H i - v l n e : ;i j ; tiv-.- ■■- c 1 i. i:i ro o n o e of ; t r ouiLc c e r e a 'Ofinvine o liiiiu c olio; on 0 to . . n i v n i o n (••; ) . ICO... CO.LOOTC. e Gf i n n o l o t i c s Uio:L i n . v -eo Finn n ob w i i n e on e o i l o> t ‘ s o i l . .inno ; i i ..nn. f '.o-.j'b:no non toKof" "i mo i c o o t u e t e f by t) o i r r in n Iron of : .. l u t io - ' t io n in.: 1 ’ t OS ' ■■ot. - ■ tis.-.ocihtion of e, .lonf i o s i s :■ ■noy o f l : D t O 'O'j.:' inch i c in: :'0>U',3>ti;' ....,inon iiu:;- : ioiinvtec.. ■. w li in to o . no toe m .e Uulouioc, ’i LnO'U ■t,or 0 3 ■ conns ■o : t o ;■ ex no nun’.e "GO.■n.. ..nmo n.Lny. con;.,...f. sjf t i w t j ; , ;■l o t in rotor in bote o 00 t v .;. : no .• oi o t r , n.fi- v in e. _b fc:. o o f f t ire n n i l c e i l ^ ^ . r j y c t.- jn 'ss w o t . rov.'tu ,n: ■- co I t if' ■:no ;o £ oonbeo i n 0.;; j oi' cent 3 o n oenn-ob i'm. i tno : G e r t i e ui.louLV, c o w i n i n 0 . 0 : Ci.. f;i.e on u ti:e o i l o t i n : ee o f the . noin . ,n i cant t r , f o m e fJo.do io o j.O to 7 .0 . : no. .its o f ■. • r mo cl'Ji.ios o.t :■■ c ' t n i o v.ei’e :oe owe n f i l t r v tiun xbtuo. t . ■ute evf: cottu i. .iiiter- ( . 6) on oy oj. Gonin >■T t ic ie o to n e t t l e boi'ore ■.itoc’oivino tbu ton n o t i o n o f t i e cis-'Oooi.fi. octi'vlt.. ■’ r one go olocn v .'floii ...vor iron f i e .o : ocent: in !'■■ t no :eaii,v, noo;,-on vif n >n,tent-.imis f e r e c o o t r i i f ee; ronf tUe r:noe;1n.:st:..nt c: t niGeu ini- ti i ei r 1.0 1.0 v. t.-i1 i C; I'. •1. ,. ‘ ti'jii i.o direct q.o 50 cell c o u n t s XIO' 9 ■: v/'ii'iJl i "0 7 i t:.‘ fc.O L ' , ■j . l l z. Y.O L" 1 t If.:. ,cl:i.oi! ou by one : o Li vi i,. ■smc't. or-’j io y oc :o v enci.m. r se L c i i x d i y . to tho - .ecicr, rvc )9Hf:ion l l l e i i oLuotoo. 1 ioioe z ever oi,;-;j"Vku, ooiii. j’i j.'i. c l i o n ei . i th too i i - n i c loco::;-':;-;/ ;,o cOiitriiu. o L-.b coi.I.s L'l'O : t i c , o oi n llo l, the i t ict; cot redivu.c.. t a t i o n oJ.- b, c t o r u d b o s c e s s i o n s . ■ C t o ’ -iii.L foe o i) cr. oi. I t i. . i c c t .J. 0.0 m rio COllCOiJ. LL: t L o u cm m. jc it C been ncoerl;_ ce.cc , i) f cnees i c ii L c n c in I" :::ic f r o ' , CC O’cS 'CL cOtcjC OL 1. 11; c.cs .-jr.rio., t) vi; c.i.j c o c c i ffcco 0i f ' o '"MT'M:>i : - .Li 1 m(; tice O'O _ o t o i l -j If e. .i. valent eo_l. co.nf tjco c s e c ie s. e--va-essec c,c; the 0:0 ': b i l l i o n oo o i io ' , ' m . ■c f t c cn 1 s • m !,i'!)i;rc -ii.c cel L COCilO c l c L::i: l.j cc-ceiit cm for c tno cc; ].. o: ••. to t . 3 nLlrion conn I iM v i s i l e c o i f , •Cl Ui.M l i i o i o i : Ot i • cncL'C Jo t c c Lror c;.. f . c cl S : e l f i ' CL in 'CU'OCO CO.!.'. COILit « i \>o.o f o f i u i r y ict-O V too "o: ct io n . c cxx‘.cii;m: lo c to c ot ej ' ( 1 1 ) to :c t o r e i ' . i - f 001.-S ircc r e ' - i w r e e .■o o f h ' f teiy c o r to s : i s f c i l l u TO rrOnctiOSetiCL. f -f iic-e 1 f m n c w e r e e f p r e y - o f t e n s i t y c.etei?nii>.pt;i'on-s. f i t e -the- nibby e o f r c L w i l o o t o n e t f . MLS +_ : t vho cr.icclr tec error in c l e w i col cation ' i l l i o o or •• .ii ? • s. v-3'icii o t :'.oce c.'l ii. ci. 'o:; ..e nscc io:r • c i i v i t y wo: 1 L c n t i t c t i v o ' w snrer ents oi c w e l c s e ) c o l l e c t i o n c l ocn w evolves : cot on r Om i s ranee. to too ennnoe, ; ) i f f ; t i r e o_ clo ro s i burl :.io 1 oi'tex- yerio.-r. or re-ctxoci ) ; no to'-Goent n o o i c i o rf>ni.c s n s l y s i s ( c l ) . ooiic1; - l i o n s the crolcnlf'tion a t ory._3 L ovolvoc:. i o t o r v n l s , lio.s teon r-ollnoo in the . nucory 00 10 03 r i r s t icettoo, z ony nttmc oi- carctus ( I t ) , 01' tic..e o/ho umisad 1C. : .<•Oo ■ ..o uy the io Joh: j l r i e . '.it bob ( J3) or I;1 Litration Luce ■..■otr t i t r a t i o n s re , i r e o*vnls by .'■•.ban, too oolo. io i .dots. -to ■eb:ur o i ■eLuio ■bur.'cion oh e Colooo : etivit;, ueot: in t r i o 0 'O'i;p; t o t ot . .rd. loson rui f t n u l ( b l ) . e;u e n t i t l l ; U. 3 od;nvio:i.'c:i red r c t e r l ; 1 ::[;o;3roioo r s r o '.by dor e-u; _l t t i i r o n r - ;o.: i o -'1. o.i 'bG.-. ore r-.ou -:i i v t i n :rir e i l r . a t . i. "■ 'oo rent ;y..r jeacion oo;, G. : ii. . \rin e i n h ir ' ovi;o .b.h- v.- - too ont r e s i ... euivr, Lou I t . . i;..o _ry h o s o oo in-oo & 1°'.'. -.vher ' t o rviinaotr'-tioo s boy . oi the d i l u t e e r i t e 10 ■ .h e dr o x u - e r.u '.lO'j t e r rr" t re oi booh r:r too l o o t o r i 1 o d o : o i ;':o o l v e oi;:. o f -..p.-- in the <"• ed to it c t e r i u l Leo v - s ;coc b; r o t e too; h i o e l bein;-. erior of r;r c t i e r too 11; oho rere heir. or e r o t e t i n y - t t i d robe or .LOO roir. r/i.ono or • innate. ot the -.'ei.-ired t i e v ’t n r v r l s , C d . ■ii - . 'or,-;.-; \ ,:re i d ore:. ;.:od :. cod. to h : d . o f ' 1 : 0 .-.oivu-ior. o' ■;o ■_oo b 0.-;, r i c h d i e d a e t f i c i e . n i a c i r h.;r toe t i t r r t i u u rirh otiter.-'.l ho i n di c 't ed t.re sd-ar er re r e I’otc rioo o i r on i.rLoi.- to. c.oot t i u e noo be "'yd: t ore. " no.:, .oilers -on on I t e r CO uirsutee. since. the. . • . . non 0e l o r ' i r r Lions v:e;re . ebe ot t ch .o ole oo e v..ilor, o> v i d li t r ; te.'. o.itr o . i .0 tiO.,<. Khi i Ooo; hjsoroyo.. t..o o, o ;o e h brer; iirm re shove: to ,.e u n r e l i a b l e , i . e . , : i s t i l l e r r t t e r rui dri:v; l e d t ! d G ol. cl n o eecor p o s it io n ot l;-0- o;s ore: ter i i too: r o t i o o f c e l l s to ioi’ot.ioe ..os inerer.sec., oJiy iov t i t r n - tion val ue s obt'oioeoi. vero r e j e c t e e urG tb.e c s t e r ino.ti.ons reosn oteci. voitii h r i r o o o r i ; i.iiol concentr; tio n o f c a l i s . ; conioi'ol titr-. ti o u no a iY;..'..!.:i ■t to 'j',’]0 0 3 C0 1 o o o e d . C'-'GOt,; ■'i; t o ..O.Vrt: no 11; S ' .0 ■ ‘oriO" I ' l i o i i l lo l.o i >0 1 " O'C ' : t: .Ol 30 'GOOUjilOUt t h e v.;ve v.rs 1- - Ii:JC.■n.t t i n t o . i ' oxih'-nol;’ ‘ Oj g. tost. Innin . 0G3OU : 'in ir. to '....! •. .lib v.>:nc3ntr.,-tlua o i1 ir-r cTocotG. ii i i beyo’K’ ii x oco -e o t t o i n onooi' to ;.iccoo.. t e a U’Ti;.; i c o o f ■y.e in;; on; cxioiiE J l c L.oj.o;?e nod oo'bo ■o x s r ' i i i o ■o t i v i t y t o o nrny c o- CXOT'i: i . o .o titin c j?' lOUCOCtr; l i o n : O' • ■■-: Jio-’i C i O'; I O 'O O l.. ottoio j.b i:t, 1 coi l-j t .e... .i;; o c c o I ol 0 0 r i, t o 00 oi o v o ro ; ;eiivio 1 no nocetion nO:-. .-0 0 t. ocxi.oo i; :iij.ioo n ill to . o o v i c o e CCOOO. ______ O t t io I'l'o c to mrs i s , :■or t l nonoi-ti 00.1 iocunno ware o o t uo to :; o t i i i . 0 0 t i l l i i 0 0 jIuIo.. o.e .1. on., tiio conuentri-tion 'intiuoo: vo-,£ O .t ■ , O.u o c j i ’ooooo t oo c- t o i o n o ; c'tiYiiy O' ■'.-■to oi U O': v.i i ';in •to .1 0 v:J 010 to to von ' i . l i . i o n t o o l Vuitt-i i ' ■o i t i o o in son --o o-e to i tL/O!: V' eoi.no - or i t T i ^ i . it. c t o r i o i con c e i i t t o i i o i i vos II. ;3 b i l l i o n t or ci' o y o so- o o v . o otoir C0]1 C 00 XO" t i . O : o 000coo.[notion . i t ' o o o i coco one to. t i ■io : . v. 0 0 L OO -r o OOOi. -; t i a i S . oO.- '■■■;-:■ 0 . 1 o i o i-i.o ■c i a o r i c o n c o n tr . li u : n e t i vi t y no t ' -i o t o n . l i t ion \ o. o i ;o . j o t v 1 to b o C o l o . .O' ; c i o o i o :r;oo-i:i- j 0 0 !■c eo I v ■tLoo n i. , ,-ooonii o i o l ,.no;' :i:;u : n. . fi o u i o ii io ■o. - c oc io ■e.-.evar-, to vi. It-ii.n i t ; o n , a oi' c o i l tic n cant r t io n .: n s a i , lo t oi i t v.x-f necoi-i.ij";, io o l . o i O.I O'1, 0..3 o. cn(> toco Louie ti.ta. ml. of 0.1 N HiOx decomposed lv» O" o tx ID X -3 O ' Oo O t 'J CD [sj O m N -C» ro O' * i o " .r! I--' -P ■H p O .. r' : U : ■p *1—4 - P ; P-* 7 ■H -r-t P O 0 r ; r’" .. •i—( 'r i •:: i—l t o•7 i > - i i 1 :-i i * P . • •• i -H , 1 -* • i TT J ” i -P | -P ; 0 ; • ' ■ ; ’0 1 C). v: , -V ; i :H , • . O O' ri -j ■H c . O 'J . O r -y :r ! o > o *—?. C ■J.OO-V1'- i -t-t Lo 7! 0 > If -o o t r-'i 0 ?1 *1 j t 1 i1 i ]P i i_* ; !0 « 1 O if-'j O \—\ L.O L- ■r> 1--1 « • « « • » • ft ’-O O- fO O c •.. •j - L> ■JJ 1--1 1—! !—f :—\ r—J f—i ;—f ---( i--f • 1 ! "■ 1 11 W: -lV. 1 ' one m t o r e . ct i on . i. ■i ■i e, i be t tit-m / ■.t o . ) n . c e n t m t v : m p o i 0 . ' . no nob non n Ol L(’'■b i o . . J .! i v o cm m e m c l o iitni.vl.j.on V i l . i e s . 0 Y.'j.Ail CO’ : )r- X'ij: Uni, : 0 liiO ;.-.Qo in mui u . u bhe '-.le i n i t i a l ■ C l i v l t , ' ml „n. m im . im^i. ‘'-:e etion .L'..oi.., ■■ v' i nor. :iK)iUi 1::. . m m - 'tin ''■.■■■ .vi V ml V.u ,,.• ve mmm . ciinim . n ■' " :: 01 10 ' X. \ ' i • — i- . i l n o m none it' mm ii V' i ’ C i , ) ) i j ii Oi YJ ii Oi- 0 n t l 010: ..io.m > ( ■ ' ? ) om s mtimj.pte ivaen t i t r a t i o n s neinmmmetio o o i ronioimi ,.-0,,. .n. ...i to -..7. 1 mmm.ivm, t,!;-: u V / m u a virtrmen p i m p n e ce in. c-m-m'im ■ c t i n i i p m. ii. in "nimmip t.:: t J. c a l l ionu : ;■ nimocp. r i s e in pctivintm by ..o'it m i ".on m i . ••■ti;- mLiadiim n e i u t i o o s miniim imonnrseo m r c m ,o ho e r r me in ivitv. . . ImriVr m i p o it.m in n n n r n i'ne I n i e omro c mmon dec. i n c : no -mo i , o t . i o i . ;no '. c i t i o n to oim tin l l u i o ml pmomnnnto n m n - t i : n t -men ipol'imr s o l u t i o n - - m m i . 0 , 1 . one, t h e . . . . , n- no ..?;*.m ^.hm t o “ . i n . .im m e i f 00 onrnm ; \ > r ./ Imp m ; omi Ire. ,• on t i p i.u;od V: .Tint.ico;: 1 : t ■■■ o :ti uim . m - o n l j ■ lienimp ..pete- . .0 • n too ■ v': mmo, J p : (10 ;Oit - OTP :;-'nu .im,,mn (ml) m ;m in c- t m. m imm. cimr- j.i,r i ' . : 1! : ononn m n ' tLr^re. mho d i l u e n t mid toe -Op m m p i l o t e d m'.tm tr,o b o i l e r n o e c jororiie r e ? . e n t s mere c h i l l e d bo 1 ° C. m m n er i s l a o o i m u l e . ii h i e i hi d o t on' p;■ o l mm re.-cti.03i ■■ivrm.ro on cm.in li m e n e t i v i t y 1&I344 17911 ; i i oi S ' o mbmn s e pc. I i y i t y _ _ __ ____ _ ./ oi t'-:s c i m t i n ^ f l u i d , yih ‘ 1 ' { . 9i i'' 6 .0 J ' V. O' i ' :J . O j " Ti'if ssasri-V---*^. ir .r . r r •••-'--r i.-r- v. i.- r i ? r vU s r r i - * ■==«r sor 10.7 ; b . i S7 ‘ 7 I (10.i : ; O.i. 11. 8 j i . h I 9.0. ! i ' . l i 10.9 ; 1 0. 7 ; 1 0. 0 7.3 ! o.l: _ ’ p . 6 I _m1. f t 7.1 ! ;0 . 9 !_ t. ii'ne oJ'ti'.’U’.i i n o c r e e e e l i n t n. iitnline. ■ o l 7 . 0 tn.ou; i 1 cin c.iinnn.,.. c; i. e ■ i n' Lwr ml. c f 0.1 N H ? 0 z ime in n o u r 04 decom posed I'3.. :'v'ctv... j' j_l-L yic OuOTci... ;.'cion. c i r n c to ,1 -ioji f-: o' c s'V. o v; r _Ij: .b i b t o too .-.i ! in i ) e l i v i r, o ' or. :■: )c ;'ro i ro- n, :• -L’’ '■■■’ 1 t l°v . i , .0 . j L>0 rii:.u ire, im : i-o , --- j ;.' 0 ,;;; .> 0. L..: .; 1,0 O’ IT. , OCO ..'0: a' a ico : x : .; 1" i m . . v"d . io i,oo sore ' . o o .[.' O' L .n d l e i, ■. ’ [ ' . j C x. roaeoloii Vx.'ir ■„4 ,.v 0 ' tie i end;.' re nroanl x 0 .of. I':. V, 3 .1 0 5 _>r no' t O' 0-0 ' o ' ' : : i . to for .. , 0; [, » .) .0 si ■.. 7 .-o' I'O .IO O .70 j['T ox . o r ;. o o t i a l i t y 01 - J !i tir.o ..;3e.:. to r co lo u ro iO tni . ;*oov. r c l ation. v i d r o r - .-. ' 0 'O', i .! x 00 •■. tit a ton co n stitu sn ta fo r d o p e ::''t: ?e ouG peosion to re re .Bio-ad aurinp r - 0 ... oooliiio 3/ : o l ' r- . ... (., * C i'.j V I 'i/V . o. o n : in t a d o rn C; TOiiO. 0 3 or. ■' L T'OC s in ce too r e c a l l s rescu. ;o. too 3 V I: 0 7 t n . 07u03' ti-..e '-0 1 1 o ■ ; . a- s o d c itrstio e C: : l t O V - 5 "...•} i i o l o o n . i ' e icrjor. c i o f -so nUp , 03 t m n ic . t '.BT]: 'ici'ti .010V/ere,0 Ctix GIG OTrO C o "if . 6 i-oYiu e i::i, n r r - i ■.t n o r t e r n " 1 re. ■•’ .'■.•..'.it; ooon for rouoiiiB e rr ii i; ■lio ns i ' o . i i .noos ..ere L'illO; , ' 0 I 0. Tl ,. . J.’L0T 1 . .OCxO'. LO* ••'C-J. L i\i 3 oo : 'la.; boo O'. \, i. V i u irai-iii.i l i t e r ra-.cTionor tbo on::yr:e I . •' o'-e i. n i - ... J ... ...I". r;7; u ■0 L'l '0 o' i n : , Le. no i ''t.. rn t u s- -c" v ne (14°C. i i i i t i . i l re-.. 1 x7 0 3 . t roe T ! TL. 7 1. L v o ' "X.;: t Li', .-..e to m :i:"t m t 1'" . . e.oe .:.lL Oil;, ''.'.! tc i ore f sour: t i e corn;. rison of o f r.r cti. .c 1'Oi .o ' 3 T 10 L.iO on:,’ e c ' c - l s o o io :.orr 0 ° r:. or - s u re Ji c ta io .se m rro rs. c r t ' :ir:£ 3 .".ciivity Jocoby o ctirit;.' or ( r L) of •di. jw I n d i a (10) obt?d iied vi i*i z a r e s r i t o f o r co:talr:se ; ' c t i v i t y oi b c o l i o;; i'air CB'Obiias riour 01 ooino r.ci'c- or.o 0 19 ■oniim l-.ctr.-uo o f f e r e d & 'better i -.euiuii lo r c i t s l s / a a c t i v i t y thrai the eino s i t n ; ny o f the otne r tv/v-rs tooted >>-.cination o • tnese n. uno \ la'csri c rclo. ine oo-iree j ! nitr e, sri, o" o'-rbohVi-rote. ci. oto ..r i the observation t i n t the ■o t i v i t y leionstr''.ted s i t n theiv..ojbni.Lic or. ,;-:ni sns . r c r / a i roc 65°s erii loir Itno ..o k ; to re c . / ’t r i s i n . c e i i u l c il o r o r c o o.t l i .: r ; c o o m , nr .mi r; . .Luce sr.o s t i t o t n; r c c i T i s io n o l ■cic. in o ! cdiur: toe -u or. l i i l . v i c t i v i t y to t.? t obTsineh l i t l . c e l l u l o s e ■r ,;k ovr o.oro t or • i t h lucooO ;o; l o soriis.. to e incu cation ten jo rr on re to concsinin. '111°: . . . r a t i o n o l 1 e r r o s u l f i t e to m • ecu rein.. ; to vi''tsnen - n r . ...inter ( s i ) . ; tr e a t ion so Lie 1 ' osii- r i u n t n; co In o.i’: i i l :u . ) j it n s .r j s . e i iu : ; nil not i . . . a ; too r c t i v i t y .uufrlesoi n : i n i ' c c t o r t t i e • c t i v i t i e . o obtain eel fir/' ('1) colled. tv.o cdfferor.t T,ei. I n c u s e o f vo ‘i n t i o n s in r e c u t i s . h •: Is: ,.:.a; ons et vOirou m :1v ' sere met: lo r _Torino inr-o t .ere i s r r n i i r n , ; vsrir.tion in ore jsrin.y r.ry "'obiTh- enn trinin '‘'"bioon, • recorc m s s'l&se .of ..os.oii.-Ot i f loouiuv. u se s. : roci t.e lo J'luctnotion in one cstsn^oO r c t i v i t y of cu ltu res ■.T'ov.ii on lo t u u " o i e i t d i f f e r e n t tir.es iOttl cco o l cu rt p :tor . .roin -v. th 3 o n e 'lecdiv! in tne n o contsAners a o t i c :-JKi vaccine necii cue i u i l u e n c s.fJ*0^ O l t v.„CC;iuie 0. ■oui’1. eonoi. ..orc iij.; uO-oier t in eo i- toe :it 17°n. , i'lx n ! :' j v.x e.: - i . 1 -r.i the ooncentn tio-i of MGo r s s Q.n y. or i.ij. 0 r nO 'tci.io i - lee cm i n . , eoiu-. on: ore c 1 tulas e n e M i t y o i h. ort<, s s i s i ppyf;Mic_ 0 . Cultures v;ore Ivon i ; .r bro •'. j..i j..j.!!oncu •J. 1 re hie n o s t i c neciu:.. rov I e y / s , the e- ccovi.-.j. caueen crotion in oho ro- ction h,3 eii.hion Li.n ' re jm .no?j p ::e) _• vr coin a •poili r: 1 ( .-eutone j < . :.v. n; r e 0 0 .0.0 exivicy ■ "* . r— i. s-st.'i.r.-s.-s..rsr5rs rA-s.,:53nr;.r*.r. .1 .,: ■. ; .j.e.t ■■ intu? ; m .o ; b l-~,;i6 i_______ M ______ |_____ 0 r > '.i;;± \se ; ‘ knots ;i . ctivity t -' Wa-r* ? r-■ r-i'.;-.rT. r - so ; -tz n . s s_- rrsi.-r.’ z~T. z -srsr-s- tris.r a. s. 3 ;; ii.p : 9 :: ii.;: ; 4 _____ 7 . 7_ _ t 4 v.'-;}i-3 . s;ur..-; ::o r-oro v a r i a ti o n in klie ci.fcaiase a c t i v i t y of pertussi s _r.jv.xi -It:; : nL:.. v.i tlio.it peptone then i s within Mx ? a ; e of erperirentnl arvo?-. ’o e f f e c t ol' xro oil o f if 1.0 lie 3 cn erln in -.l ie., xrs so 1 . hru boon io re roo by phosphoric -“cia. j . j ,-jjir .,ere r n t . s r s o f t , nsrveo Li or of the sco.uty .i roie o.it. on 0 1 euiu" „-a crt;. les o a c t i v i t y was stuuied f'ho c isis 1 !_■0 usee. iiiciun, 3 ii c s s. 00 oiooxs s x r r i r s ol no' "tn v.as pertus..-is> to oo.eent for n iOo : ... io ti.orxioo t i t e r (i.7vb 1) , me one non; h s t r a i n . he o'ns .it s iver. in h . .■; b i v ^ i c s x e 'no : i '‘;: i . i r no ■'.sn.i.;. 10 -j’i in hoc t ori oi inno'j.cse oi' .f : e c t o f , or joinire O. ^r— - - lofi-K ihhis iv o fi ol ^ ... . ort ,!s..ic: , nno.n on .o- "Oiii: f i u . n pr oj. o.-- to f . f . c.i xfj cnixnre ehinoi. on c':to.L;: ns . n c ti v ix y j ] ! .it prtni.' so Kcti'i/ity _ _______ _____ ______________ ______ j O.B i 0.0 b.6 ! _ pj _6.4___ s •; . •- r t i - 4 t . i j : r - s - . - r -T *r • * r — - : r — * '• ; 11.9 li . 0 sxi'ooth ! 10. h y*9 i ; 3.9 O i . 'i " ! y*o ■ "‘’•'v ! ; 11.9 i h. 0 ; i" .i : ; 1 h.7 rouyh ' ’ . . 0 ! .z..ib.O z. « - -r .'.i ^ ?t : t ' **■- '=-r .......... t t .z :1 . Oe.TlCyftyi jy / ' - j f - . c i : . . i a c e t. . c S'Ouin l'or.v.3 o 1 i n e .-ent .ionic 'i.'uV; i!'■;l •n l l o CO onuin ct &1QL..X Ll o o 0 , ; ob-.Ut... 01' |. i.: oil"onion! C.lii'Ui o j . i c i ' j c on o;j o') :oto. ii x.;; 1,10' ; o i e ; •:.'tin x i o n i n eo.lv ore < e u i o . ox i'v i l . o l Xo.e !/>.' ' .ii,.'.. O . 0 C'-i : i n ; cm ■<•} eULiJi". Vi. th.oui, - l o o u v i. in c o -:/i.3b I t i ..V," o.V \o ;i i ! . lij'bli 0 . L0 -'Oil OVi o li. Oil : .■VS 1.0 . o.:.0 5t L:i io: c io n o7;-°C'. l o r . — ■ 8 s o u r s . - i i I'-V.t.i li. O. • .. 3 i;Xji8j‘ b. •0 . o' d i e o.incLcEe 3.0' Go 7." CCiVlQ -. : r . ■x'i .i. no ro e ,:o -e l i m i . : .a aiv o . i . d . o v r b t o r • i v'CO J; G COfiJ-li'S'j i OX'i-ViLXi/ Oi TOIM ■'■o. •OO.o O1 C.OiOtoo Oni'i..icr.T,3 ..Tl’, 1 GO U lO 11.70., . .1 'i c. I UJOJ to 8 Oil Oil Oi vi .c I .. -.<1 CVS ;• n.i.i . _ v. o i o o I ' . l l u cn co vii co L;:.; oo on.in on c t e 1: u.oo ji.rr. o r t u f c o i e b n c i i i v s neuron v c c iu e •0 • 1— i r--j "” F6V 415 5:;.i£ "01.7 10700 V.SHb 1-55.11 ' " 11' l - . ■l, ’O?^ c.etiv lty i! . . o co.i.oe *| , . 1 1 » 7 -.I m . . . u n i o n ■. o r '* iLiOH;; •:1.00 U ? •j- - - - .......... “ u. j . or r o v l o o . , . | o ,'voi'i!■ 3 ‘ , '.'on' G '• u. 1 O. | : 0 vi otioir v o n ; ■' ovi ; t i o i i ; c t . ! b j • o’l o t i o n c t . j s e n t o 1 £ ' . 1. . - .5 a 1 -. . 7 in . : ; | 1 V s ' f ’ oVb r "r.’o f y; — • - oVC"*"' 11.5 ! 1 i ■. /. ’ : o.Qo 5. 9 ! \ 0.5 ! 0.0 b i. . . -. ’ 0 »• 1 5 . i : 1I V'. • 0i0 M -J W o,• ■: .,*»o i. '! W ()*<_> X y iv .v : I , » • 0 i i . 9 : 1 •» ! ii G ! O. . 0 .i - . 0 , ! o .i :: ' . s i ; 0 .5 ri 1 7 . G ; ; 1 .0 ;; -1 ’ 10. l 5! 5 I 0.4 15.0 : ;; 5 : 0 .7 o.o: ; 0.1 :. 9 : ; 1 .0 !: 1 0 . 1 ; ; o .o :: , . 5 : 0 ‘ 0 .0 1 1.8 !’- i i . i ; i , 5 ■it ,.v . '■r .. ■0 . '■■«■■ o - ■A' ' 7". ■■■'■■■■'•<, 4^l. ' ■,nv'. 1l ■■!i" ji i o . 0 : , 0 . .• , j u .... io .i ; :l jo . 1 ; 0 i O. 'I o:.0i £ 1 0 . -£I . X '- 3 - n s « s 3 1 0 .9 1 j 5 . -!■ I I 5 ?. : r i . z .. i .i. ^ t . : c — ~ z . r -t'.-t z —*-?• * r ~ z :x " t r : ~:‘- z lo st '0 . go .1 7 ;.:c..no o.L b l o o d i . i t.l o ccl'ic.'-e i - e c i ’i . . incvo;'.;;oO t b « o ^ t o l o c e ..'■■g . 0 0 i.dt:i orco.ce vo;B . o v e v.’. c r ’reo, oo i e v o r oetv.'esn • c b i . v i t v ox' c l x u;to o t r ' i i/ ;: '. o' 3 ■' c t i co.i t o r go . rovoi 011 o o i o t o ol o u t ilLooc) ■ o r .. i. t l.r. ■.00 t o o l ioluciuii o c o ivi t l o u t thcia tin;-30 o r o v:ri 0.0 ex Geroijou r i t l x - 'ototo ootrrct ;lood. oi'oocoioo i t i c c : o c - t i v i t y o f oiojojii ■ oo;::r^ct i r r , ' lo rirtoG : otoc., o l loio v r i o t . i o - in enivre s on c . i I't'ovoat oeo.io , c u l b u r o o o r Jor. . . - r o n c h i c s p t i cit vriT'G -rovcc on l o i o ot ...oo ,oa v- c o i n s : o u on v c n i n i i i s i o n oi oir. resents : .r. I : a C' t. r I - r, 3 * e t l v i ’ irronc h i a 3 ii /1 cn c u i f :1r o e i n f e r i o r . . ' 3 a:i..:,r t'r.r. culture. u f t h e e n t e r u o f orntare. me 1 °C. rex et i o x i v.rs v i r t u a l l y aO ~ i u u i o n vaaLIo i f a o e t o i r i i i o a a t ..... infa.3 ion fro: o r e t L-on, oa ;• ; x in f r y o t o s e , than e .a‘ i : e a i a a hi; A a..-on n e t e i v . i n a t i o u s x.ere aa ci a a t j I m i x j c . f xu . o e x l 0-. y e n oh i n t h o s e ihe tsnperainre ■ft Mai a of' t h r e e 1 'hour a . ■ ■■'• ■ in it" roo xorient. . L. ‘ ; ■ :n..ofe a a e e h l ' e c t i n b e t e i ; oi.no t i o u c r a r e e v i d e n t e n a i o o : ■. o n e a r l y t r i c e .: o la.e i^v.n a t :; 7 °C . ■' " '; .a ' t Xa.:0. . "S3 nOr.'.'lO.XO ' :1C a t i^ C . J : . t ■; ana G.f> -exiviiy x x a ' i r o c . : t t. .u t vo en,; ou c i o n t s ox, vr; a t o n e n r o t l . noon c o n a a a it i .y c r r i n . ■: u: _ ' 03 : ColV.lif tie in e r e wss c r o a a m i .-xenti c :1 '- er e i r o n y if'i.-i'on :i 1 0 , .. o i v e t a- x J a S J i J i r : IV-SJ':.* -a conb>dai:i-. ck i b i o n u l i n ere.: e e i n c- in l o s e a c t i v i t y r i t i : sixooe ynant sob c u l t u r e s . '. t r ' i n a o f : t» La j s r s 0 e r t :1b i s dv on c ai sap t i c t i for. v > ; r e o i . o b i y i n c ‘!‘G?'£oa iviitsi t a r i s e ••"•.lic’c v:ore yrov.’n o.i i r . , y ) i o £ e b v o t h ;,.i one xno °C. .... . . : ..a a a i d n o t a t t a i n fi.o a c t i v i t y al o o a ' M o i i m . r r a n s s l o r as i r o n b r o t h a r e r e p r e s e n t e d ay b- fu yj. on 1 c o w on ., a’1';: o. curves. A are acbivit^ and oi c a . lt u r o in.d iravi on al; .' i'ein vLetexained - a oS.d on a r v e x a,en;:on a y a r . :n f r x y t o s e coaditions. orctl i f a a c t i v i t y vans h i . ai.e c v i l t n r o , a'lxicli ' r t 7 -.hen f e a r e d a n a e r ::n a c t i v i t y el . .7 the csn.o on v e a l nye.r, ehowod mi i n c r e a a e 'bo I d . b aiiOii t r a n s f e r r e x j t o ' rry pr one bxxot.u. his n i l. o f O . I N H a O i — ro decom pose c o ■- o t i v i u , t *: ■ c o l t o r n c;vl ti v; t.on <;o vuel o.i 10 ±7-'. n o u n i3.\)tn '.■■■.’ir-; v, j >r'ncii i ■!. " ■ non tT'f :n m L n r n v'dco '' n. fn ifilo tio n ■v.,3 re O'ooeoi- 'Oti' 3 ni’s rr o u i n . . o r t w in b.■;“ ■c t i v i t i o f t h e n in e -rro'od t o ‘j 'r./nxooe wroth ib'on o> i "oo.L i 'i oo oi on n o r ■cti vi . I; o-:' boo i t r n i i . ; ■or xil; 'u..y;n ocn of \ u j;:o oo io., . l o r t r i o i i i , i or< at fen;;ou o''!!'; in o r If. j c i t i l i c e ) t u E > , l u c o o e oooto v io n if t n o o f ; ■1 o o i v f o i s i n otj" i n e o f _2 n_ ■ron c h i r.eoti ca. .floo-'o h?._fnno .fi-'o1!0. P? ±nco br.tion on cr n i j. o q e i c i. iv it; / o f • . oorfrussi s. : v;o in . non t i n . .f jjfhh'±oifh; vo r o o: oon.noo ■t I,'1" nod ^ ..1th o . o ■ if .non n,~0.:> !•: ii o; ;o: ekion c. ; r oof’ u s e ■. c r i v i t y ■f t e r in - f o ■e l e n i n ' t l o n o vooro ;:.?oG i.vcure 'ini r, he r e s u i u n ora n i v e n i n hi b i s 3. ■hi con o i to bnoLo oe noti.vi'c; o f e o i T m e o o f t i n n . f i r t o o i t f b ° f . ; ;o v t i ? ° C . Cu v u i * s o hoi to re art;. no i f c t i vi t j noo n3room:i-0 o f i n c u b a t i o n ■■'■OlV,’• luOnb 8 7 0r f :. - r -% if .6 nf . 7 If.d in ? 11.5 1 1.7 . lift ' 11. 5 10.9 1 v. f 11.3 1" .7 If. 7 1: .7 11.5 i . .1 1 S. f in . 7 17.5 1 ■:. 0 ,1 7 , 1: i- .9 1f .8 ±0.7 l i .n .LV:. 1 .7 17.o i;..i ±f . o 10 309 LOOLn ■■■illny UnbQ ibdl- z n i t o f th « r t r i i u i n shovvod o hi nor c i l s i o n e a c t i v i t y n i t e r i n c u b a ­ tion i t tion ffOc. m o it o7°0. ( von o e r m i e - f n n m o d no • e t o r n i n o t h e t e . i v i t o o : c ti v i tv . .JV>1 t u T-:M VOOX'O oGOC. OO n i n n t s w it h two b i l l i o n r . OU 0 0 X 3 1 ’: 1 tn m r itu r e of iiicn o - i t which c o i n O T'l " 2 ‘b v 011^ O f oortn c oi o or.- r n i f ’f mvo n o W. C O l l l e : in vhf " 1 ., i d : .hoot ' .1 3 ’ n io .nii outod onn if-oo L-'7°, -IK! 4 0 ° C. t i k.i t; oi. •00:1 I, fOV.'th. 11' a. , .if t.oo rnvrfcr m iocon.' vu>ti a t n Dorni.; .b i i l i o i t . -’. 0 " . d ?°i., O l- lv i t; >r> - lo­ J _ - 0°..^ 111 31 o lid I l f 00 Ll-TO JO .0 >. to 9.0 7 JO e '.viol'.l o f 13 of , iro p illio n ; 'o l ■t'g • c t i v i t v . CUlt'U i-o.o o f : .♦ o o r tu naif t'.O t o in jr — • O L <-■ to• if IO: 10V OfO coc- iof: e r e c i y i - c y . X. too; u. -r. mornt o K 17° 0. 0. 0 t o i:.o t o t a l _ 0 _ ! o ! o o 3 • ogI v i t y _ ■'3 "nor: i r e o f i o ' -cion . cdV:. | _ J 0 O 0 , t 1;___ i 0 ? ° 0 .____[ J. •' • O it. 3 i I; i f .0 if .1 I f .5 _L>o* ■; -- n lljm O t ‘I. ^ i ’i. 2 f i iOi’Q I i i c; L0°, ; nlmain raid ., vo : 0 0 : >1 : too 00 I-' f i d j- r/ ‘*>cJ t 170 i . d l i i o n ; 1 .fLo 0 ..l o an c in ^ ro:' \jv jcIro n t o o , - ! i ,, onniun. . obor- Ln ;o to Li t i o u o ,.cr i :: no t o o c.i.nnis ana i n e u d; . ggu a t 05°, * .• -■ i- fi.-Jioi ;z i o . e n to.- .ora- orf . r e o t l , ti.orfn , ont c o r i o i o . c i o n o f io n : : 1 v;. V j ctirity . . ■: 1. or. ;O0 am n no.re ■r.t .a oooon.ioo : \ r - c a i a m gg • c r i i a . o i n i m o o n a t i o ni ■t ."'7 ° .. J.i III -- 1,1. n j a r t ’ on.i of b l n 10 incite ..ft u:.e ■ CTI VI t f .l3 n o u n t l o r vaon n e l f f o r 7 f nourn. VI (r. i Rfe o H o 10 T lso ii o ; 'x n c t i v i r - n i t e r tv.o c o o s ; c tiv ity o o til L xxxiono r l r r e r t m i u l l o — i-.-o ; 0 0 v.-oidl;. ■s tj'O - e c r e n x j O : . o 3 ’0 n l i o - ■ 0 i j f y .'jo or; m o n e c i n b i o i r o n O'j .non . o o r t u s . - i s ir. fO t oil ft . in .obr; 1 7 9 1 1 niton.' r i n m.. n o f i n c o u n i l o r . -coivit,' r-'OLi T'O ' v' s o b i ’: i . o ; r o r c o o u 010 tj n e l so i n io n ., to n o ox iu c n n ei-io o '-n'oon’ t>Lrn.io r . u i t e ...nrroo. i o n i x i r Loco- n o tio n ' . d. >-x3 e • o b i v i t y o c c u rre d .. ..n c illtijo i^ ii;. ig -cm cn ir o y b i c ; : lo eus^nl, ■7. ' . c U vi f ir ; ,:i •j ol. c r iv .ir e r c l i v i o ' - o.l orir.n,. i ; I1 0 L,::O : i; id. vi e . >or tr i r : i :■ , . e x i i o r C .0. 'I O X . t co r■■•■;., ; [ir :: . : r o u er ! : c ;.ic; r- "C vi: •... i ;i e - ' l i r r o i ).b;L 2 ■ Uu od 22) o t i ' j o'. eoi.i. COOni. ^ n I, -.. I r'L-’ ' : l'r ~ . Hjrt’- ;j Id or ciJ-.U >. 0 l.-L !■' ■.i. c - .- r i.. r‘i i, j L■ ;:':i - c o l e i - i c . • r r-.j ; c t i v i e , c_10rtc.iT!-- ICO O' A. 0 tt'CT :00 V O... !,UlOJ. ■:i.or or i r (■t i v i l>' . r o e .'-,.l t o ,i.:i JO "Li e. ! : 1 0. 1 c ci.r e - ■•. :■ • 11- L \ tri: r ire e c ,r. o o m ' 'V - j ’. rt'vj IV. ■ 1 • ii , v -I,,; - i_ L.i.ior i . i . r ic ie r ocoerijd: ii tie . :s, ir ’•rcvrth of- a i o ,■;rv.-tir, o : r i ;d V o .io rL o I cn.cjLon c o r e m m . i !. o uvo cim o n ; . r c r ’i . ' i . o 01. Ol! dio, a o r t i c i ’: c o . o: t e r .■git e sc. m c i o , o ..ere u r o o m lis m 'rc ti ■ ui u oilier: ...' i i o r i i c u O'. a; or 0 . . . r.;o Vo. ; riovner . ViIV ill; i nori n r i l • , on ; oi: n t o o t j / 1 OL'.O- o o r ;-ro r i n r i i r i o d o v e r i d s r e t i r e (.oiov.i or. tvero e o m c ' o :r in. on e. l i o n . o r . l i ve T XX — 1 1— o, r O' -sj V) r 00 <£> 1— r o “I r t— r T -f nr -vj T -r I 3 I 5) I S5 I ^ I 3 O '- 35 rv> CM js> 01 imc in cn Q_ COff w o — rv ■ U -A J L '-'l ( T' ^ j OO' O) O = Kj -I ^ c o n c e n f r a t io n o f bacf erial cells Xio_,° L S ml. of 0.1 N hUO.?. d e c o m p o s e d * ! i i in : f- t» C>J 1 - •- r' c- '? 4* H- Ol 3 ' O CT 5 // / CL. 1 . . ‘j . ' u ' . T ’i O ' - on n :n> '; ifo^7^rxi7oTfoix:! M ’ to n i: unnq. u n o f j ' o , U ) e -1 X jT A T :;0 '0 810.T V ixo 3 T '[ r O :u O.UOD u j o m jun.oo .0 .tO .;j . o O :U m t i i u i o , O TnO TA t j o d u . • i = o:p .I O V u i'lA P !' to .. ’4-■■ ! i.1"|. Tv1 T'ra.. ; , i -T on on n n 'iT in o In ; . • CI t ; ' n c i - i m . o.; , T o o . , U TAT10 o i o: n u to c "0 J . cu e 1 . J..’ : O ' T i o n n i r.n ’iI m.tno n .i v l v t - .......... ''inTio ‘i r i O A i c ru O.r V ra .: -. T : , .J , . A ,‘AU 0 n '!■ onn., .an. ;.l n !<,' -J ! . nil A n 0 : : r . r I TXT iL.Vv.O U oo:,[ re i: 1 UVO VUlm. >n> T■>‘i-i l A A m -j. L 1 ■ ‘. T I H J r A;i •1 n-.- mi ~ i.o . - IT T •O.:; VU T' l '' -O 1 a :i •ft .Ti'i-i 7'mO ofniivn. n-'!. n.iT X ; ' no v I V ,‘ V I UTTTOO" 0 Tr;ona,.i0i i ; . n ' : r o q . u ; q :. i A ‘ 3 '■ t o 0 j o x:j i n . i j o ‘ a i n n inj.o o’T • , i e ‘0 !ioo. vuq. nr-, 10 " i . f.OTA 0- ■T : . 'I OIL, I a< n o-io •c T T eo v.:m a,t I ‘ ! n -Jtv, L.1 tV1 O 'io ,i ‘ : i. 070 ■ ! ( ) j ' II. t o 1 v u ; n i n .,> u m u ‘a A '1. .1 . n p v n on 0,1; >1 voir: n ' ov ■ no m v- . . u n io n s o t u i : o ni ai I ' T i o i u ; s lo p *80 on a m r; n T ■u -to 3 T,U U J.It'0'Un IU 0 1 1 0 nj.IO , m m r n j f : m ' i. ....... iM-t o i o m /n r .j v 1 : vlf-.i, i I ir;.' co1m r, m m o .Mueu too li J . i fv. e v 10 o r -11 ■!.'.?-O': ■..)!• m r l o r ;u 1 m i i v • sou si" . M :- M I-: U / Lm . A. L. r coo i o in in n m eim ih le medium. :f rxi . m. G L., e 1 m w se 1; o i her rbn3:M. c v m so : o t i Y i t y m i-mmo r e v i v i f y m o " X ' - j ho V' m m in.c. v h m m in M 'ttvin :’li. ■c v L v i t o m u ur m c i :: t e c cnM ame a ctiv ity imtV'sui s in o i m o c i r t i on c e x : r s . m m o uo o o c o o g v r l . n . crtolsss n b:m r e f e r s I .. ;.-j e i n c m n c m m :e i xm o siert; vhieh my i; red mi OU .1. 1 • m m o r o f imh c u l b r r g m in h i r e r a ■■ l u k . /on r x i. or . . I -- i .Xi li I I.-■ ; i 1 ■ l o i ' : i. e: y..; c o l l s . V.lnvm Cnnul. 'm/OMm ■ ; i c Ci eu r ,■ ; ci.i. t’.-.i- _ non r. i :,c /L i cm. i m • r/oei.in . s u L. m r i m rouid: c u r v e . y-v- ' ort ' • ; i s fo e j 3 f o r e o. i\m n mo ju .ov;avjr, o f _ _ .. pertu ssis. • r-tificisl t h e number o f ion. o f n on of ci'. r. u t e r i u t i c s C . i w r m u v;are s t u d i e d ro c o r i - o l ' t o on: erun/e . c t i v i t y r i t h t i c nurb e r o l ’ 'bio or c u l t u r e d on ..-orfat b e n / o n : s t e r r i u u t i o n i . . v.ere m u e o:t tv:o a t . s i n o th r o u /h . f,5 s u b c u l t u r e s , Mid tv/o s t r a i n s t h r o u . ih oG s u b c u l t u r e s . u M utinotion t i t e r , M rpi/olosy, coio.u r h e se c u ltu r e s veintr-iusd o ne m i n o i smooth, s t r a i n s one s h o r e d no si< n i f i c a n t over th is test c. • n. o in clise.-p.cteristics m ta la se activity 001 i o t i . i r r e e o t h e r s t r a i n s shov.oci a l e m subcultures. ihoso ..ctiv ity n e n o t f o l i o v e u t h r o i v h -my 1. t r a i n l o h l V had h e on t r n r f e r r e a e activ ity is. f t e r a number o f orion of tra n sitio n . o t u e e h i y i n t e r v a l s and v.os h e l d nt oU. i x t e r v n l s r.uid on t u n 1 9 t h s n h c n l t u r o shored no on o l ' o o ■ ' d r a i n 16!';67, v.rdch hr-c! c; t n l r . s o ' c t i v i i v t s r o i h d i t h e r.btii r u b c u l i o r o , • ctivity. eo- v i r m o l j to o t h e r s t r a i n s -.vr,s ez.ar.iri sd on the 1 9 t h s u b c u l t u r e r-nd nhov-ec no o t o l o s e - c t i v i t y . o n e o l t h o s e s t r a i n s shoved any cmtalrs.e ■ c t i v i t y t h r o u y h 10 s u b o e e n e n t s u b c u l t u r e s , noi’ v/r s n a y o.eroonsoi’r t e d ■•.lien o o t s r dilu ti ons : w i r e r . d e a t 1°C. 'io •!e t c e t m y c.*V jy os ncco~y>- n y i u o.-O. , t h e s e t h r e e e r r ' ins: were e z a d n e b uuouoh ocrdm r b io r the i o e o i a b i l i by t o iocoivoose l o r c h e r e c t e r i o i d o e ..rdc : t y r d l y s h o re Tee c u l t u r a l , . . o i y o o i a i r i , s e r G z o d c r d end b i o l o dcaL c r m c t o r i e t i cs ox i r e c u l t u r e s vddcii l e t c- t ' d o s e ■c t i v i t y . re.oi o 1 b. C h a r a c t e r i s t i c s o l c u l t u r e s vhiicii l o s t a b i l i t y to l e c o i ’e o e e jioOo 1 | | j ; Cuiturej orphol-j arolycdej ho. | o,;y ! an | j to r u s t | 6 an,sou : a, o r ih.'-ih) ; w oadh I +~ i.a*ov:th |■ i e t i n r - j jon v e a l j t i o n e l t h 5i n r a t i o n j Hr; s c I ! nynr n tiserun j ' ; ! "j 1 : 1 6 0 I 13517 ; ' ■■" +■ ■ -■ I ■ - !! ■ ■■■■■■■I" * ■■+■■- • - ■■■ I i I*..- . ’ i + ...a .- : - ; ... .1 - . • * , v i r a l o n c e j buiii r e a c t i o n s ' C a c n i s s e | lor v ic e | • jI ' •: c t i v i t y ; i . p . in j . Ib£ ! I t lOOhj Sbj ]5 b i l l i o n ! j j ;__ J __ _ ! _ _ _ _ _ j _ _ _ J __ 7 f l T !- i 0 .6 I i..I5. j H j ' i l l j ; i:iuo r ^ . . . . .^1 . 1 Cl . . . . . 1. . Ii-i-b -o -i;io l o i I . . __. . . . —■ . . - . . .-." M « . .. . . i I ■' . j., 0 .0 * <- 1 ■ ."“ ■■.—* * o. o .i . . .. ce l i y n r e r e p r e s e n t s t h e cry o... a e s t h o f o n e o i t h e f i v e r i c e c h a l i e n cu; C i n d i c a t e s s u r v i v a l on i r e b t h as ;■• ■•-d'ter 1 : v n l e r i t o n e s d i n j e c t i o n o f t h e c h e l i ny diL d o s e . ■*'*oi u r . ic t e r o f t h e ores, o f heviox\rh.y;ic n e c r o s i s i n tx\ a f t e r 18 h o u r s . C1 choni 'es i u t h e c h o r e e t e r i c t i c s , vs~s t h e ’".ost n c r h o a . a 1:1000 hravionsly th ose d ilu tio n o f the p j i t i s a m . is- on i n d i c a t i o n o f r i s so e l u t i o n . ”cc:rotic m u o f s o c u t 10 oin. i n hue uroo i n :• d j i u t i n c t i on t i t e r c d t ' s r e s had a _■ du bin a t e d i n ' r h i s (.iron i n u c y l u t i m ' - t i o n t i t e r >u.too ibi s t r a i n s - p v e o. ixeiiiorrhaii c ( i i o n e t e r v.iien 0 . 1 1. of u 1 n illio n .■ . . . ■ 'v ilu vion is in j a c te d . .-i.e., a c n l ' t o r o s in -she t;-v >3 d i l u t i o n ■ s : " l i u j ’ n e c r o t i c ;.tog. i ji-o i o nj: i e d ;:-ui i i i ’i icia < ' - Iron s tr r i ;' . l b ,1 6 7 : e Ln i l x n i e n e e \u:.i i . e l u s i o n o u'innn ."jig, c u t '■r e 3 o f : i t nxer-icoc no .re: c t i on i n I r e one b i l i i o n nrvTeer 11 in:'' ?x s l i ’ni iio s nil lor n ice. .Loo. on o i l c ■7‘o o e . !.:• in 1 1 1 0 1 yrrv on r: b l o o d I o n .,3 0 0 0 X0 rl. 00,1 0.0 o. i... j c ;:,i oo • '.base y '.z:- 7 '.o.o: O' i o c o i ’o e ,;■o-od i o 00' 0 0 0 oirc d oof: n i r r i r i o . o; j,.'3 odnoo co.l t u r : 0 t n o r o ner-G d e f i n i t e i.: inn ‘j 'urec nouViK-; l r t o r t h e i i r u r u u e i u a i in.j .ict.Lons t i c o tn e r niroi:! s n ..nv on ::>,teu - to- G-jocoaso- co i s l o s e , o . c t i v i t f . ey en t lQ u r n too.,' in.-.;■ ; i x Toe c •: e.o c t o nj. :, l i co end Knooui: m r r i n n . j..' • . oil -7i t o e id , o r t u e - s i s in e l u d e d in t j i i s ; r f f y , t h e r e v/ore n i n e n.hich. y o s E e s s e d t u n c lo v ; c x s i i e t i co o f svnoctl co.ltaror- os;.I Cad n o t cotoloso o,.L3 o.l t h o r e o t r u i. n o , i O l f u , -c t i - v l t y . S 3 o. i 'o t e i f o o h l l l o n ;r o c s h o r e . vax’i e d ; .-troias m n. r o l l o n s , one. C onditions of om c u l t u r e d Iron' f o u r blestec, do t i ' i e o ir. t.ao u c u c l bite o e t e i t i i n c . t i o n nm-o _ rot'tii o f cultoooo. v-:ere ir..e c o n c e n t r a t i o n o f l f . 0 p fr.-em 0 . 1 ol do 0 . 1 ..., fx-OJO 7 . 1 5 t o 9 . 1 , e x l i '-it nny t o o t e n o e r o . t o r e o f i n n o o t i o n . fro- t. or t;u 50°C. lilu ajit to 40°C, , t n s m o f t.tedit:, fro..: o . l t o <1 . 0 , s u b c u l t u r e t r n u s i e r s iro''' o to 11 . It x a s t jci o f t e r a d d i t i o n oi' l i v e r e x t r a c t , • . M o i ' i l l be d i s c u s s e d n a s als-:- ‘j i i o o r no c o n d i t i o n s n o s t c a r e any i n a i c a t i o n o f e n t n l u s s a c t i v e tc:. lotor. I> o r n o r t o asvGasiioli o p t i n o c c o n d i t i o n s cvito.ras v sro incuc' toc n.ons at for two dr pc, Cor t o o c o s t i n c r o s s e d rxaai. avtioru: / m i s a t 1 ° ; ’. m ica i'v n i /.; .itu r o i a ; etivicp s o r o o d v. i t e "c, - v. ■•••■.’O',--a oo un. oxon o f ti 00:1 u h to no no th e -•■ •■-1 u- ferticily Oi l : rD. no n o t . •. • 'j 1 o' vi o 11, or "c; t o l r . s e - n t i f a n i c s tr u c t u r e of c u l t u r e s c n u u . :. -l-:■ .urnon ( 1 6 ) c u l n i ; o : . - . c t i v i t y '.o' • o e c i e r otr: i n s . me luose u n im __i. . J A l l l A i i i c u l t u r e s \.o~'o oox-.: .ineb u f toe ■u m e ctrsin ve" n frc '• •&«••!r c e - u e { _ . t i v o 51anti;. an, a : t n i ; 00 r e t L v i t y .ire u ■u 1 1 ■ ■ o ' ti se-ri brsiu. ;.i. n i l i c . ;rc u i j l e r e n e e i:i . •; . . i n iv i. m J O L j o i t , : . l o t i or. o r z :o l : , s e - o o ; j i t i vo" c u l t u r e s i n tJ>o i o v u i l u i i o n "c: \ a s oo m03’e os r c i; . ' i f i e < 5 s u e c i e s o f : u oo 1 to it u '•.iii, i;a e r■ e j u — s e n s i t i v i t y to IlyO??. m o e f f e c t o f frOy o.i l u e v i o b i l i t y e u;oen s i o n s v. e r o m e o u r o d o u i IvOv nm-ed i n t o o ; r . c •.•.near t o e j co/i s i t i o n s , r y e : ; c t i no . i n t . / y u s .or r e t e r in c - co o . l ; no . - • c t i v i t y . of t o o ti.- 0 2 i a t o r v . u . s i o d i c : tea. i n I r o :: n;o r a u c t i o n / i r . o . : o urd fro , l o o d e /je m e in ofecu on 'o f r o 1 , ■l i ..not s v:ere rev.oved o e.et .m uon vfo modi.; . . .sHttroosed olio r e s i n ' u n l u , o . o f t h e o r ;r.ui su e t o n /o ;: i:: e u , s not , , i o ; ' \o n t i c r • v. i. ’ m i . r e l y no t h r t y o ln i,.en . ' 'fn'bie I'O v io o ilif;- of Cnl1 r e ,o. m - t a s s i s niton •.ru.oosure t o I .<£)c I f.o. o i du .• b ir_ n l i cam .rowtii cojidjt ro d _ ______ j ^ ^_______ T . O.BI I ___ _, ________ ! _ _fi’ ’o o f :r’3n'lOnnnl o__f f-nnn.in-K f r o ■' oiio j-dnction m i n t n r e -5 r u*n s . 1 15 •• r- .;o... in s . j: ,50 , , l n s . J f r d n s . 1 I l br- hjj_nFtr , '..0 i j. . . .*-i'. c-tivit\ iOibU 102:0 lO tfo lcJff 15 C ntnlose ■ .ctivity 1077 7 114 10 11 ■ 5 : 1 ° I ! i | i ; * » | f ° i f i f ; ! I v 4 h t S :Z n | i f i t 1 ; | 4 n f i i ' io 't ; 5 j i * - 1 •■• . ^ ,7 n ^ e r s ' " i m T c 7 ^ ^ ^ on v.iiicii r,rov;t5i :-.Lf f e r r e d on trwn.a!.)lants. ** ,.io - rov.th a f t e r 7 n - f s i: x c u b e t i o n . r u e c v d Lures w h i c h hue no a c t i v i t y v.-ere k i l l e d i n a s h o r t e r t i m e and iv. ' i o v e r c o a c e n t r a t v ' . - n o i ’ 1>.0.j t lai; t ho can:; v / ii ic l v e r e cau&l'ie o f Ge­ e s '.oo s i n ; 3 .3 : if. j Xl ctr- j Las were i c i l l c d ;• f t or e. c o i n l-ion. O . ' . y O ; ~ . I r e smooth s t r a i n s o f r a r e abov.u to o i l i e r on i. .io ...1 r i f i c u i i t -tr-in s T. TO m i n u t e s o r o o s a r e t o h j_ or tf £ oi s ■..It’; • n. in. t h e i r a b i l i t y w i t h o u t n o . • i .; : ; c t i v i t to (-econoo:-e a.: 0.-.. t h e r e v.es i i H e r o n c e i n t i n r a t i , e r i c o r n c t ^ r e o f t o o fro ■' . i. . c 1 r t,- ir ; o :c t i v i t ; . e ■ cti. v l ir ..if rouyn f . . e l/oar rt y .i n .: ; o.f iou .... roior. .'ere ' o 'o r j n o i i y h i l l no by f.-.Oy. c o i t n r r ; . of . . n or to n i s . culture;, . e r e ..ofc l e t l m f o r ./.ice vnen I- m i l l i o n o r o o i r t i o n or c i n —s.. nneu...<:;u ui ;,miS :.£ ...ore x:ij octoc. n . t r c . n o ritorerlly. h r a-o . u ce t no n e c r o s i s vhen 0 . 1 suspensions e o n tn in ir o n e, r a b b i t s in ir- <.ei; e l l ; . by n s t r a i n or' arc l i s t e d : i v 3, o r t e r o i i i i o u '..ore i n j e c t o r i n t o : t?r i r o f e r e o o r t n o : i 3 't;:; ; i c t L e s l i e and ;.o. r o n e r ( :.'0). ._.. e n t i t i e s o f t e s t ad rir::. an a r t i serum oroducefl o f t h o s e ■.jsyo.l bed ■a r i n s e I t r/y m o tv m i n o r a c t i v i t y nu . s.rhL'o f i l i a t i o n t i t e r s i r Vifno i t . fab le i f C a t n i p s o a c t i v i t y o f rou.’h s t r a i n s o f r . r-.-« 4...,.ly. u . 6 54 . hru o r o i d e fit! ;.r; l o t im r c i o n titer_ I C o t ei a. se a c t i v i t y o n .. G 'odium. | i . ho I 6 . f o r i they j 17 j.o r n et 61 COiinmoht j i i jertos^is ! i : 30 0.0 .’ 1:10 1.0 1.5 ; 1:10 1: .0 1 11 > e x c e p t i o n o i s t r a i n i n, vise ranhs c u l t u r e s oi lr_ 'lonness son e c n t n l . e s e a c t i v i t y t n o r r r appiMciV’b l j l e s s i r o n f o r t c.or.ion— sfrateci. by smooth s t r a i n s . G « Gi-T o c y u . l i v e y e x t r a c t ex inco cntciLase a c t i v i t y * ■■u:.i'--i-L-.■ ( i f ) o o- v LO’''t on ;■■•■ i ’ cro: no in bio •novln .on ■ ci viv it; - o i ■: n o r ; . , o i .v-pto i;. V f X . i :''ii. v ’ on ;jri o v t m c x o r •i o-- oooOt;, tr-ircs." c o i Cures . 1 >ertus;.-iE c o r e t a l i v e r - o. .ix v. ct ■i io on-t " in (1) vac f o r "in o c t i v s n e croc; ncoorui.;! - w ■-.of f i v e . 1 . n oL ".oio, e ■. on: .... ' f ' i . e o ■: n - i ii.o ' _■. m i t i a n the • -at h o c . of noj-j n l x o v o i to ■c t on on . o r . o r s i o a o i c e l l o :nr" r i v e • ' i n u r e s on.oxi'to. ion tno.Limo. ore l e n t e n . !t o :.o o o- w e ■w i v i c - : o i t u a ■ i. . i i o o t 'itoo i i v e r r- e i.o w o 'C iivito w ;ntw ct; oi a t o t ^ e r o x m i w . co.s.\n t v . c t i v i t ' : coc'Oij' o-on o s in co win. on i ; '03 m o c: W... ;ci- o oOi ((O .01.1001 - too calx: o ■so ernleo. i a evil, in to contoi.ni.i lOIC'O j ~ry f")7i ”?'■ '-n .o.o; i, j rtorv' a, t i 3 t i va tor olio, ■l O i i G r w . t i v o i w e e ; clufeo , o c ; i 02 t f e f l'v : t ,r o?o:e::'vr.i;:i. vo:;( .: t o r e t w o n ^ r v 't c n .vow. tim e o.i. v w. e r . ' ......Qy vrconc ortiioln t •w o u o i o o , r.ri cr e ro x r a r e out m - in ta:: 1.are ..itv. t o o we o' tOOi 1 of o r ‘ in a a f r e e t s no '■;o i o u v p r . 3 ,. e n T T i v 3 t , i^af:aicioT. 1 v a y ■o', con car; t r w i u : ; o i o e i i n , .'owe . m m .. - . .u: ..rov. ti 0-0 OT w o o :, \ ■e e i n e ■ ; r • it- ■v o m e n i r 1 ' rj. {'"m")v". 0vo :ino O' Ct o w i i i t i o o s conic. w : i n t c i i c a l x i'oo ■■on sio n . it i v i t o m o io n ■eo , ,,.1.. x i b r o t i o ‘. w-Me lc toes n n w i :~r t o cor: c e n t r o . t i c n o f c o l o r c v i m : r i r i o n ; nc. t s o ' C r ; ii.,re o f s t o r n . - e . r e f n i n e ci o f t c r s t o r c o O iv: e x o r e s n o d i h o c; tvj_o.se a c t i v i t y caut o i ' ctivit".' a t t i ' 0 3 ox ' Vj ' YSVt , i 57. T ab le l b i f f a c t o r o r e s e r v a t i v c s on c r t c l a s o a c t i v i t y i ..or c e n t \ Cor ce n t re t i o n W" r,i ve illO x 10“ - rvocorvrtivoj M in crth io i-te H u O . •: i ! | ) ’ ; | 11 li 11 11 TT j\ e n y l ••’.or- ; ( M i c bori.tei i w w 4 .,' * k i i w—*i- «►- *■ *. <»■ •’ i i h ^ r TJ 11 11 tf 11 11 u.01 O.OOh .... ...?i ? 9 X '-'Or rriy CO'-ILi t i o n o i coo » IT " loo io b 1000 10 »-»<*■ ». ' | o s r cent ■ueirt irei c n t n r n s e store.,ye ; o e t i v i t . v _ _ j r e t - i n od r 5 ° c~.~ I P4 rr ‘ Ar . i-°C. n " " » ii : : ; j ; j ’I io QP ?3 54 15 0 '-n ^ ,r ; f r.. . . . . . . lue c o t e l a s o a c t i v i t y v s c r e t a i n e l >or coot p r e r . e r v r t i v as s e r e s t o r e d nx 4°C. m- ioV0 . ; s i o n s co ut.'-'inin ■ 7 , . t en tiiaii o:t £5UC. t: •e c:r t e l us e a c t i v i t y hecrooise cl c s t h e oerioG o f ot o r. . .0 V;-0 0?.'olon O'’. lov »* • i ! ! i1 1 ! ; ; 1 1 i 1 I " ’ o eri oci o f r e | ;.ton:,e Jo f j _______ ^ '.O’ ! ” i 1 L .k * !j O 1 <' t! in " ; | 40 " ii .i .. oriT.i , ' iS I j ti , . .(j r, 'rG i i ! o-O coys i " .cu-’l l f s o f t h e :-:t:ao in d i e t ue t n a t c e l l s i n oon centr-v.t i o n s Is. M t h e i r ' c e t i v i by M g t e r than in hi.hhsr c o n c e n t r a t i o n : he .irorenue o f f o r u r i i i ; c'-M'oh r- r o n i o d e c r e a s e ir. cm c e n t rr-ti on s i:i t h e p r e s e n c e o f re bvinect o n l y hO y r In r e i M i o e i : / d i l u t e c e l l co.tnlnse a c t i v i t y . l i e f v y c e l l u l a r con­ e r t h i o I M o s t o m a n t ro o r t s n o e r a t u r e c e n t or' to e •: c t i v i t y n i t e r e i y h x m y s . r ; \ ' S con c e n t r a t i o n s o l o ;-ever, on i; itii the e r t r i o l o t o •'n o c e l l s ■> ;ho e o t M a s e a c t i v i t y r e t a i n e d v o s 0''; ; e r c e n t v.hen s t o r e d s t ■' ueriod ♦ out y e u s i o n s >r o m e n l i a l i y t h e sane o n e - f o u r t h , o l tr.e c r i y i j x n i a c t i v i t y on t r i e s u n e e n s i o n r s m i n o e i a f t e r f o u r "ontns o f ntor;r e i n t h e c o l a , v a c c i n e conbririiny 10 b i l l i o n ce.L.rs s e r m i n e a .ror c M M o s e a c t i v i t y con cen 'br ati on f o r o n e , t h r e e , Tour, r-'ertuosi; .e r o l . i i 0 . 0 1 per c e n t . e r t n i o l a t f o re j- M s f i v e or s i x cci bean s t o r e d i n t l i i ; oiiTiirs. on e or' t h e n ; d o u o t ;-fiy • c t i v i t y . d :e rctior: y v hien;-. 1 . ' o r c u r i c b o r o t e v.-r-r. i e o . s t d e s t r u c t i v e to cue -iiiyr-e. ;f e n s i c n \'7 i t : : ; c o n c e n t r o t i o n o '" 0.00-1 y e r c e n t in / d-ov-t id )G . . d i l i c r 0 • s co' y r r e d so :?•' c o t n i u E e ■ c t i v i t ” v;sg er ...1,, t i e ov c e n t or i n n ori.-sL-ai v a l u e nr t e n r -e rior. e o n t r i n i n • O.Cd :or c e n t . e r t n i o n r t e . . ude;.- t h e e-o e con o i lion:-', -r or i , : c t i v i t 1'' in c e n t i'i 1. toj r e e e n e e .. r s-r m 1 3 :1 0 -3 c i n h s ' o so u . i n t o bb) ro n o u o m i r e : be t-'- 1-e n c t i o n d eel. d- -or toe 0 :: 0 :1 - 1 j. . . r t e r bo n .. s . tr i e oi o r y i o o.. ..a / r o e r ’ e jroservrtive; :-em r-ic k m n a toe eere celt i y c o l i f i e brotii 1 t r : r r i ' e r s lr:r ■ t h i s mere rorth. v o l o c i t y _eo n c t curb r ■to co to l o s e ; c t i v i t y . ■Vo o :' l c u i o o e ' , 1. tr o v e l o c i t y ( tO ), o r . t n l s e e •heco:iooset ner c e i l errrtoit us? s e c o n d , voccine o .nr i n cite---ted c t £5 J C. b illion nor ’ -1. Iro n : n l t h d b iC d . >1 -13 hour I'cvitn en live n.-iOo concsoirrcitioii e s c u . 3 r . or 3 8 ,..i.v3 £ t h e c u r v e s 0 no h i r s t order. 10 dire or or, .. eut.pu : no d i l u t e e oe e c o n c e n t r a t i o n o f ol' t h e con c e n t r «.ti on o l iiyOo r y o i n s t t i v e . lire r e u c t i o n i s tiia n o-rnt e f rdO-. o e u e i o d . o n t i o n s w er e r e d o - t 1°G. t h e r e c c t i o ’- 'bi;v, tui'e ■ : t 10 i'ionite .1 one h i r s t o r b e r r e b c t i o n , c t i v i t y e;-ores se b b n c t e r i o l nos sen.Eions c e r e no.be i'ro r.oveo dorr so v o . b o t -ben. ;or r i o ;. n o e t i c - -euir'.: out i n e b . o ' t e t r-::r r e v-on b u y s , d r i r e r f no m b not. o r c e n t . 0 .' t r o o r i . i n r j . ore u lc •: s o l u t i o n no no no xcu. o r v i r b i e r s e e n siou. n o s (1, d eiy i r.:u.e >o;isiouc .•:i-<■ e v ro: o i l o n : fV■ i..■ . . 000 ,L.: < -j r t o o l c . l i e 1: -e a c t i v i t y ' v ■G xo 113 m . i n iro o o n i cod 1,- i ii-t; aen v i t run o -• "l'J.lT i 40. •L'i oC.-..' G. X i 1 Loc .1ui.i. e. j.iVj; ■o on X i X.-on i r e -;o.- Gn.re m l ° J- ffiXifLi- l A i i > i' oj '.u1L t ' i i • - 4 i.r- m .:;iv i r e i o i o r •in.Gt.i' >e c . o r o i i i i 1r o o r ir-d.Gre 01 . i r e no- ' o r G' i ..--1 ■ . o -perot-m turs, of ■->'G r - r l. i v i 1 7 . fretor-v 77°; , , nr ■g c i - i n 3 gX i ; v;i -jr-p I.-- vr viXjl o . l iv ji' ro '-c tio r 4i 'r-Oo. X Giv e .7:0 m O'nC). j r oo ctiviXp .nr ■r t 30:-r: tr.o •-•r u..3 e.: o f o r -; u .Log .:, e f f e c t •o 11 Vi v. - .0 ' • i-c; .1 c>' i 0 ,'. t -r ,:G .ti3G ..YOn Xrc r r-ooe i,j o o r ' - ;G' or. 7, G'OGG-o'O ' G.Lir' lh X: GO XL S— 3 if r-.; : . o e i e r "Yen rovn rn.i tGa:rG-:[-dG;4 Xo Y o m p i l l i o n o f . Of f.v; G; . G . Or GlOil 7 r£"Ypbi ctioG. i :: - .Li.ov.eG. t o j r o c e e c gs:-nor-tore. ■go ■ o. In oVoi r io 0 L- r onc i l i t-O.’/ t l C f i Xro i r r f c r e r v m f- _:t e r . :•: i o r - , i - L. ''G il lG;;i.rtrr> . e> m e . o u in i i i r n . ; o f c o l -I 1 0 • irs.ou. 0 ii-.cr..-;- .G.j--- eo -r :ri O'Y-'-'iGG opr j.m :r cr.ori r.i. c-sLir i n m u r e r c l i . of I' o o-r c b i m •">G0 'n:u o ron -o o1‘ o n e Xo ;;,ovou m i l l i o n oCTo: sin, ; i t . r- t o OillOG pro :jr bion-nL i.o ghs e; ig-Ipgo t::o !■-.•.■ c, . • o 7 . 0 , OG r O G ' J . t :' G. - o. ; i,rp e f . ;i?0' t •*-' 1 ■j. i . r - ,- 0 s - c i l m , t e i :ii. hosx rovn on u o t s t o c o r r e c t r e c i m ".O', it" in ir;")irO no—. _Lu eo s e Pto t-h. nnd the : ?t <■ ■'; x.i. on v,. . r i m r necUr . ctiv it;/ of tcs iO'Lo m edico . . l i e (iTolVl o'/ i... ro \ --.t i’o n f i i i — ovo l o ’ Oi" ; c t i v i t : ■ -no l e s s i. I ; 10 00" Ji or to t t •>'0 i:3-lO ■r Ot too 0 d i ' i ■: ru'.'t.. . „ o red or- t e r p e r r i I'1 0 3 f o r c o it 'Xo £0 co v im . ■■I n n i t i O i i C'CO C.tL DOl’G • 7 VO 10: x o r : . c i - i v i v - vo s r e s c v o a •c.-d ve no ; i ; ocivit; h ' l ’O ' ' o'? c c i o r t ’ o ::do moo. xo v. o i l t o r e ■'s soe ;..on n . i 'oaoiro-' 'to to'invoe a c t i v i t y nos ronfc; rp roccnec. n x r o o viva one -.coo- ; e in c ' tiv.tr s e r e l i v d t p wo; n s s o e i n t o o s i t r. o: t o i p s i s oi' trie c e l l s . C elt vires c l e r e ; ’, o t toe o-ecies u s u s l i p ovovoo r r x i r u . r c t . i Y i t y o t re v ■I'ter iievil'.' t i o n i o r tv-o o . p s . I t i n ri i f i c u l t t o i c i l i setivlt-';. ;,7ifn s t o r e d , o: c t e r i n i c e l l o me. r a i s i n c o t r i n s e :en c el l; ? o r e j i s r v e r t e o cot ti.;® t i u e o i i.is.xioujc ctivity t h e r o t e o f d e c r e m e in. e r o o ’2 o c i d . v i t y aanends on t h e o v e s e i u o t i v e one1, on c o n d i t i o n s o f i t o r v n e . t t m s noted th a t th e hi' h e r trie con c o n t r i t i o n o f c e l l s d u r i n - ; s t or v, a, t h e . d p i i e r t i e or c e n t a c t i v i t y reto m ea. 01 o m o dvsfcor -at t o c . . W i e w i o n i.'.ec li l J t o r c n c o in :o w •■ . tiver.. d i e c v t a l a s e n c t i v i t v od a cei. re torn at- i t o . w e r e id a r; r e o f d e c r e a s e .in ...ctivit:.- w i t ! ui i'doron t ere- itoeiryl ' '.orc’;r i c b o r a t e v a c w e v.ost cnti:;d; c i o r y >re- .■ or v -ti v e t e s t e d . v V u.;i ; , 11- i n r od n t ;..i.d e c: r o t . e m u o e r t u a r i a v;hic:i '..ere owjuin. w y . O t ori : ei ce vd . H M U W O .o a t r v. <• . , 1 V.1. . WOU. . a i.ori jV-u. ice l-i. oit ' oVOvVGi .i. ‘r e t i m e i ii J-j ...loo r- r e e ■ ; r c en t o ; .L : 1 i U 1 ’■- L i ! L‘ . d re e eaiitair .: n e t e r i s t i c o .r ■;a w too c ia.d :: e w t i v i t v ".O', v :or a Loa t w i a " o i i i v , - w . ..we. i d k:;’.oo M; . t w i n s . ri'.v j... iiivitiori t i t s r ; ’.f w o od m r c a i t v r lavvio:! : or. ontoi drrider trw sd o w : unower r . o v a : , i c neow w i e w o ■ od ■nr . ■1 J. Wmoa. ;■■■i i r e s o w i o , iso ii.jo etw oj- 'uiii i o m s , od cdviw c e t e r i s t i cl v u i c h m o c r i t e r i c oi' w o r t h i\t t h e o w e t i n e a? t o e a e c r w e v t." a o w i b o:de l o o s c o r v i n e occurred. i n o t a i ; ae a c t i v i t y od t h e s e t h r o e s i re i n t . i't3 l o o e r c e n t od w o o t h e I r v i n e oi' A. no cwa.Ae re a c t i v i t y were not e.t i e - i n s '..hi oil ao w o w e d t d i o w e n t y p e w.b vtisorb ea v i t L the r.biL. e n ic t ll .Y ui di'erent i r o n t n o wo oth. irorertv. a.nti oviw:. produces a; a i n at c o i l s od in e o t h e r t^...-3 cnc. i n both or s e c • i i >o i-:v. to a.. a ex-tie r , t o a e r r r e v o v e d . i n t h e t c o y r o r p s ii: w e i r A d iffe r e n c e vos noted sen s i t i v i t y to ApOy. c s ts la e e a c t iv it y vere h i l ! w c e n t r a t i o n o f LdOy than p e r t u s s i s v ii ic h ch.ov.-eci in l e s s we stra in s vithout t w o and in. n I c n e r con­ the s t r a i n « v ld.cn had t h e a b i l i t y t o hoconpose tb io cha::icol. to too o' fltb ou .-. n no con e l u s i o n u i d i i l i c e n c e o f t r o a e c u l t j r o e v;bici; iic.vo e l l c.:ootb ctrains r o a - Lit; u p r o o t but ;io no t ■• ruuoutuu: i c e” ,oH o ir-u ...v o yrc : o i l lu ■ o;u >ot . of r i ; t i o n i ; o uouc.cc chern cteristies Lo a oo tb c i r - i n e o f a . . in ecu' j o c o b'-Op,, dofersnt. .•ctivit:' i n n • euivit; •.of oertrccio, . ron <■ i cu ' t i c u u'.'.or, e; die rov.n on •a r r e t b e a u t c ; - too s t r a i n s o u t u ' o i c ' i. e ' do v. e u no C'.uodu.e a c t i v i t y , d uoc n n b 'u n >ros?cnt as ticfe■.■•cnees in cer ta ins. L ■u i f i c • "■t i i .J-. l o o s e c i f boron c e a '-ore L joo-ono too i b l l i t : ' ■ ,r:ioio,'i3 crov.ra ut cun u n o u ; o n ' u i - :ou. f ouoc. u j u u .s u trc in .s u i t i d u oc cb m o d e s e o r r o i o f o o d i, _ i one. oauior caul" ic Lo r i t i i c . 4 -*-* i o.rty-fiya o r r o i r n o f &'Ootf >pvt-. 1 ; 1 i ;; , i c i i r j . ■ 0 i.rcin:'. o f rourr. . j o r t ' i s o i o , 10 ;,-v. 1 - i r j . . ’f strain c of -L ; - ' 1 r. meo i . i i t i n . e cen t r - >i,i o i oi' ; 0 , 01 , cr i f ’■r e v”ig oro > o r t i o i v i t o t o on t i l i i o o 10 e u r r i n .- o r c T L v i c y of ■ ini 1 ini. c io. ; j ; rate i f .. 0.1 -. o ^ c r e ^ t o ! c a r o e n t i ’s t i o i i v l t i i i n o: u n i o n s coll 1 ; or uu-ensiOi: G'-iruu u ; u . 0 is ■: iucco3 cilfo ' .10 m i ti: 1. visa .. i a ,ei o i r e n Lif toe '00 : r. orone n i c e u t i c s u.o l o out on uj. or. o i n 00 0o i i Co. us ' 0 1 0 i,vue f o r r o i l o r t of y u m , on i i r f e m . i t : .0 1 ’i n , if.fi li,-ho:.,t . ■ 0 orot."-io-io iii vr.; in fu sio n tr jo- 0 :■ o c b i v i i ; . . :i‘O0 r r o f Lo:: e f f.o< , , hen o u l i u ' m rcoivity - ii:. 10 n ciiltc o r o r c o i o e o t i c r v o r e oxor'-insi xor c; t r i o so a c t i v i t y . r i n u r e o;' oau T, loo or e ' or- n 0 r c u i v i t y o f _JL p e r t u s s i s r u t o r r o c r . u n e i- v :i r or nt f i t o r tcr; - o r ’ l o r o o to on ■t I n . e r o o o s . 0. f; if, ooore m s ■c t i v i b y vo v i: t l o n 0u s fi Loot. : j_i t i r e -i r o o c i o s 1. I*:,; , i, 0 o f ir u c u l t u r e rob v u i c l i,_ / r t e r two « r ;:? i r c m u t i o n c u l t u r e s o f o c t i f e n m n t l y v w ’cneb t i e lumiiinru n a t i v i t y . s t r a i n s o r ... y e r t u s n i u u r i e h r r l o i n o n i x cumw a t a r i s t i e s o f ,00 i.f s t r f r f o r no /ii i r i i f i c n n t y a i a s t i o n in o o-irss setiv ity . x h r o c c u l t u r e s vfiiioil l o o t t o o a b i l i t y 'bo c e c o n t o f i e lyOy snored concii.i’r e r i i f ' 7 o l o s s i n c11 0 r*-'cierijvtict> v.nicii t y p i i y sw.ooTih s t r a i n s • 7. L i n t eon j e r c e n t o f t i e cataln se a c tiv ity strain s. 1 x0:.1 i.ut strains of 11. 0 a r t us Pi s aim niued liad no r l r t: .incci n ix t m r-;y l a t i n o f i o n 'boots c n i w w c t e r i s t i c:s o f s o oo t h j o r f o r t e o w iv u. adsorber, s e r a , I . - i ; x ' o j ■3 ,r e i. i t v j i. ‘ Lo: ui-j.. •• •*'*-!1•' v>ii»o ; 1 1. j . o j v o ; oi.o, ui cy . y u . o: i c •c i u r a , x-.:. n v s r o t i o f - o ’• I t - c: !: -L: oo ': 0 u.L Vi t v . ixceyt ‘ i.;, ■ , 1. 1 " I:i e x iv ity , .. o n : o i 1 co . : o '.::c c io c r ■ j ... cioto ci ■■i i : o o in i i o n v i c ■. e c l o v c o no •'Ir. ^ . i .-j ■• ■. i c' - n .t. c ■. ■... x-xi.. to j i ii o i - e l i c i t '" :?• c io O '' . • ■. L L '■••.: c m l-ln n e (r ir o n . < xx : e o LO. : * .1; i- •: u- o t*:lv. ; e i.. . o •:- v i r o i - v c ■: o r io o oi c i v i. o-y. : w c i i ocivic, i. 0,0 i •oi co- il.o : ■ ■o O I. v 1 1 -■ o c.x c, i ‘l . V j V . V i. Y ‘ oiivli .1 v 11 c ;. t i . o% - .-oi d ' .).! i llo : :C. I i ; ■; • ■11 o o o n j. or - c e ■ ■id:;'1 "i. oqt ^... cnt " o i '.•■'a c o lreriii_ :':•■• i i o l ol'ojo ,r T-t- CO j.oO0 _ 0. T. O oi ic t c i-oi ■ e o t - i o o . i , o f . exix'., :'u ? o ■ CU J. •oi. o •C ; 1 tiiio . •O0‘ .icily, to • cool o e e jo. , c e vt-crr:. . . ix 00 1, i c . .■0 '0' 1.■- O ■ ix t- l fi' -oiuoo : o> ^ ro .c riry . ' j.i - e o o o col .o 1 x c o o .v i ieo i." n ; no. i - x ’o e 0 V"'0. OOiOu .1. e i i v i x y o ' . c . i.e. ' i t : . . i l o i . O l 'O vo! ■'■) ■, a t , .r. , n .. a t , a. cj ;.,aJ.ac;:o. . i n . a - o r i o n r , tG, 71 1 ( I n t . ) a .iC'-o o . a av.or, lo r i'. - 3 ■J * ; • .e • :ocao- n : O .......o t.a a o l i c " e I t i n ■■■■tion ■.,! .; •. . o r a a - a n . ■. • ,o;.‘ -j .. ■: O O'- ic ii.o t o o l v i i;1 * j ‘ a , t o e . , 1 1 :-, t i\3 (lv) o) t, : v ir n iii t;/ ■"i.o on o no v -e c-o iv -'to iy . m io co cc-.:,. O i %y - ^ j 1 -a— ^ _ - : ,i * y 9. .o. 0 'T c c o eu^;n ci • ■..•it . . C C ■' j j . . . ... . 1. j ]j ■ r e c o v e r ; 7it > C l l i t aij.o.L-’ Go' J 1.* • -• } !g« . 1j "L ii r)'■. J . a O j o r r a r . i: r t i o n ... s i o i . , i_, * .• nr. o- v r i i . r e a c t i v i t y i n o.-O (19...;-) 11 O ' . . , ... ■to c n t a i o . s e i"i . . c t a r i o ..no in.:-: I'O Jr -ii ou 1. . .- • c t . , 9 6, 190 ( it: .: ; ) C' to o . o . a j o u i o s i t . no e r i n , . . , o n a t a r i c r c , 3. : eii._v.r irno-'O nlo.:; i s : o r ;ocioE; r a r e ’ L i i a . nott i c r t a s - L s - n :' eiJr.UE ;-n.; c l i t-aexI ea c tore.i n a i . t i c o i 1 . . : o c x . , 1 5 , 561 ( 1 9 1 3 ) ■c i l n . e s o il: ., n, a i t n e r O t t nilC: a ; ’ , - . , o > . ■ ’ ■'}■ i. ' , 0 . " b - j r ;,;ia o ; t n i " n a n t i 1. ;on von . c o i i n o t I 1.i.ra:i o i r j . 'G r e n ’G i : : l v : a r t . te'...r. .1. 1; • v * m o l ti o n r r : T - . . v i l , 1 0 3 , : 15 ( 1 9 ' ”7) Lo. „ II. r o r r ; . ' , . . - , • .o.o o -n. e , ... tor:; io:£ r e i a x - i v e to t o o o _ o' j’eovo c l o n o i-si:.: n,o ;i.an io oa'ca non _.--cr., . j ..‘t i n i c :orn' .-.... -. i o o i . o ;... i c ■o;. -- ■ 7 -~ r - - - - -‘!. . 1- -.-i-o. t i o n ■ii ■.1 i ’O - n gi i i a . c n o n . .1 . 1.0 OX. , 5, 15 5 (191-3) v» 3 i j_ y , • . j ; tA ._L-L-■j > Li• r o c i c s v . v i . d i r e u;> c i : a v o h y c a g l c r o l e t i o m . i j r c t r o m . m -tr v . i s ;ru: . ,-.?A'v.ic d e e d i e m s . I I . ^ d •: - x i I, f i m r i o u I. ■ Cl.., ji, : 09 ( 1 9 1 0 ) -Li* 19. , '--I. '.o-.: ; , 9 . d,o C u i i c c e osdi. : on -ov 9; d or o so . : i o c i c . 9. 99., 90 ( 1 9 9 1 ) a.' . u"L.. j JI , • c ; or oia ‘ m l a , cl ;' i I o r ’or m i .on 0. _r ;i..:o . i . i: :0 ‘. C , 9 ' c l . roe. .. c c., i: . ■ d .ti a n . .. - -i- v 9:-, o e r s t o d . . er o ( a ) v ■s . a-cc c i c /..siren. ; ,:;.-ob:o ..deuce . c c d i j . ! v’L. r k d e r i s n . IQ. , d d (1.99,:) e m u . . , v ,.d. 91 , 9- . . c. H I I m r i 1 :r■m, n- \ ;i I d - v m c 9 a i c or! v-';9dc ien . rn cl. rod. o e l r c. l:o. , H , .i d -. . ( a 97) 17. 1 • ( 19'0-.!) , ... - ' i oc a d ' c o t i . s e : en .. o i l r. o f t e n . ; l..: ., ., c. l o :: r oeriroi-, . , ‘ ,:ic d i d , 9. m- 3 * i c r o i i o r 9. m i t e l o o m o r r i t : -d e ne e r e r o a r .9 t; :C SCI'OOlCtiOU. '• I n . 9 . : 9 : i d o r , 9 : r ' r d , 10 o, .-0 6 ( 19' 6) ..rix ■c i . card s. 'Or’V : r d c d t i r o n e _* j . i c s o c i r . f c i or. i c tlv> encm . v n c e l i r ; . 1 . av.; . ' i c . , 9 9 , 979 ( 19 9 9) 19. • i. Leon or, •. tOoor d A ^ r d c l b • i e n d - e d m - c t - o r i s t i c s o f t.9~r- o , r o o i o i i i e - r e i o . v e . o A n ’i r , , J. dO, 79 (199 C) 90. rOOl't, o . \ . IT idioc';.-3"iscijQ o ii b a r c j l u i i :• Ui r>'root. U . i , , 9 0 , O'- ( 1 9 9 9 ) s - i 91. : 9. : i u s enut: • ' O .no 1 coon, a. . , rue. core . a , , . Code i s s o o c e a v i t o o i t h e c o c c i r e d 1 toi c e l a a v i r a l once. d e e r . ...nili. V;. I C " , iciiiooii c - t e d o l l s e, ! 3 z o \ ' r . c c 3 v * j v 7 ; eritsreion o f (ldao) Im o , a.' i r m v B , a . ,r e a d i e s o n d e c t e r i r d e u t a l c . s e . o r . OiiEdo. I n s t , looicivr. ox'.scn. , _-j_, -d d (19,-.3) > ,.A3 I 40. J hcoby, .. - t o r : c*';v eatoiiM'.ui -If , : LO C . i I--. in. . . . , . .) , i . L> ( 1 '. 1 3 ) foeoty, . . dv ■.o:.i en :;. b o e Lo f r l t i n •)q or nr. I; r. :-n "nv, .‘j o t e u ; L y l e . 1 . , O i , 19 1 ( 1 0 1 3 ) Jorns, r. c ; ■o r t o i l on t ; . t •-1 r.'.’on. : . , _o7, x 3 - C « U - 1 CiC , - ;i i j. 07. .. * • c - . s o . (1903) ,L» • .' _l■i - i,i' t x c -v. .y o n f, l e n d r i cir, o- o ilo. i ' - e f o r , . i l - , a Li:>; (...)- f t " o e t n jneri. y_, ' . i c v . -i.i ;m; to ! ^ ........ " i • i c {19::::) ^ , -.or co.:, .. I c . . . , '.od.i l l e r , 1 . ,'J'. o rt'scis. I 'o ced n res pud r e o oin,p 1 s t i d . , o . l-H), _i_ I- i ^ ■‘t i i u t i o n . (1931) 1 . . ■.. O C * :-3. .ire-. j. , .' . o.uj., ... j a e V e r ••encby-.r r o i t >■o :• e t f i o a e u r r r i n a n t i t r t i v e n ' I tej.t-.se- and ? oro:" 'ur- s e t e s t iv n -ini;, Clr o ;.orc ci. n on ruin r l c t e r i e n . i •; c .5 . 0 . , 1 7 107 { 1 9 * 6 ) ■'?. I r i t.-:._yn . y u -ln i . i o o . - e . i e l e - , . i t r i t b i i d . ’-.n,;. I. von : o::i'o orre! . i t r i t 0 Lo. i ':'''l'.lr.K;v.lrI;un,;' r o t e i l i ftV i o c i a .. . . , 999 , •■0 6 (19.7)3) n!ia-'->xo%itei', -'A:-- i» ■ . • ■ "on'. o o l i l i i G y o r t n s s i s . 30'. ■ - o e s l i e y - ' f .m o ohnGss o f J . yy.,., £1, l o x ;m i ox- b i o l o l o c n e n . : o / 0 o t i o n on e i n o o e r o r dr y e - Oder 0 ‘- ....... uest-tntes. In C ., ;'U;i f c r l e , ... f i m . i m on o n e e f f e c t o f eodiun! • ; i- n on r l c n o o i c ■ rovjth end n s.iir-itio o . I I . t h e a c t i o n o f soniir. \ nnicie on o; c x e r i o l c e t e l e s e . , . yet., 33. ■ (I. •1) o l « j_ji r X'; j * xj * 0 no. i d l ed ,- ■■o o ror.'' o f i e e be not e r f o r n o e vlt-h . y:. m o o , 97', b 39 ( ' 0-. i_} 7T.. ■■■. _7> • ; 1 ( l 9 -' ; ) ooev-, o . C x u l t y e , n n ev: en^y e o i y s n e r r i o c d o o e n c e v.ltn s o e c i n l r e f e r e n c e to t i e t o b a c c o o i a n t . L. ,o. l e y t . f y r . i ^ x o r t :’.o. 33 ( 1 9 0 1 ) 1 o: ‘i en.vi.Lt. v :•t e n 6, i : ' 1:• (I?or..) i ci i F •0TO'cq-,Tr. ugt-ts t ,l T U 3 3 TIC O' oi r o i a '/ r o G .ii To (! : -I) TTtLsq-O' .:i UTi*q.. o. g t ToI .. t; c ■' Og . j . Tt t o ‘ I •- u o jq . j oq. ‘ -V ' - j o i ;o R x :- p i T. a t ‘I ' f? O T 0 O <. 0 1.010 J COC O v ‘X O. •- • 3 3 ,.TXT 0” •, ; soiys nXT f’ f °T to 01 j o co L o~rn To c 3 -T-q ;-;a ,;o uoTq.'G\,.:i:oq; uo s o o o (S/6T) . got o . o ; ' q. r o , 0';u •- G.iOXX . 3 ■T I 0 G. OT.,'10 * -O C .ir ,10 ! T : 0 T : 031.' 0 I q : 3 XTq I ■ 3 3 1. . i.. VC' o OT,, TO (> . o x ) a ■ ■ T o o l n . CT ■ ‘ATT ‘ ; ■■ - . TO, ■ *- TIO IP aot ■ i i o . T r , ; Xr too:: t i ?) 1 o (c VOT.tr ‘ TOT ‘• ■■.'TT'.G GATH t < r ii' . i • ■ i. •I 1,T ■[ 1 T O O T 3" ,q.,,.q ' £ ... . ' o. ■ T ; 0 • o£n f q■ a • - C - . . ■*. «T L Mo.' 1 o •Vao C' (:■ . ' ; -■T . n ii t q Tr P0G1TC ■ . *,) O'ClGl at ■ ‘ at ‘ • :• . .0 ^ ■;